Mara Cecilia Arango Jaramillo

Principales razones para controlar los microorganismos:

Prevenir la transmisin de enfermedades Evitar el deterioro de los alimentos y otros materiales Evitar la contaminacin en procesos industriales que requieran cultivos puros, en laboratorios de diagnstico o investigacin.

Impedir la presencia de lama bacterial en las fbricas ( de papel y de azcar). Controlar las algas en las piscinas recreacionales y en los sistemas acuticos de refrigeracin. Prevenir el deterioro bacterial en las pinturas a base de agua.

Controlar las manchas y la podredumbre de origen mictico en las maderas. Impedir la incidencia de enfermedades en las cosechas agrcolas causadas por patgenos Erradicar microorganismos de un hospedador que est infectado

DEFINICIONES Y CONCEPTOS

Esterilizacin: eliminacin de toda forma de vida, includas las esporas. Asepsia: tcnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al campo de trabajo.

Higienizacin: Agente que reduce la poblacin bacteriana hasta niveles seguros para las exigencias de la salud pblica. Condicin sanitaria, limpieza. Se aplica a objetos inanimados y matan el 99% de los microbios en crecimiento. Tambien se le da el nombre de Sanitizacin

Antimicrobiano: agente que mata o inhibe el crecimiento de los microorganismos (antibacteriano, antifngico, etc.). Microbicida (Germicida): agente que mata formas vegetativas, pero no necesariamente las esporas de un microorganismo (bactericida, fungicida, alguicida, etc.). Microbiosttico: agente que inhibe el crecimiento de microorganismos (bacteriosttico, fungisttico, etc.).

Desinfeccin: es el proceso de destruccin de los agentes infecciosos. Desinfectante: Sustancias qumicas que matan las formas vegetativas y no necesariamente las formas de resistencia de los microorganismos patgenos. Se refiere a sustancias empleadas sobre objetos inanimados.

Antisepsia: Operaciones o tcnicas encaminadas a crear un ambiente que impida el desarrollo de los microorganismos e incluso pueda matarlos. Antispticos: Sustancias qumicas que previenen el crecimiento o accin de los microorganismos ya sea destruyndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se refiere a sustancias que se aplican sobre el cuerpo

Antibiosis: fenmeno biolgico que detiene o destruye el crecimiento microbiano debido a sustancias producidas por otro ser vivo. Antibiticos: sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de otro ser vivo.

Agentes teraputicos: antimicrobianos empleados en el tratamiento de infecciones. Agentes quimioteraputicos: sustancias qumicas empleadas en el tratamiento de enfermedades infecciosas o enfermedades causadas por la proliferacin de clulas malignas.

MUERTE DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS Y CURVAS DE SUPERVIVENCIA

Criterio de muerte de un microorganismo: prdida irreversible de la capacidad de reproduccin en un medio adecuado. Tambin implica destruccin de la clula Proliferacin: desarrollo y crecimiento de los microorganismos y por lo tanto, incremento de su poblacin

Supervivencia: no hay ni muerte ni proliferacin, permaneciendo los microorganismos inactivos o inhibidos.

Caso terico de desinfeccin

Tiempo Supervivientes Muertes por unidad de tiempo 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 1.000.000 100.000 10.000 1000 100 10 1 0 900.000 90.000 9.000 900 90 9 0 900.000 990.000 999.000 999.900 999.990 999.999 Total muertes Porcentaje total de muertes 0 90,0000% 99,0000% 99,9000% 99,9900% 99,9990% 99,9999%

por unidad de volumen

Sobrevivientes

Tiempo (horas)

Cuando una poblacin microbiana se expone a un agente letal, la cintica de la muerte es casi siempre exponencial ya que el nmero de supervivientes disminuye de forma geomtrica con el tiempo.

por unidad de volumen

100% Logaritmo de los sobrevivientes

Factores que afectan el control de los microorganismos

El nmero de microorganismos
El tiempo de exposicin.

La concentracin del agente de control

Condiciones ambientales locales El tipo de microorganismos La temperatura El estado fsico de el microorganismo

El nmero de microorganismos

A mayor nmero de microorganismos y/o resistencia de la poblacin se necesitar mayor tiempo de esterilizacin.
Para determinar el nmero de sobrevivientes es necesario conocer el tamao inicial de la poblacin.

