3 Principio

El formaldehdo se extrae de una muestra de tejido con agua a 40 C. La cantidad de formaldehdo se determina colorimtricamente.

4 Reactivos
Todos los reactivos sern de calidad analtica. 4.1 Agua destilada o agua grado 3 que cumplan con la norma ISO 3696. 4.2 Acetilacetona reactivo (reactivo de Nash) Disolver 150 g de acetato de amonio en unos 800 ml de agua (4.1), aadir 3 ml de cido actico glacial y 2 ml de acetilacetona, la transferencia en un matraz aforado de 1000 ml y aforar a la marca de agua (4.1). Guarde en un frasco mbar. El reactivo se oscurece un poco durante las primeras 12 h. Por esta razn, el reactivo debe realizarse 12 horas antes de su uso. De lo contrario, el reactivo es utilizable durante un perodo considerable de tiempo, por lo menos 6 semanas. Dado que la sensibilidad puede cambiar un poco durante un largo perodo de tiempo, es una buena prctica realizar una curva de calibracin semanal para corregir los ligeros cambios en la curva estndar. 4.3 Solucin de formaldehdo, aproximadamente el 37% (M/v o M/m). 4.4 Solucin etanlica de dimedona. Preparar disolviendo 1 g de dimedona (dimetil-dihidro resorcinol o 5, 5-dimethylcyclohexanedione) en el etanol y dilucin de la solucin con etanol para hacer 100 ml. Preparar inmediatamente antes de su uso.

5 Aparatos
5.1 Matraces de aforacin con tapn, de 50 ml, 250 ml, 500 ml y 1000 ml. 5.2 Frascos, de 250 ml con tapn. 5.3 Pipetas, 1 ml, 5 ml, 10 ml y 25 ml y graduada a intervalos de 5 ml. NOTA Un sistema de pipeta automtica de la misma precisin que las pipetas manuales, puede ser utilizado. 5.4 Buretas, 10 ml y 50 ml. 5.5 Espectrmetro, capaz de leer absorbancia de mnimo 3 decimales a una longitud de onda de 412 nm.

5.6 Tubos de ensayo y celdillas de espectrmetro. 5.7 Bao de agua, capaz de mantener una temperatura de (40 2) C. 5.8 Filtros, hecho de vidrio resistente al calor con un tamao de poro entre 40 m y 100 m (P100 smbolo de los poros de acuerdo con ISO 4793). 5.9 Balanza, con una precisin de 0.2 mg

6. Preparacin de solucin estndar y calibracin

6.1 Preparacin Prepare una solucin stock de formaldehdo de aproximadamente 1,500 mg/l, por dilucin de 3.8 ml de solucin de formaldehdo (4.3) en 1 litro de agua (4.1). Determine la concentracin de formaldehdo en la solucin stock por el mtodo estndar proporcionado en el anexo A. Registrar la concentracin exacta de esta solucin stock estandarizada. Esta solucin se guardar durante un mximo de 4 semanas y se utiliza para preparar las diluciones stock. 6.2 Dilucin La concentracin equivalente del formaldehdo en la muestra, basada en una masa de 1 g de la muestra y 100 ml de agua, ser de 100 veces las concentraciones exactas de las soluciones estndar. 6.2.1 Elaboracin de soluciones estndar (S2) Diluir 10 ml de la solucin estndar ajustada (que contiene 1.5 mg/ml de formaldehdo), preparado en el punto 6.1, con agua (4.1) a 200 ml en un matraz aforado. Esta solucin contiene 75 mg/l de formaldehdo. 6.2.2 Preparacin de soluciones de calibracin Prepare las soluciones de calibracin de la solucin estndar (S2), por dilucin con agua (4.1) En matraces aforados de 500 ml, con un mnimo de cinco soluciones de las siguientes 1 ml de S2 para 500 ml, conteniendo 0.15 mg CH2O/ml = 15 mg/kg CH2O en el tejido 2 ml de S2 para 500 ml, conteniendo 0.30 mg CH2O/ml = 30 mg/kg CH2O en el tejido 5 ml de S2 para 500 ml, conteniendo 0.75 mg CH2O/ml = 75 mg/kg CH2O en el tejido 10 ml de S2 para 500 ml, conteniendo 1.50 mg CH2O/ml = 150 mg/kg CH2O en el tejido 15 ml de S2 para 500 ml, conteniendo 2.25 mg CH2O/ml = 225 mg/kg CH2O en el tejido 20 ml de S2 para 500 ml, conteniendo 3.00 mg CH2O/ml = 300 mg/kg CH2O en el tejido 30 ml de S2 para 500 ml, conteniendo 4.50 mg CH2O/ml = 450 mg/kg CH2O en el tejido 40 ml de S2 para 500 ml, conteniendo 6.00 mg CH2O/ml = 600 mg/kg CH2O en el tejido

