OBJETIVOS

Facilitar

el crecimiento y el aislamiento de las bacterias presentes en una muestra clnica.

Determinar

qu bacterias entre las que se desarrollan tienen ms probabilidades de ser las causantes de la infeccin y cuales son sus posibles contaminantes o colonizadores.

un desarrollo suficiente de las bacterias de importancia clnica para permitir su identificacin y su caracterizacin.
CULTIVO PURO
CULTIVO MIXTO CULTIVO CONTAMINADO

Obtener

DEFINICIN
Sustrato slido, lquido o semislido que contiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y desarrollo de los grmenes. Fuentes de energa, carbono, nitrgeno, fsforo, azufre y varios minerales. pH Luz

Temperatura
Esterilidad absoluta (salvo excepciones) Recipientes adecuados

Es importante destacar que la transicin exitosa de un microorganismo in vivo a un ambiente in vitro va a depender de: Disponibilidad de nutrientes esenciales

Condiciones ambientales adecuadas

pH Temperatura Oxgeno y CO2 Presin Luz

SLIDOS LQUIDOS

SEMISLIDOS

Clasificacin de los medios de cultivo segn consistencia

semislido

Caldo nutritivo

Caldos de enriquecimiento

Caldos revitalizadores

Enriquecimiento Nutritivo

Selectivo y diferencial

Clasificacin de los medios de cultivo segn utilizacin

MEDIOS NUTRITIVOS

Contienen nutrientes que favorecen el desarrollo de la mayora de los microorganismos sin requerimientos especiales de cultivo.

No promueven el crecimiento de ningn agente en particular

MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

MEDIOS SELECTIVOS

Contienen uno o ms agentes que inhiben el crecimiento de los microorganismos que no se quieren estudiar

Agentes inhibidores: colorantes, sales biliares, alcoholes, cidos y antibiticos

MEDIOS DIFERENCIALES

Contienen un factor o factores que permite que las colonias de una especie o un tipo bacteriano exhiban ciertas caractersticas metablicas o de cultivo que puedan utilizarse para diferenciarlas de otras bacterias que crecen en el mismo agar

MEDIOS ESPECIALES

MEDIOS CROMGENOS MEDIOS DE TRANSPORTE MEDIOS DE CONSERVACIN

Sustancias cromognicas:
- Son productos qumicos de sntesis que son incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces que son hidrolizados por enzimas microbianas especficas. - Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, se libera el compuesto cromognico, que adquiere un color intenso.

- Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatgenos), se pone en evidencia la actividad enzimtica de la Bglucoronidasa o B- galactosidasa de las bacterias formndose colonias de diferentes colonias segn la especie.
- Identificacin presuntiva, haciendo innecesaria la realizacin de pruebas bioqumicas.

Medios para bacterias no exigentes - agar - extracto de carne - peptona

- NACL
- leche descremada (congelar cepas)

NORMATIVA ISP, entregar

CONTROL DE CALIDAD
El Control de Calidad en la preparacin y evaluacin de

los medios de cultivo es considerado como una esencial y buena prctica de laboratorio, necesaria para mantener el nivel y la ejecucin de cualquier tcnica microbiolgica. Proceso continuo que se extiende desde las materias primas ; a travs del productor hasta el producto final utilizado en los diferentes departamentos de anlisis y diagnstico microbiolgico.

 Recuperacin o supervivencia de los microorganismos de inters (Productividad) Inhibicin o suspensin de los microorganismos no deseados. (Selectividad) Propiedades bioqumicas (diferenciales y diagnsticas) Propiedades fsicas (por ejemplo, pH, Volumen) Sea estril .... etc. El Jefe inmediato responsable del rea * Deber analizar mensualmente los resultados de las pruebas realizadas por el responsable del departamento de control de calidad * Evaluar el cumplimiento de objetivos a travs de los resultados

CRITERIOS DE EVALUACIN DE LA CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.

Se evala utilizando criterios objetivos del medio respecto a: La recuperacin o supervivencia de los microorganismos de inters La inhibicin o supresin de los microorganismos no deseados tiene que ser cuantitativa Los atributos ( por ejemplo: Propiedades fsicas y bioqumicas) Rajadura del plato o envase Variaciones en el volumen del medio Hemlisis Cristales en el medio Presencia de burbujas Presencia de cogulos Cambio de color normal Contaminacin Falla en la inhibicin de microorganismos saprofitos Esterilidad

PRUEBAS FUNCIONAMIENTO Para evaluar cada lote de medio de cultivo que sea recibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones (ATCC) de varios gneros y especies de acuerdo al medio de cultivo a analizar. El control del funcionamiento consistir en comprobar: capacidad del medio de recuperar un bajo nmero de los microorganismos ms sensibles para los que ha sido preparado. capacidad de inhibir un alto nmero de los microorganismos que deben ser inhibidos en caso de los medios selectivos y diferenciar los microorganismos para los que ha sido diseado en caso de los medios diferenciales.

