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E + S ES EP E + P
E
La Ea de la hidrlisis de la urea
baja de 30 a 11 kcal/mol con la
accin de las enzimas, acelerando
la reaccin 1014 x
E+S
E+P
Tiempo de la reaccin
El aumento de temperatura
necesario para producir la reaccin
no catalizada seria de 529C
Enzima - Catalizador
Enzima
Sustrato
Sitio activo
Complementariedad geomtrica
Complementariedad
inicas
Modelos:
de
Encaje inducido
Llave cerradura.
Estado de transicin
cargas,
uniones
Clasificacin y
nomenclatura de enzimas
Clasificacin y nomenclatura
Nombre sistemtico:
Grupo transferido
Aceptor
EC 2.7.1.1
Grupo
Enzimas
Subgrupo
Clasificacin y nomenclatura
Clasificacin de enzimas por Grupos
EC 1.x Oxidorreductasas
EC 2.x Transferasas
EC 3.x Hidrolasas
EC 4.x Liasas
EC 5.x Isomerasas
EC 6.x Ligasas
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, en que tomos de
oxigeno hidrogeno son trasladados entre molculas:
Ared + Box
Aox + Bred
AH2 + B
A + BH2
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Nombre: Dador:Aceptor oxidorreductasa
-D-Glucosa : O2 1-oxidorreductasa
Dador
EC 1.1.3.4
Aceptor
Nombre comn:
Glucosa oxidasa
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Nomenclatura del subgrupo en oxidorreductasas:
EC 1.1.x EC 1.2.x EC 1.3.x EC 1.4.x EC 1.5.x EC 1.6.x etc.
Deshidrogenasas
Oxidasas
Peroxidasas
Oxigenasas
Hidroxilasas
Reductasas
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de tomos
grupo de tomos entre molculas:
A-X + B
A + B-X
EC 2.7.1.1
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 2: Transferasas
Clasificacin de subgrupo de las transferasas:
EC 2.1.x
EC 2.2.x
EC 2.3.x
EC 2.4.x
EC 2.5.x
EC 2.6.x
EC 2.7.x
EC 2.8.x
EC 2.9.x
Grupos monocarbonados
Grupos aldehido o ceto
Aciltransferasas
Glicosiltransferasas
Alquil- o Ariltransferasas
Grupos nitrogenados
Grupos fosfato
Grupos sulfato
Grupos selenio
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrlisis y tambin su reverso. Son
las ms comunes en el dominio de la tecnologa enzimtica:
A-B + H2O
A-OH + H-B
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Clasificacin de las hidrolasas:
3.1.-.3.2.-.3.3.-.3.4.-.3.5.-.etc.
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Caso particular Pptido hidrolasas: clasificacin comn (no
sistemtica)
I. Segn la situacin del enlace atacado:
- Exopeptidasas (extremos de la cadena) (Peptidasas)
- Endopeptidasas (interior de la cadena) (Proteinasas)
II. Segn el mecanismo cataltico:
- Serin proteinasas
- Tiol proteinasas
- Aspartil proteinasas
- Metaloproteinasas
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de remocin de grupo de
tomos del sustrato (este grupo no incluye las hidrolasas):
A-B
Ejemplo
Nombre sistemtico:
Histidina amonio-liasa (EC 4.3.1.3)
Nombre comn:
Histidasa
A+ B
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 4: Liasas
Clasificacin de las liasas:
4.1.x - Actan sobre enlaces C-C
4.2.x - Actan sobre enlaces C-O
4.3.x - Actan sobre enlaces C-N
4.4.x - Actan sobre enlaces C-S
4.5.x - Actan sobre enlaces C-Haluro (S-, Cl-, Br-, I- At-)
4.6.x - Actan sobre enlaces P-O
4.99.x - Otras liases
Aplicaciones: Pectato liasa Remueve los compuestos indeseables (ceras,
pectinas, protenas) en fibras en la industria textil bioscouring
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin moleculares
A
Ejemplo:
Glucosa isomerasa (EC 5.3.1.5)
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 5: Isomerasas
Clasificacin de las isomerasas:
5.1.x - Rasemasas y Epimerasas
5.2.x - cis-Trans-Isomerasas
5.3.x - Oxidoreductasas Intramolecular
5.4.x - Transferasas Intramoleculares (mutases)
5.5.x - Liasas Intramoleculares
5.99.x - Otras Isomerasas
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unin de dos grupos qumicos a expensas
de la hidrlisis de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.).
