N1

Figura N1

CLASIFICACIN DE LOS MTODOS PTICOS:

MTODOS ESPECTROSCPICOS: aquellos en los que existe intercambio de energa entre la radiacin electromagntica y la materia. En estos mtodos se miden espectros, siendo stos debidos a transiciones entre distintos niveles energticos.

Tcnicas basadas en la absorcin de radiacin: -niveles moleculares: UV-visible, microondas -niveles atmicos: absorcin atmica, rayos x Tcnicas basadas en la emisin de radiacin: -niveles moleculares: luminiscencia (fluorescencia, fosforescencia) -niveles atmicos: espectrometra de emisin, fotometra de llama, fluorescencia de rayos x, fluorescencia atmica

MTODOS NO ESPECTROSCPICOS: aquellos en los que no hay intercambio de energa, sino cambios en la direccin o en las propiedades fsicas de la radiacin electromagntica. Tcnicas basadas en la dispersin de radiacin: turbidimetra, nefelometra Tcnicas basadas en la refraccin de radiacin: refractometra, interferometra Tcnicas basadas en la difraccin de radiacin: rayos x, electrones Tcnicas basadas en la rotacin ptica: polarimetra, dicrosmo circular

INSTRUMENTACIN: Fotmetro: mide la intensidad de radiacin Espectrofotmetro: mide la transmitancia o la absorbancia de una muestra en funcin de la longitud de onda Colormetro: compara, usando el ojo humano como detector, el color de la sustancia problema con el de una disolucin patrn Espectroscopio: detecta lneas espectrales a simple vista (lneas de color que emite un tomo) Espectrgrafo: instrumento que registra lneas espectrales sobre una placa fotogrfica Espectrmetro: instrumentos que poseen sistemas de deteccin elctricos

COMPONENTES BSICOS DE LOS INSTRUMENTOS DE MEDIDA:

Los mtodos espectroscpicos pticos se fundamentan en seis fenmenos: 1.- Absorcin 2.- Fluorescencia 3.- Fosforescencia 4.- Dispersin 5.- Emisin 6.- Quimioluminiscencia
Para medir cada fenmeno la mayora de los componentes bsicos de los instrumentos son muy parecidos, aunque difieren algo en su configuracin. Adems, las propiedades necesarias de estos componentes son las mismas independientemente de si se aplican a la regin ultravioleta, visible o infrarroja del espectro.

Los instrumentos espectroscpicos caractersticos incluyen cinco componentes: 1.- Una fuente estable de energa radiante 2.- Un recipiente transparente para contener la muestra 3.- Un dispositivo que asle una regin restringida del espectro para la medida (seleccin de la longitud de onda) 4.- Un detector de radiacin, que convierta la energa radiante en una seal utilizable (en general elctrica) 5.- Un sistema de procesamiento y lectura de la seal, que visualice la seal detectada en una escala de medida, en una pantalla de osciloscopio, en un medidor digital o en un registrador.

Instrumento para espectroscopia ptica de absorcin:

Instrumento para espectroscopia ptica de emisin:

TCNICAS BASADAS EN LA ABSORCIN DE RADIACIN

Vamos a abordar en este apartado dos tcnicas como la espectrofotometra de UV-vis y la espectrofotometra de absorcin atmica, las dos basadas para su funcionamiento en fenmenos de absorcin de radiacin electromagntica. La medida de la cantidad de radiacin absorbida con la ayuda de estos mtodos nos servir en algunos casos aplicando la ley de Lambert-Beer para establecer una relacin lineal entre la radiacin absorbida y la concentracin de la sustancia en el medio.

ABSORCIN DE RADIACIN Y CONCENTRACIN. LEY DE BEER INTRODUCCIN La ley de Lambert-Beer permite establecer una conexin entre la absorcin de radiacin y la concentracin de la sustancia que absorbe en un medio conocido, fue descubierta por Pierre Bougler en 1729 en 1760 por Johann Heinrich Lambert y August Beer en 1852. La absorcin de radiacin provoca una alteracin en la posicin de ciertos electrones de las molculas absorbentes llevndolos a niveles de energa superior. Las diferentes molculas y de un modo ms exacto y preciso los electrones que forman parte de stas pueden absorber radiacin electromagntica a diferentes la cual son medibles y de ese modo conociendo ciertas caractersticas de la propia sustancia expresar su concentracin.

La relacin de la ley entre concentracin y absorcin de luz est basada en el uso de espectroscopa para identificar sustancias. La ley de Lambert-Beer se basa en la siguiente frmula: A=cl A= representa la absorbancia. = representa el coeficiente de absorcin de la sustancia analizada(l/mol cm). Su valor vara dependiendo de los materiales absorbentes y la aplicada en cada caso y se determina experimentalmente. C = representa la concentracin de la muestra(mol/l). L = representa el espesor de la cubeta(cm).

Existen otra serie de parmetros asociados a la absorbancia : Al incidir sobre la muestra utilizamos una radiacin que denominamos Io, la radiacin que recibimos en el detector del espectrofotmetro de UV-vis por ejemplo que luego veremos que es I.

