HEMOCULTIVOS

PRESENTADO POR: CLAUDIA MARCELA VARGAS

ESTUDIANTE DE BACTERIOLOGIA X SEMESTRE PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

QUE ES UN HEMOCULTIVO?

Es un cultivo microbiolgico de la sangre.

Es un mtodo diagnstico empleado para detectar infecciones que se trasmiten u/o ocurren a travs del torrente sanguneo

CUANDO REALIZAR UN HEMOCULTIVO

Antes de la administracin de la terapia antimicrobiana sistmica Siempre que exista sospecha clnica de sepsis Meningitis Osteomielitis Pielonefritis Infeccin intraabdominal Artritis Infecciones graves de la piel y tejidos blandos Neumona Endocarditis y fiebre de origen desconocido (absceso oculto, fiebre tifoidea, brucelosis, etc.).

IDENTIFICACIN DE LA BOTELLA

Cada hemocultivo con la sangre inoculada debe ser debidamente identificado con los datos del paciente:
Nmero de historia clnica Nombre y apellidos Servicio

En la orden

Nombre del mdico que lo solicita

Diagnstico del paciente

Tratamiento antimicrobiano que est recibiendo

Tipo de hemocultivo: (para microorganismos crecimiento rpido o lento).

Nmero de cama

OBTENCION DE LA MUESTRA DE SANGRE

La muestra de sangre para hemocultivo debe extraerse de una vena, utilizndose generalmente las del antebrazo. La utilizacin de sangre arterial no ha demostrado ventajas sobre la venosa.

Sangre extrada de catter solo debe ser utilizada cuando se sospecha bacteriemia asociada a este.
Cada muestra de sangre se obtendr de lugares de venopuncin diferentes.

PREPARACION DE LA PIEL

Palpacin de la vena elegida para la puncin

Limpiar la zona con alcohol isoproplico o etlico de 70 durante 30 segundos.

Aplicar a continuacin una solucin yodada (tintura de yodo al 1-2% durante 30 segundos o povidona yodada al 10% durante 1 minuto) cubriendo un rea circular de 2-4 cm de dimetro. Es importante dejar secar el compuesto yodado para que ejerza su accin oxidante y evitar tocar con los dedos el lugar de la venopuncin, as como hablar o toser mientras se realiza la extraccin.

EXTRACCION DE LA MUESTRA

Insertar la aguja en la vena elegida y extraer el volumen de sangre sin utilizar anticoagulante. Los frascos de hemocultivo deben inocularse rpidamente para evitar la coagulacin de la sangre en la jeringa, atravesndolos con la aguja en posicin vertical.

Se inocular en primer lugar el frasco anaerobio, evitando la entrada de aire, seguido del aerobio, invirtindolos varias veces para mezclar la sangre y el medio de cultivo.

VOLUMEN Y DILUCION DE LA MUESTRA

Volumen de medio en botellas de adolescentes: 20-90ml Sangre: 5-10 ml

adultos

Volumen de medio en botellas pediatricas: 10-20 ml sangre: 1-4 ml Lactantes de 1 mes a 2 aos: 2 a 3 ml Nios mayores de 2 aos : 3 a 5 ml

La dilucin final recomendada es de 1/5 a 1/10

PROBLEMAS DE UN BAJO NIVEL DE SANGRE

Menos de un mililitro de sangre en caso de bacterias como la Neisseria , puede ser afectada por agentes lizantes como el SPS (polianetol sulfonato sdico) .(PEDIATRICOS)

La actividad bactericida natural de la sangre reduce la viabilidad del microorganismo.

NUMERO DE HEMOCULTIVOS
En adultos se toman tres botellas, lo que incrementa la posibilidad de detectar el agente infeccioso. En nios se toman de dos a tres botellas , preferiblemente de diferentes sitios para aumentar la probabilidad de deteccin. En neonatos se toman uno o dos antes de comenzar con el tratamiento.

NUMERO DE CULTIVOS SEGN CONDICION CLINICA

TRANSPORTE DEL HEMOCULTIVO

Los frascos, debidamente marcados, deben transportarse al laboratorio inmediatamente.

Slo deben mantenerse a temperatura ambiente durante cortos periodos de tiempo para no afectar la posterior recuperacin de los microorganismos.
Si no pueden ser enviados inmediatamente al laboratorio se incubarn en una estufa a 35-37C hasta ese momento. Los hemocultivos que van a ser procesados en sistemas automticos pueden mantenerse a temperatura ambiente. Sin superar las 18 h. Los hemocultivos nunca deben ser refrigerados.

