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TLAXCALA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
MUESTRAS Y EXAMENES PARA IDENTIFICACIN DE PARSITOS
MARZO 2008
Generalidades de parasitologa
Parasitologa:
Conocimiento global
Sarcodinos:
Apicomplexa:
Ciliophora:
Balantidium coli
Helmintos
( Pluricelulares)
Cestodos intestinales
Taenia solium, Taenia saginata, Echinococcus granulosus
Trematodos
Fasciola heptica, Schistosoma
Filarias:
Linfticas
Wucheria bancrofti, Bruga malayi, Brugia timori
Cutaneas/ subcutaneas
Onchocerca volvulus, Loa loa, Mansonella streptocerca
Cavidades y tejidos profundos
Mansonella perstans, M ozzari
Manifestaciones clnicas
Eosinofilia perifrica
Interpretacin correcta
Entamoeba histolytica
Balantidium coli
Diagnstico en el laboratorio
Comunicacin Mdico-Laboratorio
Interpretacin correcta
Mtodos de alternativos de Dx
Examen microscpico:
Serologa:
Cultivo
Inoculacin en animales
Xenodiagnstico
Respuesta de anticuerpos
Deteccin de antgenos
Materia fecal
Recoleccin: expulsin natural, purgantes y por
cucharilla rectal
Consistencia: slidas, semislidas y lquidas
Manejo: cantidad y recipiente adecuado
Conservacin: formol 10%, APV, MIF y PAF, Temp 4 C
Esputo
Recoleccin: espectoracin provocada
Broncoscopa
Lavado bronquial
Manejo: recipiente limpio
Tejidos
Recoleccin: Biopsias, extirpaciones y necropcias
Manejo: recipientes adecuados
Conservacin: formaldehido 10%
Parsitos
Paciente
Formol o alcohol
Soluciones Conservadoras
Solucin de lugol
MIF
PAF
PVA
Solucin lugol
5 ml formaldehdo
50 ml de agua destilada
40 ml timerosal
1 ml de glicerina
Frasco color mbar
Merthiolate-Yodo-Formol
Formalina 37%
Solucin lugol
Timerosal
Mezclar: 15ml formaldehido + 1ml lugol + 7,5 ml timerosal.
Fenol-Alcohol-Formol
SHAUDINN.
4.5G DE BICLORURO DE MERCURIO
ALCOHOL ETILICO AL 95%
ACIDO ACETICO
Alcohol de Polivinilo
Cristales de cloruro de mercurio (HgCl2)
Alcohol etlico al 95%
cido actico glacial
Glicerina
Recomendaciones
Clasificacin de Coproparasitoscpicos
POR EL TIPO DE
PROCESO
1.
2.
3.
Directo o en fresco
Macroscpico o
microscpico
Concentracin:
1.
a.
b.
c.
Flotacin
Sedimentacin
Termotropismo
1.
2.
3.
4.
Dilucin
Cultivo
Aclaramiento
Tincin
CUALITATIVOS
d.
e.
2.
En fresco
Cucharilla rectal
Centrifugacin
Flotacin (Faust)
Flotacin (Willis)
Sedimentacin (Ritchie)
CUANTITATIVOS:
a.
b.
MTODOS ESPECIALES
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Tamizado
Graham
Baermann
Harada-Mori
Coloracin Khon
Biopsia tejidos
Microscopia electrnica
Concentracin (Ferreira)
Dilucin (Stoll)
1.
2.
Preparaciones hmedas
Preparaciones fijas:
a.
b.
Temporales
Permanentes
POR EL MOMENTO DE SU
REALIZACIN
1.
2.
Inmediato o en fresco
Mediato: de muestra preservada o
no preservada
CUALITATIVOS
FLOTACIN
Faust
Sacarosa
Willis
SEDIMENTACIN
Ritchie
Sedimento en copas
Charles-Barthelemy
CUANTITATIVOS
Stoll
Ferreira
Kato-kats
ESPECIALES
Tamizado
Graham
Cpsula duodenal
Baerman
MTODOS DE CONCENTRACIN
Mtodos fsicos
Ventajas:
Inconvenientes:
Procesos largos
Exigen mucha manipulacin
No aplicables a series grandes de muestras
Bibliografa
Prats
Romero
Basualdo y cols. Microbiologa
biomdica. Ed Atlante 1996
Flisher
Concentracin: Flotacin
Procedimiento
Add 2 a 3 g de Heces
5 ml de salmuera
Homogenizar
Colocar un cubreobjetos
Dejar en reposo 15 a30 min
Recomendaciones
No indicado en la bsqueda de
huevos pesados ni de larvas.
Mtodo de concentracin-Flotacin de
Faust.
Tcnica:
1) Mezclar bien una porcin de
materia fecal para preparar una
superficie en 10 partes de agua
destilada.
