PRODUCCION DE AMINOCIDOS

(L-LISINA, ACIDO GLUTMICO)

 Importantes componentes de las protenas y

forman parte esencial de la alimentacin
humana y de animales. Se conocen 20
aminocidos de los cuales 9 son esenciales:
arginina, histidina, lisina, leucina, isoleucina ,
metionina, treonina, triptfano y fenilalanina.
La dosis diaria de aminocidos esenciales para
personas est en la tabla. El mtodo principal
de enriquecer los alimentos es aadiendo
aminocidos que estn en dficit. El valor de
las protenas puede aumentar al doble.

AMINOCIDOS

Requerimiento diario , en grs.

Principales usos de los aminocidos

PRODUCCION DE L-LISINA
MICROORGANISMOS PRODUCTORES:
MUTANTES AUXTROFOS:
-CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM
-BREVIBACTERIUM FLAVUM

BIOSINTESIS DE L-LISINA

 Una va de las transformaciones biosintticas del cido

asprtico da lugar a la sntesis de la lisina y otra va a la
sntesis de la homoserina es un producto de paso para la
sntesis de la treonina y la isoleucina por un lado y por otro
de la metionina. Al bloquear , inhibir la biosntesis de la
treonina , metionina e isoleucina en la etapa de formacin
de la homoserina, la reaccin de transformacin del cido
asprtico se desva para la formacin de lisina . Es
necesario sealar, que la sntesis de la lisina es controlada
al nivel de la enzima aspartoquinasa. En la sntesis de la
lisina las altas concentraciones de treonina inhiben a la
aspartoquinasa. Este efecto refuerza la produccin de
lisina.

 Acido fumrico HOOC-C-H

II
H-C-COOH
Acido oxaloactico
Acido asprtico
O
H
II
I
C-COOH
H2N- C-COOH
I
I
H-C-COOH
CH2
I
I
H
COOH

 Homoserina
HOOC-CH-CH2-CH2-OH
I
NH2

Acido diaminopimlico
HOOC-CH-CH2-CH2-CH2-CH-COOH
I

NH2

NH2

Lisina
HOOC-CH-CH2-CH2-CH2-CH2
I

NH2

NH2

-CO2

 El medio de cultivo contiene :

Melaza de beterraga (fuente de carbono)
Extracto de maz (fuente de aminocidos)
Sales de amonio, urea (fuente de nitrgeno)
Un rol importante cumplen la concentracin de
factores de crecimiento en el medio: biotina y
aminocidos necesarios : metionina, homoserina , y
treonina.
Por ejemplo para el Brevibacterium la concentracin en
un litro del medio nutritivo debe ser:
Metionina- 200 mgr.
Treonina -800 mgr.
Biotina- 15-20 Mg

ESQUEMA
TECNOLGICO
El cultivo brevibacterium flavum son bacterias inmviles gram-

positivas ,sus clulas tienen forma de cocos y son ovales.

CULTIVO INICIAL
El cultivo inicial se desarrolla en el medio agar al 2% de peptona de
carne y se cultiva a 29-30C.
Comprobacin de la actividad de las colonias crecientes , material de
siembra se comprueba en un caldo de cultivo:
El cultivo brevibacterium flavum
Se desarrolla en el medio nutritivo lquido:
Melaza :3-5%
Extracto maz:2,5-3,5%
ClNa: 0,3%
pH=7-7,2
Parte se liofiliza, parte se siembra en agar peptona carne. Los cultivos
que desarrollan sirven como iniciales para la produccin de lisina.

Evolucin de la fermentacin de la
lisina con el tiempo

 Segunda siembra en matraz de 750 ml en medio melaza maz:

pH=6,9-7,0
T=29-30C
Tiempo=24 horas.
Recuento final=2x108 ufc en un ml de medio.
Para el desarrollo del cultivo del productor se prepara en el
biorreactor 250 lts del siguiente medio: en %
Melaza ( 46% de azcar en M.S) 16,3
Extracto de maz (50% de M.S)
2
Sulfato de amonio
2
Fosfato cido de potasio:
Monosaturado
0,05
Disaturado
0,05
Carbonato de calcio
1
pH del medio = 6.9-7.0

 El medio se esteriliza una hora a 126C, en el

biorreactor de 250 lts se enfra a 29-30 C y se agrega
3-5% de material de siembra. El biorreactor est lleno
al 50% . El cultivo desarrolla a 29-30 C, con aireacin
contnua ( un volumen en un volumen de medio por
minuto y mezclando a 300rev/min en 24 horas). Para
evitar espuma se agrega 0,3% de grasa de cachalote
esterilizada a 120C en una hora.
El cultivo industrial se realiza en biorreactores de 5 a
100 m3. ste se lava y se esteriliza a 0,1 MPa durante
una hora. El cultivo se desarrolla en un medio igual al
anterior. El medio nutritivo se esteriliza a 130-132C
durante 10-15 min. Despus de enfriar hasta 30-32C el
medio se enva al biorreactor.

