BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA

Facultad de Ciencias Qumicas

Licenciatura: Qumico Farmacobilogo
Equipo 1
Practica N3
Punto Isoelctrico de Protenas
DE JESUS FLORES EDGAR
GONZLEZ SNCHEZ VIRIDIANA,
SOSA VARGAS LUCIA






INTRODUCCIN:
Los grupos cido (-COOH) y bsico (-NH
2
) de los aminocidos otorgan a las protenas un
carcter cido-base o anfotrico. La carga total de las protenas depende del pH del medio y
del nmero relativo de cada aminocido en la molcula.

El valor de pH en el que la carga neta de la protena es igual a cero, la suma de las cargas
negativas iguala a la sima de las cargas positivas, a este pH se le llama punto isoelctrico o pH
isoelctrico de la protena (pI).

El pH de la solucin afecta a su solubilidad, cuando la solucin se encuentra en el punto
isoelctrico de la protena, sta pierde su carga neta y precipita.

La presencia de disolventes orgnicos tambin afecta a la solubilidad porque disminuye la
capacidad de los disolventes acuosos para separar y solubilizar los grupos cargados de los
aminocidos.

PUNTO ISOELECTRICO: El pH en el que precipitan las protenas se denomina punto isoelctrico
(pI), ya que se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas presentando una
carga neta de 0 y la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada ya que la
partculas se agregan. Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los radicales
libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y
aninicos, y as cada protena tendr un pI diferente.

SOLUBILIDAD DE PROTEINAS: las protenas en disolucin se ven afectadas en su solubilidad
por:

pH: El cambio de pH de la solucin en que se encuentre la protena promueve cambio en las
cargas de los residuos y por lo tanto un cambio de carga total de la protena. Cuando el
nmero de cargas positivas es igual al nmero de cargas negativas se dice que la protena se
encuentra en su pH isoelctrico y presentan el mnimo de solubilidad ya que no hay repulsin
de electrosttica entre las molculas.

Fuerzas de ionizacin: la solubilidad de las protenas en solucin est influenciada por la fuerza
inica que est presente, a mayor fuerza inica menor solubilidad de las protenas y a menor
fuerza inica mayor solubilidad de las protenas.

La polaridad del disolvente disminuye cuando se le aaden sustancias menos polares que el
agua como el etanol o la acetona. Con ello disminuye el grado de hidratacin de los grupos
inicos superficiales de la molcula proteica, provocando la agregacin y precipitacin. Los
disolventes orgnicos interaccionan con el interior hidrofbico de las protenas y desorganizan
la estructura terciaria, provocando su desnaturalizacin y precipitacin. La accin de los
detergentes es similar a la de los disolventes orgnicos.

Temperatura: Las protenas se encuentran en constante movimiento, un aumento en la
temperatura hace que este movimiento aumente y por lo tanto la protena interacciona mejor
con el agua mantenindose soluble. El rango de temperatura que permite la solubilidad de las
protenas se encuentra entre 0 C y 40 C.

La casena es una protena conjugada de la leche del tipo fosfoprotena que se separa de la
leche por acidificacin y forma una masa blanca. Las fosfoproteinas son un grupo de protenas
que estn qumicamente unidas a una sustancia que contiene cido fosfrico. En la casena la
mayora de los grupos fosfato estn unidos por los grupos hidroxilo de los aminocidos serina y
treonina. La casena representa cerca del 77% al 82% de las protenas presentes en la leche y el
2,7% en composicin de la leche lquida.


OBJETIVO:
1. Determinar el pI de diferentes protenas.
2. Observar el efecto del alcohol como agente precipitante.
Material Reactivos
25 Tubos de Ensaye
1 Gradilla
1 Pipeta 5 ml
1 Pipeta de 10 ml
1 Pipeta de 1 ml
Caseinato de Sodio 0.1 N
Gelatina al 1.0%
Ovoalbmina en KCl 1:16
cido Actico 0.01 N, 0.1 N,
1.0 N
Agua destilada
NaOH 1.0
Acetato de Sodio 0.1 N
Alcohol etlico
CONCLUSIN
Las protenas precipitan cerca a su punto isoelctrico debido a que sus cargas elctricas son
estables, a diferencia de las protenas que se encuentran por arriba o por debajo de ste valor de
pH, las cuales interactan con los iones del disolvente y de ste modo sus cargas son estabilizadas.

La presencia de sales a determinada concentracin, tambin influye en la solubilidad de la protena,
debido a que los iones de dichos compuestos compiten con los grupos ionizados de las protenas
por interaccionar con los iones del agua o del disolvente.

CUESTIONARIO:

1. Defina el pI de una Protena
La carga total de la molcula proteica, depende pues, del pH de la solucin y del nmero relativo de
cada aminocido en la molcula. As, cuando el pH de la solucin es tal que la carga neta de la
molcula proteica es cero, es decir, cuando el nmero total de cargas negativas iguala al nmero
total de cargas positivas presentes en la molcula, se llama a ste valor de pH, punto isoelctrico o
pH isoelctrico de la protena.

Las protenas son molculas anfteras, es decir, segn el nmero relativo de grupos carboxilo y
aminos libres, en solucin darn reaccin cido o alcalina .En otras palabras, algunas molculas se
cargarn positivamente y otras negativamente

El pH al cual una protena determinada es elctricamente neutra se conoce como punto
isoelctrico. Todas las protenas son menos solubles cuando se encuentran en su punto isoelctrico


2. Escriba la ecuacin de Henderson Hasselbach
Se utiliza para calcular el pH de una solucin buffer o tampn, a partir del pka (la constante de
disociacin del cido) y de las concentraciones de equilibrio del cido o base, del cido o la base
conjugada.

