BENMERITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA VICERRECTORA DE DOCENCIA DIRECCIN GENERALDE EDUCACIN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS

LICENCIATURA EN FARMACIA REA: FARMACIA

ASIGNATURA: LABORATORIO DE BIOFARMACIA

CDIGO: FARM-205 L ELABORADO POR: Benjamn Sandoval Guzmn Flix Luna Morales Isabel Martnez Garca I. Daniel Limn Prez de Len

FEBRERO 2009
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PRACTICAS DE BIOFARMACIA. PRACTICA 1 VOLUMETRIA Y GAVIMETRIA. Objetivo evaluar la precisin y exactitud del proceso de medicin de volmenes por medio del empleo de las pipetas automticas, graduadas y volumtricas. Conocimientos previos para efectuar la prctica: Precisin, exactitud MATERIAL Y REACTIVOS. Pipeta automtica de 1000l. Pipeta graduada 5 ml Pipeta volumtrica 5 ml Pipeta volumtrica de 1 ml Pipeta volumtrica de 3 ml Balanza analtica 2 Vasos de precipitados de 50 ml 2 tubos de ensayo PROCEDIMIENTO: 1. Calibrar la balanza analtica 2. Colocar en un vaso de precipitado un tubo de ensayo vaco colocarlos en la balanza analtica y tararlo. 3. Con las pipetas volumtricas: de 5 ml aforar y agregar al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces ms..Hacer lo anterior 3 veces 4. Con las pipetas volumtricas: de 3 ml aforar y agregar al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces ms. Hacer lo anterior 3 veces 5. Con las pipetas volumtricas: de 1 ml aforar y agregar al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces ms. Hacer lo anterior 3 veces 6. Con la pipeta graduada: de 5 ml; agregar 1ml al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces mas. Hacer lo anterior 3 veces mas. 7. Con la pipeta graduada: de 5 ml; agregar 3ml al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces mas. Hacer lo anterior 3 veces mas.

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8. Con la pipeta graduada: de 5 ml aforar y agregar 5 ml al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces ms. Hacer lo anterior 3 veces mas. 9. Con la pipeta automtica de 1000l:agregar 1000l al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces ms. Hacer lo anterior 3 veces mas 10. Con la pipeta automtica de 5000l, ajustar a 3000l y aadirlos al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces ms. Hacer lo anterior 3 veces mas 11. Con la pipeta automtica de 5000l:agregar 5000l al tubo de ensayo dentro del vaso de precipitado dentro de la balanza analtica, registrar su peso y repetir el procedimiento 5 veces ms. Hacer lo anterior 3 veces mas RESULTADOS Una vez que se tienen todos los datos se grafican volumen (x) contra peso (y) para cada una de las pipetas usadas. De los datos se obtiene coeficiente de variacin el coeficiente de relacin, la media, la moda y la desviacin estndar para cada pipeta. CONCLUSION: Sobre la base de los resultados estadsticos, que tipo de pipetas recomienda

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LABORATORIO DE BIOFARMACIA. PRACTICA 2 CURVA DE CALIBRACIN Objetivo. Desarrollar una curva de calibracin, basados en las caractersticas de absorcin a la luz ultravioleta de un frmaco. Conocimientos previos a la prctica. 1.- Caractersticas fsicas y qumicas del acetaminofen 2.- Uso de la ley deLambert- Beer MATERIAL Y REACTIVOS Pipeta graduada 5 ml (por persona) Pipeta volumtrica 5 ml (por persona) Balanza analtica 2 Vasos de precipitados de 50 ml (por persona) 11 tubos de ensayo (por persona) Matraz aforado de 250 ml (por persona) Fosfato dibsico de potasio Fosfato monobsico de potasio PROCEDIMENTO: 1. Preparar 250 ml de medio de disolucin (cido clorhdrico 0.1 N, buffer fosfatos pH 3.5 y 6.5) 2. Hacer 10 ml de una solucin patrn de acetaminofen con una concentracin de 300g/ml, en cada uno de los medios de disolucin 3. Con esa solucin madre tomar 5ml y agregarles 5ml del medio de disolucin (dilucin de 1:2) y agregarle al tubo 1. 4. Del tubo 1 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml del medio de disolucin de agua (tubo 2) 5. Del tubo 2 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml del medio de disolucin de agua (tubo 3) 6. Del tubo 3 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml del medio de disolucin de agua (tubo 4) 7. Del tubo 4 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml del medio de disolucin de agua (tubo 5) 8. Del tubo 5 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml del medio de disolucin de agua (tubo 6) 9. Del tubo 6 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml del medio de disolucin de agua (tubo 7) 10. Del tubo 7 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml del medio de disolucin de agua (tubo 8) 11. Del tubo 8 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml de agua (tubo 9) 12. Del tubo 9 tomar 5ml y colocarlo en otro tubo al cual se le van agregar 5ml de agua (tubo 10) 13. A cada tubo se mide su absorbancia a 250 nm utilizando el uv y el software de Quantitatyve Anlisis 14. Obtener la curva de calibracin y observar que el coeficiente de relacin (r) sea mayor a 0.96 si no es mayor se deber de repetir la prctica hasta que salga bien.
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RESULTADOS Una vez que se tienen todos los datos se grafican concentracin (x) contra absorbancia (y) y se efecta anlisis de regresin lineal a los datos, obtenindose: pendiente ,intercepto y el coeficiente de regresin lineal. CONCLUSIN: Sobre la base de los resultados obtenidos, la curva de calibracin es confiable para extrapolar valor de absorcin encontrados en muestras