CLASIFICACION DE LOS HEMOCULTIVOS

METODOLOGIA MANUAL CONVENCIONAL

MEDIOS DE CULTIVO
Los ms frecuentemente utilizados son:
Caldo triptosa soja Caldo Columbia Infusin cerebro corazn

Caldo Brucella
Caldo Tioglicolato Caldo de peptona suplementado

Actualmente se estn utilizando los medios con resinas para neutralizar los antimicrobianos cuando el paciente est recibiendo tratamiento antibitico previo.

El medio de cultivo se Uno de los frascos se embotella al vaco con una ventila por medio de atmsfera que contiene cantidades variables de una aguja, permitiendo CO2. la entrada de oxgeno El potencial de xidoreduccin del medio, si no se ventila, es lo suficientemente bajo como para permitir el crecimiento de bacterias anaerobias.

atmosfrico en su interior y la creacin de una atmsfera aerobia.

El anticoagulante utilizado es SPS (polianetol sulfonato sdico) .

METODOLOGIA MANUAL BIFASICO

El medio de la botella esta compuesto de una fase

slida y otra lquida. Al inclinar el frasco, el medio lquido cubre totalmente el medio slido, realizando un subcultivo en el mismo cuantas veces se desee, sin necesidad de abrir la botella.

BBL SEPTI-CHEK

METODO SEMIAUTOMATIZADO LISIS-FILTRACION

En este mtodo, tras la lisis de las clulas sanguneas, se procede a filtrar la sangre para retener las bacterias. El filtro utilizado, o fragmentos del mismo, se siembra en distintos medios de cultivo.

METODO SEMIAUTOMATIZADO LISIS-CENTRIFUGACION

Consiste en un tubo que contiene : Saponina como agente lisante Polipropilenglicol como agente antiespumante SPS (polianetol sulfonato sdico) y EDTA como anticoagulantes Lquido fluoroqumico inerte

Tras la inoculacin de la sangre, sta se mezcla con el contenido del tubo para conseguir la lisis de las clulas. A continuacin, para separar los microorganismos y los elementos sanguneos, se centrifuga el tubo a 3.000xg. durante 30 minutos. Despus se desecha el sobrenadante y se siembra el sedimento en distintos medios de cultivo.

MEZCLAR

INCUBAR

POSITIVO

SISTEAS AUTOMATIZADOS

SISTEMAS AUTOMATICOS RADIOMETRICO

Utiliza substratos marcados con 14C que al ser metabolizado por los microorganismos libera 14CO2 al medio, que difunde a la atmsfera del frasco.

Se mide peridicamente el nivel de 14 CO2 y se expresa como un ndice de crecimiento

SISTEMAS AUTOMATICOS NO RADIOMETRICO

Detectan el CO2 por espectrometra de infrarrojos.

Utilizan un agitador para los frascos aerobios en las primeras 24-48 h.

Se hacen dos lecturas diarias de los frascos aerobios los primeros tres das y una lectura diaria hasta que se cumplan 5-7 das.

SISTEMAS AUTOMTICOS DE
MONITORIZACIN CONTINUA.

Se basan en la deteccin de la produccin de CO2 por los microorganismos Los datos obtenidos en cada lectura se transmiten a un ordenador donde se almacenan y se analizan segn sofisticados algoritmos que determinan cundo se produce crecimiento bacteriano.

Minimizan el nmero de falsos positivos y falsos negativos.

El Bactec-9240 (Becton Dickinson)

Es un sistema totalmente automtico, no invasor, de agitacin continua, que se compone de un incubador, un detector y un ordenador. El CO2 producido por el metabolismo bacteriano reacciona con un material fluorescente situado en el fondo del frasco del hemocultivo, lo que modula la cantidad de luz que es absorbida por un sensor. Los fotosensores miden el nivel de fluorescencia, que se corresponde con la cantidad de CO2 producida por el microorganismo. Este sistema realiza una lectura de todos los frascos cada 10 minutos

BACTEC 9240

BacT/Alert

HEMOCULTIVOS PARA MICOBACTERIAS

El mtodo de lisis-centrifugacin ha sido el mtodo ms ampliamente utilizado.

