Dra.

Jennifer Montoya Silva

PROTENAS DE CHOQUE TRMICO: Funciones neuroprotectoras e implicaciones para enfermedad neurolgica

Hsps: comprenden un grupo de molculas que son componentes para la proteostasis. Expresin constitutiva para promover el acoplamiento y la construccin de polipptidos. Intervienen en la respuesta al estrs (incluyendo estrs oxidativo y lesin isqumica) que resulta en la acomulacin de protenas desnaturalizadas. Son la primera lnea de defensa contra el desdoblamiento, las protenas vulnerables a agregacin. Efectos neuroprotectores: inhibicin de apoptosis, proteccin citoesqueltica y modulacin inmune. Estn presentes en las inclusiones que caracterizan las enfermedades neurodegenerativas (AD, PD, HD). Las mutaciones se asocian a formas hereditarias de neuronopata motora, enfermedad aoxnal Charcot-MarieTooth tipo 2 (CM52), miopata miofibrilar y parapesia espstica progresiva. Son la clave para la farmacoterapia neuroprotectora.

CARACTERSTICAS GENERALES
Molculas chaperonas en todos los compartimentos celulares, interactan con protenas desdobladas y protegen las membranas IC, el citoesqueleto y las protenas nucleares durante condiciones de estrs. Se clasifican conforme a su PM: Hsp100 Hsp 90, Hsp70, Hsp 60, Hsp40, y pequeos Hsp (< 40 kDa). Clsicos (Hsp90, 70 y 60): requieren cambios dinmicos en su conformacin tridimensional e hidrlisis de ATP para su actividad de chaperona. Hsp90: abundantes en citosol, se puede estimular su expresin con estrs celular. Su rol chaperon es interactuar con protenas clientes, en un estado nativo o cercano a nativo para promover la maduracin conformacional. Las protenas clientes involucran factores de transcripcin con receptores de hormonas esteroides, PKs, y molculas de transduccin como la calcineurina y la sintetasa de ON. Hsp70: en casi todos los compartimentos celulares y son esenciales en varios procesos incluyendo la de novo de polipptidos, el ensamblaje de protenas, Translocacin de protenas at travs de membranas y marcadores terminde protenas desdobladas para su degradacin. Hay varias familias, incluyendo las constitucionales como la Hsc70 (cognate), Hsp70 inducible por estrs, la protena-78 mitocondrial regulada por glucosa y la protina-75 de RE regluada por glucosa. Todas las Hsp70 conservan un dominio amino-terminal al que se unen e hidrolizan el ATP y tienen un dominio carboxi-terminal que se une al sustrato. La actividad ATPasa basal de Hsp70s es baja, pero aumenta cuando interactua con la protena de dominio-J de la familia Hsp40. Hsp60 (chaperonina 60 o Cp60): en la mitocondria, asiste el ensamblaje y el transporte IC de las protenas. Tambin se encuentra en el citosol y en la superficie celular. Los Hsp60s son oligmeros cilndricos de 2 anillos que contienen una cavidad central que encapsula protenas no-nativas para permitir su ensamblaje a un estado nativo. Pequeos Hsp: son divergentes de los chaperones y son de 15-30 kDa, comparten algunas secuencias homlogas y figuran estructuras oligomricas grandes. Todas contienen una secuencia C-terminal de 80-100 residuos de aminocidos (dominio -cristalina) que media la formacin de dmeros que forman los bloques para la formacin de oligopptidos grandes y dinmicos. La oligomerizain de las Hsps pequeas se regula por fosforilacin, principalmente va PK p38. Al menos hay 10 genes que codifican (HSPB1-HSPB10). Tres de estos tienen relevancia para enfermedad: Bcristalina (Hspb5), Hsp27 (Hspb1), y Hsp22 (Hspb8) que estn distribuidos en el sistema nervioso. Respuesta de las Hsp: La acumulacin de protenas desdobladas durante estrs celular desencadenan la expresin de Hsp. Hay un loop de retroalimentacin que involucra al factor activador transcripcional de choque trmico (HSF)-1, el primer regulador de la expresin de Hsp. Este factor de transcripcin es constitucional en el citoplasma pero se mantiene inactivo, en un estado monomrico asociado con Hsp90 y en menor proporcin a Hsp70. La acumulacin de protenas desdobladas lleva a la disociacin de las Hsps del HSF-1 permitiendo al factor iniciar la trimerizacin y translocacin al ncleo. En el ncleo el HSF-1 se une a elementos de choque trmico para promover los genes de Hsp, activando la produccin de Hsp70, Hsp0 y Hsp pequeos. Una vez que el estrs celular disminuye o los niveles de Hsps aumentan suficientemente en el citoplasma, las Hsps se unen nuevamente a las HSF-1, cambiando el equilibrio hacia una forma monomrica inactiva, este loop retroalimentativo termina la respuesta. El HSF-1 tambin es regulado por modificaciones

