Alunas: Juliana de Carvalho do Couto Renata da Silva Canrio

Rio de Janeiro, junho de 2011

INTRODUO

Penciclovir (indicado para herpes simplex vrus, vrus varicela zoster, o vrus Epstein-Barr, vrus da hepatite e citomegalovrus)

Uso oral biodisponibilidade (5 a10%), efeitos adversos

biodisponibilidade,

Formulaes drmicas efeitos adversos

INTRODUO

Microemulso = disperso coloidal

Fase aquosa

Fase oleosa

Adjuvantes

Adjuvantes: principalmente surfactantes e co-surfactantes

INTRODUO
VANTAGENS DA MICROEMULASO PARA APLICAO TPICA

concentrao de droga na pele; atividade termodinmica da droga podem favorecer a sua particionamento na pele. a barreira de difuso do estrato crneo (EC) e, de permeao da droga atravs da pele. DESVANTAGENS da taxa

viscosidade e, portanto, a sua aplicao, especialmente em produtos farmacuticos pode ser limitada devido inconveniente aplicao.

INTRODUO

SOLUO:
Carbmero 940

Uso de gelificantes

Goma xantana

Carragena

Doadores de viscosidade

OBJETIVO
Investigao do hidrogel com base em microemulso (MBH) como um sistema de liberao tpico do antiviral penciclovir

MATERIAIS E MTODOS
MATERIAIS

Penciclovir (pureza 99%) cido olico (OA) Cremorphor EL Etanol Dimetil benzeno Poloxamer 188 Carbmero 940 Hematoxilina e eosina Carboximetilcelulose de sdio (CMC-Na)

MATERIAIS E MTODOS
PREPARAO DE MICROEMULSO FORMULAO DE MICROEMULSO PENCICLOVIR : OA (5% w / w) emoliente; Etanol (20% w / w) surfactante; Cremorphor EL (30% w / w) co-surfactante sinttico noinico; gua (45% w / w) (Zhu et al., 2008). MANIPULAO: OA, etanol e cremorphor EL em primeiro lugar, foram misturados entre si. Adio de gua, gota gota, com agitao magntica temperatura ambiente. Depois que o sistema resultante foi, com cuidado, equilibrado, promoveu-se agitao magntica por 30min, Adequada quantidade de penciclovir foi dissolvida em soluo por ultra-som.

MATERIAIS E MTODOS
Preparao da MBH Carbomero 940 foi selecionado como matriz de hidrogel ;

Carbomero 940 0,6% (w / w) mantido em contato com um pouco de agua por 24h obteno de uma soluo de alta viscosidade adio lenta e sob agitao da microemulso de penciclovir Os valores de pH foram regulamentadas entre 6-9.

Caracterizao da MBH Os valores de pH foram avaliados em 25C usando pHmetro PHS-25 digital;

O viscosidade foi determinada a 25C usando aNDJ-1 viscosmetro; Microscopia eletrnica de transmisso foi empregada para observar a microestrutura da microemulso ou hidrogel contendo microemulso utilizao do cido fosfotngstico 1% como corante negativo ; O tamanho das gotas / distribuio da microemulso preparados ou MBH (diludo com gua destilada) foi determinada com N5 Submicron Analisador de tamanho de partculas que tem uma faixa de deteco de 2-5000 nm.

MATERIAIS E MTODOS
Estabilidade da MBH

Observao do tamanho de partculas e da separao de fases por HPLC a 4 C at 3 meses. Teste de centrifugao a fim de avaliar a estabilidade fsica, com taxa de centrifugao 13.000 rpm por 30 min (Chen et al., 2007).

