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Introduo
Objectivo dos Mecanismos de Splicing? O nosso DNA constitudo por 25 000 genes distribudos pelos 23 pares de cromossomas. O DNA transcrito no ncleo dando origem a um pr-mRNA que posteriormente ser processado por vrios mecanismos, um dos quais o Splicing, antes de se tornar num RNA maduro ou funcional. Mas nem todo o DNA codifica protenas, apenas 5% do DNA total codificante, os exes. O restante 95% corresponde a DNA que no codificado que tanto se pode encontrar fora dos genes (sequncias no codificantes), como dentro dos genes (intres). Logo, os mecanismos de Splicing so de extrema importncia porque seleccionam as partes codificantes do gene de forma a facilitar a traduo dos pptidos e protenas nos ribossomas (processo de traduo), pois existem em mdia, nos humanos, 10 vezes mais intres que exes. Qual o papel dos Intres? Os intres so variveis tanto em tamanho como em nmero e so as partes no codificantes que, aps serem retiradas do prRNA, so destrudas dentro do ncleo gerando nucleotdeos livres que so reciclados. Pensa-se que a grande quantidade de intres deve-se acumulao de genes (outrora importantes) ao longo da evoluo, o que no implica forosamente que os seres mais evoludos tenham mais intres que os seres menos complexos. Podem tambm ter funo reguladora ou simplesmente no apresentar qualquer funo. Mas desengane-se quem pensa que no tm utilidade, pois a sua grande diversidade que permite a caracterizao individual ou de determinados grupos. Esta diferena na sequncia intrnica reflecte a diversidade gentica humana, permitindo-nos realizar coisas to extraordinrias como os testes de paternidade ou a identificao de indivduos envolvidos em acidentes e crimes. Qual o papel dos Exes? Os exes constituem o RNA funcional e so sequncias semelhantes entre indivduos, pois codificam as protenas bsicas sobrevivncia humana. Assim, no podem apresentar grande variabilidade, contrariamente aos intres, porque manifestam-se fenotipicamente, o que significa que qualquer alterao pode tornar-se incompatvel com a vida.
Claudia Junqueira, Nuno Couto, Pedro Reis , Pedro Sousa Orientadora: Professora Delminda Neves Disciplina de Biologia Celular e Molecular, 2004/2005 Faculdade de Medicina da Universidade do Porto
Auto-Splicing
Apesar da na maioria dos eucariontes o Splicing ocorrer nos Spliceossomas, encontra-se tambm um mecanismo de AutoSplicing que pode ocorrer no ncleo, nas mitocndrias, nos cloroplastos e nas bactrias. Este mecanismo catalisado pelos seus intres que agem como uma ribozima (RNA com funo cataltica) levando sua auto-exciso. Existem dois grupos de Auto-Splicing (fig.4):
Splicing Alternativo
Onde ocorre? Este processo frequente em eucariontes complexos, permitindo ampliar a diversidade de protenas. Como ocorre de forma diferente em cada tecido importante na diferenciao tecidular (exemplo: cnase da tirosina). Como Ocorre? A existncia de mltiplos intres e exes num gene abre a possibilidade de combinar os vrios exes em mais do que um mRNA. Isto significa que um pr-mRNA pode originar mltiplos mRNA e consequentemente vrias protenas (fig.5). Para que serve? Mltiplos mecanismos esto envolvidos na regulao do Splicing Alternativo que, por permitir grande variabilidade, contribui para a multiplicidade de protenas expressas durante o desenvolvimento e diferenciao (exemplo: o mesmo mecanismo, no mesmo pr-RNA, pode dar origem tanto a um inibidor como a uma activador do mesmo processo).
Auto-Splicing Splicing nos Spliceossomas Grupo I Grupo II Sequncias de intres libertadas sob forma linear Sequncias de intres libertadas em lariat Cofactor nucletido G livre Cofactor nucletido Adenina reactivo Duas transesterificaes sem consumo de energia Precisam de intres para manuteno da sua forma tridimensional que lhe atribui actividade cataltica para a reaco Onde ocorre X X X X X X X
CURIOSIDADES
- Um exemplo especfico de Splicing Alternativo o caso da determinao do sexo na espcie Drosophila,
onde o Splicing do mesmo pr-mRNA determina se a mosca macho ou fmea. - Num caso extremo, um gene de Drosophila pode produzir 38 000 protenas diferentes a partir de um nico gene atravs de Splicing alternativo, apesar de apenas alguma combinaes terem sido observadas experimentalmente. - Nos vertebrados e nos insectos o mRNA forma-se a partir de um nico pr-mRNA, enquanto que em dois tipos de protozorios (tripanossomas e euglenides) a molcula de mRNA construda por Splicing de molculas de RNA separadas: Trans-Splicing. - Splicing normal de DNA ocorre nos linfcitos B e T, apesar de ser muito mais raro.
Referncias: Fig.6 - Processo geral do Splicing dos pre-RNAt
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