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post-transduccionales como la fosforilacin y la acetilacin. Otros factores de transcripcin como la Caja O de cabeza de tenedor (jeje), actan junto con el HSF-1, para aumentar la expresin de hsp a travs del estrs oxidativo. Las neuronas motoras tienen un umbral ms alto para inducir la respuesta de choque trmico que otras neuronas o astrocitos.

FUNCIONES
Tienen una funcin dual, dependiendo de si son IC o EC. IC: protectora como chaperones moleculares, previniendo la apoptosis y estabilizando el citoesqueleto: EC: o las unidas a membrana tienen funciones de mediacin inmunolgica. Funcin chaperona: El estrs celular lleva a la desnaturalizacin (desdoblamiento) que expone residuos aminocidos hidrofbicos que pueden participar en interacciones moleculares causando agregacin y precipitacin. Estos residuos tambin son los sitios de unin para Hsps. Una consecuencia de la unin de las Hsps a protenas desnaturalizadas es la estabilizacin de la protena marcada, previniendo su agregacin y permitiendo su preparacin o re-ensamblaje. Los mecanismos involucrados en la funcin chaperona vara conforme a las familiares de Hsp. o La actividad chaperona de las Hsp constitutivas (Hsp90, 70 y 60) requiere cambios conformacionales de la molcula e hidrlisis de ATP, en algunos casos co-chaperones. La interaccin de Hsp40 co-chaperona con Hsp70 promueve la unin del sustrato a Hsp70 en sustratos en pareja con hidrlisis de ATP. En el caso de las Hsp90, las protenas cliente como los receptores esteroideos interactan primero con Hsp70 en una reaccin de catalibolizacin dependiente de ATP, entonces las chaperonas se unen tanto a Hsp70 como a Hsp90, que finalmente lleva a la formaicn del coplejo protena madura cliente-Hsp90. Las pequeas Hsps como la Hsp27 (Hspb1) se une a protenas marcadas por otro mecanismo. Mientras que la activacin transcripcional desencadenada por HSF-1 produce Hsps pequeos, sus modificaciones post-transduccionales de sitio especfico en respuesta a seales de estrs tiene importancia en su actividad biolgica. Una vez transcrito el Hsp27 forma estructuras oligopeptdicas en respuesta a estmulos diferentes, y sufre fosforilacin para reorganizarse en dmeros de BPM u oligopptidos que se une a protenas desdobladas y los dejan en una fase soluble. Cuando hay condiciones favorables, las protenas desdobladas asociadas a Hsp27 u otras Hsp pequeas se liberan y son redobladas espontneamente o con auda de chaperonas dependientes de ATP como Hsp70 y Hsp60. Cuando las chaperonas no pueden repara la protena desdoblada, se unen a protenas anormales para degradarse va ubiquitin-proteosoma o por autofagia mediada por lisosomas. Por ejemplo a Hsc70 o sp70 se une a una protena llamada C-terminal de la protena Hsc70 interactuadora, esta protena acta como una LIgasa E-3 que facilita el transporte de una cadena de poliubiquitina a sustratos desdoblados unidos a Hsc70 o Hsp70. La Hsp27 tambin interacta con el proteosoma y se une a ubiquitina, esta interaccin explica la c-localizacin de Hsp27 con proenas ubiquitinas en inclusiones citoplasmticas que caracterizan algunas enfermedades neurodegenerativas. Inhibicin de la apoptosis: va varios mecanismos. o Va mitocondrial, se desencadena porestrs celular que incluye la sobrecarga de calcio y acumulacin de ROS. El mecanismo mitocondrial involucra la formacin de un complejo poro permeable en la membrana mitocondrial que permite la liberacin de protenas proapoptticas del espacio intramembranoso al citoplasma. Estas protinas desencadenan la apoptosis por mecanismos dependientes o independientes de caspasa. El ejemplo clsico es citocromo c, que recluta el factor 1 activador de peptidasa (Apaf-1) y ATP formando un complejo formado apoptosoma. Este complejo activa la casapasa 9 que activa al caspasa 3 resultando en la fragmentacin de DNA nuclear y otros efectos asociados a apoptosis. Otras protenas liberadas de la mitocondria como el factor inductor de apoptosis desencadenan la fragmentacin de DNA nuclear indpependiente de caspasa. La permeabilizacin de la membrana mitocondrial externa se regula por una interaccin antagnica de diferentes miembros de la familia de clulas B linfoma 2 (Bcl-2). Por ejemplo, en condiciones de reposo el Bc-l2 se inserta en la membrana mitocondrial y previene la permeabilizacin de la mebmbrana y bajo condiciones proapoptticas, la Bcl-2 se asocia a la protena X (Bax) y se transporta hacia el citosol sufriendo una modificacin transformacional, se inserta en la membrana mitocondrial externa y promueve la permeabilizacin de la membrana. o Hsp70, Hsp27 y Hsp90 actan como reguladores negativos de la va mitocondrial de apoptosis en estadios pre-mitocondrial, mitocondriales y post-mitocondriales. Hsp70 inhibe la sealizacin

