ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN

MOLECULAR GENERALIDADES E
INSTRUMENTACIN

Waldo Quiroz

MTODOS ESPECTROSCPICOS

Los mtodos de absorcin estn basados en la disminucin de la

potencia (o atenuacin) de la radiacin electromagntica como
consecuencia de la absorcin que se produce en su interaccin con
el soluto.
Los mtodos de absorcin poseen la considerable ventaja de
producir poca o ninguna alteracin en el sistema estudiado.

MTODOS DE ABSORCIN MOLECULAR

PROCESO POR EL CUAL UNA ESPECIE EN UN MEDIO TRANSPARENTE,

CAPTA SELECTIVAMENTE CIERTAS FRECUENCIAS DE LA RADIACIN

M +

M*

Electrnicos (tomos y molculas) (UV-VIS)

Vibracionales (slo molculas) (IR)
Rotacionales ( slo molculas)(IR)

ABSORCIN DE LA RADIACIN
UV
Niveles vibracionales

Primer estado electrnico

excitado

IR

Niveles vibracionales
Estado electrnico basal

ESPECTROS DE ABSORCIN DE MOLECULAS

MTODOS DE ABSORCIN MOLECULAR

Informacin cualitativa:
- IDENTIFICACIN: comparando el espectro de la muestra con el de
una Sustancia de referencia. Ej. IR /UV-VIS.

Transmitancia
T => TRANSMITANCIA:

Fraccin de REM incidente que pasa a

travs de la muestra (0-1)

P
T = ----Po

Po

Haz monocromatico (1)

Haz monocromatico (1)

POTENCIA HAZ
INCIDENTE

POTENCIA HAZ
TRANSMITIDO
Largo(l)

Absorbancia (A)=

P
log T
log
P0

LEY DE LAMBERT-BEER
Po

P
C

Haz monocromatico (1)

Haz monocromatico (1)

POTENCIA HAZ
TRANSMITIDO

POTENCIA HAZ
INCIDENTE
l=0

dl

l=l

Potencia incidente (P) pasando a travs de una capa infinitesimal de espesor dl de

una solucin de una especie absorbente de concentracin C

A Cl
Funcin de longitud de onda

P
ln 0 KCl
P

P0 K
log

Cl
P
ln
10

Coeficiente de
extincin o de
absortividad

FENMENOS QUE ACOMPAAN LA ABSORCIN

LEY DE LAMBERT-BEER: VISIN PRCTICA

Po Potencia del haz luego de haber

Po

atravesado la solucin blanco

Po Potencia del haz luego de

haber atravesado la solucin

del analito

LEY DE LAMBERT-BEER
La ley de Beer se cumple para cualquier . El coeficiente de extincin molar
presenta gran variacin con , lo que afecta la sensibilidad.

Presencia de mezclas de sustancias?

LA ABSORBANCIA TOTAL DE UNA MUESTRA A UNA LONGITUD DE ONDA
DETERMINADA ES LA SUMA DE LAS ABSORBANCIAS DE CADA UNO DE
SUS CONSTITUYENTES A DICHA LONGITUD DE ONDA .(esto obliga a

seleccionar muy bien la del analito)

LEY DE ADITIVIDADES PTICAS

AT = A1 + A2 + A 3 = b( 1C 1 + 2C2+ 3C3)
ABSORTIVIDAD MOLAR (UNIDADES UAL/molcm)
DEPENDE DE:

ESPECIE ABSORBENTE
CARACTERSTICAS DEL SOLVENTE
LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

Presencia de mezclas de sustancias?

Selectividad?

