COPROCULTIVO

Instituto Politcnico Nacional Centro de Estudios Cientficos y Tecnolgicos No. 6 Miguel Othn de Mendizbal BACTERIOLOGIA

Integrantes:
Alvrez Bonifacio Yeredid Bello Reyes Sal Joshafat Garca Salinas Karen Martnez Hernndez Daniel Mayen Bernal Viridiana Quintero Andrs Fabiola Janet Rosales Hernndez Diana Carolina Sandoval Rosas Eduardo

G: 4101C
Fecha: 09 Mayo - 2012

Profesor: Miguel ngel Morales Gil

Importancia clnica.
El mdico, frente a un paciente que acude por presentar un cuadro diarreico, debe decidir cul es la posible etiologa y qu tipo de tratamiento debe dar, por lo que recurre al laboratorio a fin de obtener un diagnstico microbiolgico que permita realizar un abordaje racional de la enfermedad.

Diagrama de flujo para el diagnstico de infecciones gastrointestinales.

Materia

fecal

Agua peptonada

Campy-Bap

McConkey o EMB

Caldo tetrationato

Pruebas rpidas

Tincin de Kinyoun

Coproparistoscpico

TCBS

Seleccionar colonias amarillas y sembrar en TSI, LIA, MIO, caldo peptonado y arginina

Seleccionar colonias y sembrar en TSI, Hacer pruebas de acetato de plomo y de hidrlisis de hipurato

Seleccionar colonias y sembrar TSI, LIA y MIO

Sulfito de bismuto, SS Verde Brillante

Reacciones de aglutinacin con sueros anti A, B, C y D de Shigella Escherichia coli Tipificar con antisueros

Campylobacter

Seleccionar colonias y sembrar en TSI, LIA y MIO

Identificacin de Coccidias Deteccin de Rotavirus

Identificacin de quistes de protozoarios , huevecillos y larvas de helmintos

Reaccin de aglutinacin con suero anti Vibrio cholerae O1

Yersinia

Tipificacin de Salmonella con sueros anti A, B, C1, C2, D y E

Adaptado de: Diagnstico de Laboratorio de infecciones gastrointestinales. INDRE pp 205

AFECCIONES GASTROINTESTINALES

La ingestin de patgenos causa muchas infecciones. Los trminos utilizados ms comnmente para describir las enfermedades del tracto gastrointestinal son: Diarrea. Disentera.

DIVERSOS SINDROMES DIARREICOS

Diarrea aguda liquida Diarrea crnica/ Mal absorcin. Gastritis o atrofia gstrica. Diarrea con sangre Fiebre entrica.

QUE ES EL COPROCULTIVO?

El coprocultivo (cultivo de heces), es un estudio cuyo propsito es buscar bacterias patgenas que causan un dao en el tracto intestinal. Este estudio permite aislar e identificar al agente causal de estas enfermedades.

MECANISMOS QUE CAUSAN LA DIARREA 1)Toxinas

2) Invasin
3) Penetracin de la pared intestinal

SINTOMATOLOGIA
Algunos sntomas que los pacientes con enfermedades infecciosas a menudo experimentan son:
FIEBRE DESHIDRATACION LETARGO

Toma de muestra
Para efectuar un coprocultivo pueden utilizarse las siguientes muestras: Heces frescas Hisopo rectal Indicaciones para el paciente: No es necesario el ayuno. No se requiere dieta especial No estar bajo tratamiento con antibiticos o tener ms de 72 hrs de haber concluido el tratamiento. En caso de no ser posible ninguna de estas dos opciones, eespecificar en la solicitud del estudio que antibitico se estn tomando y cuantos das lleva hacindolo.

Indicaciones para la toma y condiciones de la muestra

La toma de muestra se deber realizar lo antes posible luego del comienzo de la enfermedad (preferiblemente dentro de los cuatro primeros das). La recoleccin se efecta en un recipiente de boca ancha estril y con tapa de rosca. Las muestras de consistencia formada debern ser de 4-6 gramos (tamao de una nuez), en caso de ser liquidas entre 5 y 1O ml. Debe evitarse la contaminacin con orina. Si no se pueden enviar las muestras de manera inmediata se pueden refrigerar sin exceder 4 hrs. ya que a medida que la muestra fecal se enfra, la cada de pH llega a ser suficiente para inhibir el crecimiento de muchas especies Shigella y algunas de Salmonella.

