Clasificacin de los medios de cultivo Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms importantes

son aquellos que se basan segn: Estado fsico (consistencia) 1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin. 2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su punto de fusin es bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la que no puede utilizarse para cultivos a 37C, que es la temperatura ptima de crecimiento para muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polmero de azcares obtenido de algas marinas. Se trata de una molcula insoluble en agua pero soluble en agua caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39C y no se funde por debajo de 85C. Funde a 90C y solidifica una vez fundido alrededor de los 45C. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgnicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacridos, Araki, en 1937, los dividi en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato, libre de cido pirvico y agaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporcin de agarosa a agaropectina en el agar vara segn el alga de origen. El agar puede utilizarse para diferentes fines, aunque los ms importantes son: agar comercial para la industria alimenticia, agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo microbiolgico, por lo que es importante la ausencia de metales txicos. 3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias Utilizacin 1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticasa de soja, el agar Columbia, etc. 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc) El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. 4) Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. APM 2011 Tecnologa Mdica

5) Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los grmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. 6) Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya aadido un elemento diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en identificacin. Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios especficos de identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se consigue simultneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificacin. Son ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID (Biomerieux), utilizados para identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos especficos. 7) Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la obtencin de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es un ejemplo tSuperficie de estos medios. 8) Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el Laboratorio de Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas: a) haciendo pases peridicos de placa a placa b) mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana c) congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1% 9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Su utilizacin debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior del medio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tSuperficies de este grupo los medios de Stuart-Amies, Cary-Blair, etc. Composicin Segn las sustancias que entren a formar parte en su composicin, los medios de cultivo pueden ser clasificados en: 1) Medios complejos: Fueron los primeros utilizados, y los ms empleados se preparan a partir de tejidos animales, y ms raramente de vegetales. Su composicin no es exactamente definida, y por consiguiente no es rigurosamente constante. Esto puede tener ciertos inconvenientes en condiciones experimentales, donde la reproductibilidad no podr ser exacta. En la prctica corriente estos medios dan excelentes resultados y son los ms empleados. 2) Medios sintticos: Son aquellos que contienen en su composicin exclusivamente sustancias qumicas conocidas y disueltas en agua destilada en proporciones determinadas, resultando un medio de composicin perfectamente definida. 3) Medios semisintticos: El gran nmero de factores de crecimiento exigidos para ciertos grmenes hace que la fabricacin de un medio sinttico para estos grmenes sea imposible o demasiado cara. En este caso se aportan los factores de crecimiento bajo la forma de un extracto orgnico complejo (extracto de levadura, extracto de tejidos, etc.).Ciertos grmenes no crecen en ningn medio por muy enriquecido que est ste, hacindolo exclusivamente en clulas vivas con unas caractersticas determinadas. Ejemplos de este tipo son, aparte de los virus, las Chlamydias, Rickettsias, etc.

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Origen a) Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente. b) Sintticos: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. c) Semisintticos: son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura. Agar Mac Conkey. El Agar MacConkey es un medio selectivo y diferencial recomendado para el cultivo y aislamiento de microorganismos Gram negativos a partir de muestras clnicas, de alimentos, agua, productos lcteos y productos farmacuticos. En este medio se aslan y diferencian bacilos entricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa. El Agar MacConkey en su frmula original fue utilizado para diferenciar cepas de Salmonella typhosa de otros miembros del grupo coliforme. La frmula fue modificada para mejorar el crecimiento de cepas de Salmonella y Shigella y con ello tambin se mejoraron las reacciones diferenciales entre los microorganismos patgenos entricos y el grupo coliforme. El Agar MacConkey contiene cristal violeta y sales biliares como inhibidores de organismos Gram positivos. Las colonias aisladas de bacterias que fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de precipitado de sales biliares el cual es debido a una cada en el pH por la fermentacin de la Lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa (como las de S. typhi, S. paratyphi y S. disentery) permanecen incoloras. Composicin Digerido Pancretico de Gelatina 17.0 g/L Sales Biliares 1.5 g/L Digerido Pptico de Tejido Animal 1.5 g/L Cloruro de Sodio 5.0 g/L Digerido Pancretico de Casena 1.5 g/L Cristal Violeta 0.001 g/L Lactosa 10.0 g/L Agar Bacteriolgico 13.5 g/L Rojo Neutro 0.03 g/L pH 7.1 0.2 Resultados Los microorganismos lactosa positiva dan colonias de color rosa con o sin zona de precipitado alrededor. Los microorganismos lactosa negativos dan colonias incoloras o de color muy claro Agar Chapman El Agar Sal y Manitol o Chapman es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos a partir de muestras clnicas y diversos materiales. El Agar Sal y Manitol fue formulado por Chapman para obtener el aislamiento de estafilococos, inhibiendo el crecimiento de otras bacterias al utilizar una alta concentracin de sal. Al adicionar cloruro de sodio al 7.5% al Agar Rojo de Fenol y Manitol, observ un abundante crecimiento de cepas patgenas de estafilococos (coagulasa positivos) que formaban colonias y halos amarillos a diferencia de las cepas no patgenas que dan colonias pequeas de color rojo y sin cambio en el color del medio. En este medio, las peptonas y el extracto de carne proporcionan la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales. El D.manitol es el carbohidrato. La alta concentracin de cloruro de sodio inhibe el crecimiento de flora acompaante. El rojo de fenol acta como indicador de pH. El agar es adicionado como agente solidificante.

