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PRCTICA 3

EXTRACCIN EN FASE SOLIDA. SEPARACIN DE COLORANTES SINTTICOS

Bermeo Solrzano Brenda Afrodita Martnez Meja Gabriela

EQUIPO 3

EXTRACCION EN FASE SOLIDA

La SPE (Solid Phase Extraction) es una tcnica que nos permite concentrar y/o purificar los analitos mediante su retencin en una fase solida para despus proceder a su elucin con un disolvente adecuado.

VENTAJAS Baja manipulacin de la muestra Alto poder de concentracin Obtencin de extractos purificados con altas recuperaciones Menor consumo de disolventes en comparacin con LLE Ausencia de emulsiones Posibilidad de automatizacin Versatilidad en el tipo de adsorbentes utilizados.
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ADSORBETE Puede estar contenido: Discos Cartuchos Jeringas Puede ser: C18 Estireno-divinilbenceno
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Mtodos en la SPE

ETAPA DE ACONDICIONAMIENTO:
La activacin del adsorbente y de los grupos funcionales se consigue al pasar un volumen de solvente o mezcla de solventes apropiado a travs de la columna. Los discos fritados de la columna se solvatan convenientemente. Para activar adsorbentes hidrofbicos se usa generalmente metanol o acetonitrilo, mientras que para los hidroflicos se usa hexano o cloruro de metileno. Se recomienda usar de 2 a 4 volmenes de lecho.

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ETAPA DE CARGA DE MUESTRA

Aplicar la muestra en la parte superior del lecho de adsorbente. Los contaminantes de matriz pueden pasar por la columna sin ser retenidos, y otros componentes de la matriz pueden retenerse ms o menos fuertemente en la superficie del adsorbente

Etapa de purificacin Cuando la disolucin que contiene los analitos pasa a travs del adsorbente activado, se produce una retencin de stos en la superficie del slido.

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ETAPA DE LAVADO

El lavado permite la eliminacin de cualquier resto de compuestos que puedan interferir manteniendo los analitos en el lecho de adsorbente.

ETAPA DE SECADO

Esta etapa mejora el rendimiento de extraccin.

ETAPA DE ELUCIN

Se pasa un solvente adecuado por la columna para eliminar la interaccin analito-solvente y eluir el 100% de los compuestos de inters.

El volumen de elucin ha de ser el menor posible para mantener alto el factor de concentracin. 15

 Etapa de Concentracin:
Los compuestos de inters se concentran evaporando una parte del solvente. Es necesario secar el eluato con sulfato de sodio para eliminar posibles trazas de agua. La muestra concentrada ya est lista para el anlisis.

Etapa de limpieza: Si es necesario, la columna puede limpiarse separndose los compuestos an retenidos
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CLASIFICACIN DE LAS SEPARACIONES CROMATOGRFICAS:

Nombre Gas-lquido Fase mvil Gas Fase estacionaria Lquido Mtodo de fijacin de la fase estacionaria Adsorbida sobre un slido poroso sostenido en una columna o adsorbida en la superficie interna de una columna capilar Sostenido en una columna tubular

Gas-slido

Gas

Slido

Particin
Adsorcin Papel Capa fina

Lquido
Lquido Lquido Lquido

Lquido
Slido Lquido Lquido o solido

Adsorbida en un slido poroso sostenido en una columna tubular

Sostenida en una columna tubular Sostenida en los poros de un papel grueso Slido finamente dividido sostenido sobre una placa de vidrio; el lquido puede adsorberse sobre las partculas Sostenido en los intersticios de un polmero slido 17

Gel

Lquido

Lquido

Por tanto, la separacin de los compuestos presentes en una muestra se basa en los principios que rigen las tcnicas cromatograficas. a) b) c) d) Forma en que se ponen en contacto la FE y la FM Segn el mecanismo de separacin implicado. Estado fsico de las frases Segn la polaridad relativa de la FM y FE. cromatografa de fase reversa cromatografa de fase normal

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COLORANTES SINTETICOS

Son colorantes orgnicos obtenidos por sntesis qumica. Solubles en agua. Se presentan en su forma pura en forma de polvo.

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Tartrazina
Sal trisdica del cido 4-psulfobencenazo-1-p-sulfofenil-5hidroxipirazol-3-carboxlico. Es un colorante alimentario de color amarillo intenso. La tartrazina como colorante aparece en las etiquetas de los productos que lo contienen con los cdigos E102 (Unin Europea) y Amarillo 5 o Yellow 5 (FDAUSA).

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Rojo de No.3
Eritrosina Colorante popular en alimentos lcteos De color rosa Polvo Soluble en agua, metanol, etanol Se encuentra como CEE E127

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Objetivos

Separar una mezcla de colorantes sintticos usados en alimentos, tartrazina y rojo No.3, por extraccin de fase solida, aplicando los conceptos en fase reversa.

Comprobar la eficacia de la separacin por medio de la cromatografa en capa fina sobre gel de slice.

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PROCEDIMIENTO

Acondicionamiento
5 ml de agua destilada

5 ml de metanol

desechar

Aplicacin de la muestra
0,3 ml mezcla de colorantes Tartrazina y rojo No.3

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 Lavado Los compuestos no adsorbidos

Se lavan con agua hasta que el eluato sea incoloro

Elusin Los colorantes adsorbidos sern eluidos

5 ml de metanol al 10% 15 ml de metanol al 50% 20 ml de metanol R.A.

Colectar eluatos de 5 ml y comprobar la eficiencia de la separacin por cromatografica en placa fina

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CROMATOGRAFA

Placa de 3 x 5 1. Muestra de los dos colorantes 2 y 3. Eluatos obtenidos con cada colorante
1 2 3

FM: butano/cido actico/agua (4:2:1)

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Bibliografa
Otero R.J Desarrollo de nuevos mtodos de extraccin en fase slida para la preconcentracin de metales traza en el agua de mar: evaluacin de un soporte de C18 y de polmeros de impronta inica. Aplicacin al estudio de la Ra de Arousa. Publisher Universidad Santiago de Compostela

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