ENZIMOLOGA CLNICA

MG. HELDA DEL CASTILLO

DRA. ALICIA FERNNDEZ GIUSTI

AGOSTO 2009


1
Teora Complementaria
Clase 2
Al trmino de la conferencia, el alumno ser capaz
de:
Sealar la importancia biomdica de las
enzimas
Definir y clasificar las enzimas
Identificar las propiedades de las isoenzimas
Conocer la utilidad clnica de las principales
enzimas del organismo en el diagnstico,
tratamiento, evolucin y pronstico de las
enfermedades y en el diagnstico de
enfermedades genticas
2
IMPORTANCIA BIOMDICA DE LAS
ENZIMAS
La presencia de las enzimas es
indispensable para la desintegracin de los
nutrientes con el fin de proporcionar energa
para la contraccin muscular y la unin de
las unidades de construccin en protenas,
DNA, membranas, clulas y tejidos
La deficiencia en la cantidad o de la actividad
cataltica de las enzimas se debe a defectos
genticos, deficiencia de nutrientes o toxinas

Las enzimas son biocatalizadores de
naturaleza proteica
Todas las reacciones qumicas del
metabolismo celular se realizan gracias a la
accin de catalizadores o enzimas
La sustancia sobre la que acta una enzima
se denomina sustrato
A partir de 1982, se sabe que no todas las
enzimas son protenas; existen molculas de
RNA con actividad cataltica, las llamadas
ribozimas

4
La sustancia sobre la que acta la enzima se llama
sustrato.
El sustrato se une a una regin concreta del enzima,
llamada centro activo.
El centro activo comprende :
(1) un sitio de unin formado por los aminocidos
que estn en contacto directo con el sustrato y
(2) un sitio cataltico, formado por los aminocidos
directamente implicados en el mecanismo de la
reaccin .
Una vez formados el producto la enzima puede
comenzar un nuevo ciclo de reaccin

5
1.- El enzima y su sustrato




2.- Unin al centro activo




3.- Formacin del producto
6
7
Antiguamente las enzimas fueron nombradas
atendiendo al sustrato sobre el que actuaban,
aadindole el sufijo -asa o haciendo referencia a la
reaccin catalizada
As tenemos que la ureasa, cataliza la hidrlisis de la
urea; la amilasa, la hidrlisis del almidn; la lipasa, la
hidrlisis de lpidos; la DNA asa, la hidrlisis del DNA; la
ATP asa, la hidrlisis del ATP, etc.
La Unin Internacional de Bioqumica (IUB) ha
elaborado un sistema complejo en el sistema IUB, cada
enzima tiene un nombre nico y un nmero de cdigo
que refleja el tipo de reaccin catalizada y los sustratos
que intervienen.
Las enzimas se agrupan en seis clases, cada una con
varias subclases.

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1.-Oxidorreductasas. Reacciones de
transferencia de electrones.
2.- Transferasas. Transferencia de grupos
funcionales. Ej. UDP-glucosa-fructosa-
glucotransferasa.
3.- Hidrolasas. Reacciones de hidrlisis. Ej.
lipasa, proteasa, celulasa.
4.- Liasas. Adicin a dobles enlaces. Ej.
carboxilasa, fenilalanina amonioliasa.
5.-Isomerasas. Reacciones de isomerizacin. Ej.
fosfoglucosa isomerasa.
6.- Ligasas. Se conocan como sintetasas
Participan en la formacin de enlaces con
hidrlisis de ATP.

9
10
ATP: hexosa fosfotransferasa
Nombre sistemtico:
Donador
Aceptor
Grupo transferido
EC 2.7.1.1
Nmero sistemtico
Enzyme
Comission
Grupo
Subgrupo
Sub-subgrupo
Enzima
Nombre comn: Hexokinasa
11
1. Oxido-reductasas
(Catalizan reacciones de
oxidorreduccin)
A
red
+ B
ox
A
ox
+ B
red

A : es el reductor o dador electrnico;
en el curso de la reaccin se oxida
(pierde electrones o hidrgenos)
B : es el oxidante o aceptor electrnico;
en el curso de la reaccin se reduce
(gana electrones o hidrgenos)
Glucosa : O
2
oxidorreductasa
Dador
Aceptor


EC 1.1.3.4
Nombre comn:
Glucosa oxidasa
12
2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de grupo :