En BACTEC 13A radiomtrico (Becton Dickinson) se puede inocular la muestra directamente en la botella del hemocultivo sin un procesamiento previo. El tiempo de deteccin depende de la concentracin de Mycobacterium en la sangre y de la especie de Mycobacterium que produce la infeccin

SISTEMAS COMERCIALES AUTOMTICOS DE HEMOCULTIVOS

Sistema Indicador del crecimiento Mecanismo de deteccin
Radiomtrico

Monitorizac in contnua
No

Bactec 460

Produccin de CO2

Bactec 660
Bactec9240 BacT/Alert Vital ESP

Produccin de CO2
Produccin de CO2 Produccin de CO2 Produccin de CO2, cambio de pH o potencial redox Produccin y/o consumo de gas

Infrarrojos
Fluorescenci a Colorimtrico Fluorescenci a Manomtrico

No
S S S S

SIEMBRA SEGN COLORACION DE GRAM

SUBCULTIVOS

Cultivar en distintos medios Se incubarn a 35-37C en diferentes atmsferas Perodos de tiempo (24 h el agar sangre y el agar chocolate, y 48-72 h el agar sangre enriquecido en anaerobiosis) En agar Sabouraud si se observan levaduras en el Gram, e incubar a diferentes temperaturas, 30C en caso de sospecha de hongos.

HEMOCULTIVO POSITIVO
Tincin de Gram Identificacin preliminar

Cocos

Gram (+) en racimos Gram (+) en diplos o cadenas Gram (-)

TSI, DNAsa o coagulasa, novobiocina, antibiograma en agar Mueller Hinton Optoquina, bacitracina, bilis-esculina, antibiograma en agar sangre Antibiograma en agar chocolate incubado en CO2(Neisseria)

Bacilos

Gram (+) y corineformes Gram (-)

Esculina, antibiograma en agar sangre Pruebas bioqumicas de identificacin, antibiograma en agar Mueller Hinton

Cocobacil os

Gram (-)

Antibiograma en agar chocolate incubado en CO2 (Haemophilus)

Levadura s

Agar Saboureaud+cloranfenicol, agar Saboureaud+cloranfenicol+cicloheximida

Flora mixta

Gram (+) y Gram (-)

Agar sangre+cido nalidxico, agar MacConkey

INTERPRETACION DE RESULTADOS

VERDADERA BACTEREMIA

Crece el mismo microorganismo en varios hemocultivos, aunque sean microorganismos de la piel. Tiempo de positividad con un rango de 48 horas. Cuando en la punta del catter se asla un recuento significativo (<15 O >15 ufc) del mismo microorganismo que en el hemocultivo.

FALSA BACTEREMIA

Un hemocultivo puede ser positivo sin que ello represente un episodio verdadero de bacteriemia.
La presencia de un solo hemocultivo positivo de extracciones seriadas en un corto perodo de tiempo sugiere una contaminacin.

MICROORGANISMOS CAUSANTES DE BACTEREMIA

MICROORGANISMOS CONTAMINANTES

Staphylococcus aureus Escherichia coli

otras enterobacterias

Pseudomonas aeruginosa Streptococcus pneumoniae

Estafilococos coagulasa negativa Streptococcus del grupoviridans Corynebacterium spp.

Propionibacterium acnes Bacillus spp.

Algunas especies de

Clostridium

BACTEREMIA ASOCIADA A CATETER

Se siembra la superficie de la punta mediante la TECNICA DE MAKI. Comparacin entre los recuentos obtenidos de hemocultivos por sangre perifrica y de sangre por el catter .
INTERPRETACION Infeccin posible: hemo perifrico (+) Infeccin probable: hemo perifrico y trans catter (+) Infeccin definitiva: cultivo de punta de catter positiva

PROCALCITONINA COMO INDICADOR DE SEPSIS

La procalcitonina (PCT) es un precursor de la hormona activa biolgica. (CALCITONINA). Se produce normalmente en las clulas C de la glndula tiroides y su nivel en condiciones normales en un sujeto sano es prcticamente indetectable

En condiciones de infeccin grave se origina tambin en los macrfagos, especialmente de origen heptico y en las clulas neuroendocrinas del pulmn e intestino, por una induccin del FNT e IL-2.

Se ha reportado tambin la elevacin de la protena en cuestin despus de estados inflamatorios, no necesariamente relacionados a infeccin como el postoperatorio inmediato y el traumatismo severo, sin embargo no se eleva en otro tipo de infecciones como las virales, en neoplasias, enfermedades alrgicas o del tejido conjuntivo

CONCLUSIONES
ITEMS A TENER EN CUENTA PARA QUE EL RESULTADO DE UN HEMOCULTIVO SEA CONFIABLE: El volumen de sangre utilizado. La dilucin MEDIO/SANGRE Numero de cultivos tomados La tcnica de hemocultivo ,incluso la preparacin superficial, y el sitio de la toma de muestra Tiempo de incubacin El tipo de botella y sistema utilizado (incluyendo si identifica anaerobios o aerobios)