La gelatina exhibe una conducta anfotrica debido a la presencia de grupos funcionales de
aminocidos y grupos amino y carboxil terminales. En medios acdicos, es decir en presencia de
altas concentraciones de iones H+, la gelatina tiene carga positiva. En medios alcalinos, es decir en
presencia de iones OH-, la gelatina tiene carga negativa. En el punto isoelctrico (IEP) las cargas
positivas de los radicales NH3+ igualan a las cargas negativas de los radicales COO-.





Esta es la conocida ecuacin de Henderson-Hasselbalch que se utiliza a menudo para realizar los
clculos que requiere la preparacin de disoluciones tampn en el laboratorio, o para otras
aplicaciones.

3. Por qu el alcohol acta como agente precipitante para la gelatina?
La gelatina, es una mezcla heterognea de protenas, de alto peso molecular, todas son protenas
solubles en agua, y el agua esta incorporada dentro de las molculas individuales de los
aminocidos, lo que hace su carcter de gel.
Al agregar suficiente alcohol etlico, se rompen las uniones de las molculas, pues el agua se mezcla
con el alcohol, y las protenas precipitan, adems de no ser solubles en alcohol.
Si en una solucin acuosa saturada, agregas un nuevo soluto (en este caso etanol) que tiene un
mayor producto de solubilidad que el soluto presente (gelatina), este tiende a ser desplazado de la
solucin y precipita.

Bibliografa
Pena, Antonio. Bioquimica. 2. ed. Mexico: Limusa, 1988. Print.
http://www.biologia.arizona.edu/biochemistry/problem_sets/ph/HH.html
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/grasayproteina_1796.pdf
http://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/biotec_FQbiomol/Practica3FQB.pdf
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/bioquimica/guia_2_2.p
df


Determinacin de pH de Casena
Nmero de Tubo
pH=pK + log(base/cido)
Concentracin de Acido Concentracin de Base
C1V1=C2V2 C1V1=C2V2
(0.1N)(0.62ml)=C2(10ml) (0.1N)(1ml)=C2(10ml) pK pH
1 C2=6.4x10-4 C2=0.01 4.76 5.96
2 C2=1.25x10-3 C2=0.01 4.76 5.62
3 C2=2.5x10-3 C2=0.01 4.76 5.36
4 C2=5x10-3 C2=0.01 4.76 5.06
5 C2=0.01 C2=0.01 4.76 4.76
6 C2=0.02 C2=0.01 4.76 4.45
7 C2=0.04 C2=0.01 4.76 4.15
8 C2=0.08 C2=0.01 4.76 3.85
9 C2=0.16 C2=0.01 4.76 3.55
Determinacin de pH de Gelatina
Nmero de Tubo
pH=pK + log(base/cido)
Concentracin de Acido Concentracin de Base
C1V1=C2V2 C1V1=C2V2
(0.1N)(0.12ml)=C2(8ml) (0.1)(2)=C2(8) pk pH
1 C2=1.5x10-3 C2=0.025 4.76 5.98
2 C2=3.125x10-3 C2=0.025 4.76 5.66
3 C2=6.25X10-3 C2=0.025 4.76 5.36
4 C2=0.0125 C2=0.025 4.76 5.06
5 C2=0.025 C2=0.025 4.76 4.76
6 C2=0.05 C2=0.025 4.76 4.45
7 C2=0.1 C2=0.025 4.76 4.157
8 C2=0.225 C2=0.025 4.76 3.803
9 C2=0.4 C2=0.025 4.76 3.5
pH de Olvoalbumina
N de tubo pH
1 8
2 7
3 5
4 4
5 4
6 3.4
7 2.8
Determinacin de P.I. de
Casena
N de
tubo
Turbidez
Precipita
cin
1 0
2 0
3 +
4 ++
5 ++++
6 ++++ X
7 +++
8 ++
9 0
Determinacin de P.I.
de Ovoalbmina
N de
tubo
Turbidez
7 0
6 0
5 +
4 + - X
3 + - X
2 ++ - XX
1 ++ - XX
Determinacin de P.I de
Gelatina
N de
tubo
Turbidez Precipitac
in
1 +
2 +
3 +
4 +
5 +++ X
6 ++
7 +
8 +
9 ++
pH TEORICO DE PROTEINAS
Protena pH
Casena 4.6
gelatina 6.3- 9.2
Ovoalbmina 7 -9
DISCUSIN DE RESULTADOS:
Las protenas presentaban mayor precipitacin y turbidez en los
tubos en los que el pH se encontraba ms cercano a su valor de
pI.

El valor de pH es modificado por la influencia del cido actico o
del acetato de sodio que se encuentra en la solucin, por lo que
a diferentes concentraciones y cantidad de los reactivos, el pH
de las soluciones ser diferente y la apariencia de la solucin
cambiar.

En el caso de la Casena el P.I. lo determinamos en los tubos 5 y 6
puesto que fueron los tubos en el que presenta ms turbidez
adems de presentar fragmentos precipitados, son los que mas
se acercan al P.I. terico que es 4.6.

En el caso de gelatina la mayor turbidez la encontramos en el
tubo 5, aqu hubo una mayor diferencia ya que el P.I. terico que
se reporta es de 6.3 y el obtenido fue de 4.76, hay una diferencia
de 1.54.

Y por ltimo el caso experimental de la ovoalbmina, los tubo
que tuvieron la mayor turbidez fueron 1 y 2, revelndonos que el
punto isoelctrico se encuentra en algunos de estos dos tubos,
se acercan mucho al P.I. terico que es de 7 - 9.
RESULTADOS: