Profesor: TM Miguel Ramrez Lpez

PRINCIPIOS DE MICROBIOLOGA

 Evolucin Microbiana y Biodiversidad

Cmo surgi la diversidad microbiana?

Como resultado de procesos de mutacin y de

recombinacin gentica, que actan en un ambiente de constante seleccin. La diversidad microbiana refleja la variedad fisicoqumica de los hbitats adecuados para la vida en la Tierra

 Los bilogos en general aceptan la idea que la

vida se origina a partir de materia inanimada en un proceso que se denomina evolucin qumica

 La Tierra primitiva

A pesar de que nunca se sabr con certeza... las condiciones de la tierra primitiva, distaban mucho de las actuales. Astrofsicos y gelogos calculan la edad de la tierra en 4600 millones de aos.
La atmsfera primitiva contena: Vapor de

Agua (H2O), CO2, CO, H2, N2 y en menor cantidad, NH3, SH2, CH4) y poco o nada de O2. Temperaturas superiores a 100C

 El siguiente paso fue la formacin de grandes molculas por polimerizacin de las pequeas molculas. La interaccin entre las molculas as generadas se increment a medida que su concentracin aumentaba. Dado que la atmsfera primitiva careca de oxigeno libre y de cualquier forma de vida... estas molculas orgnicas se acumularon sencillamente por que no fueron devoradas ni reaccionaron con el oxigeno como lo hara en la actualidad. Esta acumulacin sera lo que se llama actualmente "caldo de cultivo primitivo" y a partir del cual podra haber surgido la primera forma de vida.

LOUIS PASTEUR

LILLE: regin productora de cerveza y vino se le encarga estudiar el proceso de fermentacin Descubre: En este proceso los m.o. son capaces de transformar azucares en alcohol. Acidificacion de la leche a t ambiente tambien se producia por m.o. Pasteurizacion.(t 30 a 60C)

El trabajo de Pasteur estableci que

Los microorganismos podan ser aislados de su mbito natural y hacerlos crecer en el laboratorio para su estudio y clasificacin. Estableci la asociacin de las bacterias con la enfermedad.

ROBERT KOCH

Medico Alemn Pionero de la Microbiologa Medica . Trabajo con Peste bubnica, Clera, ntrax TBC. TBC: teora germinal de las enfermedades infecciosas *Trabajo en el desarrollo de medios de cultivo, gelatinas con diversos aditivos y nutrientes. * Pudo desarrollar m.o. en forma pura de muestras biolgicas de animales y personas enfermas

Estandarizacin de criterios experimentales (POSTULADOS DE KOCH)

PARA QUE UNA ENFERMEDAD SEA CONSIDERADA INFECCIOSA DEBE HABERSE IDENTIFICADO EL MICROBIO ESPECIFICO QUE LA CAUSA. EL MICROBIO DEBE SER CULTIVADO EN FORMA PURA. EL MICROBIO IDENTIFICADO Y CULTIVADO EN FORMA PURA DEBE PRODUCIR LA ENFERMEDAD CUANDO ES ADMINISTRADO A UN ANIMAL. EL MISMO MICROBIO DEBE SER AISLADO Y CULTIVADO DE LOS ANIMALES A LOS QUE SE LES ADMINISTRO.

PAUL EHRLICH

Finales del siglo 19 no existan ATBs para combatir a m.o. En 1910 Paul Herlich usa como ATBs colorantes que matan y tien selectivamente a las espiroquetas Treponema pallidum (Sfilis). Estudios Premio Nbel 1908 Inmunologa Uso de tintas en la identificacin bacteriana. Estudios bases para la tincion Gram, Zhiel Neelsen.

ALEXANDER FLEMING

Medico Escocs Descubre las Lisozimas.(fluido nasal) Penicilina.(Hongo Penicillium notatum) En un cultivo de E.Coli expuesto al aire, surgi una colonia fngica, que generaba un halo alrededor suyo, y se dio cuenta del carcter inhibitorio del hongo.

TAXONOMIA

Ciencia que se ocupa de los principios, mtodos y fines de la clasificacin de los seres vivos. Seres vivos: Todos aquellos en que la estructura bsica y unidad funcional es la clula.

