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DETERMINACIN Y VALIDACIN DE UN VALOR DE CORTE EN UN MTODO DESARROLLADO PARA
LA CONFIRMACIN DE INTOXICACIONES POR INGESTA DE FOSFURO DE ALUMINIO


C. Roque
1



1
Laboratorios Criminalsticos y de Ciencias Forenses, Direccin de Medicina Forense. Edif. Martnez Boqun, barrio
Guacerique. Tegucigalpa, Honduras. C.A. E-mail: ugc.lccf@hotmail.com


REA TEMTICA. REQUISITOS TCNICOS


RESUMEN. La determinacin de fosfuro de aluminio en
especmenes biolgicos es un ensayo de alta demanda en el
campo forense de Honduras. Para cubrir esta necesidad, el
Laboratorio Qumico Toxicolgico desarroll un mtodo
de cuantificacin de aluminio elemental en contenido
gstrico por espectrofotometra de absorcin atmica
electrotrmica, bajo el supuesto de una diferencia
significativa entre los niveles de individuos que ingirieron
el fumigante y aquellos que murieron por otras causas. Para
lograr ese propsito se determin un lmite de referencia
realizando mediciones a 32 especmenes organizados en
tres conjuntos, identificados respectivamente como
verdaderos positivos, verdaderos negativos 1 y
verdaderos negativos 2. Se calcularon las
concentraciones utilizando un modelo de calibracin de
segundo orden estimado en condiciones de precisin entre
das, aplicando ajustes por efectos de matriz y de dilucin.
Partiendo de las mediciones y considerando sus fuentes de
variabilidad, se generaron de cada grupo poblaciones de
10000 valores probables, por medio de un modelo
estadstico de simulacin con la tcnica de Monte Carlo.
Con la poblacin simulada a partir de verdaderos
negativos 1 se estableci un lmite de corte que fue
evaluado con los grupos restantes. Se obtuvo
estadsticamente una sensitividad de 99,98 %, una
especificidad de 97,50% y una eficiencia del 98,74 %,
adems de unos ndices de falsos negativos y falsos
positivos apropiados. Se demostr por medio de ensayos y
aproximaciones probabilsticas que el lmite de corte es
eficaz y l mtodo desarrollado adecuado para su
propsito.

PALABRAS CLAVE. Cut-off, valor de corte, lmite de
deteccin, validacin, mtodos cualitativos.



