PT A RCI C 7 METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS FERMENTACIN.

I. OBJETIVOS 1) Observar experimentalmente los fenmenos de respiracin celular anaerbica (fermentacin) en levaduras. 2) Comprobar el efecto de inhibidores de la gliclisis y de la respiracin celular. 3) Aplicar los conceptos de sustrato, inhibidores competitivos, inhibidores no competitivos, oxido-reduccin, modificacin de pH e inhibidores en la interpretacin de sus resultados. II. ACTIVIDADES Fermentacin alcohlica en levaduras (Saccharomyces cerevisiae). La fermentacin alcohlica en levaduras ocurre de acuerdo a la reaccin: C6H12O6 2CO2 2 C2H5OH (etanol) El etanol se acumula en el medio y el CO2 es liberado como gas, por lo que se puede medir la fermentacin por la produccin de CO2. III. PROCEDIMIENTOS. 3.1. Complete la siguiente batera de tubos: Tubos 1 2 1 ml 3 1 ml 4 1 ml

Suspensin 1 ml de levadura 7% Sol. Glucosa Sol. NaF Agua destilada(4 3C) Sol.Rojo Neutro 0 0 2 ml

1 ml 0 1 ml

1 ml 1 ml 0

1 ml 0 1 ml

0,1 (gotas)

ml

Agitar por inversin para homogenizar el contenido de cada tubo. 3.2. Tapar cada tubo con un frasco de penicilina invertido, presionndolo girar rpidamente de manera que el tubo quede invertido dentro del frasco. Marcar el nivel de la burbuja en la parte superior del tubo y amarrando con un elstico los 4 frascos, ponerlos a incubar en un bao de agua a 43C. 3.3. Al cabo de 30 min. Marque el nivel final de la solucin en el tubo y mida el volumen de gas producido con una pipeta con agua. 3.4. Cul es el objetivo del tubo 4? Verifique el pH en el tubo 2 con papel pH. 3.5. Anote y discuta sus resultados.

Soluciones: 1. Solucin de levadura: disolver a homogeneidad 0,7 g de levadura en 10 ml de agua destilada a 43C y completar a 100 ml con agua destilada a 43C. Solucin de glucosa 1% Solucin de NaF 1% Solucin rojo neutro 0,1%

2. 3. 4.

Papel pH.

IV. OBSERVACIONES Variables de la fermentacin alcohlica y sus efectos sobre el proceso Con el fin de obtener altos rendimientos en la fermentacin alcohlica es necesario considerar ciertos parmetros y realizar un estudio sobre los efectos que en mayor o menor grado alteren la buena marcha del proceso. 1. Clase de microorganismo: Los microorganismos ms apropiados para la produccin de etanol a partir de azcares son, como ya se dijo, las levaduras del gnero saccharomyces y kluyveromyces y las bacterias zymomonas mobilis. 2. Concentracin del sustrato: El carbono es suministrado por los azcares contenidos en la materia prima, siendo la concentracin de azcar un valor que se debe considerar ya que afecta la velocidad de la fermentacin, el comportamiento y el desarrollo de las clulas de la levadura. 3. Concentracin de Etanol: La levadura es afectada en alto grado por la concentracin de alcohol, una concentracin alcohlica del 3% ya influye sobre el crecimiento; una concentracin de un 5% influye tanto sobre el crecimiento como en

la fermentacin. Cuando la concentracin es del 10%, el crecimiento sufre la paralizacin total. 4. Temperatura: Se debe tener en cuenta que para cada levadura existe una temperatura ptima de desarrollo, en la cual se muestra activa. Adems, se tiene una zona independiente de la temperatura ptima en la cual la levadura an presenta actividad; a medida que se aleja de la temperatura ptima su actividad disminuye notablemente. Por debajo de la temperatura sealada como mnima y por encima de la mxima, las levaduras continan viviendo en estado latente, sin embargo, al exponer cualquier levadura a una temperatura de 55 C por un tiempo de 5 minutos se produce su muerte. En el caso de la saccharomyces cerevisae se tiene un desarrollo ptimo entre 28-35 C, recomendable 30 C. 5. pH: Este es un factor importante en la fermentacin, debido a su importancia en el control de la contaminacin bacterial como tambin al efecto en el crecimiento de las levaduras, en la velocidad de fermentacin y en la formacin de alcohol. Durante la fermentacin la levadura toma el nitrgeno de los aminocidos orgnicos, perdiendo su carcter anftero y pasando a cidos, lo cual origina una disminucin del pH del medio. Cuanto ms bajo el pH del medio, tanto menor el peligro de infeccin, pero si se trabaja con pH muy bajos la fermentacin es muy lenta, ya que la levadura no se desarrolla de la forma conveniente. Segn estudios se hall que el pH ms favorable para el crecimiento de la saccharomyces cerevisiae se encuentra entre 4.4 - 5.0, con un pH de 4.5 para su crecimiento ptimo. V. DISCUSIN En el tubo N 1; Se ve que no ocurre reaccin alguna ya que solo est compuesto de glucosa y agua destilada, ha este tubo lo llamaremos blanco y servir de muestra para cotejar que tubos reaccionan.

En el tubo N 2: El nivel de la mescal baja des de el punto inicia PI hasta el punto final PF, esto indica que en el tubo si ocurre la reaccin de fermentacin

En el tubo N 3 El nivel se mantiene en el ponto inicial PI, esto indica q no acorre reaccin, En este tubo no acurre reaccin porque contiene NaF y este acta como inhibidor de la reaccin

En el tubo N 4 El nivel de la mezcla baja alta el punto PF. En este tubo tambin ocurre una reaccin y vemos que la solucin rojo neutro solo acta como un indicador que nos muestra la variacin del ph de la mescla

VI. CONCLUSIONES

Podemos observar que en los tubos 2 y 4 ocurre la reaccin de fermentacin anaerbica obteniendo como productos etanol y CO2mediante la reaccin general:

C 6 H 12 O6 2C H

C H

O +2C 2 H O

En el tubo N 3 se observa que no ocurre reaccin esto ocurre por presencia del inhibidor NaF. Este impide el desarrollo
microbiano dado que al inhibir la gliclisis se evita la formacin de sustancias oxidantes

VII.BIBLIOGRAFA http://www.biologia.edu.ar/microind/medios.htm http://www.scribd.com/doc/4106429/Carbohidratos-i-Bioquimica