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Objetivos

Objetivo General
Evaluar los efectos patognicos toxinas producidas por
Xenorhabdus bovienni, sobre pupas y larvas de Ceratitis
capitata
Objetivo Especfico
Determinar las concentraciones letales 50 (CL
50
) y
90 (CL
90
) de las toxinas producidas por Xenorhabdus
bovienni, en pupas y larvas Ceratitis capitata

Variables
Variable Independiente:
Toxinas producidas por Xenorhabdus bovienni.


Variable Dependiente:
Desarrollo de pupas y larvas de la mosca Ceratitis
capitata


Antecedentes



Pea (2006), observ los efectos de Steinernema sp. sobre larvas de Ancognatha
scarabaeoides.Para la evaluacin de eficacia in vitro, se coloc una larva de A.
scarabaeoides en una suspensin de 3 ml de nematodos a diversas concentraciones (1, 5,
15, 30, 50, 100 y 150 nemtodos/ml). El porcentaje acumulado de mortalidad de las
larvas de A. scarabaeoides 18 das despus de la inoculacin fue de 100% y 90% con las
concentraciones de 150 y 100 nematodos/ml respectivamente.
Ayala (2012), evalu tcnicas de aplicacin de Steinernema carpocapsae para el control
del barrenador gigante de la palma Cyparissius daedalus en los Llanos Orientales de
Colombia. Se evaluaron cuatro tcnicas de aplicacin, usando los equipos especializados
de bombeo, aspersin y la regadera de jardn, para establecer la mortalidad de S.
carpocapsae. La menor mortalidad del nematodo ocurri con la regadera (19%), seguida
de las encontradas con los equipos Maruyama (44%) y Royal Cndor (58%). Por su
parte, con el equipo Jacto se produjo el mayor dao (68%).
Seplveda (2008), estudi los efectos de dos nematodos entomopatgenos sobre el
picudo negro del pltano Cosmopolites sordidus (Coleoptero). El objetivo del trabajo fue
evaluar la virulencia de Steinernema carpocapsae, y Heterorhabditis bacteriophora, sobre
adultos y larvas de ltimo instar de picudo. El bioensayo utilizado fue el de infeccin
individual en platos multipozo con papel filtro, en concentraciones de 10, 100 y 1.000
juveniles infectivos (JI)/25 ml, bajo las condiciones evaluadas, tanto adultos como larvas
del picudo negro fueron susceptibles al ataque de ambos nematodos, respondiendo
diferencialmente al aumento de la dosis. Se evidenci sintomatologa de infeccin y
multiplicacin en larvas, de las especies de nematodos evaluadas.

Antecedentes


Almazn (2004), estudi los efectos de nematodos entomopatgenos para el control biolgico de
la mosca del cuerno, Haematobia irritans L. (Diptera: Muscidae). Se probaron siete especies de los
gneros Steinernema y Heterorhabditis contra la mosca del cuerno (Haematobia irritans).
El estudio se realiz en condiciones de laboratorio mediante tres tipos de experimentos: Larvas de
la mosca en placas de Petri, pupas en suelo y pupas en estircol. Las poblaciones de nematodos
demostraron infectividad en larvas o adultos en placa de Petri.
Rodrguez (2012), estudi nematodos entomopatgenos para uso como biorreguladores en la
agricultura en Cuba. A partir de diversos estudios se seleccion a Heterorhabditis
bacteriophora Poinar cepa HC1, que se reproduce artesanalmente en 33 Centros de Reproduccin
de Entomfagos y Entomopatgenos (CREE). Heterorhabditis indica cepa P
2
M se emplea en el
manejo de diversas plagas, con nfasis en Pachnaeus litus Guer, mientras Heterorhabditis spp. cepa
CIAP-DEY-6 se emplearon para la plaga Phyllophaga spp.
Teniendo en cuenta la aceptacin de los nematodos entomopatgenos por los productores, se
establecieron como proyectos en Cuba: Continuar estudios con las aplicaciones en campo como:
dosis, frecuencia y momento de aplicacin; entre otros retos.
Prez (2006), caracteriz las bacterias simbiontes de los nematodos entomopatgenos
Steinernema cubanum, Heterorhabditis indica y H. bacteriophora. Los gneros estudiados fueron
Xenorhabdus y Photorhabdus formados por bacterias simbiontes especficas que viven asociadas
con los nematodos entomopatgenos Steinernema y Heterorhabditis, respectivamente.
Las formas primarias de los aislados se caracterizaron por la absorcin de los pigmentos en los
medios agar Mc. Conkey y agar NBTA, la produccin de lipasa, lecitinasa, proteasa, y la presencia
de flagelo.