Clasificacin seres vivos

5 reinos Monera:Procariontes, organismos unicelulares carentes de ncleo.------- Bacterias. Protistas: Eucariontes, organismos unicelulares con ncleo. Protozoos: Ameba, Toxoplasma, Giardia, Plasmodium,Trypanosoma. Reino Plantae. Plantas Reino Fungi. Hongos Reino Animalia. Helmintos, garrapatas ,caros araas etc.

Reino Monera (procariontes)

Estudios de cidos nucleicos indican que existen 2 lneas filogenticos. Dominio Archea: encontramos bacterias que viven en ambientes extremos de temperatura, aguas termales, volcanes (hipertermofilos),ambientes salinos (halfilos extremos), ambientes cidos, alcalinos. Dominio Bacteria:Encontramos bacterias con un espectro amplio de propiedades fisiolgicas, morfolgicas y de adaptacin a distintos nichos ecolgicos o ambientales, encontramos bacterias quimiolitotroficas, hipertermofilas, oxidan o reducen azufre y crecen a t tan altas como 95c, cuando nos referimos a bacterias es dominio Bacteria

TAXONOMIA MOLECULAR Y CONVENCIONAL

TAXONOMIA MOLECULAR: DNA %G+C/A+G+C+T ES UNA REFERENCIA UTIL EN UNA PRIMERA APROXIMACION AL ESTUDIO DE LAS RELACIONES EVOLUTIVAS ENTRE BACTERIAS. TAXONOMIA CONVENCIONAL----FENOTIPO. FORMA, AGRUPACION, ESTRUCTURA DE ACCESORIOS( FLAGELO, FIMBRIA, CAPSULA), PIGMENTACION, PROP. METABOLICAS, PROP BIOQUIMICAS, REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES, REACCION FRENTE A COLORANTE.

NOMENCLATURA

Carlos linneo (1707-1778)Naturalista y medico austriaco Nomenclatura binomial Compuesta por Genero y especie. Escrita en latn. Primera palabra con mayscula y segunda palabra con minscula. Ambas palabras subrayadas.

Ventajas de su uso

Su economa, usa dos palabras para identificar inequvocamente a una especie. Su difundido y generalizado uso. Estabilidad de los nombres usados, pues este se conserva a pesar de las modificaciones taxonmicas y sistemticas. Ejm. Escherichia coli. Klebsiella pneumoneae. Strectococcus pnumoneae. Staphylococcus aureus

Estructura de una Bacteria

Generalmente, la longitud de las clulas procariticas est comprendida entre 1 y 10 micras, es decir, son unas 10 veces ms pequeas que las

clulas eucariticas. La estructura de una clula procaritica es muy sencilla: sin ncleo definido en su interior y la mayora sin compartimentos internos delimitados por membranas. Esta simplicidad no significa que las procariticas sean inferiores a las clulas eucariticas. Su gran ventaja es su pequeo tamao, con una muy buena relacin superficievolumen.

ESTRUCTURA
El desarrollo de la M. E. en los aos 50 da a conocer la arquitectura bacteriana:

Apndices

flagelo pili fimbria

genoma ribosomas inclusiones cpsula pared celular memb. plasmtica

Regin citoplasmtica

Envoltura celular

ELEMENTOS BACTERIANOS
OBLIGADOS
Pared celular Membrana citoplasmtica Citoplasma Ribosomas Mesosomas Cromosoma disperso

ELEMENTOS BACTERIANOS

FACULTATIVOS
Cpsula Flagelos Fimbrias Esporos Plsmidos

Estructuras de la clula bacteriana

Cpsula Citoplasma Ribosomas P. celular Mb citopl. Cromosoma Plsmido

Inclusin

Cpsula P. celular Mb citopl Fimbrias

Flagelo

ARQUITECTURA BACTERIANA

Apndices externos Regin citoplasmtica Envoltura celular, trmino que describe el material que engloba al citoplasma de la clula - membrana plasmtica - pared celular - cpsula, glicocalix

COMPOSICION CELULAR Aproximadamente un 70% es agua Peso seco protenas RNA DNA Otros Otros (lpidos, carbohidratos, etc) 50% 25% 3% 22%

CITOPLASMA
Principalmente es agua, otorgando una matrix que contiene los distintos constituyentes celulares internos, protenas, enzimas, etc. Sistema coloidal

En esta matrix encontramos:

Genoma bacteriano Herencia Ribosomas (RNA) Sntesis de protenas Grnulos de inclusin Reservas material