A = log Io solvente / Isolucin = log Io/I

APLICACIONES
Espectrometra ultravioleta-visible
La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV-Vis implica la espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano. En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a transiciones electrnicas. Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometra de absorcin mide transiciones desde el estado basal al estado exitado.

La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos muy conjugados. Soluciones de iones metlicos de transicin Las soluciones de iones metlicos de transicin pueden ser coloreadas (es decir, absorben la luz visible) debido a que los electrones en los tomos de metal se pueden excitar desde un estado electrnico a otro. El color de las soluciones de iones metlicos se ve muy afectado por la presencia de otras especies, como algunos aniones o ligandos. Por ejemplo, el color de una solucin diluida de sulfato de cobre es muy azul; agregando amonaco se intensifica el color y cambia la longitud de onda de absorcin mxima.

Compuestos orgnicos
Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de conjugacin, tambin absorben luz en las regiones del espectro electromagntico visible o ultravioleta. Los disolventes para estas determinaciones son a menudo el agua para los compuestos solubles en agua, o el etanol para compuestos orgnicos solubles. Los disolventes orgnicos pueden tener una significativa absorcin de UV, por lo que no todos los disolventes son adecuados para su uso en espectrometra UV. El etanol absorbe muy dbilmente en la mayora de longitudes de onda. La polaridad y el pH del disolvente pueden afectar la absorcin del espectro de un compuesto orgnico. La tirosina, por ejemplo, aumenta su mximo de absorcin y su coeficiente de extincin molar cuando aumenta el pH de 6 a 13, o cuando disminuye la polaridad de los disolventes.

Aunque los complejos de transferencia de carga tambin dan lugar a colores, stos son a menudo demasiado intensos para ser usados en mediciones cuantitativas. La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la espectrometra UV/VIS puede usarse para determinar la concentracin de una solucin.. El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR). La presencia de un analito da una respuesta que puede ser proporcional a la concentracin. Para resultados precisos, la respuesta del instrumento al analito debe compararse con la respuesta a un estndar, lo que es muy similar al uso de curvas de calibracin. La respuesta (por ejemplo, el pico de altura) para un concentracin particular se conoce como factor de respuesta.

ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE El instrumento utilizado en la espectrometra ultravioletavisible se llama espectrofotmetro UV-Vis. Mide la intensidad de luz que pasa a travs de una muestra (I), y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a travs de la muestra (Io). La relacin I / Io se llama transmitancia, y se expresa habitualmente como un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se basa en la transmisin:

A = - log (%T)

Las partes bsicas de un espectrofotmetro son una fuente de luz (a menudo una bombilla incandescente para las longitudes de onda visibles, o una lmpara de arco de deuterio en el ultravioleta), un soporte para la muestra, una rejilla de difraccin o monocromador para separar las diferentes longitudes de onda de la luz, y un detector. El detector suele ser un fotodiodo. Los fotodiodos se usan con monocromadores, que filtran la luz de modo que una sola longitud de onda alcanza el detector. Un espectrofotmetro puede ser nico o de doble haz. En un instrumento de un solo haz (como el Spectronic 20), toda la luz pasa a travs de la clula muestra. La Io debe medirse retirando la muestra. Este fue el primer diseo, y todava est en uso en la enseanza y laboratorios industriales.

En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la muestra. Un haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a travs de la muestra. Algunos instrumentos de doble haz tienen dos detectores (fotodiodos), y el haz de referencia y el de la muestra se miden al mismo tiempo. Las muestras para espectrofotometra UV-Vis suelen ser lquidas, aunque la absorbancia de los gases e incluso de los slidos tambin puede medirse. Las muestras suelen ser colocadas en una clula transparente, conocida como cubeta. Las cubetas suelen ser rectangulares, con una anchura interior de 1 cm. Esta anchura se convierte en la longitud de ruta, L, en la Ley de Beer-Lambert. Las mejores cubetas estn hechas con cuarzo de alta calidad, aunque son comunes las de vidrio o plstico. El cristal y la mayora de los plsticos absorben en el UV, lo que limita su utilidad para longitudes de onda visibles.

MODOS DE EXCITACIN ELECTRNICA.

Dependiendo del tipo de enlace que consideremos como cromforo la excitacin electrnica que puede observarse es:

Enlace sencillo:

Enlace sencillo con pares de electrones no compartidos:

Enlace doble:

Enlace doble:

Grupo carbonilo:

Espectrofotmetro Modelo 1200RS UV-Visible (335 a 1000 nm) de simple haz

. Apto para una amplia variedad de aplicaciones en bioqumica, petroqumica, proteccin ambiental y de contaminacin, control de calidad de aguas para consumo y de desecho. Rango dinmico de operacin entre 335 y 1000 nm. Controlado por microprocesador dinmico. Dos display digital : Uno para la lectura del valor de la longitud de onda de trabajo, y el otro para la lectura de los valores de transmitancia, absorbancia o concentracin. Salida RS 232. Software Spectsoft para instalar en PC con cualquier sistema Windows, que permite crear curvas de trabajo a partir de tres puntos de lectura y calibracin y mediante la cual es posible calcular la concentracin. Funcin de autocalibracin a 0% de Absorbancia y 100% de Transmitancia. Lectura directa de la concentracin previo haber ingresado el factor de correccin correspondiente. Construccin compacta y moderno diseo. Ancho de banda: 5 nm. Monocramador de simple haz, tipo C-T, de 1200 lneas/mm. Rango de operacin: desde 335 a 1000 nm. Exactitud en la longitud de onda: 2 nm. Reproducibilidad: 1 nm. Display digital : dos (2) en los que pueden ser ledos T, A, F, C y longitud de onda de trabajo. Luz esprea: < 0,5% T a 360 nm. Exactitud fotomtrica: 1% de T. Reproducibilidad fotomtrica: 0,5% T. Estabilidad: 0,004A/hora a 500 nm

Salida digital: RS 232. Portaceldas: Para cuatro cubetas cuadradas o rectangulares de 10 mm a 50 mm de paso de luz. Detector: Fotodiodo de silicio. Fuente de luz: Lmpara tungstgeno halgena 20W 12V. Requerimientos elctricos: 220 V 50 Hz. Consumo: 50 Watts. Software de aplicacin para trazado de curvas a partir de tres puntos de calibracin. Dimensiones externas; 385 mm de ancho x 190 mm de alto x 310 mm de profanidad. Peso aproximado 7 Kilos. El equipo se entrega con los siguientes elementos de trabajo: -4 Celdas rectangulares de 10 mm de paso de luz de vidrio ptico -1 Filtro de didimio de 10 mm de tipo estndar -1 Portaceldas ajustable para cubetas de 10 mm a 50 mm de paso de luz de cuatro Posiciones -1 Cable de alimentacin de corriente - 1 Manual de instrucciones en idioma ingls - 2 Fusibles de repuesto de 1 A - 1 Cubierta de proteccin plstica - 1 CD conteniendo el Specsoft software de aplicacin para instalar en cualquier PC con sistema operativo Windows 98 o superior 1 Cable RS-232 para comunicar el espectrofotmetro con la PC

ESPECTROFOTMETRO DE ALTAS PRESTACIONES UV-VIS, HAZ DOBLE, SCANNING SPECTRO UVS-2950

Espectrofotmetro UV-VIS de altas prestaciones, de haz doble, con un soporte capaz de alojar dos cubetas. Su sistema ptico asegura la completa estabilidad de su lnea base. La resolucin es, adems, excelente y se minimiza el ruido de fondo. La fuente de luz es de mantenimiento y de reemplazo sencillos. Consta de una lmpara de Deuterio y otra de Tungsteno. El equipo posee una pantalla de cristal lquido donde se muestran los resultados obtenidos en los distintos experimentos. Adems de un microprocesador interno para su manejo y el control de los parmetros experimentales. Es posible conectar el equipo a un PC (no includo), a travs de la interfaz RS232 y manejar desde l el espectrofotmetro, tras haber instalado el software especfico. El software interno que posee este equipo permite: Realizar medidas fotomtricas: de % de Transmitancia (T) o de Absorbancia (A), a la longitud de onda previamente establecida, adems de calcular el factor K. Barridos espectrales: expresados en T o en A, dentro de un rango determinado de longitudes de onda, con funcin peak pick (seleccin de picos). Determinacin cuantitativa: mediante la elaboracin de una recta patrn, a partir de muestras de concentracin conocida. Incorporando la conexin a PC y manejndolo desde l, adems se puede realizar:

 Medidas fotomtricas realizadas hasta a diez longitudes de onda diferentes, sobre una misma muestra. Barridos espectrales. Determinaciones cuantitativas: permitiendo el ajuste de los resultados obtenidos a partir de disoluciones patrn a un polinomio de hasta 4 orden. Cinticas. Almacenamiento de los resultados obtenidos, de los protocolos de medida elaborados, etc. Dispone de un men especfico de anlisis para cidos nucleicos (ADN y ARN). Rango de longitudes de onda: (190 1.100) nm. Anchura de banda fija: 2 nm. Precisin de : 0,5 nm (con correccin automtica). Reproducibilidad: 0,2 nm. Resolucin: 2 nm. Rango fotomtrico: (-0,3 3,0) A; (0 200)% T. Precisin: 0,002 A en (0 0,5)A; 0,004 A en (0,5 1)A. Reproducibilidad: 0,001 A en (0 0,5)A; 0,002 A en (0,5 1)A. Ruido fotomtrico < 0,001 A (a 500 nm, 0 A, 2 nm de ancho de banda). Estabilidad de la lnea base: 0,002 A/h (500 nm, tras precalefaccin). Incluye cuatro cubetas de vidrio, de 10 mm de paso ptico; y dos cubetas de cuarzo, tambin de 10 mm de paso ptico. Tambin cable de conexin a PC y software de instalacin y manejo, compatible con el sistema Windows.

Dimensiones: 559 406 254 mm. Peso: 25 kg. 1 aos de garanta.