Antecedentes

Trivio (2006), aisl y caracteriz Xenorhabdus bovienii, simbionte de Steinernema feltiae
Cepa Colombia, cuya accin letal permiti el control de insectos plagas. Se efectu el
aislamiento mediante siembra en superficie en el medio NBTA de hemolinfa de
cadveres de larvas de Galleria mellonella infectados con nematodos de S. feltiae y se
emplearon pruebas bioqumicas de utilizacin de sustratos para su caracterizacin.
La cepa aislada presento dos variaciones de fase, detectadas por cambios de coloracin
de las colonias durante 24-48 horas de crecimiento en medio NBTA.
Valdez (2006), reaaliz la reproduccin de Heterorhabditis indica en cultivos
bidimensionales elaborados con protena animal. Se evalu la reproduccin y desarrollo
de juveniles infectivos de Heterorhabditis indica, sobre diferentes medios de cultivo
bidimensionales, que se elaboraron por la combinacin de hgado de pollo con almidn,
as como hgado de cerdo con melaza, almidn y polvo de arroz. Los cuatro medios de
cultivos permitieron la reproduccin de los nematodos.
Brajan (2013), evalu dos mtodos de extraccin de la bacteria simbionte Photorhabdus
luminescens del nematodo entomopatgeno Heterorhabditis bacteriophora,el nematodo
presenta una simbiosis muy especial con la bacteria Photorhabdus luminescens. El
objetivo del estudio fue evaluar y definir parmetros para la extraccin de la bacteria
simbionte Photorhabdus luminescens a travs de dos mtodos, el primero la maceracin
de nematodos extrados de larvas infestadas con el nematodo y el segundo por la
extraccin de la hemolinfa de larvas de Galleria mellonella infectadas con la bacteria.

Materiales,
Mtodos y
Procedimientos
Materiales

Material Biolgico:
La investigacin ser realizada a partir de muestras de tierra con
larvas de nematodos, tomadas de los cultivos pertenecientes al
Instituto Nacional De Innovacin Agraria (INIA)-Vista Florida, car.
Carretera Chiclayo a Ferreafe #08. Lambayeque. 2014, la misma
institucin proveer tambin los estadios de la mosca Ceratitis
capitata.

Mtodos
Poblacin:
Toda la poblacin de larvas y pupas de la mosca Ceratitis capitata
obtenidas a partir de muestras de cultivos pertenecientes al
Instituto Nacional De Innovacin Agraria (INIA)-Vista Florida, car.
Carretera Chiclayo a Ferreafe #08. Lambayeque. 2014.
Tamao de la Muestra:
La muestra ser en nmero de 12, el cual ha sido
obtenido de la siguiente manera: Muestra:

La muestra estar
conformada por 12
larvas de nematodos
de suelo,
colectadas de cultivos
pertenecientes al
Instituto Nacional De
Innovacin Agraria
(INIA)-Vista Florida,
car. Carretera Chiclayo
a Ferreafe #08.
Lambayeque. 2014.


Estadios Cepa CCs = Tamao de Muestra
2 x 3 x 2 = 12
Tamao de Muestra Repeticiones = Unidades experimentales
12 x 30 = 360
Diseo de Investigacin:
La presente investigacin es de tipo experimental y
se utilizar el diseo de estmulo creciente
Mtodos, tcnicas
e instrumentos de
recoleccin de
datos:


Se realizar la observacin para obtener un registro visual
del trabajo experimental, seleccionados los estadios de la
mosca Ceratitis capitata, se numerar, describir,
ordenar y realizar la medicin de la longitud total
(mm). Para la recoleccin de datos se utilizar como
instrumento un libro de notas y una videocmara
necesaria para alcanzar los objetivos del estudio, as
tambin se har uso de un documento con el
consentimiento informado, que permitir acceder a la
autorizacin de los ingenieros encargados del Instituto
Nacional De Innovacin Agraria (INIA)-Vista Florida, a
travs de su firma

