MICROBIOLOGIA GENERAL

INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA CONCEPTO Y CONTENIDO DE LA MICROBIOLOGIA

La microbiologa es el estudio de los microorganismos, un extenso y variado grupo de organismos microscpicos que existen como clulas aisladas o agrupaciones celulares; tambin incluye el estudio de los virus, que son microscpicos pero no celulares. Las clulas microbianas son distintas de las clulas de animales y plantas, que son incapaces de vivir aisladas en la naturaleza y solo pueden existir como partes de los organismos pluricelulares. Una clula microbiana aislada es, en general, capaz de llevar a cabo sus procesos vitales de crecimiento, generacin de energa y reproduccin independientemente de otras clulas, de la misma o de diferente clase. De qu trata, entonces, la microbiologa?

Podemos sealar aqu varios aspectos de esta ciencia:

1) Estudia clulas vivas y cmo funcionan.

2) Trata de los microorganismos, que constituyen una importante clase de clulas capaces de existir en forma libre o independiente. Se centra especial mente en las bacterias, un gran grupo de clulas estructuralmente simples y de enorme importancia bsica y practica. 3) Investiga acerca de la diversidad microbiana y de la evolucin, es decir, sobre cmo y por que aparecen los diferentes tipos de microorganismos. 4) Estudia lo que los microorganismos hacen en el mundo en su conjunto, en la sociedad humana, en nuestros propios cuerpos, y en los de los animales y las plantas. 5) Se ocupa del papel central que tiene como ciencia biolgica bsica y de como el conocimiento de los microorganismos puede ayudar a comprender mejor la biologa de los organismos superiores, incluido el hombre. Por qu estudiar microbiologa?

La microbiologa, que es una de las ciencias biolgicas ms importantes, se estudia por dos razones principales:
1) Como ciencia biolgica bsica, la microbiologa suministra algunas de las herramientas de investigacin ms verstiles para determinar la naturaleza de los procesos caractersticos de la vida.

2. Como ciencia biolgica aplicada, la microbiologa se ocupa de muchos problemas prcticos que son importantes en medicina, la agricultura y la industria. Algunas de las enfermedades ms importantes de humanos, animales y plantas son causadas por microorganismos. Los microorganismos. Los microorganismos desempean importantes funciones en la fertilidad de los suelos y en la produccin animal. Muchos procesos industriales a gran escala se basan en microorganismos, lo que ha conducido al desarrollo de toda una nueva disciplina, la biotecnologa.

LOS MICROORGANISMOS COMO CELULAS

La clula es la unidad fundamental de toda materia viva. Una nica clula es una entidad, aislada de otras clulas por una membrana celular (y quizs por una pared celular) y conteniendo dentro de ella una variedad de materiales qumicos y estructuras subcelulares. La membrana celular es la barrera que separa el interior celular del exterior. Dentro de la membrana celular se encuentran las diversas estructuras y sustancias que hacen posible que la clula funcione. Estructuras clave son el ncleo o nucleoide, donde se guarda la informacin necesaria para hacer ms clulas, y el citoplasma, donde se encuentra la maquinaria para el crecimiento y el funcionamiento celular. Todas las clulas contienen determinados tipos de componentes qumicos complejos: protenas, cidos nucleicos, lpidos y polisacridos. Colectivamente se denominan macromolculas.

Debido a que estos componentes qumicos se presentan en todos los seres vivos, se piensa que todas las clulas descienden de un antecesor comn nico, el antecesor universal. A travs de miles de millones de aos de evolucin ha ido apareciendo la enorme diversidad de tipos celulares que existe hoy en da.

Aunque cada tipo de clula tiene un tamao y una estructura definida, una clula es una unidad dinmica que constantemente sufre cambios y modifica sus constituyentes. Incluso cuando no est creciendo, una clula est continuamente tomando materiales del medio y transformndolos en su propio material. Al mismo tiempo, origina productos de desecho que libera al medio. Una clula es por tanto un sistema abierto, que est en cambio continuo pero que permanece siendo la misma.

CARACTERISTICAS DE UNA CELULA

Una clula viva es un sistema qumico complejo. Cuales son las caractersticas que permiten separar las clulas de los sistemas qumicos no vivos? Podemos citar aqu cinco importantes caracteres diferenciales.