2.1.-.- Grupos monocarbonados
2.2.-.- Grupos aldehido o ceto
2.3.-.- Aciltransferasas
2.4.-.- Glicosiltransferasas
2.5.-.- Alquil- o Ariltransferasas
2.6.-.- Grupos nitrogenados
2.7.-.- Grupos fosfato
2.8.-.- Grupos sulfato

Dador: Aceptor - Grupo transferido - transferasa
ATP: D-Hexosa Fosfotransferasa
Ejemplo:
EC 2.7.1.1
Nombre comn: hexokinasa
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3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrlisis
A-B + H
2
O
A-OH + H-B
Clasificacin de las hidrolasas :
3.1.-.- Esterasas (carboxilesterasas,
fosfoesterasas, sulfoesterasas)
3.2.-.- Glicosidasas
3.3.-.- ter hidrolasas
3.4.-.- Pptido hidrolasas
3.5.-.- Acil anhdrido hidrolasas,etc
.-No se suelen utilizar
nombres sistemticos
en las hidrolasas.
.-Muchas de ellas
conservan el nombre
primitivo: Tripsina,
Pepsina, Papana, etc.

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4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de adicin de un grupo a
un doble enlace:Entre C y C ;C y O ;C y N
A=B + X
AXB
COO
-
CH
CH
COO
-
H
2
O COO
-
CH
CH
2
COO
-
HO
Fumarato
(trans-)
L-Malato
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5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin
Algunas reacciones isomersicas:
- Racemasas
- Oxidorreductasas intramoleculares
- Mutasas o transferasas intramoleculares
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6: Ligasas
Catalizan la unin de dos grupos qumicos a expensas
de la hidrlisis de un enlace de alta energa :ATP
A + B + ATP A-B + ADP + P
i

O bien
C + D + ATP
C-D + AMP + PP
i

Algunos enzimas tienen distinta estructura molecular
aunque su funcin es similar.
Se llaman isozimas o isoenzimas. Estas diferencias de
estructura se traducen en ligeros cambios en sus
propiedades, de forma que cada isozima se adapta
perfectamente a la funcin que debe realizar. As podemos
observar la existencia de isoenzimas en funcin de:
tipo de tejido: Por ejemplo, la lactato deshidrogenasa
presenta isozimas distintos en msculo y corazn,
el compartimento celular donde actan por ejemplo, la
malato deshidrogenasa del citoplasma es distinta a la de
mitocondria
el momento concreto del desarrollo del individuo: Por
ejemplo, algunos enzimas de la glicolisis del feto son
diferentes de los mismos enzimas en el adulto.
Un ej de isoenzima la Hexokinasa: presenta, al menos,
cuatro formas distintas : Heptica Cerebral, Muscular,
Eritrocitaria

17
Es la aplicacin del conocimiento de las
enzimas en el diagnstico, tratamiento,
evolucin y pronstico de las enfermedades.
Se utilizan como marcadores de ciertas
patologas
En el diagnstico de enfermedades genticas
18
Renovacin tisular Actividad
muscular





Enzimas plasmticas rganos secretores
especficas
Actividad
enzimtica
fisiolgica
19
Las enzimas cumplen su actividad en el
interior celular, pero tambin se les puede
encontrar en los lquidos biolgicos
Algunas enzimas ejercen su funcin en el
plasma o suero, ej. LCAT, o los factores de
coagulacin
Las enzimas plasmticas, del LCR., lquido
asctico o pleural se encuentran en bajos
niveles de concentracin

20
21
Alteraciones de la concentracin
enzimtica en suero :
1. Aumento de la
actividad
enzimtica
(a). Incremento patolgico de la
permeabilidad de membrana

(b). Muerte y destruccin celular

(c). Induccin enzimtica

(d). Proliferacin celular
2. Disminucin de la
actividad enzimtica:
(a). Intoxicaciones

(b). Enfermedades
crnicas

(c). Alteraciones del
estado nutritivo.
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Enzimas con inters diagnstico
1. Aminotransferasas
2. Creatin kinasa
3. Fosfatasa alcalina
4. -Amilasa
5. Fosfatasa cida
6. Lactato deshidrogenasa (LDH)
7. -Glutamil transferasa

23
COOH
CH H
2
N
R
1
+
COOH
C O
R
2
COOH
CH H
2
N
R
2
COOH
C O
R
1
+
Aminotransferasas (Transaminasas)
Catalizan la interconversin reversible de aminocidos
y cetocidos. Utilizan piridoxal fosfato como cofactor
Su papel es importantsimo en el metabolismo de
aminocidos.
En clnica se determinan las siguientes:

EC 2.6.1.1, Aspartato aminotransferasa (AST, GOT)
EC 2.6.1.2, Alanina aminotransferasa ( ALT, GPT)
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COO
-
CH
+
H
3
N
CH
2
COO
-
+
COO
-
C O
CH
2
CH
2
COO
-
COO
-
C
CH
2
COO
-
O
COO
-
CH
CH
2
CH
2
COO
-
+
H
3
N
+
Aspartato
-Cetoglutarato
Oxalacetato
Glutamato
Aspartato aminotransferasa (Transaminasa
glutmica oxalactica)
EC 2.6.1.1 (AST,TGO)
Aparece en citosol y mitocondrias de tejidos metablicamente muy activos.
La TGO se libera de clulas enfermas en el suero como SGOT.
Su nivel se eleva en el suero ante afecciones hepticas y despus del infarto
al miocardio.
25
Alanina aminotransferasa (Transaminasa
glutmico- pirvica)
EC 2.6.1.2 (ALT,TGP)
Enzima citoslica, de elevada concentracin en el parnquima
heptico.
La SGPT tambin est elevada despus del infarto al miocardio.
Se considera casi especfica de lesin heptica.
26
CH
3
N CH
2
COOH
C HN
NH
2
ATP ADP
CH
3
N CH
2
CO
C HN
NH
2
O P O
-
O
-
O
Creatina
Creatin fosfato
Creatin kinasa, EC 2.7.3.2 (CK, CPK)
Creatin fosfato es una transferasa que cataliza la formacin de ATP
requerido por los sistemas contrctiles o de transporte.
Es el prototipo de los compuestos conocidos como fosfgenos.
La CPK es importante en el metabolismo energtico, se encuentra en el
corazn, el msculo esqueltico y el cerebro. El pulmn carece de esta
enzima.
27
+
-
MM
MB
BB
La CK se presenta en forma de tres isoenzimas
especficas de tejido:

- Forma MM (msculo esqueltico)
- Forma MB (msculo miocrdico)
- Forma BB (cerebro)
Las isoenzimas se distinguen electroforticamente
o por mtodos inmunolgicos
La isoenzima MB es un marcador precoz de
infarto de miocardio. Un nivel muy elevado es
mal pronstico.
En el infarto al miocardio, puede ocurrir elevaciones
de SGOT,LDH y beta hidroxibutirato dehidrogenasa y
de CPK., en el infarto pulmonar slo de las tres
primeras.


28
R O P
O
O
-
O
-
+ H
2
O R OH
+ HO P O
-
O
O
-
Fosfatasa alcalina, EC 3.1.3.1
Hidroliza con baja especificidad fosfomonosteres, a un pH
alto (8 -9 de ah el nombre)
Aparece en gran cantidad de tejidos.
29
La fosfatasa alcalina presenta varias isoenzimas:
- sea
- Heptica
- Intestinal
- Placentaria
Las ms importantes son las dos primeras. Se pueden distinguir
por su termoestabilidad, siendo la sea ms termolbil.
sea: Propia del tejido seo en crecimiento: elevacin
fisiolgica en la adolescencia.
Se encuentra elevada en muchas enfermedades seas, como
osteomalacia o por invasin sea por cncer localizado en
mamas, pulmones o prstata.
Heptica: Propia de las clulas del rbol biliar: se eleva en las
colestasis (obstrucciones biliares) asociada a partculas
de elevado peso molecular
30
Fosfatasa cida, EC 3.1.3.2
R O P
O
O
-
O
-
+ H
2
O R OH
+ HO P O
-
O
O
-
Hidroliza fosfomonosteres con baja especificidad. Presenta
varias isoenzimas, una de las cuales (Fosfatasa cida prosttica)
es un marcador muy fiable del cncer de prstata y que se emplea
en el diagnstico precoz del mismo.
31
a-Amilasa, EC 3.2.1.1
Es una enzima producida por las glndulas
salivales y el pncreas.

Es un marcador muy importante de afecciones
pancreticas agudas (pancreatitis). Puede incluso
aparecer en la orina, debido a su bajo peso
molecular (amilasuria)
32
La LDH est constituida por
cuatros subunidades.
Existen dos tipos de
subunidades. diferentes, lo
que explica la existencia de 5
isoformas distintas que poseen
una movilidad electrofortica
diferente que permite
distinguirlas.
Puede estar elevada despus de
infarto al miocardio y durante
muchas enfermedades del
hgado.
Tambin puede estar elevada en
anemia hemoltica.