LEY DE ADITIVIDADES PTICAS

AT = A1 + A2 + A

= b( 1C 1 + 2C2 + 3C3)

Cmo se mide un espectro de absorcin molecular o

un valor de absorbancia?
Con ayuda de un espectrofotmetro de absorcin molecular UV-VIS

Lambda 950 (Perkin Elmer Chile)

Carry 5000 (Varian-Merck)

COMPONENTES BSICOS DE UN INSTRUMENTO

DE ABSORCIN MOLECULAR

2.- SELECTOR

4- DETECTOR

DE
1. FUENTE

3.-RECIPIENTE

5.-PROCESADOR

MUESTRA

SEAL

COMPONENTES BSICOS DE UN INSTRUMENTO

DE ABSORCIN MOLECULAR

COMPONENTES BSICOS DE UN INSTRUMENTO

DE ABSORCIN MOLECULAR

2.- SELECTOR

4- DETECTOR

DE
1. FUENTE

3.-RECIPIENTE

5.-PROCESADOR

MUESTRA

SEAL

FUENTE DE ENERGA RADIANTE

FUENTE DE ENERGA RADIANTE

En absorcin molecular la muestra debe ser irradiada con

energa radiante procedente de una fuente.
CARACTERSTICAS IDEALES. Intensidad lumnica:
1.CONTINUA EN AMPLIA REGIN DEL ESPECTRO
2. ESTABLE
3. INTENSA

Por ejemplo,
UV-Visible-IR cercano

H 2 - D2

160 - 375 nm, debe usarse ventanas y cubetas de Cuarzo

Lmpara de Arco de Xenon (250 - 600 nm, P max a 500 nm)
Filamento de W (320 - 2500 nm, necesita control de V)

FUENTE DE ENERGA RADIANTE

PROBLEMAS DE ALGUNAS FUENTES:

Potencia radiante vara exponencialmente con la tensin
aplicada, por lo que es necesario estabilizar alimentacin.
Instrumentos doble haz.
TIPO DE FUENTE
Fuente continua: Intensidad no vara con la .
Absorcin y fluorescencia molecular.
Fuente de lneas: Emisin en un limitado nmero de lneas o bandas.
Absorcin atmica.

FUENTE DE ENERGA RADIANTE

Lmpara de arco de

160 - 400 nm,

Descarga elctrica disocia al 2H emitiendo radiacin UV.
Deben usarse ventanas y cubetas de Cuarzo (el vidrio absorbe en el UV).
Obtiene un haz de alta intensidad
2

H2*2H + 2H + hv
EnvolturadeSiO2

Ventana

FUENTE DE ENERGA RADIANTE

Regin UV-VIS
Lmpara de
Tungsteno

Lmpara de

Intensidad lumnica

Deuterio

300

500

700

Longitud de onda (nm)

900

1100

FUENTE DE ENERGA RADIANTE

Lmpara de Arco de Xenon: Se basa en la descarga entre dos

electrodos en un bulbo de cuarzo con Xe a alta presin. La
excitacin de Xe produce la emisin de luz continua entre 250 y
600 nm.

Reflexin sobre el color

ESPECTRO VISIBLE Y COLORES COMPLEMENTARIOS

COMPONENTES BSICOS DE UN INSTRUMENTO

DE ABSORCIN MOLECULAR

2.- SELECTOR

4- DETECTOR

DE
1. FUENTE

3.-RECIPIENTE

5.-PROCESADOR

MUESTRA

SEAL

Sistemas selectores de longitud de onda

DE ABSORCIN

FLITROS

FILTROS DE CORTE

NO DISPERSIVOS

DE INTERFERENCIA

De prisma
Monocromadores

DISPERSIVOS

De red (grating)

Sistemas selectores de longitud de onda

FILTROS
- De absorcin
- De corte
- De interferencia
MONOCROMADOR

compuesto de:

Slit de entrada
Elementos colimadores ( lentes y espejos)
Prisma o red como elementos dispersantes
Elementos para focalizacin ( lentes y espejos)
Rendija de salida.

FILTROS

Filtro de paso de banda

Dl = anchura de banda efectiva

Filtro de corte
lc = l de corte
lm = l a la que T = 90-99% de Tm
lh= l a la que T = 0,5 Tm

Sistemas selectores de longitud de onda

-Filtros-

FILTROS DE ABSORCIN Y DE CORTE PARA UV-VIS

Filtros de interferencia vs Filtro de Absorcin

1. Anchos de banda efectivos menores (5-10 nm frente 40-50

en Filtros de Absorcin).
2. El porcentaje de transmitancia en el mximo es ms alto
70-85% del inicial, mientras que en los filtros de absorcin
es 50 %.

Seleccion longitud de onda

Seleccion longitud de onda

Dos tipos de monocromador: a) Czerney-Turner de red
(b) Bunsen prisma monocromador. ( 1 > 2).
Dispersin
debida
a
difraccin
sobre
superficie reflectante

Refraccin en las
dos caras origina
dispersin
de
la
radiacin

Monocromador prisma Bunsen

Dispersin de REM por la refraccin de la luz

Dispersin Angular del prisma

REFRACCIN

La dispersin angular
en un prisma
Donde

=> ngulo
=> longitud de onda
=>indice de refraccin

Dispersin Angular del prisma

Depende del material

que constituye el prisma

UV-Visible-Near IR cuarzo
Visible (vidrio)
IR NaCl

Monocromadores de Prisma

"Dispersin de 3 tipos de monocromadores"

red

Prisma de vidrio

Prisma de cuarzo

Poder de resolucin de Monocromadores de Prisma

R => Poder de resolucin

dn
R
b
d
d
b=> Ancho del prisma en la base

LitrowType

SISTEMA MONOCROMADOR DE RED

SISTEMA MONOCROMADOR DE RED

n = d(sen(i) + sen(r))
d espacio entre las lneas

n = d ( sen i + sen r )

90

0;
4

50
;3

00

nm

MONOCROMADOR DE RED

Segn esta ecuacin, en un ngulo r podemos

tener:

900 nm (n=1); 450 nm (n=2); 300 nm ( n=3)

d

- Diferencias de intensidad
- Uso de filtros para radiacin
de orden superior a 1


R
nN

N Nmero de Lneas Irradiadas

RED DE DIFRACCIN

Seleccion longitud de onda

Un tipo comn de monocromador es el tipo Czerny-Turner, que
consiste en
rendijas de entrada y salida
fijas, espejos
focalizadores y una red de difraccin rotatoria. Al girar la red
REM de diferentes son focalizadas a la rendija de salida.

Esquema de funcionamiento de una red (1)

Esquema de funcionamiento de una red (2)

RED

Esquema de funcionamiento de una red (3)

Esquema de funcionamiento de una red (4)

Esquema de funcionamiento de una red (5)

Esquema de funcionamiento de una red (7)

Esquema de funcionamiento de una red (7)

Esquema de funcionamiento de una red (8)

Esquema de funcionamiento de una red (9)

Esquema de funcionamiento de una red (10)

Esquema de funcionamiento de
un Espectrofotmetro

Youtube

http://www.youtube.com/watch?v=pxC6F7bK8CU

http://www.youtube.com/watch?v=qeUZRxaetTc

http://www.youtube.com/watch?v=O39avevqndU

CAPITAN QUANTUM
http://www.youtube.com/watch?v=tu57B1v0SzI

Rendijas del Monocromador

Construccion de rendijas:
Piezas de Metal; Bordes Paralelos; en el mismo plano
Ancho rendija de entrada igual a ancho de rendija de salida

Iluminacin de un Slit de Salida por radiacin

monocromtica 2

Slits (rendija) del Monocromador

Efecto del ancho de rendija en el espectro. El de entrada es
iluminado solamente con 1, 2, y 3.

Menor Ancho, ms
resolucin, menor
potencia radiante

Resolucin Espectral

Slits (rendija) del Monocromador

Efecto de Anchura de Banda sobre los detalles del espectro de

vapor del Benceno

Rendijas del Monocromador

CUBETAS

CARAS NORMALES A LA DIRECCIN DEL HAZ

ABSORCIN MNIMA A LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO
Vidrio ordinario o slice (VIS).
VIS-UV Slice fundida o cuarzo (UV).
NaCl, NaI, etc (IR).

CUBETAS

MATERIALES EN INSTRUMENTOS OPTICOS

DETECTORES

Al final la REM seleccionada tiene que ser detectada y

cuantificada.
Esto se consigue con el empleo de detectores cuyo cometido
es convertir la respuesta del instrumento en una seal
medible.

DETECTORES

REQUISITOS DE LOS DETECTORES

DEBEN TENER BAJO NIVEL DE RUIDO
LA SEAL DEBE SER PROPORCIONAL A LA POTENCIA
RADIANTE
DEBEN PRODUCIR SEAL ELCTRICA FACLMENTE
AMPLIFICABLE
DEBEN SER SENSIBLES A BAJOS NIVELES DE RADIACIN
DEBEN DAR RESPUESTA RPIDA
DEBEN RESPONDER A UN AMPLIO RANGO DE LONGITUDES
DE ONDA

SISTEMAS DETECTORES

DETECTORES DE FOTONES
FOTOTUBOS

Estn basados en el efecto fotoelctrico, en el que la

incidencia de un haz de fotones sobre un metal es capaz de
generar energa elctrica

FOTOTUBO
Anodo

Catodo

e
-

Tubo de vidrio al vaco

Ctodo de metal con capas de
xidos de metales alcalinos

Se utilizan en el UV-VIS
(190-700 nm)

100 mV

FOTOTUBO

LA FOTOCORRIENTE INDUCIDA POR LA REM CAUSA UNA

DIFERENCIA DE POTENCIAL, LA QUE ES AMPLIFICADA Y
LUEGO REGISTRADA.

Respuesta

de Fototubos de distintos
materiales
KCsSb
Ga/As

Ag/O/Cs

DETECTORES DE FOTONES
Celda Fotovoltaica:
Fotovoltaica La energa radiante genera una corriente en la interface
entre un semiconductor (ej. Se, Hg-Cd-Te) y un metal (Fe o Cu).
- Al incidir la radiacin, el semiconductor se vuelve conductor.
-Se rompen los enlaces y se liberan electrones y vacancias positivas.
- Los electrones migran hacia la pelcula metlica y pasan al circuito externo
para recombinarse con los vacancias que migran hacia el metal base.
- Se crea una corriente cuya magnitud es proporcional al nmero de fotones que
inciden.
RADIACIN
ELECTROMAGNTICA

Ag SEMITRANSPARENTE

Se utilizan en el VIS
(350-700 nm)
No usan fuente externa
de Energa

SEMICONDUCTOR

Ag

+
METAL BASE

+ e

Metal Base

+ +

TIPOS DE DETECTORES DE RADIACIN

Celda Fotovoltaica
"Schematic of a typical barrier-layer cell."

TUBO FOTOMULTIPLICADOR

En el caso de los fotomultiplicadores, la seal se amplifica

mediante el uso de dnodos en serie.
Cada dnodo (BeO, GaP o CsSb) se conecta a una fuente externa de
90 V generando en el colector una avalancha de 106 a 107 electrones
por cada fotn incidente para el caso de un tubo el fotomultiplicador
de 9 dnodos

h
Fotoctodo

Dnodo 1

Dnodo 2

Dnodo 3

nodo

FOTODIODOS DE SILICIO
-Unin de Silicio tipo p sobre un sustrato de Silicio tipo n, creando
una unin pn

En ausencia de un potencial aplicado

FOTODIODOS DE SILICIO
En un detector, el diodo es polarizado inversamente (ver figura) se
ensancha la regin de deplecin, concentrando espacios y electrones en
la superficie de los electrodos.

Diodo usado como circuito

FOTODIODOS DE SILICIO
-Cuando incide un haz lumnico se generan espacios y electrones, donde el
nmero de pares espacio-electrones es proporcional a la intensidad del haz
lumnico que incide sobre el diodo.
-Consecuencia: Transferencia de electrones desde banda de valencia a la de
conduccin, y un igual nmero de espacios se genera sobre el material.

FOTODIODOS DE SILICIO
-Unin de Silicio tipo p sobre un sustrato de Silicio tipo n, creando
una unin pn

Al aplicar un potencial, los y espacios

viajan a travs de los electrodos,
generando un pulso que es medido en un
circuito externo.
Sensibles entre 190-1100 nm.
Se pueden miniaturizar y utilizar
en series lineales de fotodiodos
(p.e. 1024 diodos).