Aislamiento de la Bacteria Xenorhabdus bovienii:
La bacteria se obtendr a partir de la hemolinfa de larvas de Galleria
mellonella mantenidas en condiciones controladas de laboratorio sobre
dieta artificial, las cuales se infectarn con Steinernema feltiae al alcanzar el
IV o V instar, segn la metodologa descrita por Trivio y Luque (2006).
Extraccin de Metabolitos Secundarios de X. bovienii:
Los cultivos puros de la bacteria X. bovienii se cultivar en Agar NBTA y se
almacenarn en nevera a 4 C, hasta el momento de obtener los
metabolitos secundarios. La Extraccin de Metabolitos Secundarios
Orgnicos se utilizar el mtodo de Xu, (1998) y Vela et al (2009).
Reconocimiento de actividad entomopatgena de los metabolitos
secundarios de X. bovienii, obtenidos de la extraccin
Los estadios de Ceratitis capitata, se utilizarn como organismos
Indicadores, por su susceptibilidad a los metabolitos secundarios obtenidos
de X . bovienii.
La variable evaluada correspondi a los cambios morfo-fisiolgicos de
larvas y pupas una vez inoculados con las toxinas.
Anlisis
estadstico de
los datos


Los datos obtenidos se ordenarn en tablas y se
tabularn utilizando la hoja de clculo Excel del
software Office 2014; asimismo la concentracin, la
asociacin de gneros de las larvas de la mosca, el pH,
la temperatura de la suspensin de las toxinas, se
examinarn por medio de la Prueba de chi-cuadrado
mediante el programa estadstico Stat Soft, Kernel
Releare 5.5 (2000)

Referencias.

Dary Ayala L, FR. Leiva. 2004. Evaluacin de tcnicas de aplicacin de Steinernema carpocapsae (Rhabditida:
Steinernematidae) para el control del barrenador gigante de la palma Cyparissius daedalus Cramer en los Llanos
Orientales de Colombia.Rev. Agro Colom. (Medellin). Vol. 22 (2): 119-127.
Pea Villamil LA, L. Cultid. 2006. Efecto de Steinernema sp. sobre larvas de Ancognatha scarabaeoides (Coleoptera:
Scarabaeidae) en condiciones de laboratorio e Invernadero.Rev. Corpoica Ciencia y Tecnologa Agropecuaria.
(Medellin). Vol. 7(1): 66-69
Seplveda Cano PA, JC. Lpez Nez, A. Soto Giraldo. 2008. Efecto de dos nematodos entomopatgenos sobre
Cosmopolites sordidus (Coleoptera: Dryophthoridae).Rev. Colomb. Entomol. (Medelln). Vol. 34 (1): 62-67.
Almazn Garca C, M. Rodriguez Solano, I. Armendriz Gonzales. 2004. Estudios preliminares con nematodos
entomopatgenos para el control biolgico de la mosca del cuerno, Haematobia irritans L. (Dptera: Muscidae).
Rev. Veterinaria (Mxico). Vol. 35 (4): 339-350.
Rodrguez M, L. Gmez. 2012. Nemtodos entomopatgenos: elementos del desarrollo histrico y retos para su
consolidacin como biorreguladores en la agricultura en Cuba. Rev. Proteccin Vegetal (Cuba). Vol. 27 (3): 137-
146.
Garca M, D. Cabrera, L. Gmez. 2007. Produccin de nematodos entomopatgenos en el Centro Nacional de
Referencia Fitosanitaria para la montaa en Cuba. Rev. Proteccin Vegetal (Cuba). Vol. 22 (2): 131-133.
Prez Bocourt Y, M. Mrquez, M. Gmez. 2006. Caracterizacin de la fase primaria de las bacterias simbiontes de
los nematodos entomopatgenos Steinernema cubanum, Heterorhabditis indica y H. bacteriophora. Rev.
Fitosanidad (Cuba). Vol. 10 (3): 193-195.
Trivio J, Vanegas J, Martnez J. Aislamiento y caracterizacin de Xenorhabdu sbovienii, simbionte de Steinernema
feltiae (Rhabditida: Steinernematidae) Cepa Colombia. Nematodos Entomoparsitos: experiencias y
perspectivas (1era edicin). Universidad Nacional de Colombia. Editorial Paradas, 2006 (pp 33-40).