RESULTADOS E DISCUSSES
PREPARAO DA MBH
Dificuldades: Construo de uma relao inversa entre solubilidade do frmaco e a capacidade de permeao em estudos anteriores
Soluo: Aperfeioamento da formulao: petrleo (5%), surfactante (20%), cosurfactante (30%) e gua (45%) (Zhu et al., 2008). Testes preliminares de triagem para MBH matriz:

Poloxmero 188

Carbmero 940

CMC -Na

Viscosidade mais adequada

RESULTADOS E DISCUSSES
CARACTERIZAO E ESTABILIDADE DE MBH

O valor do pH da microemulso e MBH foi de 5,33 e 6,82, respectivamente, o Ph prximo a 7,0 indicam que MBH poderia resultar em mais ou menos estmulo pele do que microemulso. A viscosidade (23,86 s Pa) de MBH aumentou significativamente em comparao com a (S 7.92mPa) de microemulso devido adio de 0,6% Carbomer 940, que fez a preparao mais adequada para o tpico administrao (Chen et al., 2006). As gotculas de microemulso apresentou uniformemente esfrica nos termos do MET, e do tamanho das gotas de microemulso variou de 10 a 100 nm eo dimetro mdio das gotas foi de 36,5 nm. Para o MBH, gotas esfricas de microemulso foram localizados na rede de gel e o dimetro das partculas de gotculas de MBH no alterou significativamente em comparao com a da microemulso, que estava de acordo com o estudo realizado por Chen et al. (2007). Indicou que a rede do gel de Carbomer 940 no poderia influenciam marcadamente a morfologia e no dimetro de microemulso gotas. Microemulso e MBH foram estveis em 4C na presena de penciclovir. No houve alterao significativa do tamanho das partculas, a fase separao e degradao de penciclovir observado at trs meses. Os testes indicaram que centrifugado microemulso e tinha MBH boa estabilidade fsica.

MATERIAIS E MTODOS
NOS ESTUDOS DE PERMEBILIDADE IN VITRO 2.5.1. Preparao de couros

Camundongos machos Kunming pesando 20 2 g foram utilizados. Peles foram obtidas a partir da regio abdominal de ratos aps a remoo do plo cuidadosamente com uma navalha, e depois o de gordura subcutnea e tecido conjuntivo foram aparadas. As peles excisadas foram lavadas e examinadas quanto a integridade e, em seguida, guardadas no frigorfico a 4 C overnight para uso posterior.

MATERIAIS E MTODOS
Nos estudos de permeabilidade in vitro O experimento foi realizado usando clulas de difuso de Franz com uma rea efetiva de 3.8cm2. As amostras de pele extirpados foram pinadas entre o doador e o receptor da cmara das clulas de difuso de Franz com o estrato crneo de frente para o doador de cmara. 0,8 g de microemulso ou MBH (contendo 4mg de droga) ou creme (contendo 8mg de droga) foi administrado em estrato crneo, respectivamente. A cmara de receptor foi preenchido com 15 ml de soluo salina fisiolgica. O meio receptor foi mantida a 37 0,5 C e agitada a 600rpm durante todo o experimento. Para cada experimento, foi retirado do meio receptor 1ml de soluo em intervalos de tempo pr-determinados e, em seguida, o mesmo volume do meio foi imediatamente adicionado no receptor cmara. Todas as amostras foram filtradas atravs de uma membrana filtrante de celulose e analisada por HPLC.

RESULTADOS E DISCUSSO
NOS ESTUDOS DE PERMEABILIDADE IN VITRO

Microemulso = 2,5 x maior que controle MBH = 2 x maior do que o controle (aps 12 horas de aplicao).

Resultados anteriores

coerentes

com

estudos

Os adjuvantes (como o OA e etanol) reduzem a barreira do estrato crneo e aumentam o coeficiente de difuso da droga na pele. A adio de Carbmero 940 em microemulso diminuiu significativamente a permeabilidade do penciclovir.

MATERIAIS E MTODOS
NO ESTUDO DE PERMEABILIDADE IN VIVO EM CAMUNDONGOS
Material analisado: peles dorsais dos camundongos Tratamento inicial: 24h antes, as peles foram lavadas com soluo fisiolgica salina. Aps foram limpo e polido com o etanol, E em seguida colocado em banho aquoso por 60 segundos, a epiderme e derme foram separados Epiderme e derme foram cortadas em pedaos, Adicionou-se uma soluo composta de 1 ml de gua e 200 l de cido perclrico 10%, respectivamente. Homogeneizou-se Aps a homogeneizao , fez-se centrifugao a 4000rpm por 15min. O sobrenadante foi filtrado por filtro de membrana e foi analisado por HPLC.

