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Conocer la importancia de la determinacin de la enzima AST (Aspartato Amino Transferasa) Realizar de manera correcta la tcnica para obtener una adecuada medicin de actividad enzimtica.

FUNDAMENTO DE LA TECNICA En esta tcnica se lleva a cabo la siguiente reaccin: *Alanina + acido alfa cetoglutarico en la presencia de la enzima ALT da como resultado acido glutmico + ac. piruvico. Alanina + acido -cetoglutarico

LDH

Glutamato + ac. Piruvico

*El ac. Piruvico mas NADH + H+ en presencia de la enzima LDH dando como resultado acido lctico mas NAD.

Ac.piruvico + NADH + H+ INTRODUCCION

LDH

Lactato + NAD

Las reacciones de transaminacin mas frecuentes son aquellas en las que participa en alfa-cetoglutarato cuya aminacin produce glutamato, casi todo los aminocidos pueden ceder grupo amino al alfacetoglutarato, a travs de una reaccin de transaminacin para formar el cetocido correspondiente y glutamato. La reaccin precedente corresponde a la catalizada por la Transaminasa Glutmico Pirvica (TGP) siendo igual para la que cataliza la Transaminasa Glutmico Oxaloacetica (TGO), solamente cambiando el aminocido por aspartato y el cetocido por oxaloacetato, es por eso que se les llama tambin AlaninoAminotransferasa (ALT) y AspartatoAminotranferasa (AST), La TGO y la TGP Su aumento se debe a un proceso necrtico en rganos con alta funcionalidad como lo es el hgado y el miocardio. En lesiones hepticas aumentan ambas transaminasas en el suero; cuando sobreviene la mejora clnica ambas descienden en forma paralela, y si aparece una recada, las dos suben nuevamente. Sus modificaciones son muy precoces y se puede hacer el diagnstico de la hepatitis hasta 3 semanas antes de la aparicin de los sntomas y signos clnicos. Las transaminasas tambin se elevan en casos de cirrosis e ictericia por obstruccin; en las ictericias por lesin hepatocelular, su elevacin es muy marcada, coincidiendo con una elevacin muy baja o nula de fosfatasa alcalina, mientras en las obstrucciones las transaminasas suben de modo discreto y la fosfatasa alcalina se encuentra elevada.Aunque estas enzimas se encuentran en todos los tejidos, se relacionan preferentemente, en los procesos de escape de enzimas del miocardio o el hgado. Estas enzimas siempre estn presentes en el

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suero pero en concentraciones muy bajas, por lo tanto su elevacin nos indicara que hay un proceso anormal en estos rganos, lo cual las hace muy tiles en los diagnsticos

MATERIAL Y METODOS MATERIAL Pipetas graduadas Pipeta automatica Equipo vacutainer Bao Mria Centrifuga Espectrofotmetro

REACTIVOS R1 (vial): Alanina y tris (regulador) R2 (patilla): NADH LDH a-cetoglutarato METODOS Obtener sangre mediante puncin venosa Centrifugar la muestra durante 5 minutos a 3500 rmp. Mezclar R1 (vial) con R2 (pastilla) hasta que se disuelva bien la pastilla. En un tubo de ensaye colocar la mezcla que se hizo con R1 y R2 y agregar 100ml de suero Incubar por 1 minuto a temperatura ambiente. Leer en el espectrofotmetro la absorbancia de la muestra durante 3 minutos a 340nm.

VALORES DE REFERENCIA

Valores de referencia Hombre mujer Hasta 22u/L hasta 18 u/L

ANALISIS DE RESULTADOS

Como podemos observar, los resultados obtenidos estn un poco levados ya que la muestra es de mujer y esta su valor normal es hasta 17 u/L, este resultados nos pueden indicar que el paciente pudiera tener una enfermedad heptica y esto puede deberse a: Cirrosis (cicatrizacin del hgado). Muerte del tejido del hgado (necrosis heptica).

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Hepatitis. Hemocromatosis. Falta de flujo sanguneo al hgado (isquemia heptica). Tumor o cncer del hgado. Medicamentos hepatotxicos. Mononucleosis. Pancreatitis (hinchazn e inflamacin del pncreas).

Cabe mencionar que la paciente aseguro que fuma ms de 4 cigarrillos al da esto puedo ser el factor por el cual esta un poco elevado el resultado, ya que el tabaquismo crnico afecta las concentraciones de leucocitos, lipoprotenas, algunas enzimas, hormonas, vitaminas, marcadores tumorales y metales pesados, el humo del tabaco se encuentran un gran nmero de componentes piridnicos, cido cianhdrico y tiocianato. Ellos pueden ser los responsables de los cambios de las concentraciones citadas por efectos directos o indirectos y como se puede ver se esta analizando una enzima que es la ALT (Alaninaaminotransferasa) CONCLUSIONES

La determinacin de ALT se aplica en situaciones para evaluar las causas posibles de una lesin al hgado.

Estas enzimas se encuentran en diferentes tejidos. En algunos tejidos su concentracin es ms alta que en otros.

CUESTIONARIO

1.-Cules son los sustratos que se utilizan para la ALAT y ASAT? R= La ALT acta sobre la alanina y el acido cetoglutarato para dar como resultado acido piruvico mas acido glutmico. La AST acta sobre el acido aspartico y acido cetoglutarato para dar como resultado acido oxal- actico mas acido glutmico. En los dos casos las reacciones son de tipo reversible 2.-En qu casos se encuentran elevados los valores de AST? R= Se encuentra en mayor concentracin cuando se presenta infarto del miocardio, mononucleosis infecciosa, hepatitis viral.

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3.-En qu casos se encuentran los valores de ALT? R= Su determinacin nos ayuda al diagnostico de problemas hepticos, cirrosis, ictericia, tumores metasticos del hgado, infarto al miocardio

4.-Que otros mtodos existen para la determinacin de AST y ALT? R= El mtodo colorimtrico el cul contiene a alanina mas acido cetoglutarico producir acido piruvico mas acido glutarico, el acido piruvico mas 2,4 dinitro fenilhidrazina en un medio alcalino dar como resultado una hidrazona de color caf-rojizo

5.-Porque es necesario incubar a 37 C? R= Es necesario a esta temperatura ya que las enzimas se encuentran en el cuerpo a temperatura de 37C, adems de que las enzimas requieren de condiciones especificas para poder realizar su funcin adecuadamente

6.-En un infarto al miocardio cual de las dos enzimas se eleva primero? R= La enzima que se eleva inicialmente es la AST

7.-Normalmente, se encuentran elevadas estas enzimas en sangre, si o no. Porque? Normalmente estas enzimas se encuentran en sangre (suero) en determinadas concentraciones, sin embargo, sus niveles llegan a aumentar cuando se produce algn tipo de lesin de tejido u rgano.