Para establecer los procedimientos de control hay que considerar dos factores: la tasa de mortalidad y el tamao de la poblacin inicial

El tiempo de exposicin.
D: tiempo requerido para reducir la poblacin microbiana un 90%

Disminucin progresiva en el nmero de microorganismos sobrevivientes en funcin del tiempo de exposicin al agente

Efecto de la concentracin del agente de control

Tiempo (minutos)

Efecto de diferentes concentraciones de fenol sobre una poblacin de E.coli

Condiciones Ambientales

El calor es ms eficaz en un medio cido que en uno alcalino. La consistencia del material, acuoso o viscoso, influye marcadamente en la penetracin del agente. Las concentraciones altas de carbohidratos aumentan, por lo general, la resistencia trmica de los organismos.

La presencia de materia orgnica extraa reduce notablemente la eficacia de los agentes antimicrobianos :

No permite que el agente llegue al microorganismos Se combina con el desinfectante y lo precipita Se combina con el desinfectante y lo inactiva dejando libres concentraciones tan bajas que no logran el efecto deseado sobre la poblacin microbiana

La naturaleza del microorganismo

Desinfeccin por UV
http://www.cepis.ops-oms.org/eswww/fulltext/aguabas/ultravio/ultravio.html

Estado fisiolgico de las clulas: las clulas jvenes son ms vulnerables que las viejas.

Tipo de microorganismo: las clulas vegetativas en desarrollo son mucho ms susceptibles que las esporas.

La temperatura

Tiempo

Efecto de la temperatura en el control de E.coli con fenol a una concentracin de 4,62 g/l

El estado fsico de el microorganismo

Agente Virus y Escherichia Esporas Esporas esterilizante bacterianas fngicas bacterifagos coli Calor hmedo 1 3.000.000 2-10 1-5 Calor seco 1 1.000 2 - 10 5 Fenol 1 100.000.000 1 - 2 30 Formaldehdo 1 250 2 Radiacin 1 2-5 5 - 100 5-10 ultravioleta
Orahn, Bacteriol.Rev.,9, 1 , 1945

Modo de accin de los agentes microbianos:

Alteran la permeabilidad de la membrana Daan las protenas y los cidos nucleicos

Para determinar la eficacia antimicrobiana (la muerte de los microorganismos) se utilizan tcnicas que descubran a los sobrevivientes es decir, a los capaces de reproducirse; ya que los incapaces de reproducirse estn muertos. Se utilizan mtodos cuantitativos de siembra en placa en los que los supervivientes se detectan porque forman colonias.

FACTORES FISICOS DE CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

Altas Temperaturas

A.- Esterilizacin por calor hmedo:

Autoclave Tindalizacin Pasteurizacin Herbir

B.- Esterilizacin por calor seco:

Horno Incineracin

Hay que distinguir entre calor hmedo y calor seco:

La alta temperatura El calor hmedo mata combinada con un los microorganismos alto grado de porque coagula sus humedad es uno de protenas siendo ms los mtodos ms rpido y efectivo que el efectivos para calor seco que los destruir destruye al oxidar sus microorganismos. constituyentes qumicos.

La accin letal del calor es una relacin de temperatura y tiempo afectada por muchas condiciones.

Las esporas de Clostridium botulinum son destruidas: En 4 a 20 minutos a 120 C en calor hmedo En 2 horas de exposicin al calor seco.

Bacteriosttico

Bactericida

Bacterioltico

Esterilizacin por calor hmedo

Autoclave:

El calor en forma de vapor a saturacin y a presin proporciona temperaturas superiores a El aparato utilizado se llama las que se autoclave (una olla que obtienen por regula la presin interna y el ebullicin. tiempo).

Los autoclaves de laboratorio : Presin de vapor de una atmsfera por encima de la presin atmosfrica lo cual corresponde a una temperatura de 120C.

