ANALTICA AVANADA 2S 2011

Aulas 5 e 6 Espectrofotometria no UV-Vis UV-

Prof. Rafael Sousa Departamento de Qumica - ICE rafael.arromba@ufjf.edu.br

Notas de aula: www.ufjf.br/baccan

ESPECTROFOTOMETRIA
ABSORO molecular no UV-Vis UVFLUORESCNCIA molecular no UV-Vis UV-

Plano de aula: aula: - Definio de espectrofotometria - Aspectos conceituais da ABSORO MOLECULAR - Medidas de absoro e anlises quantitativas - Instrumentos para anlises espectrofotomtricas - Aspectos prticos - A quimioluminescncia - Espectrofluorimentria (princpios e aplicaes) - Instrumentao para espectrofluorimetria

Bibliografia
Anlise Instrumental F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000 Vogel - Anlise Qumica Quantitativa GH Jeffrey e col., 6a ed., Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2002 Anlise Qumica Quantitativa D. Harris; 7a ed., 2008 Principles of Instrumental Analysis Analysis DA Skoog, FL Holler, TA Nieman; 5th ed., 1998 Tutoriais dos fabricantes de espectrofotmetros

Espectrofotometria - DEFINIO
Espectrofotometria: Espectrofotometria: Medida da luz que absorvida ou emitida por uma espcie qumica

Espectro obtido para o -caroteno

Espectro obtido para Ag

coloidal

Espectrofotometria - APLICAES
ANALITOS ORGNICOS Alguns exemplos: Compostos nitrogenados Frmacos (c. acetil saliclico) (c. Fenis Gorduras (colesterol) ANALITOS INORGNICOS Alguns exemplos: on cloreto amnia, fosfato, nitrato e sulfaTO Elementos metlicos em geral, As e B

ASPECTOS CONCEITUAIS LUZ O espectro eletromagntico

(nm)

Aspecto ondulatrio da radiao eletromagntica

Relao entre comprimentos de onda e energia

Ondas com dif. comprimentos de onda ()

dif. cores (Vis)

Anlises instrumentais: medidas de fraes especficas de luz (visvel ou no) MXIMOS DE ABSORO

Aspecto ondulatrio da radiao eletromagntica Relao entre comprimentos de onda () e energia (E) Modelo matemtico h= constante de Planck (6,63 10-34 Js)

hc E=h=

c= veloc. luz no vcuo (2,99 108 ms-1)

E inversamente proporcional ao

Na espectrofotometria os mximos de absoro so a principal diferena que se observa no espectro de substncias diferentes:
fenmeno menos energtico

Espectro obtido para o -caroteno

Espectro obtido para Ag

coloidal

O que faz a absoro da luz ser diferente ?

As substncias absorverem radiao por causa dos Grupos Cromforos Cromforos

Grupos cromforos: So grupos funcionais que apresentam absoro caracterstica na regio do ultraultra-violeta ou do visvel Ex: Carboxila (- COOH): 200 210 nm Ex: COOH):

Absorve em vrios comprimentos de onda diferentes (vrios grupos funcionais)

As substncias absorverem radiao por causa dos Grupos Cromforos

Outros grupos cromforos: Carboxila (- COOH): 200 210 nm (Aldedo (-CHO): 210; 280 300 (Amino (-NH2): 195 Brometo (-Br): 208 (-Br): Dissulfeto (-S-S-): 194; 255 ster (-COOR): 205 (ter (-O-): 185 (Nitro (-NO2): 210 (Nitroso (-NO): 302 (Tiocarbonila (=C=S-): 205 (=C=STioeter (-S-): 194; 215 Tiol (-SH): 195 (-

Substncias diferentes Diferentes grupos funcionais

As substncias absorverem radiao por causa dos Grupos Cromforos

Processo de absoro da radiao: diferentes tipos de transies eletrnicas Cada transio eletrnica vem acompanhada de uma transio rotacional e vibracional Espectros na forma de banda

Nveis de energia vibracional

Nveis de energia eletrnicos

As substncias absorverem radiao por causa dos Grupos Cromforos Exemplificando as diferenas entre as substncias: substncias:
Composto CH4 CH3Cl CH2=CH2 Me2C=O H2C=CH-CH=CH2 Orbitais envolvidos na transio eletrnica n n * * * * * * * * mx (nm) 122 173 162 185 277 180 200 255

Essas transies eletrnicas ocorrem entre nveis de energia que diferem de 10 a 100x em energia

As substncias absorverem radiao por causa dos Grupos Cromforos

Processo de absoro da radiao envolvem: Transies eletrnicas (UV-Vis) (UV-Vis) Transies vibracionais (Infravermelho mdio e prximo) (Infravermelho prximo)