ADN Bacteriano

Genoma bacteriano

DNA Cromosomal, molcula nica ubicada en rea especfica, circular bicatenario DNA Extracromosomal, constituidos por plsmidos, transpones e integrones

ADN Cromosomal
No existe membrana nuclear, nucleolos e histonas. Estado superenrollado, aspecto fibrilar Funcin principal, contener la informacin gentica celular que regula el funcionamiento celular Replicacin, semiconservativa

ADN extracromosomal
Plsmidos Molculas de ADN circular, doble cadena e independiente del cromosoma Pueden encontrarse libres en el citoplasma o integradas al cromosoma, con capacidad de autoreplicacin y en algunos casos autotransferencia (horizontal y vertical)

Le confieren a la bacteria propiedades como:

- genes de transferencia

- genes de resistencia
- genes de virulencia - genes para la produccin de metabolitos, etc.

FIMBRIAS
Estructuras filamentosas proteicas, rgidas y extracelulares 1949 Anderson y Houwinke las denominan apndices filamentos no flagelares 1955 Daguid y col. Fimbria 1959 Brinton y col. Pili Fimbria Adherencia 1975 Ottow 1977 Jones Pili Conjugacin

FIMBRIAS - PILI

Composicin: pilina

FUNCIONES: Adherencia - factor de iniciacin de la infeccin Propiedades antignicas Conjugacin: pili

Pili sexual de Escherichia coli

Composicin qumica de naturaleza proteica (pilina - PM 16.000). Tamao Pili 6-13.5 nm dimetro

20 m
Tamao Fimbria 4-10 nm 0.1-1.5 m

longitud
dimetro longitud

Se encuentran en bacterias Gram negativas

FLAGELOS

Composicin: Flagelina

FUNCIONES Movilidad Especificidad antignica H

Estructura filamentosa proteica adherida a la superficie celular Funcin, movilidad bacteriana Se pueden encontrar en Gram + y Gram -

Dimetro aproximado 20 nm
Composicin subunidades de protena llamada FLAGELINA

Estructura flagelar

Estructura rgida que se mueve en forma rotatoria en sentido contrario a manecillas del reloj Energa aportada por la fuerza protn-motriz, como respuesta a la presencia de: Atractantes Repelentes Cambios de pH Concentracin de sales, etc.

Los flagelos se disponen sobre la superficie bacteriana de distintas formas:

Por la disposicin flagelar pueden distinguirse distintas bacterias.

Ej: Pseudomonas sp. flagelo polar Bacterias entricas flagelos pertricos

Polar

uno o ambos polos en penacho (en penacho)

Pertricos distribuidos en contorno celular

EXOPOLISACARIDOS

Cpsulas Capas mucosas (biofilm, slime) Fibras polisacridas Muy hidratadas Carga negativa

CAPSULA
Su composicin es proteica o polisacrida

Protege fagocitosis Elemento de identificacin Anticuerpos protectores Impide fijacin de fagos Dificulta accin antimicrobianos

Ubicada fuera de la pared celular, puede ser gruesa o delgada y estar estrecha o laxamente asociada a la pared Cuando la adhesin es dbil y el grosor y la densidad pequea se llama slime o glucocalix No son estructuras vitales pero son de importancia para la supervivencia de la bacteria.

Factor de virulencia Poco antignica y fagoctica Proteccin frente a la desecacin o materiales txicos Adherencia a clulas y mucosas del husped u otras bacterias

SLIME

Adherencia laxa a la bacteria Permite la formacin de microcolonias Adherencia a materiales sintticos

Membrana citoplsmica
Membrana bicapa fosfolipdica Peptidoglicn Membrana externa

Canal
Protena

Bicapa fosfolpidos

Protena Perifrica

Membrana citoplasmtica
Doble capa fosfolipdica (sin esteroles: colesterol, ergosterol con excepcin de los micoplasmas) Se encuentran incluidas diversas protenas 30-60% fosfolpidos 50-70% protenas

Rodea al citoplasma bacteriano

Bicapa fosfolipdica Modelo de mosaico fluido Molculas anfipticas

Es responsable de muchas funciones que son atribuibles a los distintos organelos eucariotas: - Respiracin celular - Fosforilacin oxidativa - Biosntesis peptidoglicn - Biosntesis membrana externa - Sntesis y secrecin de enzimas y toxinas - Barrera aislante Las protenas membrana se encuentran encargadas de: - transporte de metabolitos, protones, electrones - biosntesis de lpidos - replicacin del ADN