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Composicin Digerido Pptico de Tejido Animal 5.0 g/L Cloruro de Sodio 75.0 g/L Digerido Pancretico de Casena 5.0 g/L D-Manitol 10.0 g/L Extracto de Carne 1.0 g/L Rojo de Fenol 0.025 g/L Agar Bacteriolgico 15.0 g/L pH 7.4 0.2 Resultados S. aureus: Colonias pequeas a medianas con zonas amarillas alrededor Micrococos: Colonias grandes de color naranja a blanco Otros Estafilococos: Colonias pequeas de color rojo sin cambio en el color del medio Bacterias Gram negativas: Inhibidas o muy poco desarrollo Estreptococos: Sin crecimiento Agar sangre La Base de Agar Sangre es un medio utilizado para el aislamiento y cultivo de una amplia variedad de microorganismos, adicionado de sangre es til para el cultivo de microorganismos fastidiosos. Este medio tambin es conocido como BAB por sus siglas en ingls. La Base de Agar Sangre generalmente es suplementada con sangre de carnero, conejo o caballo al 5-10% para aislar cultivar y estudiar reacciones hemolticas de una amplia variedad de microorganismos fastidiosos patgenos. En 1919 Brown experiment con formulaciones de agar sangre para observar el efecto hemoltico de las colonias de neumococcos. La Base de Agar Sangre es una modificacin del medio Hormone de Huntoon con una ligera composicin cida. Este medio est especificado en los Mtodos Estndar para el anlisis de alimentos. La infusin de msculo de corazn y la peptona de casena proporcionan la fuente de nitrgeno, carbono, aminocidos y protenas. El extracto de levadura provee vitaminas y aminocidos esenciales. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el agar es usado como agente solidificante. Este medio est relativamente libre de azcares reductores los cuales interfieren en las reacciones hemolticas de estreptococos. El patrn de las reacciones hemolticas puede variar dependiendo del tipo de sangre utilizada. Composicin Infusin de Msculo de Corazn 2.0 g/L Extracto de Levadura 5.0 g/L Cloruro de Sodio 5.0 g/L Agar Bacteriolgico 15.0 g/L Digerido Pancretico de Casena 13.0 g/L Bacteriolgico 15.0 g/L pH 7.3 0.2 Resultados Los estreptococos hemolticos presentan colonias translcidas u opacas, grises, pequeas y mucoides con una zona de hemlisis. Otros organismos que pueden producir hemlisis incluyen a Listeria, varias conirebacterias, estafilococcos hemolticos, E. coli y Pseudomonas. Las colonias de neumococcos aparecen planas, lisas, translcidas, grisceas y algunas veces mucoides rodeadas por una pequea zona verdosa de alfa hemlisis. Las colonias de estafilococcos tienen una apariencia opaca, de color blanco a amarillo y rodeadas de una zona clara por la beta hemlisis. Es importante realizar el examen microscSuperficie. APM 2011 Tecnologa Mdica