Envolvem diferenas energticas menores

Cada nvel de ENERGIA VIBRACIONAL (en): (e Subnveis de ENERGIA ROTACIONAL

Envolvem diferenas energticas ainda menores

ENTRETANTO tomos no estado gasoso tambm podem absorver radio no UV-Vis UVExemplos de medidas ESPECTROSCPICAS

EspectroMETRIA EspectroMETRIA ATMICA

EspectroFOTOMETRIA EspectroFOTOMETRIA MOLECULAR

ENTRETANTO tomos no estado gasoso tambm podem absorver radio no UV-Vis UVRepresentao das transies eletrnicas que podem ocorrer no tomo de sdio

NaCl

Representao genrica para os eltrons que sofrem transies em medidas espectroscpicas:

NA PRTICA, a regio do UV-Vis importante para a UVespectrofotometria no UV-Vis vai de 180 a 780 nm UV-

PARA CASA
1) Explicar porque os espectros abaixo apresentam perfis diferentes, considerando que os espectros de absoro moleculares so geralmente bandas e no picos estreitos.

O processo de absoro da luz no laboratrio

1 etapa: etapa: excitao eletrnica da molcula M M + hv M*

2 etapa: etapa: relaxao M* M* M* M + calor M + M (fotodecomposio) fotodecomposio) M + hv hv (luminescncia)

Caracterstica dos processos de absoro na regio do visvel

A cor de uma espcie em soluo a cor complementar quela do comprimento de onda que absorve: Soluo verde-amarelada absorve violeta verdeamarela violetavioleta-azul laranja azul vermelha azulazul-verde prpura verde violeta verde-amarelo verdevioletavioleta-azulado amarelo azul laranja azulazul-esverdeado vermelho verde prpura

A regio que contem o de mxima absoro de uma espcie de interesse pode ser prevista se a soluo da amostra for colorida...

Medida de absoro e anlise quantitativa

Medidas de absoro (A):

- Obtidas a partir de medidas de transmitncia (T) - Quanto maior a transmitncia, menor a absorbncia

A= - log T= log P0/P

A absorbncia aumenta com a conc. da espcie absorvedora - depende da substncia (absortividade molar) - depende do espao fsico ocupado pela amostra (caminho ptico)

Medida de absoro e anlise quantitativa

Representao grfica para solues de KMnO4 em = 545 nm e um caminho ptico de 1 cm. a) Em %Transmitncia versus c %Transmitncia a) b) Em Absorbncia versus c

Relao entre absoro e concentrao = ANLISE QUMICA (Lei de Lambert-Beer) Lambert-Beer)

Johann Heinrich Lambert (1728 1777) observou que 1777) a intensidade da luz transmitida por um meio absorvedor era proporcional espessura do meio pelo qual a luz passava

August Beer (1825 1863) observou que a intensidade da 1863) luz transmitida por um meio absorvedor era proporcional concentrao da espcie absorvedora

Relao entre absoro e concentrao = ANLISE QUMICA (Lei de Lambert-Beer) Lambert-Beer)

A

A=abC
a= absortividade molar (: L mol -1cm-1) ( b= caminho ptico (cm) C= concentrao em (mol L-1)
=ab Concentrao Relao linear entre A e Conc. se as medidas so feitas em condio de caminho ptico constante

APLICAES DA equao da reta: A = C - Concentraes desconhecidas - OU determinar o valor de a para se obter o de

Determinao da Concentrao
1) PREPARAR PADRES DE CALIBRAO TCNICA INSTRUMENTAL

PADRES: PADRES: Solues semelhante soluo de amostra com concentrao conhecida da espcie de interesse (ANALITO) (ANALITO)

AMOSTRA ou SOLUO DE AMOSTRA ? Geralmente a amostra analisada na forma de uma soluo aquosa Ex: Determinao de Fe3+ em tecido animal Ex:

amostra laboratorial

preparo (ou tratamento) da amostra

soluo de amostra

Determinao da Concentrao
2) Calcular os limites de deteco (LD) e de quantificao: Menor quantidade que pode ser detectada com razovel certeza para um dado procedimento analtico (IUPAC) y = ybco + 3xSdbco em termos de sinal LD = (Cbco + 3xSdbco)/S em termos concentrao (C LQ = (Cbco + 10xSdbco)/S em termos concentrao (C
LD = limite de deteco LQ = limite de quantificao (o INMETRO recomenda usar o primeiro ponto da curva analtica de calibrao) y = menor sinal medido ybco = sinal do branco Cbco = concentrao do branco (considerado = zero) Sdbco = desvio padro do branco (n= 10 no mnimo) S = Sensibilidade do mtodo (coef. angular da curva analtica ()) (coef. (