RECONSTRUCCIN DEL MEDIO DE CULTIVO DESHIDRATADO

Cumplir con las instrucciones de preparacin del medio de cultivo

indicado en la etiqueta del envase Cumplir con los procedimientos tcnicos de frmulas enviadas por el cliente Utilizar agua destilada de calidad Determinar el pH del M de C Esterilizacin del medio de cultivo

Procedimiento escrito
Control de esterilidad del Medio de Cultivo

AGAR INFUSION DE CARNE

MEDIO DE LOWENSTEIN JENSEN

AGAR SANGRE

ERRORES EN LA PREPARACIN
Apelmazamiento del producto deshidratado
DEFECTO El envase no fue cerrado correctamente despus de su uso. El envase permaneci abierto por largo rato. Apelmazamiento del El producto sobrepas la fecha de vencimiento. Producto deshidratado

El valor de pH no coincide con el indicado

No fue empleada agua destilada El medio fue sobrecalentado durante su preparacin El Phde pH no coincide El valor no fue determinado correctamente El el indicado Con medio estaba vencido.

Aparicin de turbiedad o precipitados:

El medio preparado perdi agua por evaporacin El medio se calent en exceso El medio no se calent lo suficiente. No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada.

El color del medio no coincide con el indicado:

El medio fue sobrecalentado durante su preparacin. El pH no fue ajustado correctamente. El recipiente empleado estaba sucio. Los azcares contenidos en el medio se caramelizaron

El gel se obtiene ms blando que lo caracterstico para el medio:

No fue garantizada la disolucin total del agar durante la preparacin del medio. No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se aadi agua en exceso.

El crecimiento de los microorganismos es pobre:

El medio fue sobrecalentado El valor del pH no fue ajustado correctamente. La adicin de suplementos al medio se efectu a excesiva temperatura. El medio no fue mezclado correctamente.

El crecimiento de los microorganismos es atpico:

Quedaron

residuos de sustancias inhibidoras del crecimiento no deseables, en los recipientes donde se prepar o distribuy el medio. El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta. El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.

ES, POR LO TANTO, MUY IMPORTANTE QUE EL TECNLOGO MDICO SEA QUIEN SUPERVISE Y CONTROLE TODOS LOS FACTORES NECESARIOS EN LA PREPARACIN Y CONSERVACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO, PARA AS LOGRAR AISLAR E IDENTIFICAR CON EXCELENCIA LOS DISTINTOS AGENTES MICROBIANOS.

Microbiologa, Prescotts

Microbiologa, Prescotts

Los mtodos de siembra se utilizan para inocular por distintos mtodos sobre un medio de cultivo apropiado una muestra que contenga bacterias con el fin de reproducirlas para aumentar el nmero de individuos de la poblacin y formar colonias en el caso de medios slidos.

I. Siembra con rastrillo

II. Siembra con asa de cultivo - Diseminacin en superficie - Agotamiento en superficie - Tubos en superficie - Tubos en profundidad o picada

III. Siembra con trula

Figura 12: Siembra con rastrillo Manual de microbiologa 2011, U. Mayor

Figura 13: Siembra de diseminacin en superficie Manual de microbiologa 2011, U Mayor

Figura 14: Siembra semi-cuantitativa de agotamiento en superficie. Manual de microbiologa 2011, U Mayor

Figura 15: Siembra de tubo en superficie.

Manual de microbiologa 2011, U Mayor

Figura 16: Siembra de tubo profundidad.

Manual de microbiologa 2011, U Mayor

 Pared celular bacteria gram

positiva y gram negativa

Gram positiva Gram negativa

Gram negativa

de Braun

Gram positiva

1 minuto

1 minuto

Decolorar con alcohol- 15segund os acetona

30 segundo s

DIRECTOS

Primera aproximacin al posible diagnstico

Tcnicas rpidas y baratas

Diagnsticos rpidos y certeros

EXAMEN AL FRESCO MATERIA GENITAL

Secrecin Semen, vaginal secrecin y/o uretral prosttica Orina de primer chorro

LEVADURAS BACTERIAS

CLUE CELLS
LEUCOCITOS TRICHOMONAS