P R O F. .

: L U C I A N A C S S I A

REVISO

PROTENAS PLASMTICAS
Albumina: A

Protenas sricas

Globulinas: -1, -2, ,

PROTENAS PLASMTICAS
A maioria das protenas efetoras da imunidade com funo de anticorpo pertencem a frao -globulina, sendo por isso referida como gamaglobulina. Entretanto, um grupo menor dessas protenas efetoras encontram-se entre a frao -globulina e uma quantidade ainda menor na frao -2 globulina.

IMUNOGLOBULINAS

Imunoglobulinas so protenas com funo de anticorpo e diversas atividades biolgicas. Uma das maiores caractersticas das imunoglobulinas que se combinam com a substncia que induziu a sua formao.

ANTICORPOS
Anticorpos so protenas que se ligam de forma especfica a molculas conhecidas como antgenos. So sintetizadas exclusivamente pelos linfcitos B. Tambm esto presentes na superfcie destes linfcitos.

ANTICORPOS

Estrutura geral:

ANTICORPOS
Funes fundamentais: Ligar a antgenos estranhos encontrados pelo hospedeiro; Mediar as funes efetoras para neutralizar ou eliminar invasores.

ANTICORPOS
Qual a diferena entre imunoglobulinas e anticorpo?

ANTICORPOS
Cada molcula de anticorpo possui uma cadeia varivel nica, o partopo, que permite com que ela se ligue especificamente a um eptopo do antgeno.

ANTGENOS
Tem capacidade de provocar uma resposta imunolgica, normalmente substncias estranhas ao organismo, em geral exgenas; Eptopos ou determinantes antignicos so a parte ativa da molcula ou microorganismo; Quanto ao nmero de eptopos, pode ser multivalente, multideterminado ou univalente e unideterminado.

ATUAO DOS ANTICORPOS

Ao direta dos anticorpos sobre os agentes invasores: aglutinao, precipitao, neutralizao, lise (Ativao do Complemento).

ATUAO DOS ANTICORPOS

Neutralizao: ativa fortemente a fagocitose, tanto por neutrfilos quanto por macrfagos, fazendo-os englobar as bactrias s quais esto fixados os complexos antgeno-anticorpo opsonizao.

ATUAO DOS ANTICORPOS

Neutralizao de vrus e toxinas:

ATUAO DOS ANTICORPOS

Lise: um dos mais importantes de todos os produtos da cascata do complemento que tem efeito direto de romper as membranas celulares de bactrias e outros organismos invasores.

ATUAO DOS ANTICORPOS

Aglutinao: anticorpos se ligam aos invasores aderindo-se h vrios ao mesmo tempo o que promove a aglutinao (formao de pequenos agregados ou grumos).

FUNES DOS ANTICORPOS

IgM:
Pentmero com 10 stios de ligao ao antgeno (valncia 10 ou decavalente); O primeiro a ser produzido na resposta imunolgica; Ativo contra microrganismos; Aglutina antgenos; Ativao do complemento; Encontrado nas superfcies do linfcito B, sangue e linfa; 5 a 10% do total de imunoglobulinas efetoras no organismo humano (depende da idade); Presente principalmente no soro; Reagem melhor entre 4C e 25C.

FUNES DOS ANTICORPOS

IgG:
Monmero bivalente; Facilita a fagocitose; Neutraliza as toxinas; impede a reinfeco por determinado micro-organismo Protege o feto (nico anticorpo que atravessa a placenta); Ativao do complemento; ADCC (citotoxidade mediada por clulas e dependentes de anticorpos); Encontrado principalmente no sangue, intestino e linfa; Imunoglobulina mais abundante, 80 a 90% no organismo; Meia-vida de 23 dias podendo se estender a anos, dependendo do tipo de patgeno; Reagem melhor prximo 37C.

FUNES DOS ANTICORPOS

IgE:
Monmero bivalente; Ligam-se a membrana de basfilos e mastcitos; Induz a degranulao de basfilos e mastcitos: liberao de histamina; Participa das reaes alrgicas; Atua contra protozorios parasitas e ADCC; Encontrado principalmente no soro; 1% presente no organismo; progressivamente em crianas de 10 a 15 anos e declina aos nveis anteriores aps a oitava dcada de vida; Participa na defesa ADCC antiparasitria; Meia-vida 2 - 6 dias.