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inducida por estrs y previene la Translocacin de la protena proapopttica Basx a la membrana mitocondrial, inhibiendo la permeabilizacin de la membrana mitocondrial externa y la liberacin del citocromo c. La Hsp70 tambin se une a Apaf-1, previniendo el reclutamiento de pro-caspasa-9 al apoptosoma. El Hsp27 inhibe la apoptosis regulando vas de sealizacin la alta como la cinasa reguladora de sealizacin y la va cinasa B Akt, mantiene un estado reducido y esatbilidad mitocondrial, secuestra el citocromo c en el citosol e inhibe la liberacin mitocondrial de mediadores que inhiben las protinas antiapoptticas endgenas. Proteccin citoesqueltica: una funcin adicional citoprotectora de las Hsps pequeas como la Hsp27 regula la dinmica de elemtnos estructurales de citoesqueleto. La Hsp27 interacta con los microfilamento de actina y con filamentos intermediarios in vitro. La interaccin de Hsp27 fosforilada con actina previene la polimeraizacin de actina anormal y previene la disrupcin del citoesqueleto frente al estrs celular. Regulacin inmune por Hsps EC: Ademas de su funcin protectora en el citosol, las Hsps pueden expresarse en la membrana plasmtica o el espacio EC como estimuladores del sistema inmune. Los miembros de la familia Hsp70 o Hsp60 pueden ser transportados a la membrana plasmtica y liberados de clulas tumorales o clulas bajo estrs a travs de CPA. La presentacin de pptidos unidos a Hsp70 en el CMH-I desencadena la respuesta de las clula T- CD8 antgeno-especfica, la liberacin de citocinas o ambas.