HISTORIA DE LA MICROBILOGIA
Breve historia de la Microbiologa
Aunque durante mucho tiempo se sospech la existencia de criaturas demasiado pequeas para ser percibidas a simple vista, su descubrimiento estuvo relacionado con la invencin del microscopio. En 1664 Robert Hooke describi los cuerpos fructferos de mohos (clulas eucarsticas), pero la primera persona que vio microorganismos con detalle fue el holands Antonie Van Leeuwenhoek, quien aficionado a construir microscopios, utilizo microscopios simples fabricado por el mismo. Comparados con los de hoy, los microscopios de Leeuwenhoek eran bastantes primitivos pero mediante cuidadosa manipulacin y un buen enfoque fue capaz de ver microorganismos tan pequeos como los procariotas. Sus observaciones fueron confirmadas por otros investigadores, por los avances en la compresin de la naturaleza e importancia de los diminutos seres fueron muy lentos. En el siglo XIX se pudo disponer de los microscopios muy mejorados, amplindose su uso y distribucin. A lo largo de su historia, la microbiologa logro los mayores adelantos cuando se perfeccionaron los microscopios, pues estos permitieron a los cientficos penetrar ms profundamente en los misterios de la clula.

La Microbiologa como ciencia no se desarrollo hasta la ltima parte del siglo XIX. Este largo retraso se debe a que, adems del microscopio, fue necesario idear otras tcnicas bsicas para el estudio de los microorganismos. Durante el siglo XIX la investigacin en tome a dos preguntas inquietantes favoreci el desarrollo de estas tcnicas y estableci las bases de la ciencia microbiolgica: 1) Existe la generacin espontanea? 2) Cual es la causa de las enfermedades contagiosas? A fines de dicho siglo ambas preguntas fueron contestadas y la Microbiologa se estableci firmemente como una ciencia independiente en desarrollo.

PASTEUR Y LA DERROTA DE LA GENERACION ESPONTANEA

La idea bsica de la generacin espontanea puede comprenderse fcilmente. El alimento se pudre si permanece durante cierto tiempo a la intemperie. Cuando este material putrefacto se examina al microscopio se encuentra que est plagado de bacterias. De dnde vienen estas bacterias que no se ven en el alimento fresco? Algunos pensaban que provenan de semillas o grmenes que llegaban al alimento a travs del aire, mientras que otros opinaban que se originaban espontneamente a partir de material inerte. La generacin espontanea implica que la vida puede surgir de algo inanimado, pero muchos no podan imaginar que algo tan complejo como una clula viva pudiera originarse de modo espontaneo de sustancias inertes.

El adversario ms ferviente de la generacin espontanea fue el qumico francs Louis Pasteur, cuyo trabajo sobre este problema fue exacto y convincente. Pasteur demostr en primer lugar que en el aire haba estructuras que se parecan mucho a los microorganismos encontrados en el material putrefacto.

Esto lo logr pasando aire a trabes de filtros de algodn plvora (piroxilina), cuyas fibras retenan las partculas slidas. Despus de disolver los filtros con una mezcla de alcohol y ter, las partculas que haban sido atrapadas se recogan en el fondo del lquido y se examinaban al microscopio. Pasteur descubri que el aire normal contiene constantemente una diversidad de clulas microbianas que son indistinguibles de las que se encuentran en mucha mayor cantidad en los materiales en putrefaccin. Por tanto, concluy que los organismos encontrados en tales materiales se originaban a partir de microorganismos presentes en el aire. Adems, postul que dichas clulas en suspensin se depositan constantemente sobre todos los objetos. Si esta conclusin era correcta, entonces no debera estropearse un alimento tratado de tal modo que todos los organismos que lo contaminaran fueran destruidos. Pasteur emple el calor para eliminar los contaminantes, pues se conoca que el calor destruye con efectividad los organismos vivos. De hecho, otros investigadores ya haban mostrado que si una solucin de nutrientes se introduca en un matraz de vidrio, se sellaba y se calentaba luego a ebullicin, nunca se descompona. Los defensores de la generacin espontanea criticaban tales experimentos argumentando que se necesitaba aire fresco para la generacin espontanea y que el aire dentro del matraz cerrado se modificaba por el calentamiento de tal manera que no era capaz de permitir la generacin espontanea.

