INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR EN EL ESTADO DE CAMPECHE Bioquimica I , tercer semestre periodo septiembre 2009 a enero de 2010 Prctica de laboratorio

no.. 2. Identificacin o reconocimientos de glcidos reductores mediante la prueba de Fehling. Los que vamos a analizar son: glucosa, lactosa , sacarosa y almidn. Objetivo Que el alumno conozca comprenda y pueda identificar glcidos y la hidrlisis de del enlace de un disacrido Introduccin Los glcidos, tambin conocidos como azcares, sacridos, carbohidratos o hidratos de carbono, constituyen el grupo de biomolculas ms abundantes sobre la superficie terrestre y representan los principales componentes de tipo energtico-nutricional. Estas molculas responden a la composicin genrica Cn (H2O)n, con una relacin entre H y O que le ha valido el trmino de carbohidrato. Desde el punto de vista qumico, los glcidos son polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas, esto es, alcoholes polivalentes (polialcoholes) que contienen un grupo carbonilo aldehdico (si lo porta el carbono del extremo) o cetnico (si lo porta un carbono interno). Entre las propiedades fsicas destaca la de su poder edulcorante y el desviar, como despus analizaremos, la luz polarizada en el seno de las soluciones. Los monosacridos y la mayora de los disacridos poseen poder reductor, que deben al grupo carbonilo que tienen en su molcula. Este carcter reductor puede ponerse de manifiesto por medio de una reaccin redox llevada a cabo entre ellos y el sulfato de Cobre (II). Las soluciones de esta sal tienen color azul. Tras la reaccin con el glcidos reductor se forma xido de Cobre (I) de color rojo. De este modo, el cambio de color indica que se ha producido la citada reaccin y que, por lo tanto, el glcidos presente es reductor. Sus funciones biolgicas principales son: * Reserva energtica: hgado, musculatura... * Papel estructural o plstica en el mundo vegetal y animal * Fuente inmediata de energa para la inmensa mayora de las clulas * Suministradores de tomos para formar otras molculas en rutas anapletricas

1. Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solucin de glucosa, maltosa, lactosa fructosa o sacarosa (segn indique el profesor). 2. Aadir 1ml de solucin de Fehling A (contiene CuSO4) y 1ml de Fehling B (lleva NaOH para alcalinizar el medio y permitir la reaccin)

3. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan. 4. La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo y ser negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso. 5. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prcticas con las distintas muestras de glcidos

Materiales y mtodos: Materiales biolgicos para muestras de glcidos Pasta cocidas, arroz, Leches , leche con chocolate Frutas. Manzana, pltano, naranjas o mandarinas Jugos de naranja de caja Harina Papa, camote 1. Reaccin de Fehling: o Tomar la muestra que se quiera analizar (normalmente una cantidad de 3 cc.) o Aadir 1 cc. de Fehling A y 1 cc. de Fehling B. El lquido del tubo de ensayo adquirir un fuerte color azul. o Calentar el tubo al bao Mara o directamente en un mechero de Laboratorio. o La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojoladrillo. o La reaccin ser negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso.

Fundamento: Se basa en el carcter reductor de los monosacridos y de la mayora de los disacridos (excepto la sacarosa). Si el glcido que se investiga es reductor, se oxidar dando lugar a la reduccin del sulfato de cobre (II), de color azul, a xido de cobre (I), de color rojoanaranjado.

2. Reaccin del Lugol: Este mtodo se usa para identificar polisacridos. El almidn en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color azul-violeta caracterstico. o Poner en un tubo de ensayo unos 3 cc. del glcido a investigar. o Aadir unas gotas de lugol. o Si la disolucin del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reaccin es positiva.

Fundamento: La coloracin producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molcula de almidn. No es por tanto, una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la coloracin azul violeta. Basndote en esta caracterstica te voy a proponer un pequeo juego de magia que te va a sorprender:

Una vez que tengas el tubo de ensayo con el almidn y el lugol, que te habr dado una coloracin violeta, calienta el tubo a la llama y djalo enfriar. !Sorprendido!. Vuelve a calentar y enfriar cuantas veces quieras.... ? Dnde est el color?.

Poner las muestras de glcidos en los tubos de ensayo. Pueden prepararse soluciones al 1% aproximadamente. Figura 1. Realizar la Prueba de Fehling como se indica al principio de pgina. Figura 2. Despus de calentar observar los resultados. Figura 3. Estos resultados nos indican que los azcares: glucosa, maltosa y lactosa tienen carcter reductor.

Figura 2 Figura 1

Figura 3

Como se vea en la experiencia 1 la sacarosa daba la reaccin de Fehling negativa,(Figura 4)por no presentar grupos hemiacetlicos libres. Ahora bien, en presencia del cido clorhdrico (HCl)y en caliente, la sacarosa se hidroliza descomponindose en los dos monosacridos que la forman (glucosa y fructosa). Tcnica: Tomar una muestra de sacarosa y aadir unas 10 gotas de cido clorhdrico al 10%. Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos. Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling. Observa el resultado (Figura 5). La reaccin positiva nos dice que hemos conseguido romper el enlace Oglucosdico de la sacarosa. ( Se recomienda antes de aplicar la reaccin de Fehling, neutralizar con bicarbonato, Fehling sale mejor en un medio que no sea cido.)

Figura 4

Figura 5

El polisacrido almidn se colorea de azul-violeta en presencia de yodo, debido no a una reaccin qumica, sino a la fijacin del yodo en la superficie de la molcula del almidn, fijacin que slo tiene lugar en fro.

Figura 6 Figura 7 Tcnica:

Colocar en una gradilla muestras de distintos glcidos. Figura 6 Aadir 5 gotas de Lugol en cada uno de los tubos de ensayo. Observar los resultados. Figura 7.

Cuestionario:

1- explicar para cada tipo de glcidos que reaccin se lleva a cabo 2. por que los disacridos no dan pruebas reductoras positivas? 3. todos los glcidos son dulces? 4. Todos los azucares son fciles de metabolizar? 5. El almidn se reduce si es si y por que? Bibliografia Muoz E (1988): Propiedades qumicas de los azcares. En Lozano JA, Tudela J (eds): Prcticas de bioqumica. Experimentacin y Simulacin, 1 Ed. Editorial Sntesis (Madrid, Espaa), pp. 65 70. McKee T, Mckee JR (2003): Hidratos de carbono. En Mckee T, McKee JR (eds): Bioqumica. La base molecular de la vida, 3 Ed. Editorial McGraw-Hill Interamericana (Madrid, Espaa), pp. 200 233.