DIAGNSTICO

LABORATORIAL
HIV

Dra. Gabriela Cantillo
PATLOGA CLNICA


INTRODUCCIN

Sndrome Inmunodeficiencia Adquirida causado virus transmiten:
a) Contacto sexual
b) Exposicin a sangre contaminada
c) Hemoderivados
d) Transmitido de madre infectada al feto, durante embarazo o parto.

ORIGEN DEL HIV

Virus se transmiti al humano por zoonosis, especies de monos
africanos.
Existen dos virus bien diferenciados:
VIH-1
VIH-2

ESTRUCTURA DEL VIRUS




CMO ACTA EL VIRUS


1. Enlace y Fusin

2. Transcriptasa Inversa

3. Integracin

4. Transcripcin

5. Ensamblaje

6. Gemacin

DIAGNSTICO
MTODOS INDIRECTOS

a. Pruebas de Screening Serolgicas:

Tcnicas Inmunoenzimticas
Inmunocromatogrficas
Aglutinacin

b. Pruebas Confirmatorias:

Western Blot
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI)
Radioinmunoprecipitacin (RIPA)
Inmunoensayo Lineal (LIA)

MTODOS DIRECTOS

Cultivo Vrico

Deteccin de Antigenemia
(antgeno p24)

Deteccin molecular de
cidos Nucleicos





MTODOS INDIRECTOS DE SCREENING:

ENZIMOINUNOENSAYO (EIA ELISA)


EIA 1 generacin: Lisado viral VIH-1 (+falsos positivos)


EIA 2 generacin: Pptidos recombinantes/sintticos de

VIH-1 y VIH-2 (poca sensibilidad, detectan seroconversin

en 6 a 12 semanas despus de producirse la infeccin).














EIA/ELFA 3 generacin:

- Pptidos recombinantes/sintticos VIH-1 y VIH-2 y Ag.VIH 1 O
- Detectan anticuerpos (IgG, IgM e IgA)
- Reducen el perodo de ventana a 3 semanas.


EIA/ELFA 4 generacin:

- Pptidos recombinantes/sintticos VIH-1 y VIH-2 y Ag.VIH-1 O
- Detectan anticuerpos (IgG, IgM e IgA)
- Anticuerpos para detectar Antgeno p24
- Reduciendo el perodo de ventana a 2 semanas
- Sensibilidad del 100% y especificidad del 99,7%.


PROCEDIMIENTO
INMUNOCROMATOGRAFA

Mtodo indirecto cualitativo

Deteccin de todos los anticuerpos de tipo (IgG, IgM, IgA)
especficos para HIV-1 incluyendo subtipo O y HIV-2 (tercera
Generacin)

Antgeno p24 (cuarta Generacin)

Suero, plasma o sangre total

Tercera Generacin: S: 100% y E: 99,3%

Cuarta Generacin: S: 100% y E: 99,88%













MTODOS INDIRECTOS CONFIRMATORIOS
WESTERN BLOT


La metodologa: electroforesis en gel en funcin al peso molecular de
las protenas vricas

Si el suero del paciente posee anticuerpos frente a una protena se
produce una banda coloreada

Detecta anticuerpos frente a:

a) glicoprotenas de envoltura gp160, gp120 y gp41,
b) glicoprotenas las codificadas por el gen gag p55, p24 y p17
c) las protenas enzimticas p66, p51 y p31





INTERPRETACIN


- Positivo
- Negativo
- Indeterminado

Causas resultados Indeterminados:

- Seroconversin reciente
- RN de madres seropositivas
- Enfermedad avanzada o deterioro inmunolgico
- Enfermedades autoinmunes
- Embarazadas

En estos casos se recomienda control en 30 das.



INTERPRETACIN



CAUSAS DE FALSOS POSITIVOS EN LAS PRUEBAS SRICAS DE
DETECCIN DE ANTICUERPOS ANTI VIH

RELATIVAS AL SUERO:

Congelaciones y descongelaciones repetidas

Almacenamiento a temperatura subptima

Aspecto lipdico o turbio del suero

Contaminacin microbiana

Sueros tratados con calor (mayores o iguales a 60C)

Errores de extraccin o identificacin


RELATIVAS A LA PRESENCIA DE ANTICUERPOS



Personas con anticuerpos anti-HLA DR4, DQw3

Enfermedades reumatoideas

Lupus eritematoso

Multitrasfundidos

Transplantados renales

Multparas
RELATIVAS A OTRAS CONDICIONES:


Hemodializados, fracaso renal crnico

Sndrome de Stevens Johnson

Administracin previa de inmunoglobulinas

Sueros postvacunales (gripe, Hepatitis B)

Infecciones agudas por virus DNA

Enfermedad heptica alcohlica grave
CAUSAS DE FALSOS NEGATIVOS EN LAS PRUEBAS SRICAS DE DETECCIN
DE ANTICUERPOS ANTI VIH

Periodo Ventana que precede a la aparicin de anticuerpos
Tratamiento inmunosupresor prolongado
Transplante de mdula sea
Disfunciones de los linfocitos B
Plasmafresis
Exanguneotransfusin
Neoplasias
Errores de extraccin o identificacin
Fallos en el principio tcnico o en el proceso de fabricacin del
equipo diagnstico
Respuestas anmalas ante la infeccin de VIH





MTODOS DIRECTOS

CULTIVO VIRAL:

Indicaciones

Infeccin peditrica.
Infeccin silente (perodo ventana).
Estudios de epidemiologa molecular.
Estudios de sensibilidad a los antirretrovirales (fenotipo)
Caracterizacin biolgica de las cepas (tropismo, sincitiales, etc.)

