Bactriophages

CES Bactriologie-Virologie
Professeur Moussa Fafa Ciss Mdecin Biologiste Facult de Mdecine de Dakar
31/12/2012 1

Introduction

31/12/2012

Dfinition
Virus spcifiques des Bactries Synonyme : phages

31/12/2012

Dcouverte

Auteurs Twort en 1915 DHrelle en 1917 Nombre > 5.000 phages diffrents

31/12/2012

Critres de classification

Nature acide nuclique Morphologie de la particule Enveloppe virale

31/12/2012

Classification des phages

31/12/2012

Phages gnome ADN

31/12/2012

Phages ADN bicatnaire

31/12/2012

Trois groupes

31/12/2012

Phages nus symtrie binaire Siphoviridae Myoviridae Podoviridae Phages nus symtrie cubique Corticoviridae Tectiviridae Phages envelopps Plasmaviridae

Phages nus symtrie binaire

31/12/2012

10

Phages nus symtrie binaire

Sont les plus nombreux 95% des phages dcrits Sont dits cauds Morphologie Tte cubique (renferme ADN) Queue hlicodale Contractile ou non Taille: 20 190 nm
11

31/12/2012

Principaux phages cauds

Siphoviridae (60%)

Enterobacteria phage , T1, T5

Mycobactries, Lactococcus Myoviridae (25%)

Enterobacteria phage T4, Enterobacteria P1, P2 EB phage T7 Bacillus phage 29

Podoviridae (15%)
31/12/2012
12

Deux autres groupes

31/12/2012

13

Phages nus symtrie cubique

Corticoviridae

Alteromonas phage PM2 Enterobacteria phage PRD1 Bacillus phage

Tectiviridae

31/12/2012

14

Phages envelopps

Plasmaviridae

Acholeplasma phage L2

Constitution Enveloppe Nucloprotine Absence de capside

15

31/12/2012

Phages ADN monocatnaire

31/12/2012

16

Deux groupes

Phages nus symtrie hlicodale Inoviridae Phages nus symtrie cubique Microviridae

31/12/2012

17

Microviridae

Morphologie Capside cubique ADN simple brin Diffrents phages

Enterobacteria phage x 174 Bdellovibrio phage MACI Chlamydia phage 1

18

31/12/2012

Inoviridae

Morphologie Long filaments Flexibles

Enterobacteria phage fd

31/12/2012

19

Phages nus gnomes ARN

31/12/2012

20

Leviviridae

Morphologie Capside cubique ARN monocatnaire

Enterobacteria phage MS2

31/12/2012

21

Cystoviridae

Morphologie Capside cubique ARN bicatnaire, segment

Pseudomonas phage 6

31/12/2012

22

Multiplication des phages

31/12/2012

23

Cycle lytique des phages

31/12/2012

24

Phage ADN

31/12/2012

25

Exemple des Myoviridae T

Adsorption et injection du gnome Rplication et synthse des constituants Assemblage des virus Libration des virus
Dure cycle = 22 minutes

31/12/2012

26

Adsorption et injection du gnome

31/12/2012

27

Sites de fixation bactriens

Lipopolysaccharide Protines de paroi Acides teichoques Flagelles Fimbriae

31/12/2012

28

Sites de fixation phagiques

Plaque terminale de la queue Fibres caudales Capside

31/12/2012

29

Fixation du phage

Contact alatoire phage-bactrie Par une fibre de la queue Reste des fibres se fixe rapidement Phage bien arrim sur bactrie

31/12/2012

30

Injection de lADN phagique

Enzymes prsentes au n plaque Perforent paroi bactrienne Contraction de la queue Canal central pntre dans bactrie Gnome phagique est inject

31/12/2012

31

Aprs injection du gnome

Colmatage brche dinjection Par des composants Synthtiss par enzymes virales Devenir phage dpourvu de son gnome Soit reste fix sur la bactrie Soit est dcroch
31/12/2012 32

Rplication et synthse constituants

31/12/2012

33

Phase prcoce

Synthse des enzymes virales prcoces Certains gnes sont transcrits en ARNm ARNm sont traduits en enzymes virales vnement cellulaires ADN bactrien dgrad en nuclotides Inhibition synthse macromolcules Synthse hydroxymthylcytosine qui remplace la cytosine dans le phage
31/12/2012 34

Phase tardive

Rplication ADN phagique Commence ds phase prcoce Formation copies gnomes du phage Gnes tardifs sont transcrits et traduits Protines virales constitutives Protines virales non structurales Protines de la lyse cellulaire
31/12/2012 35

Assemblage des virus

31/12/2012

36

Quatre phases
Construction de la tte Construction de la queue Construction des fibres Assemblage final du phage complet

31/12/2012

37

Droulement

Encapsidation de lADN dans la tte Tte associe la queue Dj porteuse de la plaque terminale Grce au collier Fibres se fixent enfin la queue Accumulation phages dans cytoplasme
31/12/2012 38