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LABORATORIO DE BIOFARMACIA. PRACTICA 3 DISOLUCIN DISOLUCIN DE TABLETAS DE ACETAMINOFEN INTRODUCCIN Investigar la prueba de disolucin de acetaminofen (no ms de una cuartilla). MATERIAL Y REACTIVOS Disolutor de paletas Vaso de precipitados de 1 litro (por equipo) Marcas diferentes de tabletas de acetaminofen 2 jeringas de 5ml (por equipo) Papel filtro Fosfato dibsico de potasio Fosfato monobsico de potasio Acido clorhdrico Acetaminofen PROCEDIMIENTO: 1. preparar 1 litro de medio de disolucin (cido clorhdrico 0.1 N, buffer fosfatos pH 3.5 y 6.5) 2. agregar 900 ml del medio de disolucin al vaso del disolutor y prender el bao mara esperar a que el medio este a 37grados. 3. agregar la tableta de acetaminofen prender el equipo a 50rpm 4. esperar 3 minutos para la primera toma de muestra (5ml) mientras que al mismo tiempo con la otra jeringa se agregan 5ml de medio fresco esto es para mantener el volumen constante. 5. as sucesivamente se toman las muestras durante 30 minutos (en total son 10 muestras) 6. despus a estas muestras hay que diluirlas 1:10. 7. leer al uv a 254nm ocupando el software de fixed para medir su absorbancia de cada muestra 8. una vez que se tiene la absorbancia de cada muestra se traslapa a la curva de calibracin construida en la practica 2 y se deber obtener la concentracin grficamente y matemticamente ocupando la ecuacin de lnea recta y=mx+b para esto ya tenemos los datos de pendiente e intercepto de nuestra curva de calibracin. RESULTADOS Teniendo las concentraciones de cada muestra se hace la siguiente tabla por tableta tiempo Concentracin de la curva de calibracin mcg/ml 3 30 4.5 mcg/ml 45 mcg/ml Concentracin despus de multiplicar por el factor de dilucin 10 tubo 45 mcg/ml 450 mcg Concentracin despus de multiplicar por el factor de dilucin 900 vaso 40500 mcg 405 000 mcg Concentracin total mg

40.5 mcg 405 mg

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En concentracin total colocar la primera concentracin ms la segunda y en la siguiente fila la segunda ms la tercera y as sucesivamente el valor final deber ser aproximado a la cantidad reportada en cada tableta. De los cuadros para cada tableta comparar los perfiles de disolucin y si cumplen o no con la norma de disolucin vista en clase (Q).

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LABORATORIO DE BIOFARMACIA. PRACTICA 4 INTESTINO INVERTIDO Objetivo Empleando la tcnica del intestino invertido evaluar la permeacin de una solucin de acetaminofen. Conocimientos necesarios: teora pH-particin, difusin pasiva MATERIAL Y REACTIVOS Pipeta graduada 5 ml (por equipo) Pipeta volumtrica 5 ml (por equipo) Balanza analtica 2 Vasos de precipitados de 50 ml (por equipo) 11 tubos de ensayo (por equipo) Matraz aforado de 250 ml (1 por equipo) Fosfato dibsico de sodio Fosfato monobsico de sodio Probetas de 25 ml (1 por equipo) Acetonitrilo Grado HPLC Tetrahidrofurano Grado HPLC Fosfato dibsico de potasio Fosfato monobsico de potasio Hidrxido de sodio lentejas Acetona grado analtico. Solucin glucosada al 50% cido perclrico PROCEDIMIENTO: Lavar perfectamente el material de vidrio y secar con acetona. 1. 2. 3. 4. 5. Preparar 100 ml de medio de disolucin (cido clorhdrico 0.10 N). Preparar 100 ml de medio de disolucin (buffer de fosfatos pH 6) Preparar 100 ml de medio de disolucin (buffer de fosfatos pH 3.5) Preparar 50 ml de una solucin de acetaminofen 300 mcg/ml en los medios de disolucin manteniendo a 37 C. Desnucar al conejo y obtener una seccin de intestino delgado de 10 cm de largo aproximadamente, lavarlo bien con agua destilada para retirar el excremento cuidando de no frotar demasiado el intestino, voltearlo quedando la luz del intestino en la parte exterior. Lavar el intestino con solucin glucosada Cerrar un extremo del intestino sujetndolo a un tornillo pesado y el otro extremo sujetarlo bien a una punta de pipeta conectada a la tapa de un tubo cnico falcn de 50 ml. Llenar el intestino con un volumen aproximado de 10ml de medio de disolucin sin frmaco e introducir en la probeta que contendr 20 ml de medio de disolucin con frmaco. Esperar 2 minutos y obtener la primera muestra de 4 ml aprox. con una aguja intravertebral cuidando de no perforar el intestino y de reponer el volumen con medio sin frmaco. Tomar 7 muestras ya que el intestino comienza a degenerar a los 20 min. despus de cortado. Filtrar las muestras
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6. 7. 8. 9. 10. 11.