El tiempo de exposicin depende del volumen del lquido, de tal manera que para volmenes pequeos (hasta unos 3 litros) se utilizan 20 minutos a 120 C; si los volmenes son mayores debe alargarse el tiempo de tratamiento. Usualmente 15 minutos a 121C

No se deben esterilizar en el autoclave: Sustancias que no se mezclan con el agua porque no pueden ser alcanzadas por el vapor sobreviviendo los microorganismos que contengan. Sustancias que se alteran o son destruidas por tratamientos prolongados de calor.

La esterilizacin comienza cuando se ha alcanzado la temperatura ptima en el interior del aparato (autoclave o estufa) Segn el contenido, un autoclave puede requerir tiempos ms largos para alcanzar la temperatura de esterilizacin.

Esterilizacin casera de frascos en olla a presin: Se llena de agua la olla hasta 1/3 del alto de lo que se vaya a esterilizar Se colocan los frascos bien lavados se tapa la olla y se deja a fuego vivo Cuando pita se saca el aire para que quede slo vapor de agua. Se deja volver a pitar y se baja el calor a bajo Se dejan cuentan de este momento en adelante 15 minutos. Se puede apagar el fuego y dejar enfriar antes de sacar el material

Pasteurizacin:

Es un proceso que reduce la poblacin microbiana de un lquido. La leche, nata y ciertas bebidas alcohlicas (cerveza y vino), los jugos, se someten a tratamientos de calor controlado que slo matan a ciertos tipos de microorganismos pero no a todos.

La leche pasteurizada no es estril.

La temperatura seleccionada para la pasteurizacin se basa en el tiempo trmico mortal de microorganismos patgenos Es el tiempo ms corto necesario para matar una suspensin de bacterias a una temperatura determinada.

Mycobacterium tuberculosis es el patgeno ms resistentes al calor que puede transmitirse por la leche cruda y se destruye en 15 minutos a 60 C. Coxiella burnetti, agente causal de la fiebre Q, se encuentra a veces en la leche, es ms resistente al calor que Mycobacterium tuberculosis por lo que la pasteurizacin de la leche se realiza:
A 62,8 C durante 30 minutos A 71,7 C durante 15 segundos

Pasteurizacin tradicional: 63 a 65C por 30 min Pasteurizacin Flash: el lquido se calienta a 72 o C por 15 seg y rpidamente se enfra. Puede ser adaptada a flujos continuos. Ultrapasteurizacin: 150 o C por 13 seg

Tindalizacin o pasteurizacin fraccionada:

Calentamiento del material de 80 a 100 C hasta 1 hora durante 3 das con sucesivos perodos de incubacin. Se utiliza cuando las sustancias qumicas no pueden calentarse por encima de 100 C sin que resulten daadas. Las esporas resistentes germinarn durante los perodos de incubacin y en la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas son destruidas.

Esterilizacin por calor seco:

Horno :

La esterilizacin seca se logra a 160-170 C por 2-3 hrs. El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y otros materiales slidos estables al calor. Para el material de vidrio de laboratorio se consideran suficientes dos horas de exposicin a 160 C.

Incineracin:

La destruccin de los microorganismos por combustin o cremacin. En los laboratorios, las asas de siembra se calientan a la llama de mecheros Bunsen. La incineracin tambin se utiliza en la eliminacin de residuos hospitalarios.

Bajas Temperaturas

En general, el metabolismo de las bacterias se inhibe a temperaturas por debajo de 0 C. No matan a los microorganismos sino que pueden conservarlos durante largos perodos de tiempo. Circunstancia aprovechada por los microbilogos para conservar los microorganismos indefinidamente. Los cultivos de microorganismos se conservan congelados a -70 C o incluso mejor en tanques de nitrgeno lquido a -196 C.

Para evitar el crecimiento de los microorganismos patgenos y alterantes en la carne: 1. Controlar que las carnes se expidan a la temperatura mximo adecuada: +7 para las canales y los cuartos, +3 para las vsceras, 12 para las carnes congeladas, -18 para las ultracongeladas, +4 para la carne de aves y de conejo. 2. Controlar que el mantenimiento de la cadena del fro Controlar las condiciones en que se hace la

3.- Radiaciones

A.- Radiaciones ionizantes

Rayos gamma Rayos catdicos

B.- Radiaciones no ionizantes

Luz ultravioleta

Radiaciones ionizantes

Rayos gamma

Las radiaciones gamma tienen mucha energa y son emitidas por ciertos istopos radiactivos como es el Co60. Son difciles de controlar porque este istopo emite constantemente los rayos en todas direcciones. Estos rayos pueden penetrar materiales, por lo que un producto se puede empaquetar primero y despus esterilizar.

