REACCIONES DE AGLUTINACIN

Equipo 7: Alvarado Bustos Anglica Gil lvarez Manuel ngel Guzmn Nieto Ilse Irene Osorio Ibaez Suheil Snchez Mendoza Luis Leonel

 Son reacciones que se llevan a cabo por la interaccin de un antgeno particulado con su anticuerpo correspondiente. Directa: intervienen antgenos o anticuerpos que forman parte de manera natural de una partcula de mayor tamao, ej. Eritrocitos.
Indirecta: los antgenos o los anticuerpos se adsorben de forma artificial a una particula. Ej. Ltex

Factores que afectan:

Temperatura. Relacin Ag / Ac. Exposicin del antgeno. pH (6.5 7.5).

Tiempo.
Fuerza inica del medio.

Es una reaccin inmunolgica entre anticuerpos sricos y el antgeno correspondiente produciendo una reaccin de aglutinacin macroscpica.

REACCIONES FBRILES.

 Es una reaccin de aglutinacin DIRECTA entre los antgenos de: Salmonella, Brucella y Proteus.
Anticuerpos contra estos antgenos presentes

en el suero del paciente.

La infeccin por estos microorganismos

induce a una respuesta inmune con la produccin de anticuerpos.

Reaccin de Widal: Salmonella

tiphy, S.enteritis, S. paratyphi.
Demuestra la presencia de

anticuerpos aglutinantes contra los antgenos H (flagelar) u O (somtico). aparecen de 6 a 8 das iniciada la enfermedad.

Anticuerpos vs antigeno O

Anticuerpos vs antgeno H

aparecen de 8 a 12 das.

Reacciones de Huddleson.
Mtodo serolgico que detecta anticuerpos contra:

Brucella abortus, Brucella melitensis Brucella suis.

Empleado para el diagnstico de brucelosis.

Reaccin de Weil-Felix
Se lleva a cabo para la determinacin de anticuerpos de Proteus OX-19.
Existe una reaccin cruzada con bacterias del gnero Rickettsia. El aislamiento de Rickettsia sp es complicado y riesgoso.

Mtodo en placa.
Depositar en sitios diferentes de la placa cantidades distintas de suero a probar. Aadir 30 L de la suspensin de antgeno a las cantidades de suero utilizadas. Mezclar.

Observar aglutinacin a luz directa.

Mtodo en tubo.
Mezclar antgeno y realizar una dilucin 1:20 en solucin salina. Colocar 7 tubos de 13x100.
Aadir al tubo 1; 0.9 mL de solucin salina y

0.5 mL a

Titulacin en tubo.
1 Solucin Salina Suero Antgeno 1:20 0.9 mL 0.1 mL 0.5 mL 2 0.5 mL 3 0.5 mL 4 0.5 mL 5 0.5 mL 6 0.5 mL 7 C(-) 0.5 mL

<- 05.mL <- 05.mL <- 05.mL <- 05.mL <- 05.mL **** 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL 0.5 mL

Diluir el antigeno en solucin salina 1:20.

*** Eliminar 5 mL de la dilucin..

Incubar a 37 para antgenos: tifico H, Brucella abortus y Proteus OX-19. 48-50 para antgenos: tifico O y S. paratyphi A y B

Interpretacin de resultados.
Aglutinacin 4+ 3+ Tubo Organismos: 100% sedimentados. Sobrenadante: totalmente claro. Organismos: 75% sedimentados. Sobrenadante: ligeramente turbio.

2+
1+ Negativo

Organismos: 50% sedimentados. Sobrenadante: moderadamente turbio.

Organismos: 25% sedimentados. Sobrenadante: completamente turbio. No se observa aglutinacin y la suspensin es turbia.

Consideraciones.
Se deben tomar dos muestras con intervalos de 7 das, si en a segunda muestra se encuentra un titulo ms elevado que en la

primera, indicar una infeccin activa.

De manera contraria, indica que el paciente

est en recuperacin y los anticuerpos detectados son de memoria.

Metodologa
Colocar 0.08 mL del suero problema en cada una de las 6 divisiones de la placa de vidrio. Adicionar una gota de cada antgeno, mezcle con un aplicador y gire la placa con movimientos oscilatorios de 2 a 3 minutos.

Muestra de sueros
0.08 mL equivalen a una dln

Ttulo
1:20

0.04 mL
Inicie depositando los siguientes volmenes de suero y agregue una gota del antgeno positivo, calcular el titulo de acuerdo a el siguiente cuadro de equivalencias.

1:40
1:80 1:160 1:320

0.02 mL
Las muestras positivas sern las que presenten aglutinacin. Comparar con los testigos positivo y negativo.

0.01 mL 0.005 mL

Ttulo: es la mayor dilucin del suero problema que da una reaccin positiva de aglutinacin

HEMAGLUTINACION
Se refiere a la aglutinacin de los glbulos rojos. Se debe a la presencia de Ag en los eritrocitos.