A + B + ATP
A-B + ADP + Pi
Clasificacin y nomenclatura
Grupo 6: Ligasas
Clasificacin de las ligasas:
6.1.x
6.2.x
6.3.x
6.4.x
6.5.x
6.6.x
Cintica Enzimtica
Cintica Enzimtica
La cintica enzimtica es el anlisis cuantitativo del efecto de
cada uno de los factores que intervienen en la actividad
enzimtica, que se evala a travs de la velocidad de la
reaccin catalizada.
Las variables ms importantes son:
Concentracin de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
pH
Temperatura
Se tendr:
dp
ds
v
dt
dt
Baja
concentracin
de sustrato
ALTA
concentracin
de sustrato
SATURACION
.
.
.
.
.
.
[s]
[ ]
d[P]
v = dt , t
s
t
E+S
k+1
k-1
ES
k+2
E+P
E+S
k+1
k-1
ES
k+2
E+P
E+S
k+1
k-1
ES
k+2
E+P
k+1
E+S
k-1
ES
ES
k+2
E+P
Hiptesis de
Michaelis-Menten
Equilibrio rpido
e0s
x
K m s
v k
V m ax s
v
K m s
k 2 e 0 s
v
K m s
k 2 e 0 V
E S e s e 0 x s
Km
E S
x
x
m ax
dx
0 k 1e s k
dt
k 1e s k
e0s
k 2
x s k
v k
k 2 e 0 V
e0s
Km s
V m ax s
v
Km s
Hiptesis de
estado estacionario
m ax
v=
Vmax * s
Km + s
Significado de la constante Km
1. Constante de equilibrio de disociacin del complejo ES
(en condiciones de equilibrio rpido)
2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el substrato
(en condiciones de equilibrio rpido)
3. Mide la funcin de fijacin (en cond.de equilibrio rpido)
4. Concentracin de substrato para la que la velocidad se hace
igual a la mitad de la mxima (s0.5)
5. Se define para una pareja enzima-substrato
6. Se mide en unidades de concentracin
Vmax
Vmax/2
Km
La Km es la concentracin de sustrato
donde se obtiene la mitad de la Vmax
Vmax
Vmax/2
Km
Representacin directa
Vmax
100
80
60
40
V
K
m x
m
20
s
0
0
20
Km
40
60
80
100
Representacin Lineweaver-Burke
1/Vmax
-1/Km
1
K m 1
1
v V mx s V mx
Representacin Hanes
1/V
-Km
x
ma
s
1
Km
s
v V mx
V mx
Representacin de Eadie-Hofstee
Vmax
-K
v K
v
V
s
m x
Eje Y
Eje X
Intercepto
Eje Y
Intercepto
Eje x
Pendiente
LineweaverBurke
1/v
1/s
1/V
-1/K
K/V
Hanes
s/v
K/V
-K
1/V
EadieHofstee
v/s
V/K
-K
a vt 0
dp
dt
t 0
ds
dt
t 0
Efecto del pH
1. Sobre la fijacin del substrato al centro activo:
- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato
2. Sobre la transformacin cataltica del substrato
3. Sobre la estructura de la protena enzimtica
15
Desnaturacin
por calor
40
75
Temperatura
ORGANISMOS TERMFILOS
Coenzimas
Las
Sustrato
oxidado
Isoenzimas o Isozimas