Objetivos

Realizar un anlisis sobre la recogida, transporte y conservacin de las muestras microbiolgicas reseando el material necesario, la tcnica de obtencin, volumen, nmero y transporte de cada una de ellas, segn las distintas localizaciones y caractersticas especiales de aquellas o de los microrganismos a investigar.

Solicitud de peticin
Cada muestra deber ir acompaada de una solicitud de estudio a ser posible con copia autocalcable, que deber estar correcta, legible y completamente documentada. Cada solicitud deber suministrar al laboratorio la suficiente informacin para que la muestra sea procesada convenientemente y se interpretarn los resultados.

Solicitud de poseer los siguientes datos

1) Filiacin y datos administrativos: se deben especificar el nombre y apellidos, sexo y edad del paciente, el mdico solicitante y el centro, servicio, o consulta al que pertenezca, asi como cualquier otra informacin importante 2) Datos clnicos: Fecha del nacimiento de la enfermedad, diagnostico clnico de presuncin. Todos estos datos son de gran inters para orientar las tcnicas que hay que seguir. 3) Datos de la muestra: como fecha de la obtencion y en algunos casos, la hora, la naturaleza del producto y exacta localizacion de la toma, asi como el procedimiento de extracin

Clasificacin de las muestras clnicas.Segn la posibilidad de que las muestras clnicas para el cultivo bacteriolgico estn contaminadas con la flora normal se pueden dividir en tres reas. Hay distintos procedimientos en cada rea para acceder al patgeno

A.- Muestras de reas profundas y cerradas del cuerpo ( directas) La muestra recogida contendr solo el germen patgeno. Debe atravesarse la piel para llegar al patgeno utilizando medios quirrgicos o POR ASPIRACIN CON AGUJA. Asepsia previa. Ej. Sangre. B.- Muestras de reas profundas que comunica con el exterio (indirectas) Las muestras seguramente contendr AMBOS TIPOS DE GERMENES: patgenos y de la flora normal, pues estos ltimos estn en el paso para acceder al patgeno. EJ. Orina por miccin.

C.- Muestras en reas superficiales del cuerpo. La flora patgena y la no patgena estn asociadas en el lugar de infeccin; ambos topos son recogidos en la muestra. Los grmenes no patgenos no deben de tomarse en cuenta al interpretar los resultados del cultivo. El instrumento mas til es la recoleccin de estos especmenes es la TORUNDA un aplicador con la punta envuelta de algodn, Filo de polister, alginato de calcio o dacrn. EJ. Piel y membranas mucosas. Faringe y nasofaringe PROCEDIMIENTO - Se deber tomar solo con una visin clara de la faringe, utilizando un bajalengua. Se evitar rozar otras estructuras. Prevenir al paciente de concurrir en ayunas sin lavarse los dientes con pasta dental - Se dispondr de los hisopos, preferentemente humedecidos en tripticasa de soja. - Con los hisopos se tocara el fondo de la garganta, amgdalas, fosas tonsilares y cualquier otro lugar donde exista inflamacin, exudado o ulceracin. El frote debe ser enrgico, de lo contrario ser un espcimen deficiente para el cultivo. - Uno de los hisopos se usara para hacer tinciones, y el otro para hacer un cultivo. El estreptococo del grupo A es la nica causa bacterian comn de faringitis, por ello la estrategia diagnostica el cultivos de garganta que tiene por finalidad identificar. OBTENCION DE LA MUESTRA Es imprescindible realizarla en el propio laboratorio como en exudados genitales que requieren una observacin en fresco al microscopio y siembra inmediata. La toma se efectua en el sitio exacto de la lesin con las mximas condiciones de asepsia que eviten la contaminacin con microbios exgenos. Que la toma sea lo mas precoz posibles y que se prefieran siempre los productos purulentos frescos liquidos (recogidos por aspiracin directa con jeringa) o tejidos sospechosos, a las muestras tomadas con hisopos o torundas con algodn

TRANSPORTE
La mayora de las bacterias resisten bien las temperaturas bajas, por lo que los productos pueden mantenerse en la nevera unas horas, pero el LCR (el meningococo es muy sensible al frio), exudados, heces, y muestras de anaerobios no deben ser refrigerados. (2-8c). En todos los casos, el envio de la muestra debe evitar la salida ( y posible contaminacin) de contenido, por lo que el recipiente debe de cerrarse con seguridad, o utilizar un doble recipiente, siempre quedaran claras las identificaciones de la muestra, de la persona a quien pertenece y los servicios solicitante y receptor.

Envases/ contenedores

Hisopos

ENVASES/ CONTENEDORES Cuando la viabilidad de las bacterias es muy escasa o la posibilidad de desecacin de la muestra es grande (favorecindose la destruccin bacteriana) y la toma no puede realizarse en el mismo laboratorio se usaran medios de transporte. Se trata de medios, tales como el Stuart-Amies, que no son nutritivos, sino que preservan las bacterias existentes, sobre todo si son escasas, a la vez que impiden el crecimiento exagerado de otra flora bacteriana no deseada. HEMOCULTIVO MATERIAL NECESARIO Frascos de hemocultivo. Compresas de goma. Jeringas y agujas de puncin IV. Gasas estriles. Guantes de goma estriles. Alcohol etlico o isoproplico al 70%. Solucin Yodada. VOLUMEN DE LA MUESTRA Como norma general es adecuado que la sangre mantenga una proporcin 1:10 con el medio de cultivo. Es decir, para un frasco de 100 ml, introducir 10 ml. de sangre. En caso de neonatos y nios pequeos en que no se pueden obtener volmenes grandes de sangre es suficiente una cantidad de 1-5 ml, que se introduce en un solo frasco

UROCULTIVO ORINA OBTENIDA POR MICCION MEDIA Material necesario Gasas esteriles Jabn neutro Recipiente de boca ancha con tapa de rosca, hermtico y esteril. Bolsas de plstico o colectores estriles.

