COLORACIN O TINCIN DE GRAM

ELIO FERNANDO AVILA VEREAU

TINCIONES

Nos permiten diferenciar entre grupos de bacterias

que tienen distintas propiedades tintoriales.

Las tinciones diferenciales mas comnmente

utilizadas son la tincin de Gram y la tincin de Ziehl-Neelsen.

TINCIN DE GRAM

Se debe solicitar siempre. De bajo costo y gran utilidad:

1.Orientacin diagnstica rpida. 2.Caractersticas inflamatorias. 3.Infecciones mixtas (anaerobios).

Sensibilidad analtica: 100.000 bacterias/ml muestra.

TINCIN DE GRAM
La tincin de Gram fue desarrollada empricamente por Christian Gram en 1884. A pesar del tiempo transcurrido la tincin apenas se ha modificado y es uno de los primeros pasos que se realiza para cualquier identificacin bacteriana. La tcnica es capaz de diferenciar dos grandes grupos

de eubacterias:

Gram positivas. (Cristal Violeta Moradas) Gram negativas. (Safranina Rojas)

TINCIN DE GRAM
La tincin de Gram requiere cuatro soluciones:
1.

Primer colorante. Un colorante bsico (+) que en contacto con las clulas cargadas negativamente, reacciona con ellas colorendolas. El mas utilizado es el cristal violeta. Solucin mordiente. Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las clulas. Los mordientes usados suelen ser sales metlicas, cidos o bases, como por ejemplo, una sol. diluida de yodo. Agente decolorante: Es un disolvente orgnico; por ejemplo alcohol acetona (1:1).

2.

3. 4.

Colorante de contraste. Es un colorante bsico de distinto color que el primer colorante, como por ejemplo, la Safranina.

Tincin de Gram

1. Cristal-violeta

3. Alcohol-acetona

2. Lugol

4. Safranina

DIFERENCIAS TINTORIALES
Los dos grupos bacterianos difieren en el color con el que

finalmente se tien las bacterias.

Las Gram positivas se observarn de azul por el cristal violeta y no

perdern esta coloracin durante los pasos sucesivos.

Las bacterias Gram negativas perdern la coloracin inicial con los

siguientes pasos y se teirn de rosa debido a la Safranina.

La diferencia esta determinada por la composicin de su

envoltura celular.

Las bacterias Gram positivas poseen una malla de pptidoglicano

en su parte mas externa.

Las Gram negativas recubriendo una fina capa de peptidoglicano y

presentan una membrana externa .

Diferencias entre Gram (+) y Gram (-)

FUNDAMENTO DE LA TINCIN DE GRAM

La diferenciacin entre las bacterias Gram positivas y Gram

negativas se establece en la naturaleza de la pared celular bacteriana.

Las bacterias Gram positivas poseen una gruesa pared de

Durante la decoloracin con alcohol acetona se provoca una

peptidoglicano que es capaz de retener al complejo cristal violetayodo.

deshidratacin de esta gruesa pared y se reduce la porosidad, atrapando entonces al complejo dentro de la clula.

En las Gram negativas, la delgada capa de peptidoglicano no

puede impedir la salida del complejo colorante-mordente y es entonces fcilmente teida por el colorante secundario o de contraste.

Fijacin FIJACIN Cristal Violeta

Tratamiento con Iodo

MORDIENTE: LUGOL
Decoloracin ALCOHOL ACETONA Colorante de Contraste: Safranina

REVISAR EL SIGUIENTE ENLACE Y OBSERVAR:

http://www.youtube.com/watch?v=SHtYccisU 10&playnext=1&list=PL3D427BAB5338FE1A&f eature=results_main