Para calcular la primera curva de regresin del tipo y = a + bx. Esta curva de regresin se utiliza para todas las mediciones. Si las muestras contienen una cantidad de formaldehdo mayor que 500 mg/kg diluir la solucin de la muestra. NOTA Esta dilucin doble es necesaria para en la muestra contar con las concentraciones de formaldehdo en el mismo las soluciones de calibracin como en las soluciones de ensayo de los tejidos. Si el tejido contiene 20 mg / kg de formaldehdo, un espcimen de 1.00 g se extrae con 100 ml de agua, la solucin contiene 20 mg de formaldehdo y de esto se desprende, 1 ml de la solucin contiene 0.2 mg de formaldehdo.

7 Preparacin y acondicionamiento de las muestras

No acondicionar la muestra debido a que el presecado y la humedad en relacin con el aire pueden causar cambios en el contenido de formaldehdo de la muestra. Antes de la prueba de almacenar la muestra en un recipiente. De la muestra, cortar dos muestras de anlisis en trozos pequeos, y con un peso de aproximadamente 1 g de las piezas con una precisin de 10 mg. Si el contenido de formaldehdo es bajo, aumentan el peso de la pieza de prueba a 2,5 g con el fin de lograr una precisin suficiente. Para cada muestra, poner las piezas que se pesaron en un matraz de 250 ml con tapn (5.2) y aadir 100 ml de agua (4.1). Tapn bien y colocar en un bao de agua a (40 2) C por (60 5) min. Agitar el frasco por lo menos cada 5 minutos. A continuacin, filtrar la solucin a otro matraz a travs de un filtro (5.8). En caso de controversia utilizar una muestra paralela acondicionado para calcular un coeficiente de correccin usado para corregir de la muestra del ensayo a utilizar para la prueba. Cortar la muestra del ensayo, se pesa inmediatamente y de nuevo despus de un acondicionamiento (de acuerdo con ISO 139). Utilice estos valores para calcular el coeficiente de correccin de dos nmeros enteros y el uso del coeficiente para calcular el peso acondicionado de la muestra de ensayo utilizado para la solucin de la muestra.

8 Preparacin y acondicionamiento de las muestras

8.1 Ponga 5 ml de la solucin muestra filtrada en un tubo (5.6) y 5 ml de las soluciones estndar de formaldehdo en los tubos ms (5.6). Aadir 5 ml de reactivo de acetilacetona (5.2) en cada tubo y agitarlos. 8.2 Mantenga los tubos de ensayo primero en un bao de agua a (40 2) C durante (30 5) minutos y luego a temperatura ambiente durante (30 5) min. Tomar la solucin de 5 ml de solucin de reactivo acetilacetona en 5 ml de agua ha sido tratada de la misma manera como el blanco y usar un espectrmetro, medir las absorbancias en una celda de 10 mm de absorcin a una longitud de onda de 412 nm (4.1).

8.3 Si se prev que los tejidos tienen los niveles de formaldehdo extraccin encima de 500 mg/kg, o si los niveles calculados a partir de la prueba con una relacin 5:5 de ms de 500 mg/kg diluir el extracto para dar absorbancia en el rango de la curva de calibracin (el factor de dilucin se tendrn en cuenta al calcular los resultados). 8.4 Para tener en cuenta el efecto de las impurezas o decoloracin en la solucin de muestra, poner 5 ml de la solucin de muestra en un tubo de ensayo por separado, aadir 5 ml de agua (4.1) en lugar de acetilacetona y tratar de la misma manera que el anterior. Determinar la absorbancia de esta solucin, de la misma manera que el anterior, pero el uso de agua (4.1) como control. 8.5 Realizar al menos dos pruebas simultneamente.
PRECAUCIN. La exposicin del color amarillo desarrollado de la luz solar directa durante un periodo de tiempo har que algunos se decoloren. Si existe un retraso considerable (por ejemplo 1 h) en la lectura de los tubos despus de la aparicin del color y la luz solar intensa se presenta, se debe tener cuidado para proteger los tubos, como cubrindolos con una caja libre de formaldehdo. De lo contrario el color es estable durante un tiempo considerable (por lo menos una noche) y la lectura se puede retrasar, si lo desea.