OBTENCION DE LA ORINA.

La muestra idnea es la primera miccin de la maana, ya que permite la multiplicacin de bacterias durante la noche. Tcnicas para mujeres. Se lavar las manos cuidadosamente con agua y jabn, las enjuagar con agua y las secar con una toalla limpia. -Se separarn los labios mayores y menores, y los mantendr separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina. Se indicar a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros, tras lo cual y sin interrumpir la miccin, se recoger el resto de la orina en el recipiente. Tcnica para nios. - En nios y nias mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos. - En nios y nias ms pequeos, la orina se recoger en colectores o bolsas estriles especialmente diseadas para ellos de la siguiente forma: * Lavado cuidadoso de los genitales y rea perineal igual que en los adultos. MATERIAL NECESARIO. - Gasas. - Alcohol 70 o solucin yodada. - Jeringa o aguja estril. - Recipiente estril.

COPROCULTIVO.
MATERIAL NECESARIO. -Recipiente de boca ancha para recoger las heces, tipo orinal, bacinilla o cua. No es necesario que est estril, slo es preciso que est limpio. Recipiente estril de boca ancha y cierre hermtico para enviar la muestra. Puede ser vlido el empleado para recoger orinas, aunque es preferible utilizar un recipiente que tenga esptula para tomar la muestra de las heces. -Medios o sistemas de transporte para heces. Se emplean slo si la remisin de la muestra se retrasa y los distribuye el laboratorio de Microbiologa. Existen sistemas comerciales para bacterias (Cary-Blair o modificaciones o solucin de glicerol tamponado) o para parsitos con el fin de fijarlos [PVA (alcohol polivinlico /10% de formalina), SAF (acetato sdico/cido actico/formalina), MF]. -Esptulas, cucharillas o depresores. OBTENCIN DE LA MUESTRA. - Si son formadas o pastosas se toma una porcin del recipiente donde hayan sido emitidas y se transfieren al sistema elegido para el envo al laboratorio. Se seleccionan zonas donde haya sangre, moco o pus. No son vlidas las muestras contaminadas con orina. No debe utilizarse para la recogida papel higinico, porque suelen tener sales de bario que inhiben algunas bacterias enteropatgenas.

HISOPOS RECTALES. A. MATERIAL NECESARIO. - Hisopos rectales con medio de transporte. - Guantes. B. OBTENCIN DE LA MUESTRA. En general debe desaconsejarse su uso, aunque hay que recurrir a l si no se puede disponer de heces, como en neonatos o adultos debilitados. Se ha demostrado eficaz en el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae, Campylobacter spp., Shigella spp. (protege de la desecacin)

TRACTO GENITAL. MUESTRAS DEL TRACTO GENITAL FEMENINO. 1. Exudados vaginales. 2. Exudados cervicales. 3. Exudados uretrales. 4. Exudados rectales. 5. Endometrios. 6. Culdocentesis. 7. Trompas y ovarios. 8. Vulva. 9. Lesiones cutneomucosas para campo oscuro (chancros). 10. Ganglios linfticos inguinales. 11. Lquido amnitico. 12. Productos de la concepcin.

MUESTRAS DEL TRACTO GENITAL MASCULINO. 1. Exudados uretrales. 2. Exudados rectales. 3. Ganglios linfticos inguinales.

4. Lesiones de campo oscuro (chancros). 5. Muestras para el estudio de la prostatitis ENDOCERVICALES. A. MATERIAL NECESARIO. - Camilla ginecolgica. - Espculo estril. - Torundas secas sin medio de transporte (para limpieza de exocrvix). - Torundas de alginato clcico o Dracon con medio de transporte tipo Stuart-Amies. TCNICA. - Con la paciente en posicin ginecolgica introducir suavemente el espculo sin lubricar (o lubricado con agua templada). - Se limpiar el exocrvix de secreciones vaginales, con una torunda seca. - Bajo visin directa se comprimir cuidadosamente el crvix con palas del espculo y se introducir una torunda en el canal endocervical con un suave movimiento de rotacin. - Se repetir la operacin con la segunda torunda.

EXUDADOS URETRALES. A. MATERIAL NECESARIO. - Torundas uretrales finas, con varilla de alambre no excesivamente flexible, de alginato clcico o Dacron con medio de transporte tipo Stuart-Amies. - Gasas estriles.

TCNICA. Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas estriles. Introducir la torunda suavemente con un movimiento de rotacin hasta penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (35 cm para la investigacin de Chlamydia trachomatis). (Vase figura) Repetir operacin con una segunda torunda. Cuando no haya sufuciente exudado, puede estimularse mediante un masaje suave de la uretra contra la snfisis del pubis, a travs de la vagina. EXUDADOS RECTALES. MATERIAL NECESARIO. -Guantes de goma. -Torundas con un medio de tranporte (Stuart-Amies). TCNICA. Introducir una torunda suavemente a travs del esfnter anal. Rotar contra las criptas rectales, dejar 10-30 segundos para que se absorvan los microorganismos y extraer. Se intentar evitar el contacto con materia fecal. Cuando la torunda salga manchada de heces, deber tomarse una nueva muestra