1.- Introduccin

Debido a la alta incidencia de intoxicaciones por ingesta
de fosfuro de aluminio se hizo necesario desarrollar un
mtodo que fuera rpido, eficaz y resolutivo. Existen
mtodos de ensayos en fluidos biolgicos ampliamente
conocidos para identificar el ion fosfuro, entre los ms
comunes y accesibles estn los de coloracin, sin embargo
sus lmites de deteccin no siempre resultan satisfactorios
(Raina, Shrivastava, Mathur, & Dogra, 2004). Tambin se
ha propuesto la cromatografa de gases con deteccin
termoinica que es ms sensible y especfica (Musshoff,
Preuss, & Madea, 2008) aunque requiere de una
manipulacin preanaltica en extremo cuidadosa, y sin
embargo no est exento de falsos negativos y falsos
positivos, prevaleciendo los problemas con la recuperacin
debido a la volatilidad del analito y la posible la presencia
de interferentes desconocidos. En todo caso, el Laboratorio
Qumico Toxicolgico no cuenta con un detector
termoinico.
Consecuentemente, se decidi desarrollar un mtodo
propio. El mtodo desarrollado se fundamenta en una
confirmacin indirecta por medio de la cuantificacin de un
producto secundario de la reaccin entre el fosfuro de
aluminio y el cido clorhdrico del jugo gstrico. Cuando el
fosfuro de aluminio reacciona se transforma en fosfina
gaseosa, en tanto que el aluminio forma sales,
principalmente cloruros, las cuales permanecen en el saco
estomacal y son fcilmente recuperables en la recoleccin
del contenido gstrico. Se espera entonces que una ingesta
de fosfuro de aluminio produzca colateralmente un
incremento significativo de las concentraciones tpicas en
el contenido gstrico. Se trata entonces de un mtodo
cualitativo basado en mediciones, con el cual se clasifica
un espcimen como normal o como atpico en funcin
de su concentracin de aluminio. Esta distincin se logra
naturalmente por medio de un lmite de referencia
adecuado. Por tanto, adems de una evaluacin de los
parmetros de desempeo cuantitativos, la validacin del
mtodo exige una caracterizacin escrupulosa de
parmetros cualitativos, concretamente la evaluacin de la
probabilidad de falsos positivos y falsos negativos, as
como la sensibilidad, especificidad y eficiencia. Las
mediciones de aluminio en contenido gstrico por mltiples
razones conllevan una variabilidad grande, por lo que el
lmite de corte debe ubicarse en un punto tal que cumpla
los siguientes requisitos especificados:
-Se encuentre ampliamente por encima del lmite de
deteccin del mtodo y sea coherente con el lmite de
cuantificacin.
-Implique un riesgo de falsos negativos con una
probabilidad menor al 5 %.
-Implique un riesgo de falsos positivos con una
probabilidad menor al 5 %.
-Permita una sensitividad y especificidad mayores o
iguales al 90%, y una eficiencia no menor al 95%.
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Para determinar un valor de corte se requiere disponer de
un conjunto representativo de especmenes como
referentes, cuya procedencia est apropiadamente
documentada y la causa de muerte registrada sea
contundente. La factibilidad de reunir una cantidad
conveniente de especmenes postmortem es poca, as que
se aplic una simulacin de Monte Carlo que permiti
generar estadsticamente 30000 datos partiendo de un
conjunto de 32 muestras recolectadas durante las autopsias
que rutinariamente se practican. Se utilizaron 10000
valores para estimar el lmite de corte, calculndose de
ellos el lmite superior de un intervalo de confianza con una
significancia del 5 % como referente.
Las 20000 concentraciones simuladas a partir de 16
especmenes se organizaron en Tablas de contingencias,
segn cayeran a un lado u otro del valor de corte en prueba,
estableciendo cuatro categoras de resultados: verdaderos
positivos, falsos positivos (error tipo I), verdaderos
negativos y falsos negativos (error tipo II).


2.- Equipo y materiales

2.1 Equipo instrumental

-Espectrofotmetro de absorcin atmica, marca Varian,
modelo SpectrAA 200.
-Atomizador de horno de grafito, marca Varian, modelo
GTA 100.
-Agitador elctrico de alta velocidad, Vrtex, modelo
Genier, marca Fisher.
-Microcentrfuga, Abbot, Velocidad nica de 12500
rpm.

2.2 Equipo volumtrico

-Micropipeta, Eppendorf con rango operativo de (10
100) l.
-Pipeta volumtrica de 1 mL de capacidad, clase A.
-Matraces volumtricos de vidrio de 5 mL de capacidad,
Pyrex, clase A.
-Tubos para microcentrfuga de 1,5 ml, de polipropileno.
-Dilutor Repipet, de vidrio Pyrex, Teflon y resina
fluorocarbono.
-Beackers, probetas y otros contenedores, de polietileno o
polimetilpenteno.
El material de vidrio fue lavado con solucin de cido
ntrico al 50% previo a su uso. Los matraces se
mantuvieron permanentemente llenos con cido ntrico al
50%, y fueron lavados con abundante agua desionizada
antes de su uso.


2.3 Solventes y reactivos

-Agua destilada y desionizada.
-Solucin de cido clorhdrico 1% v/v y cido ctrico 50%
p/v: preparada con cido clorhdrico (ACS), cido ctrico
monohidrato (p.a.) y agua destilada y desionizada.
-Solucin de cido ntrico 1% v/v y cido ctrico 1% p/v:
preparada con cido ntrico (ultratrazas, TraceSelect),
marca Fluka, cido ctrico monohidrato (p.a.), marca
Fisher, y agua destilada y desionizada.
-Solucin de nitrato de magnesio 1 g/L, en cido ntrico.
-1%, grado ultratrazas, marca Fluka.

2.4 Materiales de referencia

-Solucin de cloruro de aluminio, 1,001 g/L en cido
clorhdrico, trazable con BAM
-Fosfuro de aluminio en formulacin comercial: Tabletas
de 3 gramos, CELPHOS 56 FT, con 56% de
ingrediente activo segn etiqueta.


3.- Seleccin y manipulacin de especmenes

Los especmenes fueron clasificados en dos grupos:
1. Verdaderos negativos (VN): especmenes cuya historia
mdico legal confirma que la causa de muerte fue ajena a
intoxicaciones por ingestin de fosfuro de aluminio. Estos
fueron subdivididos en:
-verdaderos negativos 1 (VN1) constituido por 16
especmenes; y
-verdaderos negativos 2 (VN2), constituido por 6
especmenes. De estos, 3 fueron acidificados adicionando
100 L de solucin de cido clorhdrico 3 M para evaluar
un efecto de especiacin, provocando la formacin de
cloruros de aluminio, ya que el pH de los contenidos
estomacales tiende a incrementar durante el
almacenamiento favoreciendo especies hidrxido.
2. Verdaderos positivos (VP): constituido por 4 muestras
provenientes de individuos cuya historia mdico legal
confirma la muerte fue por ingestin de tabletas de fosfuro
de aluminio y 6 muestras preparadas a partir de los
especmenes del grupo VN2, tomando una alcuota de cada
una y fortificndola con distintas cantidades de
formulacin de fosfuro de aluminio pulverizada y
homogenizada. La preparacin del grupo VN2 y las
muestras fortificadas de VP se detallan en la Tabla 1.
Las muestras fueron preservadas adicionando una
solucin de cido clorhdrico 1% y cido ctrico 50% como
estabilizador, conforme a los pasos 1 al 4 del
procedimiento de ensayo y se mantuvieron a -20 C
durante los perodos de almacenamiento.

Tabla 1. Preparacin de especmenes VN2 y fortificados de VP.
Especmen
Volumen
cido
clorhdrico
Volumen
inicial
de alcuota
Cantidad
adicionada de
formulacin
Volumen
final de
alcuota*
100 L 1,0 mL 24,8 mg 1,5 mL
M1
1,5 mL ----- 1,5 mL
1,0 mL 28,1 mg 1,5 mL
M2
1,5 mL ----- 1,5 mL
100 L 1,0 mL 45,6 mg 1,5 mL
M3
1,5 mL ----- 1,5 mL
1,0 mL 45,6 mg 1,5 mL
M4
1,5 mL ----- 1,5 mL
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Especmen
Volumen
cido
clorhdrico
Volumen
inicial
de alcuota
Cantidad
adicionada de
formulacin
Volumen
final de
alcuota*
100 L 1,0 mL 70,2 mg 1,5 mL
M5
1,5 mL ----- 1,5 mL
1,0 mL 77,1 mg 1,5 mL
M6
1,5 mL ----- 1,5 mL
*El volumen de las alcuotas fue completado con el mismo espcimen