8.6 En caso de duda de que la absorcin no pueda ser debido al formaldehdo, por ejemplo a un agente colorante extrado, llevar a cabo una prueba de confirmacin, con dimedona (ver 8.7). NOTA La dimedona reacciona con el formaldehdo, y por lo tanto no hay color que resulta de reaccin de formaldehdo se observar. 8.7 Para la confirmacin dimedona, poner 5 ml de la solucin de muestra en un tubo de ensayo (diluido en este caso, vase el captulo 7), aadir 1 ml de solucin de etanol de dimedona y agitar. Calentar la solucin en un bao de agua a (40 2) C durante (10 1) minutos, a continuacin, aadir 5 ml de reactivo de acetilacetona, agitar y seguir calentando la solucin en un bao de agua a (40 2) C de (30 5) min. Dejar la solucin an a temperatura ambiente durante (30 5) min. Determinar la absorbancia de la solucin con una solucin de control preparado de la misma manera que el anterior, pero con agua en lugar de la solucin de la muestra. La absorcin de formaldehdo a 412 nm (4.1) desaparece.

9 Clculo y expresin de los resultados

Para cada muestra corregir la absorbancia de la muestra de ensayo de la siguiente manera:

A = As - Ab - (Ad)
donde A es la absorbancia corregida As es la absorbancia de la muestra Ab es la absorbancia del reactivo blanco Ad es la absorbancia de la muestra en blanco (slo en caso de decoloracin o cualquier otra contaminacin)

Determinar la cantidad de formaldehdo en mg/ml de la curva de calibracin, utilizando el valor de la absorbancia corregida. Calcular la cantidad de formaldehdo extrado de cada muestra (WF) a la precisin de mg/kg mediante la siguiente ecuacin:

Donde es la concentracin de formaldehdo en solucin (en mg/l) como se lee en la curva de calibracin. m es la masa de la muestra de prueba, en gramos. Calcular la media aritmtica de los dos valores. Si el resultado es inferior a 16 mg/kg informar como "no detectable".

10 Informe de la prueba
El informe del ensayo incluir la siguiente informacin: a. El nmero y ao de publicacin de esta Norma Internacional, es decir, la norma ISO 141842:2011. b. La fecha de la muestra se ha recibido de los medios en que se almacenan antes de su prueba y la fecha de la prueba. c. Descripcin de la muestra analizada y empaquetada. d. La masa de las muestras de ensayo y, si procede, el coeficiente de correccin para la masa; e. El intervalo de la curva de calibracin. f. La cantidad de formaldehdo extrado de la muestra, expresado en la clusula 9. g. Cualquier desviacin, por acuerdo o no, por el procedimiento especificado.

Anexo A
(Normativa)
La estandarizacin de la solucin stock de formaldehdo

A.1 General
La solucin stock que contiene aproximadamente 1,500 mg/ml de formaldehdo estandarizado con precisin con el fin de preparar una curva de calibracin precisa para su uso en anlisis colorimtrico.

A.2 Principio
Una alcuota de la solucin madre se hace reaccionar con un exceso de sulfito de sodio seguida de retro-titulacin con una solucin de cido en presencia de timolftalena como indicador.

A.3 Aparato
A.3.1 Pipeta, 10 ml. A.3.2 Pipeta, 50 ml. A.3.3 Bureta, 50 ml. A.3.4 Matraz Erlenmeyer, 150 ml.

A.4 Reactivos
A.4.1 Sulfito de sodio, cNa2SO3 = 1 mol/l, se obtiene disolviendo 126 g de Na2SO3 anhidro por litro de agua (4.1) A.4.2 Timolftalena, 10 g/1 en etanol. A.4.3 cido sulfrico, cH2SO4 = 0.01 mo1/1. NOTA Este reactivo puede ser comprado en un formulario estandarizado o debe estar estandarizado con una solucin de hidrxido de sodio estndar.

A.5 Procedimiento
Aadir 50 ml de sulfito de sodio (A.4.1) en el matraz Erlenmeyer (A.3.4). Aadir dos gotas de indicador timolftalena (A.4.2). Aadir unas gotas de cido sulfrico (A.4.3), si es necesario hasta que desaparezca el color azul.

Pipetear 10 ml de la solucin de formaldehdo stock en el matraz (el color azul volver a aparecer). Valorar la solucin de cido sulfrico (A.4.3) hasta que el color azul desaparezca. Registrar el volumen de solucin de cido sulfrico utilizado. NOTA El volumen de cido sulfrico debe ser de aproximadamente 25 ml.

NOTA Un medidor de pH calibrado se puede utilizar en lugar de timolftalena indicador, en cuyo caso se alcanza el punto final a pH = 9,5. Llevar a cabo el procedimiento por duplicado.

A.6 clculos
1 ml de 0.01 mol/l de cido sulfrico es igual a 0.6 mg de formaldehdo. Calcular la concentracin de formaldehdo en la solucin stock (en g/ml) de la siguiente ecuacin;
Volumen de la muestra utilizada (en ml) Volumen de cido sulfrico utilizado (en ml) 0,6 1000

Calcular el promedio de los resultados y el uso de la concentracin determinada anteriormente en la preparacin de la curva de calibracin para el anlisis colorimtrico.