MESOSOMAS
Invaginacin de la membrana plasmtica observable en el interior del citoplasma Principalmente en Gram positivas

Estructuralmente al igual que su composicin son idnticos a membrana citoplasmtica

Mesosomas septales, participan en el proceso de divisin celular favoreciendo la formacin del tabique de separacin. Fijacin de ADN para la multiplicacin coordinada. Mesosomas laterales, poseen funciones secretoras, sntesis de exoenzimas

PEPTIDOGLICN
Exoesqueleto que rodea a la membrana citoplasmtica Es esencial para la estructura, replicacin y supervivencia Puede interferir con la fagocitosis, presenta propiedades pirognicas y mitognicas Se encuentra presente en casi todas las especies bacterianas con excepcin de micoplasmas que no poseen pared celular y Archaeobacteria que presentan seudoglicanos.

Gram positivos

Pared celular gruesa (80 nm) y que est compuesta por varias capas de peptidoglicn, protenas, polisacridos, cidos teicoicos y cidos lipoteicoicos.

Los cidos teicoicos estn asociados al peptidoglicn estabilizando la pared celular, tambin pueden tener relacin con la sntesis de peptidoglicn y en la divisin celular Tienen carcter antignico.
Los cidos lipoteicoicos estn asociados a la membrana citoplasmtica, estabilizan la pared y tambin pueden ser factores de virulencia y adherencia en algunas bacterias.

Esta estructura corresponde a un esqueleto de residuos de carbohidratos formados por unidades alternadas de Nacetilmurmico y N-acetilglucosamina unidos por enlaces 1,4.

Gram negativas

Es ms complejas tanto qumica como estructuralmente pero es ms delgada que la de Gram positivas. Por fuera de la membrana citoplasmtica encontramos un espacio periplsmico que contiene enzimas hidrolticas, factores de virulencia lticos, sistemas de transportes y lipoprotenas que unen el peptidoglicn y la membrana externa.

El peptidoglicn es una sola unidad de espesor por lo tanto , es ms laxa y no posee cido teicoico y lipoteicoico.

Relaciones estructura-funcin en el peptidoglucano

Gran rigidez, aguanta fuerzas osmticas del protoplasto (5-15 atm), sta depende de: grado de entrecruzamiento enlaces (14) compacto Alternancia de NAM y NAG es uno de los polisacridos ms estables Alternancia de aa en L y en D estabilidad adicional Gran flexibilidad, soporta variaciones de presin osmtica del protoplasto

Condiciona la forma celular

La pared celular brinda rigidez estructural, confiere la forma a la clula y crea una barrera fsica contra el ambiente externo Las bacterias Gram positivas y Gram negativas se diferencian por la estructura y grosor de la pared El componente rgido corresponde al peptidoglicn La estructura de la pared bacteriana tiene una importancia directa y prctica ya que el tipo de estructura es responsable de la reaccin frente a la tincin de Gram.

Tincin de Gram
Cristal violeta Lugol Alcohol acetona Safranina

TINCION DE GRAM

Membrana externa
Se encuentra por fuera de la capa de peptidoglicn, es caracterstica de Gram negativas y constituye una barrera impermeable para molculas de gran tamao y molculas hidrfobas, adems de ofrecer proteccin a condiciones ambientales adversas. Es una membrana asimtrica - Zona interna fosfolipdica - Zona externa molcula anfiptica, Lipopolisacrido (LPS)

Conocido como endotoxina ya que es un potente estimulador del sistema inmune (antgenos somticos o antgeno O) Molcula de glucolpidos complejos compuestos por: - Lpido A, responsable de la actividad endotxica (esencial para viabilidad bacteriana). Similar en Flias - Regin central o Core polisacrido (esencial para viabilidad). Similar en un mismo gnero y especies - Cadenas laterales O-especficas (variablesidentificacin). Se proyectan hacia el exterior

Tambin se encuentran presente: - Fosfolpidos - Porinas, canales transmembrana - No porinas, transmembrana asociadas al peptidoglicn - Lipoprotenas, protenas pequeas que estabilizan la pared celular

Esporas bacterianas

Exosporio (env. adicional)

