INSTITUTO TECNOLGICO DE ACAPULCO

CINTICA, QUMICA Y BIOLOGA.

DRA. MARA DE LOS NGELES GAMA VALDS

UNIDA 4 CINTICA ENZIMTICA.

4.7 INMOVILIZACIN DE ENZIMAS. MTODOS DE INMOVILIZACIN. EFECTO DE LA INMOVILIZACIN SOBRE LA ACTIVIDAD CATALTICA. LIMITACIONES DIFUCIONALES EN SISTEMAS CON ENZIMAS INMOVILIZADAS.

JIMNEZ CHVEZ LUIS ALBERTO

Consiste en mantener la biomolcula unida o atrapada en un soporte fsico, conservando su actividad cataltica y permitiendo el flujo de sustratos y productos. Las enzimas pueden ser inmovilizadas en sustratos naturales y/o sintticos por medios qumicos, y pueden adems ser encapsuladas mecnicamente la adicin de agentes que formen una pelcula protectora alrededor de la enzima inmovilizada, permitiendo el paso de reactivos y productos de pequeo tamao, pero no de protenas.

Los mtodos de inmovilizacin de enzimas se clasifican en dos rubros: mtodos reversibles y mtodos irreversibles.

Mtodos de Inmovilizacin Irreversibles El concepto de inmovilizacin irreversible implica el enlace del biocatalizador a un soporte de manera permanente, por lo cual el biocatalizador no puede ser liberado sin destruir o modificar su actividad biolgica o el soporte. Los procedimientos ms comunes de inmovilizacin irreversible son el enlace covalente, enlace cruzado, atrapamiento y micro encapsulado.

Formacin de enlaces covalentes

Formacin de enlaces cruzados

Con esta tcnica los soportes no son necesarios, ya que la inmovilizacin se da por un enlace directo entre enzimas, que puede ser mediado o no por un agente de unin. Generalmente se aade el agente de bajo peso molecular (ej. glutaraldehdo) a la enzima en solucin, uniendo covalentemente los grupos funcionales de las enzimas para formar agregados. Atrapamiento El mtodo de atrapamiento est basado en la oclusin de las enzimas dentro de una red polimrica que permite al sustrato y a los productos pasar a travs de ellos y retener las enzimas. Este mtodo difiere de los mtodos de acoplamiento covalente descritos anteriormente, ya que las enzimas no estn enlazadas a la matriz o soporte. Existen diversos mtodos de atrapamiento de enzimas como el de gel o atrapamiento por fibras, microencapsulado y por inclusin.

MTODOS DE INMOVILIZACIN REVERSIBLE En el mtodo de inmovilizacin reversible, las enzimas inmovilizadas pueden ser desprendidas del soporte bajo condiciones no extremas. El uso de mtodos reversibles para la inmovilizacin de enzimas es altamente atractivo, principalmente por razones econmicas debido a que el soporte puede regenerarse y recargarse con enzimas nuevas cuando la actividad enzimtica decae. Existen distintos mtodo de inmovilizacin reversible, que a continuacin se describen:

Por adsorcin El mtodo de adsorcin emplea soportes orgnicos o inorgnicos que presentan un adsorbente activo (monocapastiol auto ensambladas, oro, entre otros) en los cuales, las enzimas son atradas y retenidas por medio de interacciones inicas o fuerzas dbiles.

Adsorcin no especfica

Adsorcin hidrofbica

Quelacin o enlace metlico.

Formacin de enlaces disulfuro

Seleccin de soportes Las caractersticas de las matrices o soportes son de gran importancia en la determinacin de la eficiencia del sistema de inmovilizacin de enzimas. Las propiedades ideales de un soporte incluyen la resistencia fsica a la compresin, hidrofilicidad, inertes entre las enzimas y sus derivados, biocompatibilidad, resistencia al ataque microbial y bajo costo. Asimismo, los soportes pueden clasificarse en inorgnicos y orgnicos en funcin de su composicin qumica. En donde los soportes orgnicos pueden dividirse en polmeros naturales y sintticos.