4.- Procedimiento de ensayo

El procedimiento consta de los siguientes pasos:
-se homogeniza el contenido gstrico en agitador Vrtex
-se transfieren aproximadamente 1,5 ml del espcimen a
un tubo de microcentrfuga
-se adiciona a la alcuota 100 L de solucin de cido
clorhdrico 1% y cido ctrico 50% (estabilizador)
-se homogeniza la mezcla en Vrtex
-si la mezcla tiene muchas partculas groseras se
centrifuga por no ms de 2 minutos
-se transvasan 100 L a un matraz volumtrico de 5 mL y
se diluye a volumen de aforo con solucin de cido ntrico
1% y cido ctrico 1% (solvente)
-se transfieren 25 L de la mezcla diluida a un segundo
tubo de microcentrfuga y se adicionan 1,5 mL de solvente.
Los calibradores se preparan a partir de este paso de la
misma manera que las muestras, diluyendo diferentes
porciones de 50 L (1, 2, 3 y 4 porciones respectivamente)
-cada tubo de microcentrfuga se instala directamente en
el automuestreador del espectrofotmetro y se ejecuta la
medicin bajo las condiciones operativas programadas.
-se registran la absorbancias de las muestras y un blanco
de solvente y se estima la concentracin de aluminio
elemental en la muestra aplicando la siguiente ecuacin:

( )
FR
1
D
F
a1
V
d1
V
2
2b
blk
A
x
A
0
b
2
b
2
1
b b1
exp
C


+
=
(
(
(
(
(

|
|

\
|

(1)

donde,
b2, b1 y b0 = coeficientes de regresin del modelo de
calibracin cuadrtico,
Ax = absorbancia de la muestra,
Ablk = absorbancia del blanco de solvente,
Va1 = volumen de la alcuota en el paso 6 (0,1 mL),
Vd1 = volumen de la dilucin en el paso 6 (5,0 mL),
FD = factor de ajuste por efecto de dilucin,
FR = factor de ajuste por efecto de matriz,
FD = resultado de una funcin de segundo orden del
factor de dilucin efectuado en el paso 6.
En tanto se efecte la dilucin como est establecido en el
procedimiento, FD tendr un valor constante de 1,08.
FR es resultado de una aproximacin cuadrtica de ajuste
por efecto de matriz, establecida al verificarse un efecto
sistemtico variable sobre la recuperacin en funcin de la
concentracin del analito. La funcin de correccin es:

FR = -0,00022276C
2
0,00852853C + 1,36764562 (2)
donde,
C = concentracin calculada por la ecuacin (3)

( )
2
2b
blk
A
x
A
0
b
2
b
2
1
b b1
C
|
|

\
|
+
=

(3)


5.- Desarrollo y validacin del valor de corte

5.1 Lmites analticos: Valor crtico (LC), lmite de
deteccin (LD) y lmite de cuantificacin (LQ)

Se determin el lmite de deteccin midiendo la
absorbancia de 6 rplicas de blanco de solvente durante 5
das consecutivos, para establecer la concentracin
calculada mxima que puede ser atribuida a los mismos.
Se calcul el desvo tpico y la media, de la absorbancia,
en condiciones de reproducibilidad entre das (Sblk y Ablk
respectivamente) considerndose como la mxima
imprecisin para establecer un lmite crtico. Se estim el
lmite superior del intervalo de confianza del blanco, con
una significancia del 5% como valor de respuesta crtico
(ALC) segn la ecuacin (4)

A
LC
= A
blk
+ t
(4;1-)
S
blk
(4)

Se calcul el valor crtico de concentracin (CLC)
insertando ALc como equivalente de la expresin Ax -
Ablk en la ecuacin (3), la cual se aplica al no haber
dilucin ni la presencia de matriz. Partiendo de CLc se
obtiene el lmite de deteccin (CLD) por la siguiente
ecuacin:

t
(4;1-)

C
LD
= C
LC
+
2b
2
C
LC
+ b
1

(S
2
R(TOTAL)
)
1/2


(5)

donde,
b1 y b2 = coeficientes de regresin de la ecuacin (1) para
una curva preparada en condiciones de reproducibilidad
entre das y,
S2R(TOTAL) = varianza total del modelo de calibracin,
compuesta por la varianza residual, la precisin entre das y
la repetibilidad.
El lmite de cuantificacin se define como la
concentracin mnima (CLQ) que puede ser determinada
con una incertidumbre relativa mxima especificada, que
para el mtodo es de 33,3%, equivalente a tres veces CLC:

C
LQ
= 3C
LC
(6)

Con el fin de verificar los requisitos especificados para
los lmites de deteccin y cuantificacin, CLD y CLQ
fueron ajustados con el factor de dilucin, FR y FD,
suponindoles como muestras con matriz biolgica.
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5.2 Valor de corte (VC)

Se determinaron las concentraciones de aluminio en las
muestras VN1 y se verific la distribucin normal del
grupo de datos obtenidos aplicando un test de Anderson-
Darling. Consecuentemente se calcularon la media y el
desvo estndar y se realiz el experimento de simulacin
de Monte Carlo para estimar el lmite superior del intervalo
de valores que pueden catalogarse como tpicos.
Se estableci como valor de corte la concentracin que
puede atribuirse estadsticamente a ms del 95% de las
muestras negativas ( = 0,05) con la ecuacin siguiente:

VC = C
x(sim)
+ Z
(1-)

(sim)
(7)

donde,
Cx(sim) = concentracin media calculada de 10000 datos
simulados y (sim) su la desviacin estndar.
El software utilizado para la simulacin fue Quantum XL,
que opera como complemento de Microsoft Excel y
simula resultados introduciendo las variables deseadas de
frmulas creadas en las hojas de clculo.
Para la simulacin de los valores Cx probables se insert
la ecuacin (3) en la ecuacin (2), y a su vez esta
combinacin se insert en la ecuacin (1). Asumiendo que
el procedimiento ser ejecutado como se ha especificado,
se definieron Va1, Vd1, FD como trminos fijos, y b2, b1,
b0, Ax, y Ablk como los trminos variables.
El software genera una poblacin de valores para los
trminos variables, dentro de un intervalo definido por su
desvo estndar y caracterizado por una funcin de
densidad de probabilidad, con una confianza determinada.
Luego estas variables son combinadas para generar una
poblacin de resultados probables, calculando a la vez una
media de todos los datos creados con su desvo estndar. Se
asumi una distribucin normal para todos los trminos
variables.
Los desvos estndar de Ablk y los coeficientes de
regresin b2, b1 y b0 se estimaron en condiciones de
precisin entre das, tomando en cuenta que el blanco y la
curva de calibracin deben prepararse con cada lote de
ensayos. Para estimar la variabilidad de los coeficientes de
regresin se ajust una curva de calibracin conformada
por 6 sets de calibradores preparados y medidos uno cada
da.

5.3 ndice de falsos positivos, ndice de falsos negativos,
sensitividad, especificidad y eficiencia

Se repiti el experimento de simulacin descrito
anteriormente, con los grupos VN2 y VP. Para la
simulacin de VN2 se program la contabilizacin de las
concentraciones por encima del cut-off (falsos positivos) y
para VP se program el conteo de valores ms bien por
debajo (falsos negativos). Las muestras fueron de esta
manera identificadas como negativas o positivas en
base al valor de corte (VC)
Con los datos reales y los simulados se construyeron
Tablas de contingencia clasificando los resultados como:
-vn: valores en VN2 inferiores a VC;
-fp: valores en VN2 superiores a VC;
-fn: valores en VP inferiores a VC; y
-vp: valores en VN2 superiores a VC.
La Tabla construida sigui el modelo de la Tabla 2.

