Reguladores del crecimiento

vegetal

Lorena Rojas
Daniel Marín

Micología industrial
 Definición

 Biomoléculas que se encargan de

regular la proliferación y crecimiento
celular mediante cascadas de
señalización en el tejido blanco
 Generalidades
 Funcionan en bajas concentraciones
(10^-5 M)

 Actúan en el mismo tejido donde son

producidas
 Clases
 Fitohormonas principales

 Auxinas

 Citoquininas

 Giberelinas

 Etileno

 Ácido Abscisico
 Clases
 Fitohormonas Secundarias

 Compuestos fenólicos

 Poliaminas

 Brasinosteroides

 Jasmonatos
 Auxinas
 Primeras fitohormonas identificadas.

 Primer aislamiento : Rhizopus suinus

 Endospermo de granos de maiz

(1946)
 Auxinas
 Ácido Indolacético (IAA)
 Alargamiento celular,
 Dominancia apical,
 División celular,
 Fototropismo
 Citoquininas
 Skoog – Tabaco (1950)

 División celular (Hojas, tallo, raices)

 Crecimiento de brotes laterales

 Activar al endospermo
 Citoquininas
 Plasmodiophora brassicae (Impide
degradación de citoquinas)

 Zeatina
 Giberelinas
 Gibberella Fujikuroi – Bakanae (arroz)
 Giberelinas
 Glomus mosseae - Bouteloua gracilis
(producción de GAs)

 Giberelina A3

 Alargamiento y división celular (tallos),

gravitropismo negativo, activación de
semillas
 Etileno
 Fitohormona mas simple (CH2=CH2)

 Florecimiento

 Maduración del fruto

 Senescencia
 Ácido Abscisico
 Absicina I y II (Adiccot & Carmns,
1983).

 Dormancia en semillas, Absición,

bloqueo de estomas

 G. fasciculatus – Disminución de
micorrización
Ácido Abscisico
 Compuestos fenólicos
 La mayoria son sintetizados por la via del
Shiquimato y acetato

 Importantes en la interacción con hormonas

 Los acidos fenolicos pueden aumentar la actividad

de las auxinas dependiendo del acido fenolico que
intervenga
 Poliaminas

 Moléculas de naturaleza policationica

 Plantas Fitohormonas
- reguladores de crecimiento
- Concentraciones elevadas en
plantas

¿HORMONAS?
 Promoción de crecimiento
- regulación de división celular
 Embriogénesis
 Protección contra estrés
medioambiental
 Formación de polen
 Formación de raíces
 Procesos de senescencia
Principales poliaminas
 Putrescina

 Espermidina

 Espermina
 Brasinosteroides

 Incrementa resistencia a condiciones

medio ambientales

• cambios de temperatura
• Infecciones fúngicas
• Injuria por herbicidas
 Interacción sinérgica con auxinas:
síntesis de etileno
 Interacción con Acido abcisico
 Jasmonatos

 Presente en angiospermas y
gimnospermas
 Elevada actividad en :
• Hojas jovenes
• Apices de los tallos
• Frutos inmaduros
• Extremos de las raices
 Regulan la senescencia de las hojas
• Degradación e Inhibición de Rubisco
• Inhibición de la fotosíntesis
 Estimula síntesis de proteínas
 Interviene en procesos de latencia de
semillas
Inducción…
 Heridas
 Elicitores de fitoalexinas
 Deficiencia de agua
 Compuestos osmóticamente activos
(sorbitol, manitol)
Efecto de las plantas sobre los microorganismos

a) directamente: aporte de sustancias energéticas,

estimulantes o inhibidoras, como moléculas orgánicas,
vitaminas, fitohormonas, sustancias que producen
agregados, en forma de exudados, secreciones, restos de
tejidos (Fuentes de E,C,N,S, etc.)

b) indirectamente: modificación del medio físico

(temperatura, humedad) o químico (liberación y absorción
de elementos: compuestos orgánicos, quelantes,
productos volátiles
 EL DESARROLLO EN PLANTAS