FOTODIODOS EN SERIE
Detector de polarizacin inversa con una serie lineal de
diodos: (a) seccin transversal (b) vista superior.
Ventana de SiO2

Si tipo p

Capa de
deplecin

Si tipo n

DETECTOR DE ARREGLO DE DODOS

DISEO DE INSTRUMENTOS

Carry 5000 (Varian-Merck)

Lambda 950 (Perkin Elmer Chile)

Clasificacin general

- Haz simple, lectura directa

- Haz simple, lectura compensada
- Doble haz, lectura directa
- Doble haz, lectura compensada

DISEO DE INSTRUMENTOS
Haz simple frente a Doble Haz
La luz slo pasa por una disolucin.
1.Se ajusta el medidor a 0 % transmitancia
2.Con el blanco se ajusta 100% transmitancia
3.Se lee absorbancia de la muestra

DISEO DE INSTRUMENTOS
Haz simple frente a Doble Haz
La luz pasa a travs de una disolucin y a la vez, pasa a travs de un
blanco que sirve de referencia.
1.Con el blanco en ambas cubetas, se ajusta 100% transmitancia.
2.Con el blanco en la cubeta de referencia, se mide absorcin de la
muestra.

DISEO DE INSTRUMENTOS
Haz simple frente a Doble Haz
-Si se trabaja a ms de una longitud de onda, la calibracin se debe
repetir, pues la potencia de salida de la fuente como la respuesta
del detector dependen de la longitud de onda
- Se requiere estabilizacin del voltaje de la fuente y del detector
para compensar problemas de estabilidad.

-Si se trabaja a ms de una longitud de onda, no se requiere

calibracin del detector
- Puesto que registra diferencias de intensidades, no afectan
variaciones de la fuente y el detector, y se suprimen componentes
del blanco.

DISEO DE INSTRUMENTOS
Lectura directa frente a
lectura compensada
- Para lectura directa, se usa
un medidor de absorbancia o
transmitancia

-Ms sencillos, bajo costo,

fcil mantenimiento
- Precisin: Entre 0.5-2 %

- Para lectura compensada, se usa un

dispositivo de compensacin que
permite comparar la seal a medir
con una seal de referencia

- Ms complejos, mayor costo

- Precisin: Entre 0.2-1%
- Mayor exactitud

INSTRUMENTO DOBLE HAZ ESPACIAL

ESPECTROFOTMETRO DE DOBLE HAZ (Espacial)

Haz dividido espacialmente para realizar medidas del blanco

(referencia) y la muestra simultneamente

INSTRUMENTO DOBLE HAZ TEMPORAL

Divisin del haz temporalmente alternando la medida de la muestra y del blanco

(casi simultaneo) mediante un espejo de sectores.
La determinacin de absorbancia se realiza igualando las intensidades del haz de
referencia y del blanco mediante una cua ptica con indicador de escala
Mtodo de eleccin para registrar espectros UV-VIS a varias longitudes de onda
Compensa fluctuaciones de la fuente y del sistema detector (Temporal y Espacial)

INSTRUMENTO MONO HAZ

DiagramadesistemapticodeespectrofotmetroSpectronic20(340
950nm)MONOHAZ

Precisin 2,5 nm
Ancho banda efectiva 20 nm

Esquema de Espectrofotmetro
UV-Vis Doble haz Manual
195-850 nm
anchura de banda 4 nm
Precisin 0.2%T

Esquema de Espectrofotmetro UV-Vis

Doble Canal Perkin Elmer 57
190-900 nm
Ancho de banda: 0,2;0,5;1,0;3,0 nm
Precisin 0.1%T

DOBLE HAZ REAL: LAMBDA 25

PERKIN ELMER

DIVISOR DE HAZ

DOBLE HAZ REAL: LAMBDA 25

PERKIN ELMER

DISEO DE INSTRUMENTOS
Equipos de doble dispersin

Permiten mejorar pureza espectral y disminuir radiacin parsita

- Configuracin de dos monocromadores en serie

Esquema de Espectrofotmetro Varian Cary Modelo 219 de doble dispersin.

MEDICIN:195-850 nm
Precisin 0.2%T

ESPETROFOTMETRO CON ARREGLO DE DIODOS

DETECTOR

En la actualidad es el detector
espectrofotomtrico mas utilizado
Acoplado a un sistema cromatogrfico lquido