Pasteur super esta objecin de modo simple y brillante construyendo un matraz en forma de cuello de cisne, que ahora se designa como un matraz de Pasteur. En tales recipientes los materiales en putrefaccin se podan calentar hasta ebullicin; luego, cuando el matraz se enfriaba, el aire poda entrar de nuevo, pero la curvatura del cuello del matraz evitaba que el material particulado, las bacterias y otros microorganismos, alcanzasen el interior del matraz. El material esterilizado en tal recipiente no se descompona y no aparecan microorganismos mientras el cuello del matraz no contactara con el lquido estril. Sin embargo, bastaba con que el matraz se inclinara lo suficiente como para permitir que el lquido estril contactara con el cuello, para que ocurriera la putrefaccin y el lquido se llenara de microorganismos. Este simple experimento bast para aclarar de un modo efectivo la controversia acerca de la generacin espontanea.

Eliminar todas las bacterias o microorganismos de un objeto es un proceso que ahora denominamos esterilizacin.
Los procedimientos que usaron Pasteur y otros investigadores fueron eventualmente mejorados y aplicados a la investigacin microbiolgica. La superacin de la teora de la generacin espontanea condujo por tanto al desarrollo de procedimientos eficaces de esterilizacin sin los cuales la microbiologa no podra haberse desarrollado como ciencia.

EL MICROSCOPIO: TIPOS Y DESCRIPCION

MICROSCOPIOS Y MICROSCOPIA
Para el examen microscpico de microorganismos se puede hacer uso bien del microscopio ptico o del electrnico. Para la mayora del trabajo de rutina se usa el microscopio ptico, mientras que para el examen de las estructuras intracelulares el microscopio electrnico es en muchos casos un complemento imprescindible. Todos los microscopios utilizan lentes para aumentar la imagen del tamao de las estructuras que se examinan, y permitir as observar sus detalles. Adems del aumento es la resolucin la que permite observar dos puntos adyacentes como unidades distintas. A pesar de que el aumento se puede incrementar prcticamente sin lmite, no ocurre lo mismo con la resolucin, dado que est limitada por las propiedades fsicas de la luz. Es por consiguiente la resolucin y no el aumento la que dicta los lmites de lo que puede ser observado con un microscopio. Para el microscopio ptico los lmites de resolucin estn en aproximadamente 0,2 m (200 nanmetros nm-); mientras que el microscopio electrnico es capaz de incrementar los lmites de resolucin del ptico en aproximadamente 1.000 veces.

EL MICROSCOPIO OPTICO COMPUESTO

Como ya se ha mencionado, el microscopio ptico ha sido una herramienta bsica para el desarrollo de la microbiologa como ciencia, y sigue siendo una herramienta bsica en la investigacin microbiolgica. Varios tipos de microscopios pticos se utilizan habitualmente en microbiologa: campo claro, contraste de fases, campo oscuro y fluorescencia.

EI microscopio de campo claro se emplea generalmente en cursos bsicos de biologa y microbiologa, y est integrado por dos series de lentes (objetivo y ocular), que funcionan conjuntamente para producir la imagen. Con este tipo de microscopio, las muestras se visualizan gracias a las diferencias de contraste que existen entre ellas y el medio que las rodea.
Las diferencias de contraste se producen porque las clulas absorben o dispersan la luz en diferentes grados. Sin embargo, muchas bacterias son difciles de observar al microscopio de campo claro por su falta de contraste con el entorno. Los microorganismos pigmentados son una excepcin, al incrementarse el contraste debido al color.

AUMENTO Y RESOLUCION
La capacidad de aumento de un microscopio compuesto se calcula multiplicando el aumento del objetivo por la del ocular. Aumentos de 1.500 veces estn cercanos al lmite de lo que se puede conseguir con un microscopio ptico compuesto. Este lmite viene determinado por la propiedad de resolucin de las lentes. El poder de resolucin est en funcin de la longitud de onda de la luz y de una propiedad innata de la lente que integra el objetivo denominada apertura numrica (que es una medida de la capacidad de captacin de luz por la lente). En general existe una correlacin entre la capacidad de aumento y la apertura numrica de una lente: Lentes de gran capacidad de aumento poseen generalmente altas aperturas numricas. EI dimetro del objeto mas pequeo que se puede resolver es igual a 0,0035 /apertura numrica, donde es la longitud de onda de la luz que se utiliza. Por esta razn se incrementa la resolucin si se usa luz azul y el objetivo es de alta apertura numrica.

La mxima resolucin alcanzable en un microscopio ptico compuesto es de aproximadamente O,2 m. Esto significa que dos objetos que se encuentren ms prximos que esta distancia no pueden visualizarse como entidades distintas. La mayora de los microscopios utilizados en microbiologa poseen oculares capaces de aumento de 10 a 15X y objetivos desde 10 a 100X aumentos. Con los objetivos de 100X, as como con otros objetivos de elevada apertura numrica, se emplea el aceite de inmersin para que no exista aire entre la preparacin y el objetivo. Las lentes con las que se usa aceite de inmersin se denominan objetivos de inmersin. Este tipo de aceite se utiliza porque tiene una mayor apertura numrica que el aire (que posee una apertura numrica de 1), as como un mayor ndice de refraccin, por lo que se incrementa considerablemente la resolucin.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE, CAMPO OSCURO Y FLUORESCENCIA

El microscopio de contraste de Fases se desarroll para poder incrementar las diferencias de contraste entre las clulas y el medio que las rodea, lo que permite su visualizacin sin necesidad de tincin. Este tipo de microscopio se basa en el hecho de que las clulas poseen diferente ndice de refraccin que el medio, y por lo tanto producen un desvo en los rayos de luz que las atraviesan. Los rayos de luz que atraviesan una muestra con un ndice de refraccin distinto al del medio, son retardados. Este efecto es amplificado por un anillo especial que posee el objetivo de los microscopios de contraste de fases, lo que da lugar a la formacin de una imagen oscura con un fondo brillante. Este microscopio se usa habitualmente en investigacin por que permite la observacin en montajes hmedos (en los que la muestra permanece viable). Las tinciones, aunque se utilizan tambin de forma generalizada en microscopa ptica (como se ver ms adelante) producen generalmente la muerte de las clulas y pueden adems distorsionar sus estructuras.

El microscopio de campo oscuro es un tipo de microscopio ptico en el que se ha modificado el sistema de iluminacin de manera tal que la luz incide sobre la muestra solo desde los lados. La nica luz que es capaz de entrar en el objetivo es la que, al ser dispersada por la muestra, incide sobre el objetivo; de ah que los microorganismos se observen brillantes sobre un fondo oscuro. La resolucin en los microscopios de campo oscuro es bastante alta, y pueden observarse en ellos objetos difcilmente visualizables en campo claro o en contraste de fases. EI campo oscuro es tambin un mtodo excelente para estudiar la motilidad de los microorganismos, dado que los penachos de flagelos suelen poder resolverse por esta tcnica. EI microscopio de fluorescencia se utiliza para visualizar muestras capaces de emitir fluorescencia; esto es, capaces de emitir una determinada longitud de onda cuando previamente ha incidido sobre ellas una luz de menor longitud de onda. La fluorescencia puede ser debida a que determinadas clulas posean sustancias capaces de fluorescer, como por ejemplo las clorofilas (autofluorescencia), o por haber sido previamente tratadas con un colorante fluorescente.

TINCIONES INCREMENTO DE CONTRASTE PARA MICROSCOPIA DE CAMPO CLARO

Con el objeto de incrementar el contraste y facilitar la observacin de las muestras en microscopa de campo claro, se pueden utilizar colorantes. Los colorantes son compuestos orgnicos y cada tipo de colorantes suele tener afinidad por determinadas estructuras celulares. Muchos de los colorantes utilizados con frecuencia en microbiologa estn cargados positivamente (catinicos; esto es, que en un campo elctrico se desplazan hacia el ctodo (-)) y se combinan fuertemente con componentes celulares cargados negativamente, como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Entre los colorantes catinicos se pueden citar el azul de metileno, el cristal violeta, y la safranina. Dado que las envueltas externas de los microorganismos estn por lo general cargadas negativamente, estos colorantes se combinan con estructuras de la superficie celular, y son por lo tanto excelentes colorantes de aplicacin general. Las tinciones ms simples se realizan sobre preparaciones presecadas. Sobre un porta con una suspensin seca de microorganismos se derrama una pequea cantidad de una solucin diluida del colorante, y se mantiene el contacto durante uno o dos minutos; se lava varias veces con agua y se seca. Este tipo de preparacin suele observarse con un objetivo de inmersin.

Se denominan tinciones diferenciales aquellas que no tien de manera homognea a todos los tipos de clulas. La ms importante tincin diferencial utilizada en microbiologa se denomina tincin de Gram, en honor al microbilogo que la describi. Dependiendo del resultado de esta tincin, las bacterias pueden dividirse en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas. Una vez terminada la tincin de Gram, las bacterias Gram positivas aparecen de color purpura, mientras que las Gram negativas presentan color rojo. La distinta tincin de estos dos grupos de bacterias se basa en las profundas diferencias que presentan sus paredes celulares (como se ver ms tarde en este captulo). La tincin de Gram es uno de los procedimientos de tincin ms tiles en un laboratorio de bacteriologa. Es ms, en la identificacin de una bacteria desconocida, es casi esencial iniciar la determinacin con una tincin de Gram.

EL MICROSCOPIO ELECTRONICO
Los microscopios electrnicos se utilizan habitualmente para el estudio detallado de las estructuras celulares. Para el estudio de las estructuras internas de las clulas un microscopio electrnico de transmisin (TEM de Transmisin Electrn Microscope) es esencial. En el TEM se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la funcin de las lentes la realizan electromagnetos, operndose en todo momento a alto vaco. EI poder de resolucin del microscopio electrnico es mucho mayor que el del microscopio ptico, pudindose incluso observar estructuras moleculares, como protenas y cidos nucleicos. Sin embargo, los haces electrnicos poseen " bajo poder de penetracin, resultando difcil la observacin de estructuras intracelulares, porque incluso una clula aislada es demasiado gruesa para ser directamente visualizada. Por ello se emplean tcnicas especiales para la obtencin de cortes ultrafinos que permitan la observacin de las muestras. Incluso sobre una clula bacteriana deben realizarse una serie de cortes ultrafinos que son posteriormente visualizados de manera individual en el microscopio electrnico.

Con la finalidad de que el contraste sea suficiente, suelen tratarse las preparaciones con compuestos como el cido smico, permanganato, uranio, lantano o plomo. Dado que estas sustancias poseen tomos de alto peso atmico, son capaces de desviar adecuadamente a los electrones, con lo que se incrementa el contraste. Cuando solo se pretende estudiar las estructuras externas de una muestra, no son necesarios los cortes ultrafinos, pudindose realizar la observacin directa en TEM, despus de aplicar una tcnica denominada tincin negativa. Tambin se puede usar el Microscopio Electrnico de Barrido (SEM de Scanning Electron Microscope) Mediante esta tcnica la muestra a estudiar se recubre con una fina capa de un metal pesado, como el oro. EI haz de electrones del SEM barre la superficie de la muestra; los electrones desviados por la capa de metal son recogidas y proyectados sobre una pantalla para producir una imagen. En el SEM se pueden observar muestras de cierto tamao, y la profundidad de campo es extraordinaria. Con el SEM se puede obtener un amplio rango de magnificaciones que van des de 15X hasta 100.000X, pero solo se puede visualizar la superficie de los objetos. Todos los microscopios electrnicos incorporan cmaras que permiten fotografiar las muestras. Este tipo de fotografas se denominan microfotografa electrnica.

LOS MICROORGANISMOS EN L A NATURALEZA

MICROORGANISMOS COMO CELULAS:
ESTRUCTURA CELULAR
Cul es la estructura de una clula? Todas las clulas tienen una barrera denominada membrana (celular) citoplasmtica que separa el exterior del interior celular. A travs de la membrana celular entran todos los nutrientes y otras sustancias de vital importancia para la clula, y a travs de esta misma membrana salen de la clula los materiales de desecho y otros productos celulares. Cuando la membrana resulta daada el contenido de la clula sale y la clula normalmente muere. Como veremos, algunos frmacos y otros compuestos qumicos daan, la membrana citoplasmtica ocasionando as la destruccin de las clulas. La membrana citoplasmtica es una capa muy fina y flexible que es estructuralmente dbil. Por s sola, no suele mantener unidos los componentes de la clula y se necesita una capa adicional ms slida llamada pared celular.

La pared es una capa relativamente rgida que se sita por encima de la membrana, protegindola y dando firmeza a la clula. Las clulas vegetales y la mayor parte de los microorganismos poseen estas paredes celulares rgidas. Las clulas animales, sin embargo, no tienen paredes; estas clulas han desarrollado otros medios de proteccin. Dentro de una clula, y limitada por la membrana citoplasmtica, se encuentra una complicada mezcla de sustancias y estructuras llamada el citoplasma. Estos materiales y estructuras, inmersos en agua, realizan las funciones de la clula. Los componentes mayoritarios del citoplasma, adems del agua, incluyen macromolculas, ribosomas, pequeas molculas orgnicas (principalmente precursoras de macromolculas) y diversos iones inorgnicos.

CELULAS PROCARIOTICAS Y EUCARIOTICAS

Tras cuidadosos estudios de la organizacin interna de las clulas, se ha puesto de manifiesto la existencia de dos tipos bsicos: procariotas y eucariotas. Estos dos tipos de clulas son estructuralmente muy diferentes. Una diferencia estructural importante entre procariotas y eucariotas, adems del tamao, es la disposicin del DNA dentro de la clula. Los eucariotas contienen un ncleo rodeado par una membrana nuclear que encierra varias molculas de DNA y se divide por el bien conocido proceso de mitosis. Por el contrario, la regin nuclear procaritica, llamada el nucleoide, no est rodeada por una membrana, consta de una sola molcula de DNA y su divisin no es mittica. A diferencia de las procariticas, las clulas eucariticas contienen normalmente, adems del ncleo, otras estructuras internas rodeadas por membrana, como las mitocondrias y los cloroplastos. Los nicos procariotas representan dos importantes ramas evolutivas, Bacteria y Archaea. Existen varios grupos de microorganismos eucariticos, incluyendo algas, hongos y protozoos. Adems, todas las formas pluricelulares de vida (plantas y animales) estn formadas por clulas eucariticas. En general, los microorganismos son muy pequeos. Un procariota tpico de forma bacilar puede tener una longitud de 1-5 micrmetros (m) y es por tanto completamente invisible a simple vista.

Los virus no son clulas. Los virus carecen de muchos de los atributos de las clulas, y no son sistemas dinmicos abiertos. Una partcula vrica aislada es una estructura esttica muy estable e incapaz de cambiar o reemplazar sus partes constituyentes. Solo cuando se asocia con una clula el virus es capaz de replicarse y adquirir algunos de los atributos de un sistema vivo. As, a diferencia de las clulas, los virus no tienen metabolismo propio.
Aunque poseen informacin gentica (DNA o RNA), los virus carecen de sistema de traduccin y usan la maquinaria de la clula para la sntesis de protena. Los virus infectan diversos organismos, incluyendo a los microorganismos.

CELULAS PROCARIOTAS BACTERIAS Y ARCHEA

LA CELULA PROCARIOTICA
Una clula procaritica tpica de una Eubacteria o una arquea bacteria posee generalmente las siguientes partes: pared celular, membrana citoplasmtica, ribosomas, inclusiones, y el genforo (tambin conocido como nucleoide).
La membrana citoplasmtica es la barrera esencial de permeabilidad que separa el interior del exterior de la clula. La pared celular es una estructura rgida situada por fuera de la membrana plasmtica, que confiere la forma a la clula y la protege de un entorno osmtico hostil. Los ribosomas son pequeas partculas compuestas de acido ribonucleico (RNA) y protenas, que pueden ser observadas en el TEM. Una sola clula procaritica puede tener hasta 10.000 ribosomas. Los ribosomas constituyen una parte fundamental de la maquinaria implicada en la sntesis proteica.

En ocasiones los procariotas tambin presentan inclusiones que son acmulos de materiales de reserva como carbono, nitrgeno, azufre o fsforo.

Estos acmulos se forman cuando estos compuestos se encuentran en exceso en el medio ambiente, con el fin de poder ser utilizados en situaciones de carencia.
La zona nuclear de los procariotas difiere significativamente de la de los eucariotas, dado que los procariotas no poseen un verdadero ncleo. En los procariotas la funcin del ncleo la realiza una nica molcula de acido desoxirribonucleico (DNA). EI DNA se encuentra en forma ms o menos libre en el interior de la clula procaritica, si bien en microscopa electrnica se detecta en una forma agregada a la que se denomina nucleoide. En algunas ocasiones, y solo por homologa con los eucariotas, al DNA de los procariotas se le denomina cromosoma. Muchas de las bateras, pero no todas, son capaces de desplazarse. Cuando se produce, el movimiento de los procariotas se debe generalmente a unas estructuras denominadas flagelos. Cada flagelo est formado por una nica protena tubular enrollada. En medio lquido, la rotacin de los flagelos provoca la propulsin de la clula. Los flagelos bacterianos son observables en microscopa ptica mediante el empleo de tinciones, y son claramente visibles en microscopa electrnica.

MORFOLOGIA DE LOS PROCARIOTAS

A la forma de una clula se le denomina morfologa celular. A las diferentes formas bacterianas se les ha dado diferentes nombres. A las bacterias de forma esfrica u ovoide se les denomina cocos. A las de forma cilndrica se les denomina bacilos. Algunos bacilos curvados que presentan formas espirales se denominan espirilos. En muchos procariotas las clulas se mantienen juntas despus de la divisin celular, formando grupos, y este tipo de agrupaciones son en muchos casos caractersticos de los diferentes tipos de microorganismos. Por ejemplo, algunos cocos y bacilos pueden formar largas cadenas.

Algunos cocos se disponen en finas capas de clulas, mientras que otros forman estructuras trimensionales de forma cubica, o agrupaciones mas irregulares con una morfologa similar . Distintos grupos de bacterias pueden ser inmediatamente reconocidas gracias a sus formas peculiares.
Algunos ejemplos incluyen a las espiroquetas, que son bacterias con forma de sacacorchos, bacterias con apndices, que poseen protuberancias celulares en forma de largos tubos o tallos, y las bacterias filamentosas, que producen largas y delgadas clulas o cadenas de clulas.

MICROORGANISMOS EUCARIOTAS: ALGAS, HONGOS, PROTOZOARIOS Y METAZOARIOS

LAS CELULAS EUCARIOTAS
Las clulas eucariticas son ms grandes y de estructura ms compleja que las procariticas, y una diferencia fundamental es que las clulas eucariticas poseen un verdadero ncleo. EI ncleo es una estructura envuelta por una membrana en la que se localiza el DNA. En el ncleo el DNA se organiza en cromosomas, unas estructuras que se mantienen prcticamente invisibles salvo en el momento de la divisin.

Antes de que ocurra la divisin celular, los cromosomas se duplican y posteriormente se condensan y compactan, para luego dividirse a la par que el ncleo. Al proceso de divisin nuclear en eucariotas se le denomina mitosis, y es un proceso complejo y finamente regulado. De la divisin de una clula parental se producen dos clulas idnticas, cada una de ellas recibe un ncleo con igual dotacin cromosmica.

Las clulas eucariticas poseen igualmente otra serie de estructuras internas denominadas orgnulos internos, en las cuales tienen lugar muchas de las funciones celulares. Los orgnulos internos no existen en clulas procariticas, aunque los procesos fisiolgicos que se llevan a cabo en estos orgnulos, como la respiracin y la fotosntesis, tambin pueden darse en las clulas procariticas. Un tipo de orgnulos interno presente en la mayora de las clulas eucariticas son las mitocondrias. Las mitocondrias son los orgnulos en los que se realizan las funciones de generacin de energa. La energa que se genera en las mitocondrias es posteriormente utilizada por toda la clula. Las algas son microorganismos eucariticos capaces de realizar la fotosntesis. En estos microorganismos, al igual que en las plantas verdes, se encuentra otro tipo de orgnulo: el cloroplasto. Los cloroplastos son verdes, acumulan la clorofila y son los responsables de la captacin de la energa de la luz necesaria para llevar a cabo la fotosntesis.

TAXONOMIA, NOMENCLATURA Y EL MANUAL DE BERGEY

La taxonoma es la ciencia de la clasificacin y est constituida dos subdisciplinas principales, la identificacin y la nomenclatura. Es esencial distinguir entre taxonoma bacteriana y la filogenia bacteriana, ya que ambos trminos hacen referencia a cosas distintas. De era tradicional, la taxonoma bacteriana se ha basado en anlisis fenotpicos para la clasificacin. En cambio, debido al pequeo tamao de las bacterias y dado que su estructura aporta relativamente pocas pistas sobre sus races evolutivas, las relaciones filogenticas entre los procariotas se han empezado a conocer slo a partir de los anlisis genotpicos las tcnicas genotpicas (por ejemplo, las sondas de cidos nuclecos) se estn imponiendo gracias a la sensibilidad, rapidez y especificidad de dichos mtodos de identificacin .

LA CLASIFICACION Y EL CONCEPTO DE ESPECIE

Dado que los microbilogos necesitan identificar y clasificar las bacterias por diferentes razones prcticas, la taxonoma bacteriana es aun una disciplina importante. En microbiologa, la unidad taxonmica bsica es la especie. Una especie puede ser definida de manera operativa como una coleccin de cepas similares que difieren lo suficiente de otros grupos de cepas para asegurar su reconocimiento como unidad taxonmica bsica.