Hemaglutinacin directa
La presencia de antgenos en la superficie de los glbulos rojos se puede detectar por la hemoaglutinacin producida cuando se

aade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antgenos. Esta tcnica se emplea habitualmente para la identificacin de los grupos sanguneos y Rh

 A la sangre heparinizada se le aaden los

antisueros correspondientes: anti-A, anti-B o anti-AB (todos ellos anti-Rh negativos).

Hemaglutinacin indirecta o pasiva

Se basa en el principio de la inhibicin de la hemaglutinacin.
Se precisan glbulos rojos a los cuales se les ha

unido la misma sustancia que se desea detectar o cuantificar

 Aglutinacin (+) indica ausencia de la sustancia a

estudiar, y aglutinacin (-) indica presencia de la misma

Microtitulacion
Se utilizan diluciones seriadas de Ab
Se mantiene constante el Ag Titulo de aglutinacin: La dilucin ms alta a

la que se sigue aglutinando el Ag Utilidad: conocer la concentracin de Ab especficos en suero

Metodologa
Colocar una gota de 50 L de PBS en cada uno de los pozos de la placa de microtitulacin. Con el dilutor de 50L tomar el suero y mezclar bien girando 10 veces empezando con el pozo 1 y hasta el pozo 11; el pozo 12 ser el testigo negativo

Agregar 50 L de una suspensin de GRC al 1% mezclando bien .

Reporte el titulo como la inversa de la dilucin

Incubar a 37C por 1 h y leer el titulo de aglutinacin

DIAGNSTICO SEROLGICO DE SFILIS

Treponema pallidium pallidium

CARACTERSTICA

Forma, agrupamiento Bacilos aislados, largos y delgados en forma de espiral Gram (-) Cultivo Caractersticas antignicas No se han cultivado en medios artificiales. Antgeno no muy bien definido. Induce la produccin de reagina. Tiene ms de 100 antgenos proticos. Hombre Contacto sexual, transplacentario, contacto con sangre infectada en piel o mucosas lesionadas. Variable

Reservorio Mecanismo de transmisin Periodo de incubacin

PRIMARIA Aparicin de chancro duro en el sitio de inoculacin Periodo: 3-6 semanas.

SECUNDARIA Erupciones cutneas predominantemente en el pecho, espalda , manos y pies. Sndrome tipo gripal Periodo: 2-10 semanas.

TERCIARIA lceras y dao seo Neurosfilis (demencia), neuritis ptica. Periodo: despus de 5 aos o ms

Campo oscuro Observacin del treponema Diagnstico Inespecficas Pruebas serolgicas Especficas VDRL RPR FTA-ABS TPHA Tincin argntica

Tienen una sensibilidad del 70-99%. Son afectadas por el tratamiento antitreponmico. No pueden utilizarse para el diagnstico de la sfilis primaria o la tarda. Prueba tamiz, barata y fcil de realizar.

Infeccin treponmica

Floculacin

Anticuerpos reagnicos

Reaccin con cardiolipinas

Reactivos. Antgeno en suspensin estabilizado Control positivo Control negativo

Material y Equipo Placa cncava Agitador mecnico Microscopio

Obtener 3mL de sangre , centrifugar y separar el suero.

1er anillo Depositar 0.05mL de suero problema

2do anillo Gota de control negativo

Agitar placa a 180 rpm por 4 minutos.

Aadir una gota de antgeno.

3er anillo

Gota de control positivo

Observar al microscopio a 10X

FALSOS NEGATIVOS

FALSOS POSITIVOS
Error tcnico.

En sfilis tarda o primaria.

Pacientes que tienen otras infecciones treponmicas.

Seleccionar el suero positivo obtenido de la prueba cualitativa

Colocar en una gradilla 6 tubos de 12 x 75 mm y numerarlos

Depositar 0.5mL de suero al tubo uno y mezclar.

Agregar a cada uno 0.5 mL de solucin salina.

Depositar 0.5mL de cada una de las disoluciones en los anillos de la placa

Aadir una gota de antgeno

Leer al microscopio a 10X

Agitar a 180rpm por 4 minutos

Prueba VDRL FTA-ABS

Interpretacin

Resultado reactivo a cualquier disolucin reactivo Afirma treponematosis actual o pasada reactivo a ttulos bajos No reactivo No reactivo reactivo

Reaccin falsa positiva Treponematosis pasada y curada

PROTENA C RECATIVA (PCR)

La Protena C reactiva (PCR CRP por sus siglas en ingls) es una alfa globulina anormal. Fue descubierta originalmente por Tillett y Francis en 1930.

 La PCR es miembro de la clase de reactivos de

fase aguda "protena de fase aguda

 El nivel de la PCR aumenta en casi todas las

infecciones bacterianas agudas. Algunos tumores . Diversos tipos de destruccin de tejidos (infarto al miocardio).