Tabla 2. Modelo de Tabla de contingencia.
Resultados en base a VC

Negativo Positivo Total
Negativo vn fp vn + fp
Positivo fn vp fn + vp Datos reales
Total vn + fn fp + vp T

Con los datos obtenidos se calcularon los parmetros
cualitativos de desempeo seleccionados:
-ndice de falsos positivos: la probabilidad de que una
muestra verdaderamente negativa resulte positiva.

fp vp
fp
+
=
fp
r
(8)

-ndice de falsos negativos: la probabilidad de que una
muestra realmente positiva resulte negativa.

fn vp
fn
+
=
fn
r
(9)

-Sensitividad (%): la probabilidad de un resultado
positivo para una muestra verdaderamente positiva,
expresada en trminos porcentuales.

vp
Sensitividad[%] =
vp + fn
X 100

(10)

-Especificidad (%): la probabilidad de un resultado
negativo para una muestra verdaderamente negativa,
expresada en trminos porcentuales.

vn
Especificidad[%] =
vn + fp
X 100

(11)

-Eficiencia (%): la capacidad general del mtodo para
acertar; es decir, para clasificar muestras negativas y
positivas verdaderas como tales, expresada como una
probabilidad en trminos porcentuales

vn+vp
Eficiencia[%] =
T
X 100

(12)


6.- Resultados y discusin

6.1 Lmites analticos: Valor crtico (LC), lmite de
deteccin (LD) y lmite de cuantificacin (LQ)

De las mediciones de los blancos se estim un lmite
crtico de 1,01 mg/L, un lmite deteccin de 2,08 mg/L y un
lmite de cuantificacin de 6,25 mg/L. Estos dos ltimos
fueron multiplicados por el factor de dilucin (5/0,1) y por
un factor de ajuste por efecto de matriz de 1,35 y 1,31
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respectivamente, seguidamente se dividieron por el factor
de ajuste por efecto de dilucin (1,08).
Las variables involucradas en el proceso y sus resultados
se exponen en la Tabla 3.

Tabla 3. Clculos para los lmites analticos.
Absorbancia media de los blancos (n = 30), Ablk [mUA] 0,0763
Desvo estndar, Sblk [mUA] 0,0151
Valor crtico, ALC [mUA] 0,1085
Varianza del modelo de calibracin, S
2
R(TOTAL) [mUA] 0,00043
Lmite de concentracin crtico, CLC [mg/L] 1,010
Lmite de deteccin ajustado, LD [mg/L] 130,0
Lmite de cuantificacin ajustado, LC [mg/L] 379,1

6.2 Diferencias entre grupos y valor de corte (VC)

Se efectuaron las mediciones de concentracin de
aluminio elemental en los tres grupos preparados. Se
corrobor la distribucin normal de cada uno y verificado
este supuesto se realizaron los experimentos de simulacin.
Las absorbancias y concentraciones calculadas de los tres
grupos de presentan en la Tabla 4.

Tabla 4. Absorbancias y concentraciones calculadas en grupo de
especmenes VN1.
Verdaderos negativos 1 (grupo VN1)
N Absorbancia
Concentracin
(mg/L)
N Absorbancia
Concentracin
(mg/L)
1 0,0562 78,1 9 0,0536 70,3
2 0,0576 82,2 10 0,0486 55,4
3 0,0515 64,1 11 0,0497 58,7
4 0,0473 51,6 12 0,0477 52,8
5 0,0474 51,9 13 0,0501 59,9
6 0,0467 49,8 14 0,0495 58,1
7 0,0498 59,0 15 0,0550 74,5
8 0,0422 36,4 16 0,0526 67,3
Verdaderos negativos 2 (VN2) Verdaderos positivos (VP)
N Absorbancia
Concentracin
(mg/L)
N Absorbancia
Concentracin
(mg/L)
1 0,0765 138,6 1 0,2029 516,0
2 0,0416 34,6 2 0,1897 476,8
3 0,0606 91,2 3 0,2121 543,3
4 0,0955 195,3 4 0,2301 596,3
5 0,0609 92,0 5 0,2628 691,6
6 0,0480 53,7 6 0,2717 717,2
7 0,2336 606,6
8 0,4278 1123,6
9 0,2760 729,5
10 0,2256 583,1
Absorbancia del blanco: 0,0573