Crecimiento Formación y
Germinación Floración Polinización Fecundación Senescencia
vegetativo madurez de los frutos

FITOHORMONAS

Auxinas Giberelinas Citocininas Etileno Ácido Abcísico

Promueve: Promueve: Promueve:

Inhibe el Inhibe:
Alargamiento Alargamiento del División crecimiento
celular y tallo celular Crecimiento
Promueve:
Crecimiento apical Formación de flores Crecimiento Germinación
y de Abcisión de
Formación de hojas y Desarrollo de las
frutos frutos brotes yemas
frutos
Tropismos Germinación de la Inhibe:
semilla Maduración
Inhibe: Envejecimiento
Crecimiento de Caída de las
yemas hojas
axilares
ARTICULOS
 Introducción
 Microorganismos que se desarrollan
dentro de tejido vegetal sin causar
daños aparentes (Petrini, 1991)

 Estudios sobre relación

microorganismo-planta

 Producción de fitohormonas
 Objetivos
 Aislar de levaduras endofitas en raíces de Zea
mays productoras de auxinas

 Evaluar la capacidad colonizadora de las cepas

productoras de auxinas

 Analizar el efecto del triptófano en la producción de

auxinas in vivo

 Evaluar el efecto de las cepas seleccionadas sobre

el crecimiento de raíces y tallos en condiciones de
invernadero.
METODOLOGÍA
 Aislamiento de levaduras
endofitas
 Desarrollo de semillas predesinfectadas en
suelos propios de cultivo de maíz

 Esterilización de raices

 Maceración y filtración de solución obtenida

 Siembra de filtrado diluido en YMPDA +

Cloranfenicol
Producción in vitro de auxinas
 Siembras de 24 aislamientos en caldo glucosa-peptona con y
sin triptófano

 Centrifugación de suspensiones (obtención de sobrenadante)

 Detección de auxinas con reactivo de Salkowski (Abs 530 nm)

 Curva patrón con concentraciones conocidas

 Cromatografía Liquida de Alta Eficiencia (HPLC)

 Evaluación de promoción del
crecimiento
 Aislamiento de 8 cepas productoras de IAA
y IPYA.

 Crecimiento y germinación de semillas

desinfectadas en papel filtro estéril

 Apertura de las puntas de las raíces y

contacto con suspensión de inoculo (10^8
UFC/mL)
Evaluación de promoción del
crecimiento
 Contacto con inoculo autoclavado
(Control)

 Siembra de plantas en tubos con

arena esterilizada

 Medición de longitud y peso de tallos y

raices
 Selección de cepas
 Selección e identificación de cepa 4
(Williopsis saturnus)

 Selección de cepa no productora de

IAA - cepa 16 (Rhodotorula glutinis)
 Detección de otras
fitohormonas
 Cultivo de cepa 4 y 16 en caldo GP
con y sin triptófano

 Centrifugación del cultivo y obtención

de sobrenadante

 HPLC para detección de giberelinas y

citoquininas
 Pruebas en invernadero
 Producción de inoculo de cepa 4 y 16 en YMPDB
(10^8 UFC/mL)

 Estimación de la colonización de la raíz

 Producción de mutantes resistentes a la cicloheximida

 Inoculación en plantas
 Crecimiento de maíz en suelo de cultivo característico en
invernadero
 Extractos de raíz sembrados en YMPDA con
cicloheximida – Recuento en Placa.
 Pruebas en invernadero
 Pruebas in vivo

 Siembra de plantas preinoculadas en suelo

característico

 Formulación de 8 experimentos con las diversas

condiciones (Triptófano, inoculo)

 Medición de peso seco y longitud de tallos y

raíces.
 Pruebas en invernadero
 Extracción de auxinas de raíces y
tallos

 Detección con HLPC

 Visualización de cepas por

microscopia
RESULTADOS
Cepas productoras de IAA
Efecto de las cepas productoras
de IAA sobre el crecimiento
Colonización de levaduras
endofitas
Efecto sobre crecimiento en
invernadero
Niveles de auxinas in planta
Microscopia
 Conclusiones
 Williopsis saturnus es capaz de colonizar
raíces de Zea mays y promover su
crecimiento mediante auxinas.