Cubierta de la espora Corteza Ncleo o corazn

Clula vegetativa
Ambiente desfavorable

ENDOSPORA
Condiciones favorables

Clula vegetativa

Formas de resistencia: ciertas bacterias forman endoesporas que pueden sobrevivir en condiciones adversas y cambian las condiciones del medio ambiente o se agotan los nutrientes continua siendo viables incluso durante aos y cuando las condiciones mejoran devuelven a la bacteria a la vida vegetativa. Esporulacin Divisin asimtrica Invaginaciones de membrana citoplasmtica Peptidoglicn constituye el sptum

Sptum engloba el material nuclear

Germinacin Cese de la dormancia Sobrecrecimiento

Reproduccin Bacteriana
La reproduccin bacteriana es un proceso coordinado en el que se producen dos celulas hijas iguales. Las bacterias se reproducen normalmente por fisin binaria. La multiplicacin implica el aumento del numero, pero no del tamao bacteriano.

Es importante que el medio que rodea a las bacterias proporcione las condiciones fsico qumicas apropiadas.

REPLICACIN
La replicacin bacteriana es un proceso

coordinado durante el cual se producen dos clulas hijas idnticas. Su crecimiento exige la presencia de suficientes metabolitos para permitir la sntesis de los componentes bacterianos y, especialmente, de los nucletidos destinados a la sntesis del ADN.

Fisin Binaria
En clulas procariotas se produce la divisin simple, por biparticin : el ADN de la bacteria se duplica y forma dos copias idnticas. Cada copia

se va a un punto de la clula y mas tarde la clula se divide en dos mitades. As se forman dos clulas hijas iguales, mas pequeas que la progenitora.

La replicacin cromosmica se inicia en la membrana y cada cromosoma hijo se ancla a una porcin diferente de la misma. En algunas clulas, el ADN se asocia a mesosomas. Los procesos de formacin de la membrana bacteriana, sntesis de peptidoglucano y divisin celular se llevan a cabo de forma coordinada. A medida que crece la membrana bacteriana, los cromosomas hijos se separan. El comienzo de la replicacin cromosmica tambin inicia el proceso de divisin celular, la cual se puede visualizar por el comienzo de la formacin del tabique que separar a las dos clulas hijas

ESPORAS
Algunas bacterias es determinadas condiciones, como carencia de C, N y/o P dan origen a una ESPORA o ENDOESPORA.

Caractersticas:
Alta resistencia a agentes ambientales Ausencia de agua en su estructura

Refractaridad a la tincin
Mantencin indefinida en forma de latencia

Fisin Binaria
1 El cromosoma circular est unido a un punto de la membrana plasmtica 2El cromosoma se duplica. Las dos copias estn fijas a la membrana en puntos cercanos 3 La clula se alarga, se agrega nueva membrana plasmtica entre los puntos de unin 4 La membrana plasmtica crece hacia el interior 5 La clula original se ha dividido en dos clulas hijas

Clasificacin
Se basa en la afinidad o no por la tincin de Gram, su morfologa y en la utilizacin o no de O2 en su metabolismo, las bacterias son divididas en 3 grandes grupos : Gram - , Gram + y aquellas que no se tien con Gram (ej. Las BAAR que se tien con la tcnica de Ziehl- Nielsen); a su vez estos grupos pueden estar

conformados por bacterias Aerobias o Anaerobias facultativas y bacterias Anaerobias Estrictas.

Hay bacterias que requieren la presencia de oxgeno molecular para su crecimiento y, en consecuencia, se denominan aerobias estrictas. Sin embargo, la mayor parte de las bacterias puede crecer tanto en presencia como en ausencia de oxgeno, en cuyo caso reciben el nombre de anaerobias facultativas.

Algunas bacterias no pueden crecer en presencia de oxgeno. Este tipo de bacterias son conocidas como anaerobias estrictas

Visita al mundo celular

El ojo humano slo tiene un poder de resolucin de aproximadamente 1/10 milmetros o 100 micrmetros. El poder de resolucin es una medida de la capacidad para distinguir un objeto de otro; es la distancia mnima que debe haber entre dos objetos para que sean percibidos como objetos separados. La mayora de las clulas eucariticas miden entre 10 y 30 micrmetros de dimetro, entre 3 y 10 veces menos que el poder de resolucin del ojo humano