INSTRUMENTACIN Y METODOLOGA PARA CROMATOGRAFA DE LQUIDOS DE ALTA EFICACA(HPLC)

JOSU ESA MACAS LPEZ

INTRODUCCIN
Un equipo de ste tipo, consiste esencialmente en: Sistema de suministro de fase mvil Sistemas de inyeccin de muestra Columna Detector

HPLC
Para purificar una mezcla de compuestos, un pequeo volumen de sta es inyectado en la columna y eluido con la fase mvil ms adecuada. La elucin de la muestra puede ser obtenida del modo isocrtico que es con disolventes de composicin constantes, y de modo gradiente que es con disolventes de composicin variable.

 Los componentes que son eluidos de la columna pueden ser detectados por luz ultravioleta, fluorescencia, ndice refractario y deteccin electroqumica.

SISTEMA DE SUMINISTRO DE FASE MVIL(BOMBA)

Tiene una bomba para llegar a las altas presiones que se requieren, y suele contener algn medio para producir un gradiente de elucin(cambiar concentraciones del eluyente). Los disolventes deben estar puros y ser calidad HPLC. Las formas ms comunes para degasificar consisten en el vacio y el burbujeo con helio.

Bombas ms usadas
Reciprocante De jeringa motorizada Jeringas neumaticas (de presin constante)

SISTEMA DE INYECCIN DE LA MUESTRA

Anillo de acero inoxidable con 6 conexiones diferentes (1 de la columna) Cono mvil de tefln

Precolumna y Columna
La eficacia de una columna empaquetada aumenta al disminuir el tamao de las partculas de la fase estacionaria.

Precolumna
Entre el inyector y la columna se instala un guardacolumna pequeo de 3 a 10 cm. Tiene el mismo empaque que la columna analtica. Retiene basura y materia slida proveniente de la muestra, peridicamente debe sustituirse.

DETECTORES
Este debe tener gran sensibilidad Puede ser: Detector de UV Detector de Refractmetro Diferencial

METODOLOGIA (SELECCIN DE COLUMNA Y DISOLVENTE)

ADSORCION Y PARTICION . EN LA CROMATOGRAFIA DE ADSORCION SUELE MANTENERSE CONSTANTE AL ADSORBENTE Y SE HACE AUMENTAR LA POLARIDAD DEL DISOLVENTE DE ELUCIN NPC.- FE.- SILOXANO CON UN GRUPO POLAR FM.- NO POLAR (HEXANO, CLOROFORMO, ETC.) RPC.- FE.-NO POLAR FM.- POLAR (METANOL, ACETONITRILO, THF, AGUA O UNA MEZCLA.

 UNA GRAN VARIEDAD DE COMPUESTOS DE COMPUESTOS ORGANICOS SE PUEDEN DISOLVER EN FASES MIXTAS DE AGUADISOLVENTE PARA SEPARARLOS, DE TAL MODO QUE LA CROMATOGRAA DE FASE INVERSA ES LA MAS USADA EN HPLC; NATURALMENTE SI UNA MUESTRA ES MUCHO MENOS POLAR E INSOLUBLE SE USA LA CROMATOGRAFIA DE FASE NORMAL

Seleccin del disolvente

En la mayor parte de las aplicaciones con un disolvente puro no se obtendr la separacin eficiente de una serie de compuestos (k,)

DIFERENCIAS DE COLUMNAS Y APLICACIONES

Los fabricantes proporcionan informacin como el nm. de platos, selectividad nica, reproducibilidad, cada de presin, etc. Esta tcnica tiene muchas aplicaciones, tanto clnicas como forenses, ambientales e industriales.

Problema
De manera volumtrica se pueden detectar los iones alcalinos haciendo pasar por una solucin de ellos por una columna de intercambio de cationes en su forma hidrogeno. stos desplazan una cantidad equivalente de iones hidrogeno, que aparecen en el efluente y se pueden titular. Cuntos milimoles de ion potasio hay en un litro de solucin, si el efluente obtenido de 5ml de alcuota pasados por una columna de intercambio catinico necesitan 26.7 ml de NaOH .0506M para titularse?

 REFERENCIAS: Gary D Christian, Qumica Analtica, SextaEdicion, Cap.19-21,Pg 563-641 Daniel C. Harris, Analisis Qumico Cuantitativo, Tercera Edicin, Pg 607-610