PRACTICA

COPROCULTIVO

COPROCULTIVO
Es el cultivo de los microorganismos presentes en la materia fecal Asilar a las bacterias Objetivo

Identificar las bacterias

RECOMENDACIONES

Seleccionar la muestra con moco o sangre Si la muestra es slida, antes de sembrarla, diluirla en solucin salina isotnica (SSI) Sembrar la muestra inmediatamente despus de su recoleccin, en caso contrario, utilizar medio de transporte

Medio de Transporte (Stuart)

Destinado a la recoleccin, transporte y preservacin de muestras clnicas, empleadas en exmenes bacteriolgicos. Mantiene la microorganismos. viabilidad de los

Permite recuperar patgenos entricos y respiratorios. Genera escasa o nula reduccin en la viabilidad de los microorganismos

Caractersticas del medio de Stuart

Medio semislido, cuyo contenido de tioglicolato de sodio, permite generar un ambiente reducido til para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte. Se usa azul de metileno indicador de oxido reduccin. como

Medios de transporte.

MUESTRA
SIEMBRA DIRECTA
MEDIOS DIFERENCIALES MEDIOS SELECTIVOS BIOQUIMICAS SEROTIPIFICACION ENRIQUECIMIENTO

MEDIOS DE CULTIVO PARA ENTEROBACTERIAS

Medio de cultivo

Color inicial

Detecta sulfuros

Detecta lactosa
Si, al fermentarla, el medio se acidifica (E. coli Lac +)

Microorganismos observados E. coli : Lac + ; colonias verde amarillentas, opacas y rodeadas de un halo amarillento Salmonella: Lac - ; colonias rosa plido transparentes y rodeadas de un halo rojo brillante Proteus : Lac - ; colonias rojas E. coli : colonias convexas, presentan un centro azul-negro y brillo metlico azulverdoso. Enterobacter aerogenes, Klebsiella : colonias grandes (4-6 mm), elevadas y mucoides, tienden a unirse, muestran un centro grisceo caf y bordes claros, usualmente no presentan brillo metlico. Salmonella y Shigella: colonias ligeramente elevadas, transparentes, desde incoloras hasta ambarinas. Proteus sp.: colonias pequeas translucidas rosas, cuando no hay swarming son semejantes a Salmonella y Shigella Shigella y la mayor parte de las Salmonellas : colonias claras, incoloras, transparentes, medio amarillo E. coli : colonias pequeas que van del rosa al rojo Enterobacter, Klebsiella : colonias mucosas, opacas de crema plido hasta rosa Proteus y Salmonellas : colonias incoloras,

Verde Brillante

Rojo naranja

No

Agar Eosina Azul de Metileno EMB

Vino claro

No

Si;

Agar Salmonella Shigella SS

Rosa claro

Si; colonias que presentan un centro negro y un halo claro alrededor

Si; al fermentarla, el medio se acidifica; las colonias varan del rosa al rojo

AGAR EMB
Empleado en el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Medio de Eosina azul de metileno

MICROORGANISMOS TIPO DE COLONIA

Escherichia coli

Klebsiella pneumoniae
Proteus mirabilis

Verdosas con brillo metlico y centro negro azulado Mucosas, rosa prpura, confluentes Incoloras Incoloras, pequeas, puntiformes Incoloras
Incoloras

Enterococcus faecalis
Shigella flexneri Salmonella typhimurium

Medio de EMB

Mac Conkey Agar

Para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Agar Mac Conkey.

MICROORGANISMOS
Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Salmonella typhimurium Shigella flexneri Proteus mirabilis Enterococcus faecalis

TIPO DE C OLONIA
Rojas con halo turbio Rosadas mucosas Incoloras transparentes Incoloras transparentes Incoloras transparentes Diminutas, incoloras opacas

AGAR Salmonella Shigella

Empleado en el aislamiento de Salmonella spp. y de Shigella spp. Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por las sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Diferencial debido a la fermentacin de lactosa, y formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio de algunos microorganismos.

AGAR Salmonella Shigella

Los fermentadores de lactosa capaces, acidifican el medio hacindolo virar al rojo, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien, y producen colonias transparentes. La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de hierro

Medio de Salmonella y Shigella (SS)

MICROORGANISMO Salmonella typhimurium Shigella flexneri Shigella sonnei

COLONIAS Transparentes centro negro Incoloras incoloras

Proteus mirabilis
Escherichia coli Klebsiella pneumoniae

Transparentes centro negro

Rosadas a rojas Rosadas, cremosas y mucosas

Enterococcus faecalis

Incoloras de muy escaso crecimiento

Medio de agar SS

Agar SS

A: Klebsiella pneumoniae. Acid + Lac + B: Escherichia coli.Acid + Lac + C: Salmonella sp..H2S D: Proteus mirabilis H2S E: Pseudomonas aeruginosa

PRUEBAS BIOQUIMICAS

AGAR TSI
Medio empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, que se combinan con cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.

Agar TSI
La fermentacin de azcares, produce cidos, detectados por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido.

El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno que reacciona con una sal de hierro proporcionando sulfuro de hierro de color negro

Caractersticas del medio preparado: rojo

Resultados

AGAR HIERRO LISINA (LIA)

Utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilacin/desaminacin de la lisina y en la produccin de cido sulfhdrico. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y desaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.

Prueba en el Medio de LIA

La decarboxilacin de lisina, produce la amina, que alcaliniza el medio y genera el vire del indicador a color violeta.
La decarboxilacin de lisina, se d en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada. Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un vire en la totalidad del medio, pero a las 24 h de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.

Resultados: 1-Decarboxilacin de la lisina: -Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta. -Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo. 2-Desaminacin de la lisina: -Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp. 3-Produccin de cido sulfhdrico: -Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y fondo) Caractersticas del medio preparado: color violeta.

MICROORGANISM COLOR EN COLOR EN LA O EL PICO DE BASE DEL FLAUTA TUBO

Proteus mirabilis Salmonella typhimurium Rojo Purpura Amarillo Purpura

ENNEGRECIMI ENTO DEL TUBO

Negativo Positivo

Salmonella enteritidis
Providencia spp Citrobacter freundii Morganella spp Edwuarsiella spp Klebsiella pneumoniae Escherichia coli

Purpura
Rojo Purpura Rojo Purpura Purpura purpura

Purpura
Amarillo Amarillo Amarillo Purpura Purpura purpura

Positivo
Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo

MEDIO MIO
Medio semislido. Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina decarboxilasa e indol La triptena aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio cido es amarillo.

 La movilidad se demuestra por enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculacin. La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador vire al amarillo. La presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina descarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color prpura. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo

 Resultados 1-Movilidad: -Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra. -Resultado negativo: crecimiento solo en la lnea de siembra. 2-Ornitina decarboxilasa: -Resultado positivo: color prpura. -Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio. 3-Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. -Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.

Caractersticas del medio preparado: prpura transparente a ligeramente opalescente.

AGAR CITRATO DE SIMMONS

Util en la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y energa. El azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad

 Resultados -Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad. -Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color

MICROORGANISMO CITRATO PERMEASA

COLOR DEL MEDIO

Klebsiella pneumoniae Salmonella typhimurium Escherichia coli Shigella flexneri

Positivo
Positivo Negativo negativo

Azul
Azul Verde Verde

Caractersticas del medio preparado: verde.

Autor.
QFB. Anglica Reyes Torres.

Revisin, correccin y complementacin

Rafael Garca Gonzlez Aurora Candil Ruiz.