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Estructura cuaternaria
Protenas que estn formadas por una o ms cadenas polipeptdicas, subunidades o monmeros. Muchas veces slo presentan su actividad cuando forman el agregado
Estructura terciaria
Arreglo espacial en el que las cadenas se pliegan para dar una forma compacta (por ejemplo globular o cilndrica). El empacamiento espacial se encuentra determinado por una combinacin de estructura: -hlices, plegadas y desordenadas
Estructura secundaria
Las protenas adoptan una conformacin en el espacio debido a: 1) las interacciones de las cadenas laterales de sus residuos de aminocidos y 2) el solvente en el que se encuentren, dando una estructura de mxima estabilidad.
Estructura primaria
La secuencia lineal de los aminocidos en una protena. Estructura que identifica a una protena y que le determina sus caractersticas qumicas y biolgicas. Las propiedades fisicoqumicas intrnsecas como plegamiento o conformacin estn sealadas en su estructura primaria
1. 2. 3. 4. 5. 6.
Alifticos (5): Ala, Val, Leu, Ile, Gly. Hidroxlicos (2): Ser y Thr. cidos o dicarboxlicos y sus amidas (4): Asp, Asn, Glu y Gln. Bsicos (3): Lys, Arg e His. Cclicos (4): Phe, Tyr, Trp y Pro. Contienen sulfuros (2): Met y Cys.
Fitasa Lipasa Hexosa oxidasa Vacuna Hepatitis B Insulina Gelatina Protenas recombinantes varias
c)
FASE I
Comentarios
Volmenes 50 mL Disponibilidad de equipo
Homogenizador
Disponibilidad de equipo
No se necesita equipo
Choque osmtico
El tamao de las protenas es medido usualmente en masa molecular, aunque algunas veces se menciona su longitud y dimetro (en ). El peso molecular es la masa de 1 mol de protena, usualmente se expresa en daltones. Un daltn es la masa atmica de un protn o neutrn. La masa se puede determinar con mtodos como: la electroforesis, la filtracin en gel y la espectrometra de masas. Los mtodos de separacin de protenas en los que se incluyen tanto forma como tamao son: la cromatografa en filtracin en gel (size exclusin chromatography y la electroforesis en gel de poliacrilamida.
FASE I
Centrifugacin
La centrifugacin aprovecha la propiedades de tamao, forma y densidad de las protenas para separarlas de otras molculas que presentan caractersticas distintas. Como resultado, el efecto de la gravedad para cada protena es diferente. En principio, se pueden separar organelos de una solucin homognea de partculas, al exponer a la muestra a diferente fuerza gravitatoria.
FASE I
Centrifugacin diferencial
FASE II
Precipitacin: cambio de pH, incremento en la temperatura, adicin de solventes, molculas cargadas, etc. Pero, el mtodo ms comnmente empleado es la precipitacin por salado con (NH4)2SO4.
FASE II
Solubilidad
Es la cantidad de soluto que puede disolverse en un solvente. La estructura 3-D de la protena afecta sus propiedades de solubilidad. Las protenas citoslicas son abundantes en aminocidos hidrofilicos en su superficie. De manera opuesta a las protenas membranales. Cada protena tiene una solubilidad caracterstica en un ambiente definido y si se cambian esas condiciones (amortiguador, tipo de solvente, pH, fuerza inica, temperatura, etc.) puede causar que las protenas pierdan sus propiedades de solubilidad y precipiten en solucin.
FASE II
Salting in. Las protenas globulares aumentan su solubilidad al incrementar la concentraciones de iones. Pero cuando se eleva la concentracin de iones la protena disminuye su solubilidad y se agrega (salting out).
Fase I
FASE II
Formulas o tablas
Y tambin en internet
1. 2. 3.
http://www.proteinchemist.com/cgibin/s2.pl Conocer: Sulfato de amonio slido Conocer el volumen de la solucin Y la concentracin final de la sal
Eliminar la sal
Una vez que se obtiene el pp de una mezcla protena hay que eliminar la sal o medio utilizado para la precipitacin. La sal puede interferir en los posteriores pasos de purificacin La sal puede alterar las propiedades biolgicas de la protena
Dilisis Utilizar la cromatografa filtracin en gel, para perder las molculas de bajo peso molecular (Sefadex-G25). Utilizar filtracin a travs de membranas de dimetro especifico.
Tambin llamada comatografa de exclusin molecular. Consiste de una fase lquida mvil y una fase slida estacionaria. Fase slida estacionaria consiste de un gel de tamao molecular determinado. Fase mvil. Acarreara a la mezcla de protena
Protenas de alto peso molecular salen primero de la columna Despus las protenas de bajo peso molecular.