En el grupo VN1 se puede observar que las absorbancias
son indistinguibles del blanco y consecuentemente
producen niveles por debajo de los lmites analticos. Al
determinar las concentraciones de las muestras VN2 se
verific una consistencia en el comportamiento de los
especmenes negativos. Aunque al cotejar las varianzas de
VN1 y VN2, a travs de una prueba de Fisher resultaron
significativamente diferentes, con una probabilidad de error
del 10-4%, no se encontr evidencia de diferencias
significativas entre las medias muestrales al aplicarse una
prueba de t de student, con una probabilidad de error del
16%.
En cambio, las diferencias entre VP y los grupos VN1 y
VN2 s resultaron ampliamente significativas, con
probabilidades de error del 2,9x10-6% y 1,3x10-6%
respectivamente. Por otra parte, no se encontr diferencia
significativa entre las muestras fortificadas y los
especmenes reales que conformaron el grupo VP.
Estos datos experimentales permiten comprobar la
hiptesis planteada originalmente sobre la diferencia
tangible entre las concentraciones de ambos grupos de
estudio. Se procedi a los experimentos de simulacin para
crear un valor de corte y evaluar sus probabilidades de
error.
Las medias y desvos estndares de las variables
expuestas en la Tabla 5 fueron los trminos con los que se
program la simulacin de cada poblacin. Se generaron
10000 concentraciones probables para cada grupo y se
verific la una distribucin normal por una prueba de
Smirnov-Kolgomorov. Las medias poblacionales y sus
desvos estndares se exponen en la Tabla 6, junto con sus
respectivos estimadores. La diferencia entre las medias y
desvos estndar experimentales y las simuladas pueden ser
explicadas por las condiciones de reproducibilidad entre
das con las que se generaron estas ltimas, contra las
condiciones de repetibilidad con las que se determinaron
las mediciones experimentales.
De los niveles simulados en VN1 se contabilizaron 3623
por debajo del lmite de deteccin, slo 5 de ellos fueron
nmeros negativos. El 99,99 % de los datos fueron
inferiores a 291,04 mg/L y basado en este dato se
estableci entonces un lmite de corte de 300 mg/L
De las 10000 concentraciones simuladas a partir de VN2
se contabilizaron 250 superiores al valor de corte, de stas
14 superaron el lmite de cuantificacin. Por otra parte, de
los datos generados por VP, con una media de 6 a 10 veces
mayor que las muestras negativas, se registraron slo 21
especmenes inferiores al lmite de cuantificacin y slo 2
menores al valor de corte.
Se puede observar una franca dicotoma entre los
especmenes negativos y los positivos. Ambas poblaciones
mantienen la suficiente distancia para dar un margen de
riesgo estrecho. La probabilidad de que las medias de VN1
y VP sean estadsticamente iguales es prcticamente nula a
aplicarse la prueba Z de significancia (P <10-10). Se
elaboraron tambin histogramas de ambas poblaciones, en
los que puede apreciarse grficamente su relacin con el
valor de corte (ver figuras 1 y 2).

Tabla 5. Variables de entrada para la simulacin.
Software: Quantum XL Banyan Tree Engine
Generacin de nmeros aleatorios: Mersenne Twister, 10000 simulaciones
Variable Media
Desvo
estndar
Distribucin
Coeficiente de segundo orden, b2 -0,00017867 2,9085x10
-7
Normal
Coeficiente de primer orden, b1 0,021278 1,1377x10
-5
Normal
Intercepto, b0 0,08722 8,0970x10
-5
Normal
Absorbancia del blanco, Ablk 0,07629 0,0151 Normal
Absorbancia, Ax (VN1) 0,0503 0,0040 Normal
Absorbancia, Ax (VN2) 0,0639 0,0196 Normal
Absorbancia, Ax (VP) 0,2338 0,0306 Normal