CORRELACIONES CLNICAS
Isquemia cerebral y condiciones pre-isqumicas: Desencadena la expresin aumentada de diferentes Hsp, incluyendo la Hsp70 o la Hsp27. Estas Hsp estn involucradas en efectos neuroprotectores de una condicin pre-isqumica cerebral; esto se refiere a mecanismos por los que isquemia subletal, trainsitoria resulta de tolerancia a isquemia cerebral posterior. Un estudio en ratas mostr que una isquemia focal transtiroai de 5120 minutos de la ACM ocluda indujo la expresin de Hsp70 en neuronas y clulas gliales a travs del territorio isqumico, la introduccin de Hsp70 fue mxima en 24 horas posterior y result en inclusiones positivas de protinas Hsp70 en microglia activada, macrfagos, astrocitos y oligodendrocitos. En ratones transgnicos con sobreexpresin de Hsp70 o Hsp27 hubieron lesiones menores 24 horas despus de laoclusin de la ACM midiendo con RMN T2. La induccin de Hsp70 contribuye a efectos neuroprotectores de hipotermia en la isquemia cerebral. Enfermedades neurodegerativas: AD,PD, HD, enfermedad por priones y enfermedades de la proteostasis se caracterizan por falta de acoplamiento de protenas celulares que llevan a la agregacin y acumulacin de inclusiones intraneuronales y extraneuronales compuesto de fibrillas amiloides. El cambio conformacional en la protena afectada lleva a una funcin intermediaria de los monmeros txica, promueve la formacin de agregantes e inicia la cascada de interacciones proteicas que llevan a disfuncin neuronal y muerte. Hay una co-localiacin de las molculas chaperonas como la Hsp27, Hsp70 y la Hsp90 y componentes del sistema de degradacin la proteosoma ubiquitina dentro de los cuerpos de inclusin que son caractersticos de estas enfermedades neurodegenerativas. Esta co-localizacin refleja un intento fallido para redoblar o protenas agregadas degradadas, secuestro y subsecuente prdida de funcin de las molculas chaperonas o ambas. Las Hps son los supresores ms potentes de neurodegeneracin en modelos animales. Su sobreexpresin inhibe la agregacin de protenas amiloidognicas, muerte celular y ambas in vitro y puede reducir la severidad del fenotipo de los modelos animales con ELA, HD o PD. EN contraste la Delecin de Hsp puede exacerbar consecuencia clnicas y neuropatolgicas de estas alteraciones. La Delecin de Hsp70 exacerba al comportamiento neuropatolgico en HD en un ratn. La relacin entre los Hsps y la enfermedad neurodegenerativa se debe seguir estudiando. Neuropatas motoras: Mutaciones en el gen de HSPB1 (que codifica a Hsp27) y de HSPB8 (que codifica Hsp22) se asocia a fenotipos contrapuestos, neuropata motora distal hereditaria (HMN tipo II) Y CMT2. La HMN tipo II es una alteracin motora pura caracterizada por debilidad muscular progresiva y atrofia de extremidades, es una neuropata axonal que involucra tanto nervios sensitivos como motores, aunque los sntomas sensitivos pueden estar ausentes. La localizacin de las mutaciones se encuentra en el residuo aminocido con carga positiva en el dominio -cristalina de las pequeas Hsp. Las mismas mutaciones pueden producir diferentes fenotipos dentro de la misma familia. Por ejemplo la mutacin de Hsp27 arginina-triptfano (R127W) causada tanto por CMT2F como HMN tipo II en miembros de 5 generaciones de la familia Sardiniana. Miopata miofibrilar asociada a desmina: comprometen un grupo de enfermedades heterogneas genticas que comparten fenotipos clnicos y morfolgicos. Las manifestaciones clncias incluyen debilidad progesiva que afecta musculatura proximal, distal o ambas. La cardiomiopata puede estar presente y en algunas ocasiones es el sntoma inicial y la neuropata perifrica puede ocurrir en algunos pacientes. Hay una acumulacin anormal de un arreglo de protenas en sitios ectpicas y acumulacin de protenas miofibirlates degradadas que forman agregados grandes. Varios genes se han descubierto en las miopatas miofibrilares, estas protenas