 Existen levaduras capaces de colonizar

tejido vegetal sin presentar efectos positivos
ni negativos para la planta.
ARTICULOS
 Introducción
 La síntesis microbiana de fitohormonas es una
variable importante en la fertilidad del suelo.

 La salinidad es un factor de estrés determinante en

el metabolismo de la planta.

 Pocos estudios explican la producción de

fitohormonas y su rol en el desarrollo de cosechas.
 Objetivos
 Evaluar la producción de GA y IAA de
hongos de propios de la rizosfera y el
rizoplano (superficie de la raíz)

 Analizar el efecto de la concentración de

NaCl sobre la producción de GA, IAA y
citrocromo P-450

 Estudiar el efecto de GA e iones de calcio

para reducir el estrés causado por el NaCl
 Metodología
 Recolección de raíces de Vicia faba, Corchorus
olitorius, Sesamum indicum y Glycine max
(Agriculture Garden of Assiut University)

 Determinación de hongos de rizosfera

 Suspension de raices en agua destilada
 Siembra en agar Czapek

 Determinación de hongo de rizoplano

 Extracto de raíces
 Siembra en agar Czapek
 Metodología
 Identificación microscópica de
especies encontradas.

 Producción de IAA y GA
 Cultivo de 10 especies fúngicas en caldo
glucosa-Czapek
 Extracción de fitohormonas
 Metodología
 Bioensayos con fitohormonas
 Utilización de semillas de Sorghum,
Vicia, Triticum

 Crecimiento en extractos y fitohormonas

estándar

 Determinación de longitud de raices y

tallos
 Metodología
 Producción de GA, IAA y citocromo P450
por Fusarium oxysporum en caldo con NaCl
 Siembra de esporas en medio mineral-glucosa
con 0,5; 1; 4; 7% de NaCl

 Filtración del cultivo para determinar

concentraciones de IAA y GA

 Estimación de Citrocromo P450 en el micelio

 Metodología
 Efecto de iones de calcio en la
producción de IAA y GA de F.
oxysporum en caldo con NaCl

 Medios mineral-glucosa con NaCl 4%

con 10, 40, 70 mM de CaCl2

 Filtración del cultivo para determinar

concentraciones de IAA y GA
 Metodología
 Efecto de GA, IAA e iones de calcio en la
germinación de semillas tratadas con NaCl
 Inmersión de semillas en 10 µM GA, 10 µM IAA
y 10 mM de Ca por 10 horas

 Inmersion en NaCl 175 mM e incubacion en

cajas de petri

 Evaluacion de germinación
 Metodología
 Determinación de IAA y GA

 Filtrado de cultivo

 Cromatografía

 Determinación de citocromo P450

 Método de Omura and Sato (1964)
RESULTADOS
Especies fúngicas asiladas
Producción de fitohormonas
Viabilidad de las semillas
tratadas con NaCl
Efecto de NaCl en la producción
de IAA y GA de F. oxysporum
Germinación de semillas con
distintos tratamientos
Efecto de la interacción Na/Ca
en la producción de IAA y GA
 Conclusiones
 Diferentes especies de Aspergillus, Fusarium,
Penicillium y Rhizopus estan asociadas a la
rizosfera y al rizoplano de Vicia faba, Corchorus
olitorius, Sesamum indicum y Glycine max

 Su efecto promotor consiste ampliamente en la

producción de GAs

 La producción de giberelinas, al igual que la

presencia de calcio, puede llegar a reducir los
efectos toxicos que tienen las altas concentraciones
de NaCl sobre las cosechas.