Rayos catdicos

Radiacin con haz de electrones Se usan para esterilizar material quirrgico, medicamentos y otros materiales. Ventaja: el material se puede esterilizar despus de empacado (ya que stas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura ambiente.

Radiaciones no ionizantes

Luz ultravioleta:

Radiaciones con longitudes de onda alrededor de 265 nm son las que tienen mayor eficacia como bactericidas (200 295 nm). La luz UV tiene poca capacidad para penetrar la materia por lo que slo los microorganismos que se encuentran en la superficie de los objetos que se exponen directamente a la accin de la luz UV son susceptibles de ser destrudos.

Se usan para reducir la poblacin microbiana en: Quirfanos Cuartos de llenado aspticos en la industria farmacutica Superficies contaminadas en la industria de alimentos y leche. Bodegas de carne refrigeradas

Ondas ultrasnicas (sonicacin)

En general, los microorganismos suspendidos en un lquido y sometidos a la accin de ondas ultrasnicas de altas intensidades (20,000 ciclos/seg.) durante cierto tiempo se destruyen porque se rompe la pared celular y se pierde el contenido de la clula. Se usan en tratamiento de pequeos volmenes de agua

Filtracin

Membranas con poros de un tamao determinado o materiales filtrantes. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la muestra. Los microorganismos quedan retenidos en parte por el pequeo tamao de los poros del filtro y en parte por adsorcin a las paredes del poro durante su paso a travs del filtro debido a la carga elctrica del filtro y de los microorganismos.

Debido al pequeo tamao de los virus, nunca es posible tener certeza de que, por los mtodos de filtracin que dejan libre de bacterias una solucin, se van a eliminar tambin los virus.

Son difciles de utilizar en lquidos con muchos slidos suspendido

Segn el tamao del poro se puede lograr esterilidad o reduccin de los microorganismos En las plantas de tratamiento de agua se logra remover hasta el 90-99% de los microorganismos filtrando el agua previamente floculada y sedimentada

La filtracin se utiliza para Emulsiones oleosas, aceites, algunos tipos de pomadas. soluciones termolbileS: lquidos biolgicos (suero de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y antibiticos). Esterilizar soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas.

Existen tres tipos bsicos de filtros:

Filtros profundos o Filtros de profundidad: consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo.
En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz.

Filtros HEPA

Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) Est compuesto por pliegues de acetato de celulosa que retienen las partculas (includos los microorganismos) del aire que sale de una campana de flujo laminar.

Membranas filtrantes: tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de la partcula. Los filtros de membranas son discos de steres de celulosa con poros tan pequeos que previenen el paso de los microorganismos Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriz del filtro debido a efectos electrostticos.

Estos filtros son desechables.

Los filtros de membrana se utilizan en: La esterilizacin de lquidos En el anlisis microbiolgico de aguas ya que concentran los microorganismos existentes en grandes volmenes de agua.

Filtro de microfibras de vidrio. Electron micrograph Whatman

Filtros de membrana de nitrocelulosa Electron micrograph Schleicher and Schuell

Millipore PVDF membrane. Electron micrograph

Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas.
Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente.

Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro.

Desecacin

La desecacin de las clulas vegetativas microbianas paraliza su actividad metablica. Este proceso se utilizaba ampliamente antes del desarrollo de la refrigeracin.

El tiempo de supervivencia de los microorganismos despus de desecados depende de muchos factores, entre ellos la especie microbiana.
En general, los cocos Gram (-) son ms susceptibles a la desecacin que los cocos Gram (+). Las endoesporas bacterianas son muy resistentes a la desecacin pudiendo permanecer viables indefinidamente.

Presin osmtica

La pared celular de las bacterias las protege de cambios en la presin osmtica del medio. Pero si la presin osmtica externa es alta el organismo puede morir. Altas concentraciones de sal interrumpen los procesos de transporte a travs de la membrana y desnaturalizan las protenas.