Aps: *Aplicao de creme comercial (com 1% de droga)

*Aplicao da microemulso (com 0,5% de droga)

*Aplicao de MBH (com 0,5% de droga)

Avaliou-se a administrao em intervalos de tempo pr-determinados (0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 24 h). Os ratos foram sacrificados As peles foram lavadas com soro fisiolgico

RESULTADOS E DISCUSSES
Primeiras duas horas: Epiderme: sem significativa diferena Derme: Microemulso duas vezes maior que creme comercial MBH= 1,5x maior que creme comercial Entre 2-8horas Epiderme = Microemulso maior que MBH Derme = Microemulso maior que MBH Aps 24horas Epiderme: MBH maior que microemulso Derme: MBH maior que micoemulso Creme comercial: queda drstica de concentrao do frmaco. Alta viscosidade Movimento de partculas limitadas Boa adesividade pele Tempo de liberao mais retardado Alta permeabilidade (reao entre concentrao da droga, a pequena gota dimetro e da reao entre o etanol, OA, Cremorphor EL e EC ) Razes:

MATERIAS E MTODOS

SEUS COELHOS, SO AQUI, RENATA

2.7. Avaliao de irritao da pele (EM COELHOS) Os ensaios de irritao da pele foram realizados em coelhos para determinar se microemulso ou penciclovir MBH poderia produzir irritao aps a aplicao nica e mltipla. Os coelhos (pesando 2,0 2,5 kg) foram utilizadas neste experimento, e eles foram divididos aleatoriamente em dois grupos, incluindo intacta grupo da pele e do grupo de leses na pele (cujos desdobramentos obtido por escarificao pele intacta at hemorragia capilar). Ambos foram subdivididos novamente em dois subgrupos, o subgrupo de aplicao nica e mltipla aplicaes subgrupo. Pele dorsal para o teste de irritao de cada coelho foi dividido em trs regies para o creme comercial, microemulso ou MBH, respectivamente. Para a aplicao nica, os preparativos acima foram aplicados na regio correspondente a 24 h. Um hora aps a retirada da droga, cada local de administrao, em seguida, foi inspecionados quanto presena de eritema e edema (Dreher et al., 1996). Para mltiplas aplicaes, essas preparaes foram aplicados nas regies de pele mesmo descrito acima por 24 h, 1 h aps a remoo o medicamento, administrado sites foram avaliados quanto a sinais de irritao da pele, e este procedimento de teste foi repetido por mais 6 dias. Depois retirada, de observao para administrao nica ou mltipla continuou por trs dias (Dreher et al., 1996). Os resultados de irritao da rea de ensaio foram obtidos por julgar o grau de eritema e edema de acordo com os critrios propostos por Paulino et al. (2002). Eritema e edema foram classificados da seguinte forma: 0 para nenhuma reao visvel, 1 para uma reao presentes, 2 para a reao leve, 3 para moderada reao, e 4 para a reao grave. Eventualmente, os escores totais de Teste de irritao em cada condio foram calculados utilizando a seguinte equao. Equao 2

RESULTADOS E DISCUSSES
AVALIAO DE IRRITAO DA PELE O critrio da intensidade da irritao: < 0,5 significou nenhuma irritao, 0,5-3 de leve irritao, > 6 mostrou irritao severa e outros foram irritao moderada. Resultados Peles Normais = nenhuma alterao. Peles feridas = ligeira irritao para microemulses. Possvel razo: Diminuio da capacidade metablica da pele CONCLUSO: MBH no provocou nenhuma irritao. Possvel razo: Mudana de propriedade da microemulso (Carbmero 940).

MATERIAIS E MTODOS
EFEITO DA MICROEMULSO E MBH NA SUPERFCIE DA PELE (MICROSCOPIA)

Tratados com MBH

Tratados Com Microemulso

Grupo Normal

OBS: Peles foram analisadas 24 h aps a aplicao.

As amostras foram colocadas em paraformaldedo a 4% (fixao) e em seguida, desidratadas por soluo de etanol em diferentes concentraes. As amostras foram posteriormente colocadas em dimetil benzeno transparente e, Aps, foram cortadas em fatias. As fatias foram suavizadas com gua morna e em seguida, secas a 45C. Por fim, os cortes foram observados em microscopia de luz aps hematoxilina e eosina.