2) Filtrar la suspensin a travs de
una gasa doblada en cuatro, sobre un
tubo de centrfuga, ayudndose con
un embudo pequeo.
3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm
por 1 min.
4) Decantar el lquido sobrenadante
y completar con agua hasta igualar la
medida anterior, centrifugar
nuevamente . Resuspender el
sedimento.
5) Repetir el procedimiento 2 veces
hasta que el lquido sobrenadante
6) Decantar nuevamente el
lquido sobrenadante
reemplazndolo por igual
cantidad de solucin de sulfato
de Zn al 33%. Mezclar bien la
solucin con el sedimento.
Centrifugar durante 1 minuto a
1500 rpm.
7) Tomar 3-4 gotas de las
partculas que flotan en la
superficie del lquido. Colocarlos
en un porta-objeto y mezclarla
con 1-2 gotas de lugol, colocar
cubre-objeto.
8)
Examinar al microscopio y
reporte sus resultados.
Metodo de Ritchie
Metodo de Ritchie
Procedimiento:
5 ml de SSI en un tubo de ensaye + (abate
lenguas) 2g de materia fecal +
homogeneizar.
Pasar la suspensin a travs de una gasa
colocada en un embudo a otro tubo
Centrifugar a 2000 rpm por 1 min
Decantar en sobrenadante y suspender en
SSI. Centrifugar, decantar y resuspender
= sobrenadante claro.
Mtodo de Ritchie
=
Pipeta pasteur tomar sedimento, extraer
=
Carles I
formol 10 ml
Cloruro de sodio al 0.85% 90 ml
Carles II
Ac. Citrico cristalizodo 12 g
Agua destilada 100 ml
Formol 2 ml
1955
No se utiliza formol por que es una muestra
previamente preservada.
Permite hacer una concentracin de
huevos, quistes y larvas y trofozoitos
(pueden ser destruidos con el ter a pesar
de que hallan sido preservados y fijados
con MIF merthiolate, yodo y formol
Procedimiento:
Mezclar la suspensin fecal y pasarla a
traves de una gasa humedecida en MIF
a un tubo conico y se coloca en la
centrifuga.
+ 3 ml de ter, tapar y agitar
vigorosamente durante 1 min.
Centrifugra a 1500rpm un min.
Cuatro capas
Eter
Restos fecales solucion Mif
Sedimeto con las formas parasitaris
=
Pipeta pasteur tomar muestra de la parte
sup. del sediment porta u cubre objetos.
MTODO DE STOLL
Agregar heces
hasta 60ml
10 perlas de vidrio
56 ml de NaOH 0.1 N
Mezclar
Observar 40X
Tomar 0.075ml
Clculo
1.- La disolucin fecal original es de 1:15 (4ml/60ml). Como se contaron los
huevos en un volumen total de 0.15 ml, el nmero total de stos en 1ml de
heces se encuentran al multiplicar la cuenta total por 100 (1/5 x 0.15 x
100=1).
2.-Multiplicar x 100 g de materia fecal
3.- Nmero de parsitos hembras presentes, se divide el nmero diario de
huevecillos que hay en las heces entre el nmero promedio de
hembra de la especie Necator: 7000 huevos/da
hembra de la especie Ascaris: 200000 huevos /da
hembra de la especie Trichuris: 7500 huevo/da
Resultados ms exactos. Multiplicar el nmero que se obtiene en el paso
uno por el factor apropiado. Heces formadas= 1, blandas formadas=1.5,
blandas diarreicas=3, fluidas diarreicas=4, muy lquidas=5.
MTODO DE FERREIRA
4 g de heces
16ml de
formaldehdo
Homogenizar
2000r.p.m. 1 min
2-3ml de
ZnSO4
2 veces (agua)
Campana
de Ferreira
2000 r.p.m.
1min
+ gasa
Observar a 40X
Huevo de Ascari
Huevo de Necator
Huevo de Trichuris
Huevo de Tenia
MTODO DE KATO
1.
Procedimiento
Con un aplicador de madera, se toman
50 mg de materia fecal y se depositan
en un porta objetos.
2.
Resultados
50mg de muestra---------1 huevo
1000mg ---------------------X huevos
X= 1000 x 1 x 20 = huevos/g de heces
5
TAMIZADO
UTILIDAD:
saginata.
TAMIZADO
MTODO
TAMIZADO
C/solucin salina
Tincin o aclaramiento
GRAHAM
Clsico mtodo de raspado repianal
GRAHAM
MTODO
GRAHAM
CPSULA DUODENAL
CPSULA DUODENAL
MTODO
30a 1
hora
C/solucin salina
Extrae - exprime
VERDE AMARILLENTO
CPSULA DUODENAL
Mtodo de Baermann
Procedimiento