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se asocian con el disco-Z. Las mutacinoes que afectan la cristalina-B, una Hsp pequea abundante en el msculo cardioco y esqueltico, se asocian a miopata miofibrilar asocaida a desmina de inicio en la adultez. Estas mutaciones pueden alterar la estructura de la B-cristalina, la actividad chaperona y las interacciones con la desmina. Paraparesia espstica hereditaria: La paraparesia espstica comprende un grupo heterogneo de enfermedades genticas caracterizadas por espasticidad progresiva y debilidad de extremidades inferiroes as como egneracin axonal retrgrada de la va corticoespinal y las columnas dorsales. La gentica de esta alteracin s compleja e incluye una HAD, HAR y ligada a X, estn asociadas al transporte transmembranal y al transporte axonal. Las mutaciones del ge HSPD1 que codifica para la Hsp60 mitocondrial chaperona causa una forma rara HAD de paraparesia espstica hereditaria (SPG13). La Hsp60 ayuda al acoplamiento de una regin de protenas mitocondriales. Una mutacin de Hsp60 que involucra de valina a isoleucina (Val98Ile) disminuye la expresin de dos proteasas de calidad mitocondriales. Los polimorfismos de Hsp60 modifican el fenotipo de una forma ms comn de HAD paraparesia espastica, asocaida a mutaciones de espastina (SPG4 llevando a un inicio ms temprano de la enfermedad. Mientras se piensa que las mutaciones de espastina alteran el transporte mitocondrial axonal, los polimorfismos de Hsp60 afectan la biognesis mitocondrial, motencializando el dficit energtico en la porcin distal de los axones corticoespinales. Implicaciones teraputicas: Estudios in vitro y de modelos animales indican que la sobreexpresin de molculas hcaperonas pueden beneficiar el tratamiento de enfermedades neurodegneerativas. La Hsp90 provee un marcador teraptuco atractivo por ser parte de un complejo que regula negativamente la actividad de HSF-1, la inhibicin de Hsp90 puede llevar a una actividad transcripcional aumentada de HSF-1 y ua la produccin de Hsp70 y otras chaperomnas neuroprotectoras. Frmacos como la geldanamicina o el redicicol se unen al ATP en Hsp90 y bloquean su interaccin con HSF-1, promivienod la activacin de HSF-1 y la sntesis de Hsp70, Hsp40 y otras chaperonas. La geldanamicina ha probado efecto en la enfermedad poliglutamina y otraos modelos de enfermedades neurodegenerativas. El arimoclomol prolonga la activdad de HSF-1, in vivo y in vitro se ha demostrado este efecto en la prevencin de la prdida neuronal en modelos experimentales de la ELA familiar y en trials clnicos se ha demostrado tolerabilidad y seguridad.

PERSPECTIVA
Los efectos neuroprotectores mltiples de las Hsps han hecho de ellos una clave para la manipulacin farmacolgica para prevenir prdida neuronal y de clulas gliales en muchas enfermedades neurolgicas. Su efecto teraputico potencial probablemente depende de otras variables, incluyendo su biodisponibilidad en el SN, la concentracin relativa y factores ambientales. Por ejemplo el efecto benfico potencial de lo inhibidores de Hsp90 se ha visto que incrementean la actividad transcripcional de HSF-1 pero debe de sopesarse el efecto deletreo de la interaccin con molculas de sealizacin transduccional. Los efectos benficos de la regulacin a la alta de Hsp27 sern determinados por su habilidad para realizar modificaciones posttransduccionales requeridas para la funcin chaperona, antiapopttica y protectora del citoesqueleto. Estadio pre-mitocondrial Promueve el efecto de Akt/PKB Inhibe JNK1 Estadio mitocondrial Mantiene un estado reducido y estabilidad de la membrana mitocondrial Previeen la Translocacin de Bax a la membrana mitocondrial externa Inhibe la liberacin de Cy-C Inhibe Bad Estadio post-mitocondrial Secuestra el Cy-C Inhibe Smac Se une e inhibe Apaf-1 Inhibe AIF