Las muestras deben examinarse y cultivarse lo antes posible despus de la recoleccin, si el cultivo se hace dentro de las dos horas despus de tomada la muestra, no se requiere medio de transporte, pasado este periodo se recomienda usar el medio de transporte Cary & Blair, caldo selenito o Tioglicolato. En general no se recomienda el uso de hisopados rectales pero pueden ser necesarios para obtener muestras fecales de neonatos o adultos mayores. El hisopo rectal debe insertarse exactamente ms all del esfnter rectal, evitando el contacto directo con materia fecal en el recto. Estos hisopados deben inocularse de inmediato en medios de cultivo o colocarse en un sistema de transporte adecuado para impedir el desecamiento. En pacientes en edad peditrica que usan paales las muestras deben ser tomadas preferentemente de sus glteos y no del paal seleccionando las partes mucosas, purulentas y/o sanguinolentas y colocarlas en frasco estril.

EXAMEN MACROSCPICO

Consistencia (solidas, diarreicas, liquidas) Color; indica la abundancia y la calidad del flujo biliar. Presencia de sangre, pus, moco. Fragmentos de tejidos o restos alimenticios sin digerir Olor

BACTERIAS CAUSANTES DE LA DIARREA

ESCHERICHIA COLI

Esta bacteria ha sido incriminada en enfermedades infecciosas que afectan casi cualquier tejido y sistema orgnico humano. Cepas de E. coli que pueden producir gastroenteritis:
E. coli enterotoxigenica (ETEC) E. coli enteropatgena (EPEC) E. coli enteroinvasiva (EIEC) E. coli enterohemorrgica (EHEC) E.coli enteroagregante (EAEC) E.coli difusamente adherente (DAEC)

Termino
E. coli enterotoxigenica

Abreviatura
ETEC

Fenotipo patgeno
Elaboracin de enterotoxinas termolbiles y/o termoestables secretoras que no daan el epitelio mucoso

Signos y sntomas
Asociado con los sindromas clnicos diarrea del destete y diarrea del viajero. Tienen inicio brusco tpico, casi siempre sin sangre, moco ni pus. La deshidratacin y vmitos ocurren en algunos casos.

e. coli enteropatgena

EPEC

Se adhieren a las clulas epiteliales intestinales en microcolonias localizadas que producen lesiones histopatolgicas caractersticas conocidas como lesiones de fijacin y desprendimiento

Habitualmente ocurre en lactantes, se caracteriza por fiebre, vmitos, diarrea acuosa con gran cantidad de moco y en algunas ocasiones se observan leucocitos en las heces.

E. coli enteroinvasiva

EIEC

La mayora de las cepas son inmviles, fermentadoras tardias o no fermentadoras de la lactosa y anaerogenas. Elaboracin de toxinas shiga

Se presenta principalmente como diarrea acuosa, se tiene necesidad imperiosa de defecar, presencia de moco, sangre y muchos leucocitos en las heces. Diarrea sanguinolenta sin leucocitos, dolor abdominal frecuente. Diarrea con moco, fiebre leve y poco o nada de vomito. Diarrea en la mayora de las veces sin presencia de sangre ni leucocitos

E. coli enterohemorrgica

EHEC

E.coli enteroagregante

EAEC

Se adhieren a las clulas epiteliales y producen una toxina (EASTI) Se adhieren a las clulas epiteliales en un patrn difuso

E.coli difusamente adherente

DAEC

Medios de cultivo apropiados para el crecimiento de E. coli.

AGAR EMB (colonias Prpura-violeta con brillo verde metlico) Incubar a 35-37 C de 18 a 24 horas AGAR MacConkey (color Rosa-rojo ) Incubar entre 35 y 37C de 18 a 72 horas.

SHIGELLA

Shigella es un bacilo gram negativo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, que se encuentra estrechamente relacionada con el genero Escherichia, por sus propiedades bioqumicas, serolgicas y por similitudes genticas.

SS, Agar

Las colonias sospechosas de Shigella crecidas en AgarSalmonellaShigella son transparentes, translcidas u opacas y suelen ser lisas. En este medio las colonias de otros microorganismos que fermentan la lactosa (coliformes) son colonias rojizas y en muchos casos mucoides.