Libration des phages

31/12/2012

39

Lyse brutale de la bactrie

Intervention de 2 gnes phagiques Lun code le lysozyme Lautre code une protine entranant le lysozyme vers la paroi Libration de 300 phages environ

31/12/2012

40

Phage ARN

31/12/2012

41

Exemple des Leviviridae

Petits phages ARN (+), monocatnaire Sans queue Capside cubique Site fixation = pilus F et fimbriae Similitudes avec Enterovirus, HAV
31/12/2012 42

tapes

Fixation-pntration Reconnaissance/fixation sur pilus F Pntration : modalit mal dfinie ARN phagique est directement traduit Protine A fixation Protine de capside Rplicase Protine de lyse bactrienne
43

31/12/2012

Rplication

Formation intermdiaire de rplication Brin (-) sert de matrice ARNm protines virales ARNv (+) gnomes phages fils Dure du cycle 20 30 minutes

31/12/2012

44

Cycle lysognique des phages

31/12/2012

45

Phages temprs

Phages Phage Phages P2 P22 Phage Mu-1 ADNv intgr dans gnome bactrie Directement de faon covalente Ou comme plasmide On obtient un prophage
46

31/12/2012

tapes

Fixation-pntration Injection ADN phagique Circularisation de lADN phagique Transcription des ARNm 2 voies selon expression du rpresseur CI Cycle lytique Cycle lysognique
31/12/2012 47

Modalits de la lysognie

Synthse de protines prcoces CII et CIII CII se fixe sur promoteur PRE Activation synthse du rpresseur CI Rpresseur CI : est auto-activable Inhibe transcription des ARNm Stimule un autre promoteur qui augmente la synthse de CI
31/12/2012 48

Intgration du gnome phage

Mcanisme CII active expression dun intgrase int CI rprime transcription Enzyme int Intgre gnome du phage Dans un site prcis du gnome bactrie Grce au site att du gnome du phage
31/12/2012 49

Induction du cycle lytique

Agents inducteurs Ultras violets Agents chimiques mutagnes Mcanisme de linduction Diminution quantit rpresseur CI CI dgrad par enzymes bactriennes Gne xis excisionase qui sassocie int dont elle inverse le processus
31/12/2012 50

Rle et utilisation des phages

31/12/2012

51

Outils gntique molculaire

31/12/2012

52

Phages usuels

Phages filamenteux (Inoviridae) Phage M13 Phage fl Phage fd Phage

31/12/2012

53

Utilisation des phages

Modalits dutilisation Vecteurs de gnes Amplificateurs de gnes Buts Thrapie gnique Vaccination Production de protines
54

31/12/2012

Prparation des phages

Insertion simple de lADN tranger Dltion-remplacement Il faut conserver Squences cos Gnes de structure du phage

31/12/2012

55

Autres vecteurs drivs

Vecteurs drivs Cosmide: plasmide + squences cos Phagemide: plasmide + phage filamenteux Intrt Encapsids in vitro Capacit dinsertion gnomique +++

31/12/2012

56

Rle dans lenvironnement

31/12/2012

57

Rles bnfiques

Contrle densit bactries et biomasse 1010 UFP litre deau propre 108 UFP litre deau use Tmoins de contamination fcale

31/12/2012

58

Problmes pour industrie

Phages dtruisent bactries fermentaires Utilises pour production lait, protines

31/12/2012

59

Utilisation en bactriologie

31/12/2012

60

Facteurs de virulence

Production de toxines bactriennes Corynebacterium diphtheriae Streptococcus pyogenes Acquisition rsistance aux antibiotiques Staphylococcus aureus Streptococcus spp.
31/12/2012 61

Lysotypie bactrienne

Bactries souvent types Listeria monocytogenes Salmonella Staphylococcus aureus Indications de la lysotypie tudes pidmiologiques (pidmies) Dtection de Listeria dans aliments
31/12/2012 62

Autres organismes virus like

31/12/2012

63

Virodes

31/12/2012

64

Classification

31/12/2012

Critres de classification Homologie de squences Rgion centrale conserve ou non Deux familles Avsunviridae Virode brlure de lavocatier Rgion centrale non conserve Pospiviridae Rgion centrale conserve

65

Structure des virodes

ARN (+) Monocatnaire Circulaire Sans rgion codant pour des protines 240 400 nuclotides Absence de capside

31/12/2012

66

Infectent les plantes

Agents pathognes parasites des plantes Tubercules Pomme de terre Mcanisme daction Parasitent appareil transcription hte Utilisent ARN pol II nuclaire de lhte
31/12/2012 67

Virusodes ou ARN satellites

31/12/2012

68

Composition
ARN satellites Encapsids avec des virus des plantes Ont besoin de virus auxiliaire Car ne peuvent pas se rpliquer seuls

31/12/2012

69

Merci
31/12/2012 70