 Por la lnea estril de siembra al fermentador

ingresa el material de siembra en la cantidad
de 5-6 % del medio nutritivo. El biorreactor se
llena al 75%. El proceso de fermentacin dura
48-72 horas a 29-30 C, con agitacin contnua
y aireacin del medio con aire caliente estril
(50C) segn el clculo de un volumen en un
volumen de medio por minuto, P de aire= 2030 KPa. El antiespumante es grasa de
cachalote, al 0,5% del volumen del medio, (
0,2% se agrega en el momento de la
preparacin del medio).

 El medio, lquido de cultivo estabilizado con

0,15% de bisulfito de sodio con un pH=5-6, se
deshidrata en un evaporador al vaco. La
concentracin inicial de materia seca M.S. en
el lquido que ingresa al proceso de
evaporacin, es de 10-15%, al final es cerca al
40%. El lquido de cultivo evaporado , se
deshidrata con aire caliente en un atomizador.
Deshidratado hasta 48% , el concentrado de
lisina se empaca en 20 kg en papel kraft con
polietileno.

Esquema tecnolgico de produccin

del concentrado L-lisina

1.
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18.
19.
20.

Reactor con agitador para esterilizar antiespumante.

Bombas.
Reactor con agitador para disolver el bisulfito.
Balanza para la melaza.
Reservorio para solucin de bisulfito.
Reservorio para el antiespumante estril.
Tanque con agitador para la disolucin previa de la melaza con agua.
Columna esterilizadora.
Reactor para mantener la melaza disuelta y estril.
Reactor con agitador para la preparacin del medio nutritivo.
Intercambiador de calor para esterilizar el medio de cultivo.
Intercambiador de calor para enfriar el medio de cultivo nutritivo.
Dosificador.
Balanza para el extracto de maz.
Reactor con agitador para disolver las sales nutritivas.
Reactor para fermentacin del material de siembra.
Filtro de aire individual.
Reactor para la produccin.
Reactor para la estabilizacin del lquido de cultivo.
Colector, receptor del lquido de cultivo.

21. Intercambiador de calor (calentador).

22. Evaporador.
23.Retirador de espuma.
24.Condensador baromtrico.
25.Caja barmetro.
26. Colector de concentrado.
27.Colector de condensado.
28. Colector del concentrado evaporado.
29.Cmara de secado.
30. Reservorio de agua.
31.Ventilador , succionador.
32.Ciclones.
33.Compuertas de esclusa.
34.Cicln de transporte neumtico.
35. Balanzas automticas.
36.Mquina de empacado en sacos.
37.Mezclador.
38.Bomba de alimentacin.
39.Ventilador a presin.

Biosntesis fermentativa del cido

glutmico

Flujo tecnolgico de produccin

La bacteria se desarrolla en tubos, matraces . En el matraz T de cultivo = 28-30C.

pH=6,8-7,5 . Tiempo = 24 horas. El inculo se prepara en condiciones aerbicas en
el mismo medio , en fermentadores de de 2 a 5 metros cbicos hasta obtener 6-8
gr/lt de biomasa deshidratada.
El inculo en cantidad de 5-6 % (del volumen del medio) se agrega al fementador
de 50 metros cbicos. Se llena hasta el 70%. Se utiliza el medio de la tabla. La
intensidad de aireacin es de 40-45 mgr de oxgeno por minuto pH= 7,8-8,0 ,
T=28-30C. Tiempo = 48 horas. En este tiempo se obtiene 50 gr /lt de cido
gltmico.
La biomasa se separa del lquido de cultivo por centrifugacin. Se filtra.
El cido glutmico se extrae del filtrado del lquido de cultivo mediante absorcin
en una columna de NH4 + por cromatografa en intercambio inico. La capacidad
de absorcin del cationito es de 0,08-0,1 gr de cido glutmico. Despus de la
limpieza de la columna con 0,001N de cido sulfrico , la elucin se realiza con
una solucin de amonaco 0,2N, as el rendimiento del cido glutmico en la etapa
de elucin es mayor al 99% .
Los eluatos obtenidos se tratan con carbn activo y se concentran a 40C en 3-5
veces. Despus de la acidificacin con HCl hasta pH 3,2- a 4C se cristaliza hasta
77% de cido glutmico. Luego de la repeticin del tratamiento el rendimiento de
cido glutmico es hasta 87 % , la pureza de los cristales es de 99,2%. Luego de
una recristalizacin la pureza aumenta a 99,6%.

Obtencin de glutamato de sodio

Tratamiento con NaOH hasta pH=6,8-6,85
Filtracin con carbn activado (60-70C)
Evaporacin al vaco (40-45C) hasta 60% M.S.
Cristalizacin (3 das )
Centrifugacin
Deshidratacin con aire caliente (0,05-1%)
de Humedad