Sulfito Bismuto Agar

Sembrar por estra el material objeto de estudio o el procedente del caldo de enriquecimiento en este caso con caldo tetrationato. Incubar a 352C de 24 a 48 horas. Shigella flexneri ATCC 12022 Crecimiento (Nuloescaso) Color ( Marrn)

SALMONELLA
Colonias Lac+ Rosadas y pueden estar rodeadas de un precipitado Colonias LacIncoloras (S. typi, S.paratyphi, S.disenteria)

Agar SS
No fermentadoras de lactosa (colonias incoloras).

Presentan colonias con centro negro. (productoras de Acido sulfrico)

Agar Verde Brillante

Colonias de color rosa a blanco, opacas rodeadas por el rojo brillante del medio

Agar EMB

Las colonias de Salmonella y Shigella son translcidas, de color mbar o incoloras.

VIBRIO

Es un bacilo Gram (-) curvo que posee un flagelo polar produce oxidasa y fermenta glucosa.

GASTROENTERITIS
V. Cholerae es el prototipo de los sndromes diarreicos causados por la produccin de toxinas colricas.

Aislamiento en el Laboratorio Clnico

Enriquecimiento de la muestra: Agua peptonada Alcalina, pH 9.0, de 6-8 horas a 37 C

Sembrado: Medio de cultivo TCBS, mantener a 37C y revisar entre las 18-24 horas. Seleccionar colonias de color amarillo para Vibrio Cholerae

V. Cholerae en medio TCBS

Vibrios no colricos
Adems de V. Cholerae existen otras especies de vibrios como:

V. Parahemolyticus V. Mimicus V. Metschnikovil V. Hollisae V. Furnisae V. Fluviales

Yersinia

Son las responsables de algunas afecciones como gastroenteritis, diarrea y linfadenitis mesentrica. Las bacterias patgenas de la Yersinia son: Y. enterocolitica Y. pseudotuberculosis

Y. enterocolitica en Agar MacConkey

Las colonias tienden a ser puntiformes despus de 24 horas

CAMPILOBACTER

Morfologa y caractersticas: Se trata de bacterias gram negativas, pequeas (0.3-0.6 m de dimetro, 0.5-5 m de ancho), no esporuladas, con una forma distintiva curva o en espiral, con aspecto de vibrio, cuando se observan a partir de cultivos jvenes; con ms de 48 horas de incubacin o tras prolongada exposicin al aire adoptan una forma cocoide.

Los Medios ms usados para su aislamiento son Skirrow, Butzler y Campy-BAP. Las colonias pueden apreciarse en las placas en 24-48 horas.

Campylobacter jejuni Medio Butzler

IDENTIFICACION HASTA ESPECIE

La identificacin hasta especie se realiza a partir de pruebas bioqumicas. Para las bacterias que se encuentran en el coprocultivo normalmente estas pruebas se realizan con los siguientes medios de cultivo: TSI LIA MIO Citrato de sodio Urea Agar Hierro de Kligler (La lectura e interpretacin de las mismas se explican en los anexos correspondientes.)

Identificacin Final
Antisueros: Suero que contiene anticuerpos (inmunoglobulinas) especficos frente a un determinado antgeno o a varios o Suero animal o humano que contiene anticuerpos contra una enfermedad especfica, que se utilizan para proporcionar inmunidad pasiva frente a dicha enfermedad. Los antisueros no dan lugar a la produccin de anticuerpos. Anticuerpo: Molcula de inmunoglobulina especfica de antgeno, producida por un clon de linfocitos B en respuesta a su estimulacin por dicho antgeno concreto. Antgeno: Es una sustancia que se combinar con un anticuerpo a raves de sitios de unin especficos. Sustancia capaz de reaccionar con las molculas especficas propias de una respuesta inmunitaria, es decir, anticuerpos y receptores de linfocitos T.

Identificacin Final
El mtodo tradicional para preparar antisueros ah sido inyectar el antgeno en un animal (cordero, conejo, caballo, cuyo, cabras, etc). El animal genera entonces anticuerpos. Los antisueros se inyectan a los animales para que estos se pongan en contacto con las bacterias y se generen anticuerpos (especficos para las bacterias que se inocularon en los animales). Posteriormente estos anticuerpos se extraen de la sangre de los animales para ser utilizadas en la identificacin de bacterias aisladas de muestras biolgicas. Cuando hay formacin de precipitados da positivo a la bacteria estudiada.

ANTIBIOGRAMA DEL COPROCULTIVO

En caso de encontrar algn agente patgeno es necesario realizar un antibiograma por el mtodo de Bauer-Kirby.

POR SU ATENCIN, GRACIAS!

:D