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6
Tabla 6. Concentraciones medias y desvos estndar de las determina-
ciones experimentales y los valores generados por simulacin de Monte
Carlo.
Experimentales Simuladas
Variable Media
Desvo
estndar
Media
Desvo
estndar
VN1 (n = 16) 60,6 mg/L 11,8 mg/L 117,5 mg/L 46,7 mg/L
VN2 (n = 6) 100,9 mg/L 58,5 mg/L 155,8 mg/L 74,5 mg/L
VP (n = 10) 658,4 mg/L 184,0 mg/L 661,6 mg/L 98,8 mg/L

Se observa que el lmite corte supera ampliamente al
lmite de deteccin y esto es favorable para lograr un bajo
riesgo de falsos negativos. Por otra parte, el cut-off es
menor al lmite de cuantificacin, ello sugiere tener
precaucin con concentraciones inferiores a 400 mg/L y la
incertidumbre es importante en ese margen.


Fig. 1. Histograma de datos generados por simulacin de Monte Carlo
partiendo del grupo VN.


Fig. 2. Histograma de datos generados por simulacin de Monte Carlo
partiendo del grupo VP.

6.3 Parmetros cualitativos

Los resultados se organizaron en Tablas de contingencias,
tanto para las mediciones en muestras reales como los
datos generados por simulacin de Monte Carlo.

Tabla 7. Tabla de contingencia de mediciones reales
Resultados de ensayo
Negativo Positivo Total
Verdaderos negativos (VN2) 6 0 6
Verdaderos positivos (VP) 0 10 10
Total 6 10 16

Tabla 8. Tabla de contingencia de datos simulados.
Resultados de ensayo
Negativo Positivo Total
Verdaderos negativos (VN2) 9750 250 10000
Verdaderos positivos (VP) 2 9998 10000
Total 9752 10248 20000
La Tabla 9 resume los cualitativos de desempeo
calculados tanto con resultados de ensayos reales y como
con datos generados por simulacin

Tabla 9. Parmetros cualitativos de desempeo.
Parmetro Ensayos Simulacin
ndice de falsos positivos 0 0,0250
ndice de falsos negativos 0 0,0002
Sensitividad 100% 99,98%
Especificidad 100% 97,50%
Eficiencia 100% 98,74%

Es factible realizar algunas estimaciones probabilsticas a
partir de estos resultados. Se observa por ejemplo que al
establecer 300 mg/L como valor de corte la probabilidad de
que un espcimen del grupo VN1 sobrepase este valor es
del 0,0046%, aproximadamente 5 por cada 100000
muestras, en tanto que la probabilidad de falsos positivos
en el grupo VN2 es del 2,5% y de falsos negativos del
0,02%. Se debe tener presente entonces que la
aproximacin estadstica supone un mismo
comportamiento en todos los especmenes sometidos al
proceso de medicin, incluyendo la especiacin, efecto de
matriz, dilucin entre otras condiciones y puede haber
ciertas diferencias entre poblaciones de una misma
categora. En general, el mtodo desarrollado tiene una
probabilidad de no acertar en un 1,26 % de los casos.


7.- Conclusiones

Se desarroll un mtodo propio evaluando los parmetros
de desempeo de rigor para ensayos cuantitativos, pero
tambin se evaluaron parmetros cualitativos que
tradicionalmente se aplican a otras tcnicas analticas. El
uso de estos recursos, fortalecidos por la potente tcnica
estadstica de Monte Carlo para generar un gran nmero de
datos, resultaron indicadores de desempeo tiles para
valorar la habilidad discriminativa de un mtodo de ensayo
destinando a un propsito cualitativo siendo su base
eminentemente cuantitativa y que opera sobre una matriz
de escasa existencia, de la cual difcilmente se podr
recolectar un nmero conveniente de especmenes reales
para establecer un intervalo de referencia de forma
taxativa.


Bibliografa

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