Agar Tripticasa El TSA Agar es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias aerobias y anaerobias. Permite visualizar reacciones hemolticas que producen muchas especies bacterianas. Tiene por base una fuente proteica (digeridos trpticos, digeridos proteicos de soja) con una pequea cantidad de hidratos de carbono naturales, cloruro sdico y 5% de sangre. Es un medio recomendado para la deteccin y recuento de una amplia gama de microorganismos. La presencia de Lectina y Tween permite neutralizar la actividad antibacteriana, facilitando la investigacin de los grmenes en productos o superficies que contengan: Aldehdos, derivados fenlicos, o amonio cuaternario. La aportacin de casena y peptonas de soja al Agar de Tripticasasoja hace el medio muy nutritivo por el suministro de nitrgeno orgnico, particularmente aminocidos y pptidos de cadena ms larga. La presencia de estas peptonas en el medio permite el cultivo de una gran variedad de grmenes aerobios y anaerobios que crecen rpidamente, as como los del gnero Candida. Tambin permite el crecimiento de algunos grmenes exigentes como estreptococos, pneumococos, Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella. Composicin Polisorbato-80 5.0 g/L Histidina 1.0 g/L Peptona de Soja 5.0 g/L Sodio Tiosulfato 0,5 g/L Lecitina 0,7 g/L Peptona de Casena 15.0 g/L Sodio Cloruro 5.0 g/L Agar 15.0 g/L Microorganismos del TSA Agar Escherechia coli Staphylococcus aureus Bacillus subtilis Candida albicans Aspergillus niger Pseudomonas aeuroginosa Agar Hierro Lisina (LIA) El Agar de Hierro y Lisina es un medio utilizado para la diferenciacin de microorganismos entricos en base a su capacidad para desaminar o descarboxilar la lisina y de producir sulfuro de hidrgeno. Este medio tambin es conocido como LIA. Edwards y Fife desarrollaron este medio para diferenciar a Salmonella arizonae. Debido a que S. arizonae fermenta la lactosa rpidamente, la produccin de H2S es suprimida en el Agar de Hierro y Triple Azcar. Eliminando la lactosa e incorporando la lisina, Edwards y Fife encontraron que este medio diferencia a los bacilos entricos en base a su capacidad para descarboxilar o desaminar la lisina y producir H2S. Este medio es especialmente recomendado para la identificacin de bacilos que fermentan rpidamente la lactosa. En este medio, la peptona provee la fuente de carbono y nitrgeno. El extracto de levadura provee vitaminas y cofactores para el crecimiento. La dextrosa es la fuente de energa. El hidrocloruro de L-lisina es el sustrato donde actan las enzimas descarboxilasa o desaminasa. El citrato frrico de amonio y el tiosulfato de sodio actan como indicadores de la produccin de H2S. El prpura de bromocresol es un indicador de pH. El agar es adicionado como agente solidificante. Composicin Peptona de Gelatina 5.0 g/L L-Lisina 10.0 g/L Extracto de Levadura 3.0 g/L Tiosulfato de Sodio 0.04 g/L APM 2011 Tecnologa Mdica

Dextrosa 1.0 g/L Citrato de Hierro y Amonio 0.5 g/L Prpura de Bromocresol 0.02 g/L Agar Bacteriolgico 13.05 g/L pH 6.7 0.2 Procedimiento: 1. A partir de una colonia aislada, sembrar el medio por picadura en el fondo y por estra en la superficie. 2. Incubar a 35 2C durante 18 a 48 horas. 3. Examinar los tubos para observar cambios de color y ennegrecimiento. Resultados Prueba Produccin de H2S Descarboxilacin de la Lisina Desaminacin de la Lisina Reaccin positiva Formacin de un precipitado negro en la superficie Fondo y superficie del medio de color prpura ( alcalino) Superficie roja Reaccin negativa No hay formacin de precipitado negro Fondo amarillo (cido), superficie prpura (alcalina) Superficie prpura

Proteus y Providenza producen cultivos con superficie roja sobre fondo amarillo Medio MIO El Medio MIO es utilizado para la diferenciacin de enterobacterias en base a su movilidad, capacidad para descarboxilar la lisina y la produccin de indol. Este medio tambin es conocido como Medio para Movilidad Indol y Ornitina. Edered y Clark as como Oberhofer y Hajkowsky desarrollaron el Medio MIO para poder observar las reacciones de movilidad, produccin de indol y descarboxilacin de la lisina simultneamente. Estas reacciones son determinantes para la identificacin de enterobacterias. En este medio, las peptonas proporcionan la fuente de carbono y nitrgeno. El extracto de levadura provee las vitaminas y cofactores requeridos para el desarrollo. La dextrosa proporciona la fuente de energa. El agar es adicionado para demostrar la movilidad. El prpura de bromocresol acta como indicador de cambios de pH facilitando la deteccin de la descarboxilacin de la lisina. Composicin Peptona de Gelatina 10.0 g/L L-Ornitina 5.0 g/L Peptona de Casena 10.0 g/L Dextrosa 1.0 g/L Extracto de Levadura 3.0 g/L Prpura de Bromocresol 2.0 g/L Agar Bacteriolgico 2.0 g/L pH 6.5 0.2 Procedimiento 1. A partir de una colonia aislada sembrar el medio desde el fondo del tubo. 2. Incubar a 35 2C durante 24 a 48 horas. 3. Examinar los tubos para observar cambios de color y movilidad.