RESULTADOS E DISCUSSES
Efeito da microemulso e MBH na pele
Pele normal (Fig. 3 A) Pele tratada com MBH (Fig. 3B) Clulas dispersas, EC soltos e Edema drmico leve. Microemulso (Fig. 3C), camada de EC mais flexvel(comparao com 3B). A superfcie parecia mais spero do que a pele tratada com MBH.

MATERIAIS E MTODOS
MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA (MEV)

Amostras de pele cortadas em cubos de tamanho adequado. Foram fixadas em 4C em paraformaldedo 2% e 2,5% glutaldedo em soluo tampo cacodilato 0,2 M (pH 7,4) durante a noite, Em seguida, lavadas 3 vezes com cacodilato 0,2 M e tampo sacarose 7% por 15 min e ps fixadas com tetrxido de smio 2% por 1 h, Aps, foram imersos em 0,5% acetato de uranila aquosa por 30min. Ento foram desidratados em concentraes graduais de etanol, transferido para para o acetato de isoamila, Scas utilizando CO2 lquido. As espcimes secas foram afixadas com paldio ouro em um aplicador de ons e examinadas no MEV.

RESULTADOS E DISCUSSES
MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA (MEV) Pele Normal: Fig 4 A

Pele tratada com MBH: Fig 4B Aparncia escamosa de queratina, (desnaturao dos queratincitos nas camadas EC).
Pele tratada com Microemulso As imagens de MEV da pele tratadas com microemulso apresentaram alterao significativa da superfcie da pele (Fig. 4C)

RESULTADOS E DISCUSSO

A concluso coerente com os resultados obtidos em experimentos de permeabilidade in vitro e in vivo. Devido adio de Carbomer 940, contato com microemulso na pele (reduo irritabilidade)

Os componentes da microemulso desempenharam um papel importante na mudana da microestrutura da pele.

OA (como fase de oleosa) promove desordem pode EC. Quando aplicado em conjunto com o etanol, OA tambm pode causar extrao de lipdios do EC (Touitou et al. , 2002)

MELHOR PERMEABILIDADE, ENFRAQUECIMENTO DA BARREIRA DE EC.

MATERIAIS E MTODOS

2.9. HPLC anlise de penciclovir

As amostras foram analisadas utilizando o sistema de HPLC, incluindo um separaes mdulo (Waters 2695), um detector de arranjo de diodos (Waters 2996) e uma coluna de fase reversa C18 (5 m?, 4,6 milmetros 250 milmetros, Dikma). A fase mvel foi uma mistura de 0,1%, soluo de cido actico / acetonitrila em uma proporo 98:2 (v / v) com a vazo de 1 ml / min e o comprimento de onda de deteco foi fixado em 253 nm. Alquotas de 20? L de cada amostra foram injetados na coluna, e todas as operaes foram realizados temperatura ambiente. A rea do pico correlacionada linearmente com a concentrao penciclovir na faixa de 10-50 g? / ml eo limite de deteco mais baixo em 0.5? Ml / g.
2.10. A anlise estatstica Os dados foram apresentados como mdia D.P. (N = 5). Os dados estatsticos foram analisados pelo teste t de Student ao nvel de p = 0,05.

CONCLUSO

Neste trabalho, MBH com viscosidade adequada foi construdo para entregar penciclovir para administrao tpica. A adio de Carbomer 940 em microemulso resultou no aumento da viscosidade. Comparado com o creme de leite comercial, MBH poderia significativamente melhorar a permeao de penciclovir in vitro e in in vivo. Alm disso, o MBH apresentou a excelente capacidade de liberao lenta e mais fraca irritao, que forneceu uma probabilidade para aplicao clnica. Atravs de microscopia ptica e MEV, a alteraes na microestrutura de SC pode ser claramente observada, e o aprimoramento de permeao percutnea pode estar relacionada com a efeitos combinados dos ingredientes da composio de microemulso sobre a microestrutura da pele. A MBH com permeao poderosa capacidade e irritao baixa era esperada como uma entrega da droga promissora do sistema.