FUNES DOS ANTICORPOS

Reao de hipersensibilidade mediada por IgE:

FUNES DOS ANTICORPOS

IgA:
Dmero tetravalente, tambm pode ser monmero, trmero e at tetrmero; Proteo das superfcies e mucosas; ADCC; Encontrada principalmente nas secrees (saliva, lgrima, muco, leite), sangue e smen; Auxiliam na proteo do recm-nascido contra infeces durante os primeiros meses de vida 10 a 15% presente no organismo.

FUNES DOS ANTICORPOS

IgD:
Monmero bivalente; Possivelmente o primeiro a ser produzido na resposta imunitria; Encontrado principalmente na superfcie do linfcito B, sangue e linfa; 0,002% no organismo; Papel fisiolgico ainda sob investigao.

M TO D O S DIAGNSTICOS

MTODOS DIAGNSTICOS

Nos ensaios imunolgicos a principal amostra biolgica ainda o soro, mas pode-se utilizar outras amostras como: Sangue completo; Plasma; Soro; Outros.

MTODOS DIAGNSTICOS

Todas as tcnicas utilizadas em imunologia visam determinar antgeno (Ag) e anticorpo (Ac) ou o imunocomplexo formado por sua interao. As reaes Ag-Ac dependem de vrios fatores, entre eles destacam-se a fora de interaes no-covalentes e o elevado grau de complementaridade entre eles;

MTODOS DIAGNSTICOS
Afinidade: fora da interao entre um nico ptopo e o anticorpo. Ligao fraca: rpida dissociao; Ligao forte: tempo maior de ligao. Especificidade: caracterstica que indica que o teste em questo identificar somente o antgeno ou o anticorpo desejado.

MTODOS DIAGNSTICOS
Sensibilidade: diz respeito a quantidade mnima de antgeno para reao com anticorpo, depende da afinidade e da distribuio dos eptopos no antgeno.
Ensaio Reaes de precipitao em fludos Sensibilidade (g anticorpo/mL) 20-200

Reao de precipitao em gis Imunodifuso radial Imunodifuso dupla imunoeletroforese 10-50 20-200 20-200 Reaes de aglutinao Direta Aglutinao passiva 0,3 0,006-0,06

Radioimunoensaio (RIA)
Enzimaimunoensaio (Elisa) Imunofluorescncia

0.0006-0,006
0,0001-0,01 1,0

MTODOS DIAGNSTICOS
A maior parte das preparaes de anticorpos
policlonal.

MTODOS DIAGNSTICOS

Entre os mtodos para anlise imunolgica destacam-se as reaes de precipitao, de aglutinao, imunodifuso, radioimunoensaios, reaes imunoenzimticas, imunofluorescncia.

MTODOS DIAGNSTICOS
Importncia da pesquisa de anticorpos no diagnstico imunolgico: Elucidar processos patolgicos; Diferenciar a fase da doena; Selecionar doadores de sangue; Selecionar doadores e receptores de rgos; Fazer triagens para certas doenas; Avaliar a imunidade naturalmente adquirida ou artificialmente induzida

ANLISE SOROLGICA
Existem muitas doenas cujo diagnstico no feito pela presena do "micro-organismo" em si, mas pela pesquisa da presena ou ausncia das clulas que o corpo produz, responsveis pelo combate e reconhecimento dessa doena.

ANLISE SOROLGICA
Qualitativa Resultado: Positivo e Negativo; reagente e noreagente.

ANLISE SOROLGICA
Semi-quantitativa: depende da titulao ou da absorbncia. Faz-se diluies do soro do paciente em salina (NaCl a 0,9%) 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 e mais se necessrio.

Quantitativa: fornece resultados precisos, com valores absolutos, expressos em massa por volume (por exemplo, mg/ml; mg/dL) ou em unidades internacionais tambm por volume (por exemplo, UI/ml, g/mL).

 ESPECIFICIDADE + SENSIBILIDADE = CONFIABILIDADE

ANLISE SOROLGICA

Quanto MAIOR a sensibilidade, MENOR a ocorrncia de resultados falsos-negativos, MAIOR a possibilidade de deteco precoce de doenas.
ALTA SENSIBILIDADE OBRIGATRIA EM TESTES DE TRIAGEM

Quanto MAIOR a especificidade, MENOR a ocorrncia de resultados falsos-positivos, MENOR a ocorrncia de reaes cruzadas.
OBRIGATRIA ALTA ESPECIFICIDADE EM TESTES CONFIRMATRIOS

M E TO D O L O G I A S PA R A O E S T U D O DA IMUNIDADE HUMORAL

TESTES SOROLGICOS
Tambm chamados de imunoensaios, so tcnicas utilizadas para a deteco e quantificao de antgenos e anticorpos e outras substancias que desempenham o papel de antgeno (drogas, hormnios, cidos nuclicos, citocinas, receptores de clulas, etc.)