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Resultados Reaccin positiva Reaccin negativa Movilidad Difusin del crecimiento en El crecimiento no difunde la lnea de siembra Descarboxilacin de Ornitina El medio no cambia de color El medio cambia de color prpura a amarillo Indol (adicionar de 3 a 4 Desarrollo de color rosa a No hay cambio de color gotas rojo del reactivo de Kovacs) TSI Agar Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tSuperficie sulfuro de hierro de color negro. Composicin Extracto de carne 3.0 g/L Pluripeptona 20.0 g/L Cloruro de sodio 5.0 g/L Lactosa 10.0 g/L Sacarosa 10.0 g/L Glucosa 1.0 g/L Sulfato de hierro y amonio 0.2 g/L Tiosulfato de sodio 0.2 g/L Rojo de fenol 0.025 g/L Agar 13.0 g/L pH 7.3 0.2 Procedimiento A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio. Cultivar a 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis. Resultados 1-Superficie alcalina/fondo cido (Superficie color rojo/fondo color amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Superficie cida/fondo cido (Superficie color amarillo/fondo color amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa. 3-Superficie alcalina/fondo alcalino (Superficie color rojo/fondo color rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares. 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. 5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico. Prueba

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Microorganismo E. coli K. pneumoniae P. mirabilis S. typhimurium S. enteritidis S. flexneri P. aeruginosa A: cido K: alcalino

Superficie/Fondo A/A A/A K/A K/A K/A K/A K/K

Produccin de gas + + + + -

Produccin de cido sulfhdrico + + + -

Prueba de la Catalasa Se utiliza para diferenciar Staphylococcus de Streptococcus, que son bacterias que viven en ambientes aerobios y que requieren de la enzima catalasa para convertir el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno molecular. Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con H2O2 al 3% y se producen burbujas de oxgeno. Se emplea para diferenciar el gnero Staphylococcus (catalasa positivo) del gnero Streptococcus (catalasa negativo) Procedimiento Se coloca una gota de H2O2 al 3% sobre un portaobjetos y luego se transfiere una porcin de colonia sobre el H2O2 realizndose una emulsin. En lo posible debe tomarse la colonia a partir de un medio sin sangre ya que los eritrocitos tienen actividad de catalasa y pueden falsear los resultados. Esta prueba tambin puede realizarse en un aislamiento en tubo, simplemente colocando unas gotas de H2O2 dentro del mismo. Prueba de la Coagulasa La coagulasa es una protena producida por varios microorganismos que permite la conversin del fibringeno en fibrina. En el laboratorio, se usa para distinguir entre diferentes tipos de Staphylococcus. Un resultado de coagulasa positivo indica que la muestra contiene S. aureus. Esta protena tambin es producida por Yersinia pestis. La coagulasa reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama staphylothrombina, y permite que la enzima proteasa convierta el fibringeno en fibrina. Esto hace que se coagule la sangre. La coagulasa est estrechamente relacionada con la superficie de la bacteria S. aureus y puede revestir su superficie con fibrina al entrar en contacto con la sangre. Se cree que sta cubierta de fibrina del Staphylococcus es capaz de resistir la fagocitosis haciendo esta bacteria tenga un factor de virulencia mayor. Permite diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de Staphylococcus (coagulasas negativos). La tcnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada. Prueba de portaobjetos Prueba del portaobjetos se hace conjuntamente con un control negativo para descartar auto aglutinacin. Se ponen 2 gotas de solucin salina en el portaobjetos rotulado con un nmero de muestra, Test (T) y control (C). Las 2 gotas son emulsionadas con la prueba de organismo mediante el uso de un asa recta o circular. Se pone una gota de plasma (plasma de conejo con anticoagulante (EDTA) en la gota de solucin salina inoculada correspondiente a la prueba y se mezcla bien con un una varilla de madera. Agitar el portaobjeto con cuidado unos 10 segundos. Si es positivo: Se podr observar aglutinacin en el plasma en los 10 segundos mientras que no se observar aglutinamiento en la gota de solucin salina. Si es negativo: No se observara aglutinamiento. APM 2011 Tecnologa Mdica

Si la prueba de la coagulasa de portaobjetos fuera negativa, debera hacerse una prueba de tubo como confirmacin. El aglutinamiento en las dos gotas es un indicativo de auto aglutinacin y por lo tanto debemos descartar la prueba de tubo. Prueba del tubo de ensayo La prueba se utiliza plasma que ha sido inoculado con una colonia de staphylococcus (por ejemplo, con un coco gram positivo, catalasa positivo). Luego el tubo se incuba a 37 grados Celsius en 1 horas. Si es negativo entonces continuamos la incubacin por unas 18 horas. Si sale positivo (por ejemplo, la colonia problema es S. aureus), el suero coagular, dando como resultado un cogulo (a veces el cogulo esta tan desarrollado que el liquido se solidifica completamente). Si sale negativo, el plasma permanece liquido. Un resultado negativo podra indicar que se podra tratar de S. epidermidis pero solo con unas pruebas ms precisas se puede confirmar este hecho, como por ejemplo el API o mtodos de BBL CRYSTAL.

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