Normalmente se define una especie a partir de la caracterizacin de varias cepas o clones. EI uso de la palabra clon en este sentido puede tomarse como indicador de una poblacin de clulas genticamente idnticas derivadas de una sola clula. El concepto de especie es importante porque proporciona una identidad taxonmica formal a las colecciones de cepas. Los grupos de especies se renen en gneros. Por analoga a las especies, un gnero puede definirse como una coleccin de especies distintas que comparten las propiedades principales que definen dicho gnero, pero difieren entre s por la presencia o ausencia de otros caracteres normalmente menos significativos Aunque los gneros se agrupan en familias, las familias en ordenes, los ordenes en divisiones, etc., hasta alcanzar el nivel taxonmico mas alto, que es el dominio, la familia es el taxn superior que se emplea de manera rutinaria en estudios taxonmicos de procariotas.

NOMENCLATURA Y ATRIBUCION TAXONOMICA FORMAL

Siguiendo el sistema binomial de nomenclatura, a todas las bacterias se les asigna un nombre de gnero y otro de especie. El nombre del gnero de un organismo suele abreviarse e identificarse con una sola letra mayscula; el nombre correspondiente a la especie no se abrevia nunca. Por tanto, Escherichia coli normalmente E. coli.

TAXONOMIA BACTERIANA CONVENCIONAL

Existen muchas maneras de agrupar los procariontes. En la taxonoma bacteriana convencional, se miden varias caractersticas de diferentes cepas o especies y estos rasgos se usan luego para agrupar los organismos. Entre las caractersticas de valor taxonmico que se usan ampliamente estn la morfologa, la tincin de Gram, el tipo de nutricin (fototrofa, quimioorganografa y quimiolitotrofa). La estructura qumica de la pared celular, la presencia de inclusiones celulares y la acumulacin de productos de reserva, la estructura qumica de la capsula, los pigmentos, los requerimientos nutritivos, la capacidad para usar diferentes compuestos de carbono, nitrgeno y azufre, los productos de fermentacin, los requerimientos (y las tolerancias) de gases, de temperatura y de pH, la sensibilidad a los antibiticos, la patogeneidad, las relaciones simbiticas, las caractersticas inmunolgicas, y el hbitat.

TAXONOMIA MOLECULAR: HIDRIDACION DNA: DNA

Aunque la determinacin del porcentaje de GC aporta informacin sobre la proporcin de cada nucletido presente en el DNA de un organismo, no revela ningn dato sobre la secuencia de dichos nucletidos. La secuencia es crtica, porque si dos organismos tienen muchos genes idnticos o parecidos, tambin tendrn iguales muchas de las secuencias de sus DNA. Dos molculas de DNA muy parecidas se espera que puedan hibridarse en una proporcin relacionada con el grado de semejanza de sus secuencias. La hibridacin genmica puede aplicarse con esta finalidad y es una tcnica til en taxonoma bacteriana, especialmente para establecer las relaciones existentes a nivel de especie o incluso por debajo de dicha categora. En un experimento de comparacin de genomas, el DNA aislado de un organismo se marca radiactivamente con P32 o H3, se corta en fragmentos relativamente pequeos, se calienta suficientemente para desnaturalizarlo y se mezcla con un exceso de DNA no marcado del segundo organismo, que se habr preparado de la misma manera. Se enfra la mezcla de DNA para permitir la renaturalizacin y se separa el DNA bicatenario de las cadenas simples de DNA. A continuacin se determina la cantidad de radiactividad en el DNA hibridado y se compara con el control, que se toma como el 100%.

No existe un acuerdo sobre la proporcin de homologa necesaria para asignar dos organismos a un mismo rango taxonmico. No obstante, homologas por encima del 60% se consideran una prueba de que dos organismos pertenecen a la misma especie; valores por encima del 20% son una indicacin de que pertenecen al mismo gnero.
EI DNA de gneros no relacionados normalmente presenta un grado remoto de hibridacin, entre 1 y el 5%. La hibridacin genmica es, por tanto, un mtodo til en el estudio taxonmico de bacterias relacionadas estrechamente, pero no es til para determinar relaciones en rangos taxonmicos superiores. Adems la hibridacin DNA: DNA no revela la historia filogentica de un organismo. Para ello es necesario conocer la secuencia molecular. A pesar de estas limitaciones, los experimentos de hibridacin genmica son tiles en muchos estudios taxonmicos y las nuevas tcnicas de marcado no radiactivo, y de procesado del DNA han facilitado el proceso de hibridacin y lo han hecho tambin ms rpido que cuando empez a aplicarse en la dcada de los sesenta.