12. Leer al espectrofotmetro a 254nm ocupando el software de fixed para medir su absorbancia de cada muestra 13. Teniendo la absorbancia de cada muestra se traslapa a la curva de calibracin construida en la practica 2 y se deber obtener la concentracin grficamente y matemticamente ocupando la ecuacin de lnea recta y= mx+b para esto ya tenemos los datos de pendiente e intercepto de nuestra curva de calibracin. 14. Preparar una curva patrn e inyectarla al HPLC, la fase mvil estar compuesta de 43% Acetonitrilo, 2% Tetrahidrofurano y 55 Buffer fosfatos 0.01 M, leer a 278 nm 15. Precipitar protenas con una solucin de cido perclrico al 10%, cenntrifugar a 3000 rpm durante 3 min, pasar la fase acuosa a un tubo 16.- Efectuar la extraccin de la muestras por medio de una mezcla de Cloroformo/alcohol isopropilico 95/5, y Cloroformo/Diclorometano 95/5, 17. Efectuar las inyecciones de las muestras e interpolar en la curva patrn RESULTADOS Una vez que se tienen todos los datos se grafican concentracin (x) contra absorbancia (y).De los datos se obtiene coeficiente de variacin el coeficiente de relacin, la media, y la desviacin estndar. Comparar los resultados de los 3 medios de disolucin de la sulfametazina, por medio de las graficas de cantidad acumulada permeada vs tiempo. Comparar los resultados con los obtenidos al cuantificar las muestras por medio de HPLC CONCLUSIN: Los datos obtenidos en la prctica justifican la teora pH-particin, de ser as demustrelo

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LABORATORIO DE BIOFARMACIA. PRACTICA 5 LIGAMIENTO A PROTENAS PLASMTICAS Objetivo. Evaluar el proceso de ligamiento de un frmaco a albumina MATERIAL Y REACTIVOS 3 Pipetas volumtricas 1 ml (por equipo) Balanza analtica 3 Vasos de precipitados de 50 ml (por equipo) 11 tubos de ensayo (por equipo) Matraz aforado de 250 ml (1 por equipo) Fosfato dibsico de sodio Fosfato monobsico de sodio Probetas de 25 ml (1 por equipo) Acetonitrilo Fosfato dibsico de potasio Fosfato monobsico de potasio Hidrxido de sodio lentejas Acetona grado analtico. cido perclrico Dexametasona 21-acetato Metilprednisolona Acetona Alcohol etlico Fenitona o Difenilhidantona PROCEDIMIENTO: Lavar perfectamente el material de vidrio y secar con una mezcla acetona/alcohol etlico 1. Preparar 1 L de una solucin de albmina al 4%, agitar suavemente 2. Agregar 200 L de una solucin de metilprednisolona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 3. Agregar 200 L de una solucin de fenitona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 4. Agregar 200 L de una solucin de Dexametasona 21 acetato (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 5. Agregar 100 L de una solucin de metilprednisolona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 6. Agregar 100 L de una solucin de fenitona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 7. Agregar 100 L de una solucin de Dexametasona 21 acetato (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 8. Agregar 50 L de una solucin de metilprednisolona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C

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9. Agregar 50 L de una solucin de fenitona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 10. Agregar 50 L de una solucin de Dexametasona 21 acetato (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 11. Agregar 25 L de una solucin de metilprednisolona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 12. Agregar 25 L de una solucin de fenitona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 13. Agregar 25 L de una solucin de Dexametasona 21 acetato (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 14. Agregar 10 L de una solucin de metilprednisolona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 15. Agregar 10 L de una solucin de fenitona (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 16. Agregar 10 L de una solucin de Dexametasona 21 acetato (200 mcgr/ml) en un vaso que contenga 25 ml de la solucin de albmina al 4%, calentar a 37 durante 20 min C 17 En cada caso Tomar 1ml y pasarlo por una membrana de 0.45 , aadir 2 ml de agua HPLC 18 Preparar una curva patrn de cada uno e los frmacos empleando concentraciones desde 2 a 150 mcgr/ml Resultados 1.- Extrapolando los datos de ligamiento en cada una de las curvas patrn determinar las concentraciones libres, para cada frmaco. 2.- A partir de los datos de cada frmaco libre determinar el % ligado 3.- Graficar para cada frmaco las diferentes formas de expresin de datos de ligamiento, con el objeto de determinar el nmero de clases de sitios de ligamiento, el numero de cada uno de ellos , la constante de ligamiento al sitio.

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