FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERIA EN ALIMENTOS CARRERA BIOQUIMICA DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DE MICROORGANISMOS INTEGRANTES: GUIJARRO VIOLETA TITUAA CARLOS LALAEO SILVANA VINICIO SOLIS
Contar clulas Mtodos para contar clulas Mtodos para contar clulas Basados en la microscopa Hemocitmetro Contador de Bacterias UFC Basados en Colorantes CUENTA VIABLE Contar clulas Crecimiento Es la capacidad para multiplicarse que tienen las clulas individuales esto es iniciar y completar una divisin celular Involucra sntesis de estructuras celulares,cidos nucleicos, protenas y otros componentes celulares a partir de nutrientes. Todos los seres vivos toman nutrientes y excretan productos de desecho. Contar clulas Biomasa Es un trmino general que se refiere a los microorganismos presentes en un sistema. Se trata de una variable clara para establecer las tazas de produccin, de consumo de nutrientes y el clculo de los balances dems de cualquier proceso biolgico Para determinar la biomasa es necesario calcular el nmero de clulas en una determinada muestra. Contar clulas Determinacin de poblaciones concentraciones de clulas Determina la cantidad de individuos en un medio de cultivo, (solido o liquido). Para la determinacin de concentracin de individuos se habla de unidad formadora de colonias, (ufc). Bacterias, hongos, algas, protozoos, sus concentraciones se expresan en ufc/ml.
Contar clulas Si la muestra de una solucin es muy concentrada es imposible determinar su numero de colonias, de 20 a 70 colonias mayores a estos valores es difcil contar, se realiza las diluciones de la muestra a analizar. Contar clulas Diluciones para cuenta viable Contar clulas CUENTA VIABLE Contar clulas Cuenta viable Contar clulas
CMARA DE NEUBAUER O HEMOCITMETRO Contar clulas El hemocitmetro o cmara de Neubauer Contar clulas (rojo) (azul) (verde) (amarillo) (gris) 1 mm Profundidad = 0,1 mm La cuadrcula del hemocitmetro Contar clulas Se introduce la suspensin de clulas en el hemocitmetro Contar clulas Observacin con microscopio ptico y recuento de clulas Contar clulas La regin de recuento del hemocitmetro Contar clulas Diferencias entre clulas vivas y muertas Clula viva Clula muerta De las tres lneas, la del centro es la que corresponde al lmite del cuadrado Contar clulas PARA SU DETERMINACION N ESPORAS= ESPORAS TOTALES / V V= E(espesor) A(rea del hemocitmetro Contar clulas La cmara de recuento del hemocitmetro USO DE COLORANTES Marcaje fluorescente con naranja de acridina y ioduro de propidio Contar clulas Naranja de acridina: atraviesa la membrana celular y tie los cidos nucleicos, generando una intensa fluorescencia de color verde a bajas concentraciones. Ioduro de propidio: no atraviesa la membrana de clulas intactas, pero s la de las clulas daadas. Se une a los cidos nucleicos, desplazando al naranja de acridina y genera una intensa fluorescencia de color rojo. Viabilidad celular: Naranja de acridina + Ioduro de propidio Clulas vivas Clulas muertas Contar clulas Recuento de clulas con el hemocitmetro Contar clulas Recuento de clulas por anlisis de imagen Contar clulas UFC (UNIDADES FORMADORAS DE COLONIA) Contar clulas Calculo de numero de colonias Contar clulas 3. Determinacin de metabolitos asociados a crecimiento 3.1 Mtodos Directos Componentes de Pared celular Protenas cidos nucleicos
3.2 Mtodos Indirectos Produccin de cidos orgnicos Produccin de alcoholes y glcidos Produccin de CO2 MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO MICROBIANO Contar clulas 4. Determinacin de la utilizacin de algn nutriente 4.1 Mtodos Indirectos Oxgeno Azcares CO2 cidos grasos MTODOS PARA DETERMINAR EL CRECIMIENTO MICROBIANO