TESTES SOROLGICOS
Precipitao: imunodifuso radial simples e dupla; Aglutinao: hemaglutinao, PCR, ASLO, ABO, FR; Teste de imunofluorescncia; Tcnicas imunoenzimticas: Elisa; Testes rpidos: Dengue, HIV, -HCG; Tcnicas empregadas na automao: nefelometria.

TESTES SOROLGICOS
Tcnicas imunoenzimticas: Elisa. Vantagens: Mtodo altamente sensvel e especfico, com alto grau de confiabilidade como ensaio quantitativo, custo baixo a mdio. Desvantagens: pequenas variaes de pipetagem e tempo de incubao podem ocasionar resultados alterados.

TESTES SOROLGICOS

Elisa indireto

TESTES SOROLGICOS
Aglutinao: PCR, ASLO, ABO, FR. Vantagens: resultado rpido, fcil manipulao. Desvantagens: baixa especificidade.

TESTES SOROLGICOS
Precipitao: imunodifuso radial simples e dupla;
Vantagens: Mtodo simples, de fcil execuo, baixo custo, rpido; Desvantagens: Baixa sensibilidade e especificidade, devido a mal armazenamento das hemcias, pode-se obter resultados falso-negativos.

TESTES SOROLGICOS
Teste de imunofluorescncia;
Vantagens: Alta especificidade e sensibilidade; possibilidade de deteco de protenas intracelulares e de sua localizao, bem como do trfico intracelular. Desvantagens: variao individual na leitura de resultados de IFA; alto custo de microscpio de fluorescncia;

TESTES SOROLGICOS
Tcnicas empregadas na automao: nefelometria.
Vantagens: rpida, precisa, fcil de realizar, totalmente automatizado; Desvantagens: alto custo, reaes inespecficas devido a soros lipmicos e hemolisados, necessidade de vrias diluies para antgenos concentrados.

SOROLOGIAS IGM/IGG
IgM no reagente + IgG reagente = IMUNE
Ou seja, o paciente j entrou em contato com o patgeno pesquisado, e j criou defesa contra ele.

IgM reagente + IgG no reagente = INFECO AGUDA

O paciente est com uma infeco pelo patgeno pesquisado, ou seja, ele est entrando em contato com ele pela primeira vez.

IgM e IgG positivos (reagente) = INDERTERMINADO

No possvel saber h quanto o paciente entrou em contato com o patgeno pela primeira vez, podendo ser h pouco tempo, ou h muito tempo.

IgM e IgG negativos (no reagente): SUSCEPTIVEL

O paciente nunca entrou em contato com o microorganismo.

TESTES CUTNEOS PARA IGE

Testes alrgicos por intradermo reao ou por puntura: aplica-se na pele substncias suspeitas de causar o problema. Apresentam uma reao de vermelhido e edema em 15 a 20 minutos e desaparecem aps 1 ou 2 horas sem deixar marcas .Tm grande valor quando se trata de antgenos ou substncias que penetram no organismo por via inalatria e menor quando se trata de alimentos, drogas, bactrias ou vrus.

TESTES CUTNEOS PARA IGE

Patch testes alrgicos ou testes de contato : so testes de se aplicar as substncias na pele e se deixa por 48 horas mantidas no local por artefato prprio.

SOROLOGIA PARA ALERGIAS

IgE total: quando a histria do paciente sugere alergia, prever riscos de anafilaxia. Indetectvel no neonato; Pode atingir concentraes adultos jovens; mximas em

Nvel elevado pode no significar doena alrgica; IgE pode estar elevada em outras condies, como: parasitoses intestinais;

TESTES SOROLGICOS PARA IGE

IgE especfica: permite confirmar qual o provvel alrgeno responsvel pelas manifestaes alrgicas do paciente.

Denominada RAST (radioallergosorbent test);

Parmetro decisivo para o diagnstico de alergia mediada por IgE; Tem a mesma finalidade dos testes cutneos de leitura imediata. Desvantagens: maior tempo de sensibilidade para alguns alrgenos. execuo, custo e

Vantagens: uso de anti-histamnicos, pacientes com problemas dermatolgicos, risco de reaes sistmicas.

SOROLOGIA PARA ALERGIAS

Classes 0 1 2 3 4 Faixa (kU/L) Inferior a 0,35 0,35 a 0,70 0,70 a 3,50 3,50 a 17,50 Superior a 17,50 Resultados Indetectvel Fraco Moderado Forte Muito Forte

CONTINUA...