Hsp Hsp27 (Hspb1)

Hsp70

Hsp90

Promueve el efecto Akt/PKB Promueve la activacin de TNFRs y la va JNK y NFB

Se une e inhibe Apaf-1 Inhibe calpainas Regula la actividad de CAD

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Enfermedad AD Lesin Placa senil Componente agregante A40, A42 Molculas co-localizadas Hsp90, Hsp70; GRUP78, B-cristalina, Hsp27 Hsp27, Hsp70, Hsp90 Mecanismo de neuroproteccin in vitro GRP78 se une a APP y reduce la produccin de A40 y A42 Hsp27 interacta con P-tau y disminuye la muerte celular mediada por tau Hsp70 facilita la ubiquitinacin tau pero paradjicamente aumenta lo niveles de tau insolube Hsp70 disminuye la sinucleina y su toxicidad Hsp70 y Hsp27 disminuye la -sinucleina en ratones transgnicos Hsp27 regula a la alta en ratones transgnicos con sinucleina Hsp70 disminuye la toxicidad de la mutacin SOD1 B-cristalina se une a SOD1 mutado Hsps pequeos son regulados a la baja en neuronas y regulados a la baja en astrocitos en un ratn modelo con ELA Hsp40 o Hsp70 suprime la formacin y toxicidad de cuerpos de inclusin PoliQ Hsp27 disminuye la toicidad de poliQ disminuyendo la formacin de radicales libres La prdida de Hsp70 exacerba la patogenia pero no los niveles de agregados fibrilares en un modelo de ratn con HD

Tauopata

Nudo neurofibrilar

Tau hiperfosforilada

PD

Cuerpos de Lewy

-sinuclena

Hsp70, Hsp40, Hsp27

ELA

Inclusin TDP-43

Mutacin SOD1

Hsc70 en neuronas, Bcristalina en astrocitos espinales

HD

Inclusiones intranucleares

PoliQ-huntingtina

Hsp70, Hsp27

A= pptido amiloide; GRP= glucose-regulated protein; PolyQ= polyglutamine repeat, SOD= SUPEROXIDE DISMUTASE, tdp-43= tar dan-BINDING PROTEINS OF 3KdA. Hsps inhiben las vas mitocondriales desencadenadas por varias seales incluyendo la acumulacin intramitocondrial de ca++ y el estrs oxidativo as como vas indirectas. Estas vas involucran la formacin de un PTPC (permeability transition pore complex) en la membrana mitocondrial externa, que permite la liberacin de protenas proapoptticas al citosol. Estas incluyen el Cy-c que interacta con la Apaf-1 (apoptotic peptidase-activating facotr 1) para activar la Casp9, desencadenando al degradacind e DNA mediada Casp3, la induccin de AIF, que degrada directamente le DNA y activadores mitocondriales secundarios de caspasa (Smac) que bloquean la actividad de las protenas inhibitorias de apoptosis (IAP). En condiciones proapoptticas la Bax (Bcl-2-associated protein X) se inserta en la membrana mitocondrial externa y promueve su permeabilizacin, el Bad (Bcl-2-associated death promotor) mueve al Bcl-2 que es una molcula antiapopttica, de su sitio inhibitorio con Bax. Hasp70, Hasp27 y Hasp90 actan como reguladores negativos de las vas mitocondriales de apoptosis en estadio premitocondrial, mitocondrial y postmitocondrial. ASK1= apoptosis signal-regulatin kinase, CAD = caspase activated DNAse, JNK= Jun-N terminal kinase.

FUENTE: BENARROCH, Eduardo E. Heat shock proteins. Multiple neuroprotective functiones and implicationes for neurologic disease. Neurology 76 February 15, 2011