 Es sintetizada por el hgado y por los adipocitos.

Es miembro de la familia de las pentraxinas. La Protena C reactiva est relacionada con la

fosfocolina, iniciando el reconocimiento y la fagocitosis de las clulas daadas.

 El gen PCR se encuentra en el primer

cromosoma (1q21-q23). Es una protena de 224 aminocidos. La protena tiene forma de un disco pentamrico anular Masa molecular de 251.060 Da.

 Su utilidad ms frecuente es para registrar actividad en pacientes con fiebre reumtica y artritis reumatoide Indicio de inflamacin Determinar la efectividad de un tratamiento o conocer lo avanzada que est una enfermedad.

 El FR se encuentra en suero y lquido sinovial.

Algunos factores reumatoideos se pueden comportar como crioglobulinas.

Resultado PCR

FACTOR REUMATOIDE
Son anticuerpos dirigidos contra el fragmento Fc

de Ig.G. Los anticuerpos son de tipo Ig.M, pero tambin pueden ser Ig.A o Ig.G.

 La produccin de FR puede ser regulada con

anticuerpos anti-idiotipo, que son anticuerpos IgG dirigidos contra sitios especficos sobre el fragmento Fab.

FR-Waalter-Rose (hemaglutinacin)
EL FR detectado es nicamente de tipo IgM. Se basa en la capacidad del FR para la aglutinacin de GR de oveja previamente sensibilizados con suero de conejo. El IgM (pentmero) se une a los fragmentos Fc de las IgG del suero de conejo que se han unido a los GR de oveja provocando la aglutinacin. Especifico para Artritis Reumatoide Costosa

FR Singer Plotz (ltex)

El FR reacciona con las partculas de ltex

recubiertas con IgG humana produciendo una aglutinacin Menos especifica Mas barato

 Altas concentraciones de RF (>300 IU/ml) son

encontradas en la artritis reumatoidea y en el sndrome de Sjgren.

PIE (Prueba inmunolgica de embarazo)

Embarazo caractersticas: Ausencia de menstruacin Dolor en glndulas mamarias La presencia de nusea matutina o vmitos ocasionales, cansancio y sueo.

GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA

Glucoprotena.
Placenta 36.5 Kd Tiempo de vida media 24h.

GONADOTROPINA CORINICA HUMANA

Niveles de hCG srica en embarazadas normales durante el primer trimestre.
Edad Gestacional (semanas) 3-4 4-5 5-6 7-12 13-16 hCG mUI/ml)

9-130 75-2600 850-20800 4000-100200 18300-137000

INMUNOENSAYOS PARA DETECCIN DE HCG

Inhibicin de la hemaglutinacin.

Inhibicin de partculas de ltex.

Inhibicin hemaglutinacin

EXISTEN DOS TIPOS BSICOS PARA EL INMUNOENSAYO EN PARTCULAS DE LTEX:

a) Aglutinacin directa de partculas de ltex

b) Inhibicin de la aglutinacin de partculas de ltex

AGLUTINACIN DIRECTA
Utiliza anti-HCG directamente absorbido en las partculas de ltex. Estas partculas se colocan junto con la muestra que contiene HCG.
a)POSITIVA: La aglutinacin indica la presencia de HCG b)NEGATIVA: Cuando no hay aglutinacin, por ausencia de HCG.

INHIBICIN DE LA AGLUTINACIN EN PARTICULAS DE LATEX

Se mezcla brevemente suero antiHGC con orina del paciente (HGC) y se aaden partculas de ltex recubiertas de HCG
a)POSITIVA: Si existe la HCG sta neutralizara al antisuero anti-HCG y no habr aglutinacin de las partculas de ltex recubiertas de HCG b)NEGATIVA: En caso contrario, el antisuero anti-HCG (en ausencia de HCG) quedara libre (no resulta afectado) y provocar una aglutinacin visible de las partculas de ltex recubiertas de HCG

antisuero

Antigeno

Latex c/antigeno

antisuero

Latex c/antigeno

Referencias.
Rojas-Espinosa O. Inmunologa de memoria. 3a ed. Mxico:

Editorial Medica Panamericana, 2006 Freeema, Bob A. Microbiologa de Barrows. 22ed; Interamericana Mc Graw Hill:2008. Kokuina E, Chico A, Estevez M, Argelles A, Casas N, Prez D et al. Autoanticuerpos diagnsticos en enfermedades autoinmunes sistmicas y especficas de rgano. Rev Cubana Med. 2006;45 Goldby, Richard. Inmunologia. 5Ed; Mc Graw Hill: 2006. BAch, Jean F. Inmunologa. Editt Limusa: 1984 Colectivo de Autores. Inmunologa Celular y Molecular. En: Sistema del Complemento. La Habana: Editorial Ciencias Mdicas; 2006 .p.370.