L/O/G/O

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGA

Ingeniera Farmacutica Equipo: 7 Grupo: 3FM1

Alumnos: Corts Javiel ngeles Jimnez Hernndez Oscar Lugo Gonzlez Valeria Profesora: Morales Martnez Martha

Pruebas Bioqumicas
Microbiologa Farmacutica

Prueba de Ureasa
El sustrato urea, una diamida de cido carbnico, a menudo se designa como una carbamida. Todas las amidas son hidrolizadas con facilidad. La urea es hidrolizada por una enzima en especfico, la ureasa (o urea amidohidrolasa), para dar dos molculas de amonaco. En solucin, la urea se hidroliza a carbonato de amonio como producto final.

Prueba de ureasa
La ureasa es una importante enzima microbiana relacionada con la descomposicin de compuestos orgnicos. Las enzimas bacterianas se clasifican como constitutivas o adaptativas. La ureasa es considerada como constitutiva debido a que es sintetizada por ciertas bacterias sin tomar en consideracin la ausencia o presencia de su sustrato, la urea. La ureasa se clasifica como una amidasa, ya que cataliza la hidrlisis de las amidas. Esta actividad enzimtica es caracterstica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este gnero de otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado.

Prueba de Ureasa
Oppenheimer incluyo entre las amidas a todas las enzimas que pueden romper los puentesentre nitrgeno y carbono por hidrlisis. En el caso de la ureasa, el nitrgeno es disociado con amoniaco (NH3). La ureasa acta con los compuestos a nivel de los puentes C-N, excepto aquellos que contienen puentes peptdicos. Al formarse el carbonato de amonio, se produce una alcalinizacin y un aumento del pH en el medio, virando al color del indicador de pH (rojo de fenol) El pH ptimo para la actividad de la ureasa es de 7. Principales medios empleados: - Caldo con urea de Rustigian y Stuart - Agar con urea de Christensen - Caldo con urea R (Rpida)

Prueba de ureasa
Interpretacin de resultados. Caldo con urea de Stuart: POSITIVO: Color rosa-rojo intenso en todo el caldo. NEGATIVO: Sin cambio de color (amarillo-naranja) Agar con urea de Christensen POSITIVO: Color rosa-rojo intenso en el pico de flauta NEGATIVO: Sin cambio de color (color piel a amarillo palido) Caldo con urea R: POSITIVO: Color cereza (prpura rojizo)

Prueba de Ureasa
Microorganismos utilizados para el control de Calidad:
a) POSITIVO (+): rpido e intenso Proteus mirabilis Proteus vulgaris b) POSITIVO (+): dbil Klebsiella pneumoniae c) NEGATIVO (-): Escherichia coli

Prueba de MR VP

Medio de cultivo
Medio de cultivo : Medio de Clark y Lubs (caldo RM VP)
Composicin: 1. Polipeptona 2. Dextrosa 3. Fosfato de potasio 4. Agua destilada 5. Indicador: rojo de metilo a) pH inicial = 6.9, medio no inoculado, color rojo. b) cido: rojo (pH = 4.4) c) Alcalino: amarillo (pH = 6)

Fundamento de la reaccin con Rojo de Metilo (RM)

Es una prueba cualitativa de la produccin de cido (determinacin de pH). Las bacterias que principalmente siguen la va de fermentacin de cidos mixtos a menudo producen suficiente cido para mantener un pH menor de 4.4.

La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH para determinar la concentracin de iones hidrgeno presentes cuando un organismo fermenta glucosa.
Las bacterias RM positivas producen cidos estables manteniendo una alta concentracin de iones hidrgeno hasta alcanzar cierta concentracin y entonces cesa toda actividad. Los organismos RM negativo tambin producen cidos pero tienen una menor concentracin de iones hidrgeno.

Fundamento de la reaccin de Voges Proskauer (VP)

Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, la acetona a partir de la fermentacin de glucosa.
La reaccin de VP se basa en la deteccin de acetona como producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la gluclisis. A partir del cido pirvico, una bacteria puede seguir muchas vas. La produccin de acetona (precursor de la produccin de 2,3-butanediol) es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en las bacterias.

Test
Inocular el caldo RM VP con un cultivo puro de no ms de 24 horas del m.o. en estudio.
Incubar a 35C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubacin transferir 1 mL del caldo a un tubo limpio para VP. En el caldo restante revelar RM agregando unas 4 - 8 gotas del indicador rojo de metilo. Para revelar VP agregar 0,6 ml (10 gotas) de alfa-naftol al 5% y 1 4 gotas de KOH al 40%. Agitar cuidadosamente para exponer el medio al oxgeno atmosfrico y dejarlo reposar durante 10 a 15 minutos.

Resultados
La prueba RM es positiva si se desarrolla un color rojo estable. Esto indica que la produccin de cido es suficiente para producir el viraje del indicador y el m.o. ferment la glucosa por la va de cido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo. La prueba VP es positiva si se desarrolla un color rojo-fucsia luego de 15 minutos, que indica la presencia de diacetilo, producto de oxidacin de la acetona.

Ejemplos:
Microorganismo E. coli ATCC 25922 K. pneumoniae ATCC 700603 P. mirabilis ATCC 43071 S. typhimurium ATCC 14028 Crecimiento
Bueno Bueno Bueno Bueno

RM
+ + +

VP
+ -

Citrobacter freundii
Enterobacter aerogenes

Bueno
Bueno

+
-

Esquema general de la prueba