Deshidrogenasa lctica
33
34
g-Glutamil transferasa, EC 2.3.2.2 (GGT)
GSH + aa
-Glu-aa
+ Cys-Gly
Cataliza una reaccin entre un tripptido: el glutation y un
aminocido para formar un gama-glutamil aminocido y cisteinil
glicina.
Tiene un importante papel en el transporte de aminocidos a
travs de membranas.
Es un indicador sensible de enfermedades del hgado.
Es una enzima inducible, y su concentracin en suero aumenta
con xenobiticos (alcohol, drogas, etc.)
35
Aspartato aminotransferasa (AST/GOT)
Valores normales: < 40U/ml
Aumento importante: Infarto de miocardio, hepatitis,
traumatismos
Aumento moderado: cirrosis, mononucleosis, ictericia,
hemlisis
Alanina aminotransferasa (ALT/GPT)
Valores normales: < 50 U/ml
Aumento importante: Shock, hepatitis
Aumento moderado: cirrosis, mononucleosis, ictericia,
-amilasa
Valores normales: <50U/ml
Aumento importante: pancreatitis aguda y crnica, cncer de
pncreas.
Aumento moderado: parotiditis, algunos carcinomas,
procesos parapancreticos
(gastritis, lcera duodenal, peritonitis, obstruccin intestinal.
Gamaglutamil transpeptidasa (GGT)

Valores normales: < 35U/ml en varones y <25U/ml en
mujeres
Aumento importante: Hepatitis vrica, obstruccin biliar,
metstasis hepticas, enf. alcohlica
Aumento moderado: infecciones que afectan al hgado
(citomegalovirus, mononucleosis infecciosa)

Lctico deshidrogenasa (LDH)

Valores normales: < 120-230 U/ml
Aumento importante: infarto de miocardio (LDH1),
hepatitis vricas (LDH4, LDH5)
Aumento moderado: hemlisis, accidente cerebro-
vascular, distrofia muscular


36
Enzimas sricos en la enfermedad cardiaca


Creatn fosfoquinasa (CPK) < 160 U/L (Isoenzima mb)

Lctico deshidrogenasa (LDH) < 120-230 U/L; isoenzima 1
(15-25%)

Aspartato aminotransferasa (AST; GOT) < 40 U/L

Tras el infarto, hay una liberacin de protenas
intracelulares de las clulas daadas. La primera en ser
detectada es la troponina (5-10 h post infarto), seguida
de la CPK-MB (pico a 1 da), y finalmente la LDH 1,
cuyo mximo se alcanza a los 2-3 das post infarto

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CPK
LDH 1
TGO
ENZIMA SRICA PRINCIPAL USO DIAGNSTICO
Aminotransferasas
Aspartato aminotransferasa (TGO)

Alanina aminotransferasa (TGP)

Infarto de miocardio

Hepatitis viral
Amilasa y lipasa Pancreatitis aguda
Creatina kinasa (CPK) Trastornos musculares e infarto de
miocardio
Gama glutamil transpeptidasa
(GGT)
Enfermedades hepticas
Deshidrogenasa lctica (LDH)
(isoenzimas)
Infarto de miocardio
Fosfatasa cida Carcinoma metastsico de prstata
Fosfatasa alcalina
(isoenzimas)
Trastornos seos y enfermedades
hepticas obstructivas
39
ENZIMAS EN EL DIAGNSTICO DE
ENFERMEDADES GENTICAS
Gracias a tcnicas basadas en el rendimiento
cataltico y la especificidad de la catlisis
enzimtica, se pueden detectar las
mutaciones genticas:
PCR (reaccin en cadena de la polimerasa),
analiza el DNA en muestras biolgicas y forenses
RFLP (polimorfismo de longitud del
fragmento de restriccin), facilita la deteccin
prenatal de trastornos hereditarios como rasgo
drepanoctico, talasemia, fenilcetonuria infantil y
enfermedad de Huntington
CONCLUSIONES
Las enzimas son catalizadores biolgicos
eficaces y altamente especficos
El anlisis de las enzimas plasmticas
ayudan al diagnstico, pronstico y evolucin
de las enfermedades
A travs de la terapia gnica se logra
subsanar las deficiencias o los defectos en la
funcin de las enzimas
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