Desventajas

Sensibilidad variable (generalmente baja).
Tcnica laboriosa



DETECCIN DE ANTIGENEMIA (ANTGENO p24):


El antgeno p24 de la cpside del VIH (core)
Detectado en suero o plasma mediante una reaccin de EIA
Es un marcador precoz de infeccin aguda por VIH.


DETECCIN DE CIDOS NUCLEICOS:

Tcnicas de diagnstico gentico.

Hibridacin simple (dot-blot, hibridacin in situ).
Amplificacin por reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y variantes:
RT-PCR, nested PCR, in situ-PCR, competitive PCR, etc.
Amplificacin isotrmica con RNasa H (NASBA).

Indicaciones.

Diagnstico perinatal
Individuos con patrn serolgico indeterminado.
Infecciones silentes (periodo ventana).



Algoritmo para el diagnstico serolgico de la
infeccin por VIH
Tcnicas de Tamizaje
No Reactivo
informar
Reactivo
Laboratorio Perifrico
Banco de Sangre
Laboratorio de Referencia
2 Tcnicas de Tamizaje
Distinta Configuracin antignica
No Reactivo
(-/-)
informar
Reactivo
(+/+)
Discordante
(+/-)
WESTERN BLOT
Positivo Indeterminado Negativo
INFORMAR
Repetir serologa
en 30 das









SEGUIMIENTO DE PACIENTES VIVIENDO CON HIV/SIDA

RECUENTO DE CLULAS CD4

- Una vez diagnosticado el paciente: exmenes complementarios
- Recuento de Clulas T CD4 (glbulos blancos)
- Consiste en medicin del # de clulas CD4 en un milmetro cbico
de sangre (mm3).
- El recuento de clulas CD4 de una persona no infectada por VIH:
450 a 1.600.
- El recuento de CD4 tambin vara: estrs, el fumar, ciclo menstrual,
actividad fsica reciente, la hora del da y otras enfermedades.
- Tambin permite conocer el # de linfocitos T CD8 y lintocitos T CD3.
- La relacin de CD4/CD8 es de 2:1.
- Se emplea la tcnica de citometra de flujo.



Su recuento es importante para:


Evaluar el estado inmunolgico

Indicacin de inicio de TARV

Evaluar eficacia TARV

Indicacin de profilaxis

Suspensin de profilaxis

Monitoreo de evolucin sin TARV



PARAMETROS DEL RECUENTO DE CELULAS CD4/CD8


Superiores a 500 clulas CD4+: (Buen estado de salud)

Entre 200 y 500 clulas CD4+: Incrementa riesgo de Herpes, Infecciones
en piel, Infecciones pulmonares, TB, Enfermedades Oportunistas,
Neumona por Pneumocistis carini, Citomegalovirus

Entre 50 y 200 clulas CD4+: Se incrementa el riesgo por otras
enfermedades oportunistas. Se recomienda ya el tratamiento preventivo

Inferiores a 100: Considerar el tratamiento preventivo para enfermedades
oportunistas e infecciones masivas por hongos.

Inferiores a 50 clulas CD4+: Se incrementa riesgo de enfermedades
oportunistas. Continuar con terapias preventivas.




CARGA VIRAL

- Las pruebas de carga viral miden la cantidad de material
gentico del VIH en sangre mediante tcnicas moleculares.

- Los resultados de una prueba de carga viral se expresan como
el nmero de copias de ARN del VIH en un mililitro de sangre

- Es importante su determinacin para:

1. iniciar el tratamiento

2. evaluar el tratamiento

3. efectuar cambios en el mismo, conjuntamente con los valores
del recuento de los linfocitos T CD4.






CARGA VIRAL (COPIAS/ML)
MENOR
500
501 - 3000
3.001 10.000
10.001
30.000
MAYOR
30.000
PROBABILIDAD DESARROLLAR
SIDA (%)
5,4 16,6 31,7 55,2 80,0
PROBABILIDAD DE MORIR (%) 0,9 6,3 18,1 34,9 69,5
UTILIZACIN DE LA CARGA VIRAL PARA PREDECIR EL CURSO DE
LA ENFERMEDAD








DIAGNSTICO DE LA INFECCIN PERINATAL

- Transferencia pasiva de anticuerpos de la madre al recin nacido
(IgG) y permanece en sangre del nio hasta 18 meses de edad.

- Nios < 18 meses: necesidad de mtodos directos.

a) PCR detectar ADN genoma vrico (sensibilidad 100%) mes edad.

b) Cultivo viral (complicado)

c) Antigenemia (baja sensibilidad)

d) Carga viral (puede dar falsos positivos)

- Mtodos Indirectos:

a) Determinar mediante EIA, IgM e IgA para el virus.




GRACIAS