Determinando a Concentrao de Misturas (Dois analitos: M e N: ADITIVIDADE DA LEI DE BEER) analitos:

A
A

s devem ser conhecidos em todos os comp. onda ( e ) (

Considerar as espcies independemente (no existe interao)

A = M . b . cM + N . b . cN A = M . b . cM + N . b . cN

Resultado

clculos matemticos (resoluo de sistemas ou Quimiometria) Quimiometria)

OUTROS ASPECTOS DA LEI DE LAMBERT-BEER LAMBERTVlida para: para:

- Solues diludas (C < 0,01 mol L-1) - Radiao monocromtica - Meio homognio e estvel

Todas as medidas (padres e amostras) : celas o mais parecidas possveis Para compensar perdas de potncia da radiao incidente por reflexo e espalhamento

Desvios da Lei de Lambert-Beer ... Lambert1) Interaes entre os centros absorvedores e instabilidade qumica DESVIO REAL DA LEI DE BEER
Ex de instabilidade qumica: qumica: equilbrio entre os nions dicromato e cromato

Cr2O72- + H2O
350 nm

2H+ + 2CrO42CrO
373 nm

Espcies que podem participar de equilbrio qumico em soluo devem ser analisadas em um meio onde apenas uma espcie predomine

PARA CASA
2) Suponha que a anlise de um frmaco deva ser feita em triplicata, por um mtodo espectrofotomtrico e que a espcie absorvedora apresenta um mximo de absorbncia que varia com o pH da soluo de amostra. Descreva, resumidamente, Descreva, como essa anlise deveria ser feita, considerando desde o preparo da amostra at a obteno do resultado final.

Desvios da Lei de Lambert-Beer Lambert2) Influncia de erros instrumentais ( inadequado, radiao policromtica ou espria) DESVIO APARENTE Ex de erro instrumental: instrumental:

II

I I II

Comprimento de onda

Concentrao

Instrumentao (ESPECTROFOTOMETRIA = TCNICA INSTRUMENTAL)

FOTMETROS (COLORMETROS) ESPECTROFOTMETROS

Visvel -Filtros pticos (380 780 nm) nm)

UltraUltra-violeta e visvel - Monocromadores (200 1000 nm) nm)

Componentes bsicos (duas configuraes: a e b):

Seletor de Comprimento de Onda Detector h Fotomtrico Processador 0.102 UA

Fonte de Luz

Amostra

Fonte de Luz

Seletor de Comprimento de Onda

Detector h Amostra h Fotomtrico

Processador 0.102 UA

Instrumentao 1) FONTE DE LUZ

REGIO DO ULTRA-VIOLETA ULTRA200 nm 390 nm

REGIO DO VISVEL 800 nm

Lmpadas de Deutrio Lmpadas de filamento de Tungstnio Lmpadas de Hidrognio 320 2500 nm podem ser halgenas (W-I2) 160 375 nm - maior durabilidade LEDs (diodos emissores de luz)

Lmpadas de Xennio

FONTE DE LUZ Emisses, por comprimento de onda, das principais lmpadas para espectrofotometria

Instrumentao 2) SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA

Isolar faixas estreitas de comprimentos de onda Diferentes dispositivos complexidade e largura da faixa de - Filtros - Monocromadores

FILTROS:

- Constitudos por uma ou mais substncias - Isola bandas com no mn. 50 nm de largura - Usado na regio do visvel - Baixo custo

Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA FILTROS:

Fluoreto de clcio ou magnsio

Constitudo por vrias camadas Dieltrico com espessura de mesma ordem do desejado - Passa apenas 1 e seus mltiplos - Isola bandas com at 10 nm de largura - Pode ser usado tanto no UV como no visvel - Custo maior que o filtro de absoro t= espessura do dieltrico = ndice de refrao n= ordem de interferncia

Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA

FILTROS os de interferncia so mais eficientes: (larguras a meia altura)

Filtros servem para faixas especficas de Monocromadores: isolam bandas estreitas ao longo do espectro - Mais versteis - Custo mais elevado que os filtros

Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA MONOCROMADORES: PRISMAS E REDES (GRADES) DE DIFRAO

Diferenas entre os ndices de refrao

Fenmeno da interferncia n = d(sen i + d sen r) d(sen 300 2000 ranhuras ngulo de incidncia

FORMA DE USO 1) Prisma (instrumentos mais antigos) 2) Grade (custo menor, espectrofotmetros mais compactos)

Instrumentao
SELETOR DE COMPRIMENTOS DE ONDA MONOCROMADORES: PRISMAS E REDES (GRADES) DE DIFRAO Dependendo dos demais componentes pticos: largura de banda de 1 20 nm POSICIONAMENTO DA FENDA DE SADA Isolar o comprimento de onda separado Ex: Ex:

Monocromador de Czerny-Turner

Instrumentao 3) COMPARTIMENTO (OU SUPORTE) DA AMOSTRA

CELAS OU CUBETAS DE QUARTZO (UV-Vis) UV-Vis) CELAS OU CUBETAS DE VIDRO (Vis) CELAS OU CUBETAS DE ACRLICO (Vis)
face para manipulao

FACES PLANAS E PERPENDICULARES RADIAO INCIDENTE CILNDRICAS menor custo mas que conferem menor repetibilidade
CAMINHOS PTICOS VARIVEIS mais comum: 1 cm LIMPEZA: 1- gua e detergente diludo 2- enxague com gua purificada e, depois, com a prpria amostra

Instrumentao 4) DETECTORES (TRANSDUTORES) DE SINAL

CONVERSO DA RADIAO EM SINAL ELTRICO
- Intensidade da corrente proporcional intensidade da radiao - Fototubos, fotomultiplicadoras e semicondutores de silcio Fototubos,
Juno pn

eCatodo

Anodo Feixe de Ftons Amplificador

+ +

+ +

_ _ _

R
+ _ _ p n

90 V DC +
+

Fototubo < Sensibilidade que os semicondutores < Fotomultiplicadora

Instrumentao
DETECTORES (TRANSDUTORES) DE SINAL

Espectrofotmetro com arranjo linear de diodos

Instrumentao
O FEIXE DE RADIAO UTILIZADO PARA A MEDIDA DO BRANCO E DA AMOSTRA DEVEM TER A MESMA INTENSIDADE

INSTRUMENTOS FEIXE NICO E DUPLO FEIXE FEIXE NICO DUPLO FEIXE

cela do solvente %T a. fotmetro de feixe nico lmpada de tungstnio

ajuste 100% T

filtro

espelho semi-prateado

detector

cela do solvente detector %T detector de zero

b. Fotmetro de feixe duplo

ESPECTROFOTOMETRIA NO UV-Vis UVCONSIDERAES GERAIS

Instrumentos atuais operam em transmitncia ou absorbncia Quando so utilizados outros solventes alm de gua os mesmos devem ser de grau espectroscpio e inerte no meio Anlises de rotina: utilizar sistema de anlise por injeo em fluxo (FIA) Pequenas quantidades de amostras e reagentes = Menor custo e gerao de resduos Maior preciso (repetibilidade) e velocidade analtica (repetibilidade) Pode ser combinada com outras tcnicas analticas, instrumentais ou no, geralmente como ferramenta de deteco Pode ser utilizada em anlises no quantitativas e diretamente sobre slidos (reflectncia difusa em produtos acabados)

ESPECTROFOTOMETRIA NO UV-Vis UV-

ANLISE DE SLIDOS POR REFLECTNCIA DIFUSA NA REGIO DO UV-Vis UV- Utilizada para materiais opacos Papis Plsticos Pigmentos para tintas Filmes polimricos Medicamentos Alimentos (leite em p) ... - Princpio: a radiao no absorvida refletida e detectada na forma de um espectro - Equipamentos de laboratrio e portteis

REFLECTNCIA DIFUSA Aplicaes importantes no setor parmetros de qualidade:

de tintas para determinao de

DETERMINAO DE OUTROS PARMETROS: - ndice de brancura e amarelamento: ASTM E-313-73 E-313- ndice de brancura: ASTM E-313-CIE modification E-313- ndice de brancura: ASTM D-1925 D- ndice de amarelamento: ASTM E-313-98 E-313-

REFLECTNCIA DIFUSA Tipos de equipamentos Portteis De bancada

Anlise de materiais/ produtos acabados Anlise quantitativas tambm so possveis a partir de calibrao

PARA CASA
3) Ao desenhar a curva analtica de um mtodo espectrofotomtrico o analista atribuiu ao branco (reagentes utilizados em gua) o valor de transmisso 100%. Voc concorda com esta atribuio? Justifique.

4) Em termos de configurao instrumental, comente sobre as vantagens de se utilizar um espectrofotmetro com um detector do tipo arranjo de diodos.

Bibliografia utilizada
Principles of Instrumental Analysis Analysis DA Skoog, FL Holler, TA Nieman; 5th ed., 1998 Anlise Instrumental F Cienfuegos, D Vaitsman; 2000 Vogel - Anlise Qumica Quantitativa GH Jeffrey e col., 6a ed., Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2002 Anlise Qumica Quantitativa D. Harris; 7a ed., 2008 Tutoriais de fabricantes de espectrofotmetros Slides didticos fornecidos pelo Prof. Dr. Jlio C. J. Silva (UFJF) Figuras da Apostila didtica da disciplina QA 581, do IQ - Unicamp