PRACTICA IV METODOS DE CUANTIFICACION TECNICA DE DILUCIONES Frutas & Hortalizas

Grupo 2

Aprender y utilizar la tcnica de dilucin Enumerar las bacterias mesfilas

Interpretacin de resultados y posterior calculo.

Las frutas y hortalizas se contaminan con diversos microorganismos en el momento de la cosecha, las contaminaciones proceden principalmente del suelo, del agua, del polvo, etc.
La microflora la componen principalmente los esporeiformes, corineformes y otros organismos del suelo.

Dado el alto contenido de cido y azcar de las frutas, predominan en ella las levaduras y

los mohos (generalmente Alternaria, Botrys y

Phytopthora) que producen descomposicin,

mientras que el alto contenido de hidratos de

carbono de muchas hortalizas favorecen la formacin de bacterias acidolacticas.

Las

bacterias

coliformes

no

fecales

los

enterococos forman parte de la microflora que se encuentra naturalmente en las frutas y hortalizas, pero la presencia de E. coli puede atribuirse solo

a las aguas de regada contaminadas o a su

manejo por el hombre.

Se basa en la hiptesis de que las clulas

microbianas que contiene una muestra mezclada con un medio agar forman, cada una, colonias visibles y separadas.

Para ello se mezclan diluciones decimales de la muestra del alimento homogeneizado con el medio y luego de la incubacin se calcula

el numero de bacterias mesofilas por gramo

de la muestra de alimento.

En el recuento de microorganismos se estima la flora total pero sin especificar el tipo de grmenes.

Tasas superiores a 10^6 10^7 grmenes por gramo suelen ser ya indicio de

descomposicin.

Posteriormente a la toma de muestra y como

parte del anlisis, se hace una dilucin primaria

cuya finalidad es lograr obtener una muestra representativa del alimento, tanto en el aspecto cualitativo (diferentes tipos de bacterias) como en el cuantitativo, y as lograr una distribucin lo ms uniforme posible de los microorganismos contenidos en la muestra destinada al anlisis.

Se

pretende

encontrar

el

nmero

de

microorganismos por unidad de volumen, esto se logra despus de realizar tantas diluciones decimales seriadas como sea necesario, en el mismo diluyente.

Los diluyentes ms utilizados son la solucin

amortiguadora

de

fosfatos,

el

agua

peptonada y la solucin salina isotnica,

pero pueden utilizarse otros diluyentes que cumplan con las funciones de dispersar y homogenizar la carga en microbiana y de

facilitar

la

recuperacin
estudio,

de

los

microorganismos

mediante

condiciones de osmolaridad, pH, etc.

1.Pesar una cantidad de X g de la muestra por analizar en un recipiente o bolsa plstica estril de tamao adecuado.

2.Adicionar el volumen del diluyente, segn sea el caso. 3.Operar la licuadora o el homogeneizador peristltico de 1 a 2 minutos hasta obtener una suspensin completa y homognea.

4.Permitir que las partculas grandes sedimenten, y transferir la cantidad deseada (alcuota), tomando sta de las capas superiores de la suspensin.

5.Transferir 1 mL o un mltiplo de la dilucin

primaria a otro recipiente que contenga nueve volmenes del diluyente estril a la temperatura apropiada, evitando el contacto entre la pipeta y el diluyente.

6.Utilizar pipetas diferentes para cada dilucin

inoculando simultneamente las cajas seleccionadas. El volumen transferido debe ser <10% de la

capacidad total de la pipeta.

OBS: Si se toma 1mL de muestra en 9mL de diluyente,

se obtendr una dilucin 1:10 (factor 10^-1); si se utilizan 10mL de muestra se utilizarn 90mL de diluyente para obtener el mismo factor.

Transcurrido el tiempo de incubacin, se hace el recuento de colonias en las placas.

El numero total de colonias contadas, dividido

por el factor de dilucin de la placa elegida y el volumen inoculado, da como resultado el recuento de unidad formadora de colonia por gramo del producto analizado.

Gracias por su atencin