MA RIE LA LAZCANO VARGAS Quiero agradecer de manera muy especial a mis maestros que han sido parte fundamental

en mi formacion academica, he logrado todos mis xitos gracias a su enseanza muy enriquesida en valores que hoy en dia han definido mi carcter y mi formacin moral.

DULCE KARINA DEL ANGEL TEMPLOS. Yo le agradezco a mi mama que me apoya y el esfuerzo que hace para seguir estudiando, tambin a mis maestros por su tiempo y la enseanza que me dieron que son la base de mi formacin academica.

En esta investigacin trataremos el tema de la falta de informacin sobre la utilizacin de productos transgnicos en alimentos por parte de las empresas, abarcaremos de manera sencilla pero con un contenido significativo de forma que la informacin provoque el inters del lector. En las pginas siguientes explicaremos composicin qumica de los cidos nucleicos que son el ADN (acido desoxiribonucleico) y el ARN (acido ribonucleico) siendo estos dos portadores de la informacin gnica. Desde tiempos remotos los hombres se preguntaron como es que tenemos el mismo color de ojos de nuestra madre o la foma de la cara del padre, por esa razn chargaff demostr que las proporciones de las bases nitrogenadas eran diferentes en los distintos organismos, aunque seguan algunas reglas y Watson y Crick (1953) fueron los primeros investigadores en proponer una estructura para los cidos nucleicos llamada doble helice. La importancia de las moleculas de ADN es que pueden copiar por medio de enzimas especializadas y de esta manera se conserva su informacin para la siguiente generacin. Parte importante para creacin de organismos trangenicos es la codificacion del ADN en base a esto existen mtodos para la insercin de nuevos genes en plantas los cuales son: El mtodo fsico Agrobacterium tumefaciens Veremos los fines que se tienen a la hora de la produccin de transgnicos que serian: mejorar la productividad y resistencia a una enfermedad o plagas y el aspecto fsico. Los principios antes mencionados son la base teorica para la creacin de trangenicos que estn presentes en los productos que consumimos en la vida diaria, de modo que en esta investigacin mostraremos que empresas utilizan materia prima genticamente modificada y no informa la presencia de ellas.

Los motivos por los cuales decidimos realizar nuestra tesina sobre el tema de la falta de informacin sobre la utilizacin de transgnicos en los productos que consumimos de manera cotidiana nos parecieron muy importantes y sobre todo es un tema que nos debe preocupar por que consumimos sin saber que son o de donde provienen. Y De acuerdo con la Organizacin de Naciones Unidas, el derecho a la informacin es el primer derecho bsico de los consumidores. Contar con informacin de los bienes y servicios que las compaas ofrecen de manera oportuna, completa, clara y veraz permite a los consumidores elegir qu es lo que quieren comprar. Por ello los mexicanos tenemos derecho a saber si los alimentos que adquirimos para nuestras familias contienen ingredientes o derivados de transgnicos, para que as cada uno decidamos si los comemos o no. Este derecho no est garantizado por la Ley de Bioseguridad de Organismos Genticamente Modificados vigente en Mxico, que slo obliga a informar sobre los transgnicos que sean nutrimentalmente distintos de forma significativa. Esta caracterstica es vaga y discutible por lo que la industria puede usar esta imprecisin para evadir su obligacin de informar al consumidor.

La coperacion de las leyes ayudado a que nuestros derechos sean violados como consumidores no tenemos el respeto ni la concideracion de las empresas ni las leyes que nos deberan proteger, pero no lo hace. De tal manera la situacin es preocupante por lo que debemos saber que articulo esta libre de algn organismo genticamente modificado que te pueda provocar una nueva alergia.

Es necesario que el consumidor conosca que industrias son las que evaden la obligacin de informar. Sobre todo tenemos derecho a saber que consecuencias prodria traer el consumir estos artculos para nuestra salis, las concecuenacias a nuestro ambiente y la combinacin de los organismos nativos con los transgnicos.

Sobre todo nos interesa informar de manera clara la situacin actual que vivomos con las nuevas tecnologas.
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Demostrar que empresas utilizan transgnicos en los productos que comercializan y no informan al consumidor.

Mostrar la composicin qumica y las bases biolgicas para la obtencin de un transgnico. Analizar los mtodos que las empresas utilizan para la obtencin de productos transgnicos. Enumerar las compaas productoras que utilizan o no ingredientes transgnicos o sus derivados que vende al consumidor.

TEMA 1. COMPOSICIN QUMICA DE LOS CIDOS NUCLEICOS Miescher en 1871 aisl del ncleo de las clulas de pus una sustancia cida rica en fsforo que llam "nuclena". Un ao ms tarde, en 1872, aisl de la cabeza de los espermas del salmn un compuesto que denomin "protamina" y que result ser una sustancia cida y otra bsica. El nombre de cido nucleico procede del de "nuclena" propuesto por Miescher., Cuando se realiza la hidrlisis completa de los cidos nucleicos, se obtienen tres tipos de componentes principales:

Azcar, en concreto una pentosa. Bases nitrogenadas: pricas y pirimidnicas. cido fosfrico.

El azcar, en el caso de los cidos desoxirribonucleicos (ADN) es la 2-desoxi-Dribosa y en el caso de los cidos ribonucleicos (ARN) es la D-ribosa.

Pentosas

cido fosfrico

Las bases nitrogenadas que forman parte de los cidos nucleicos son de dos tipos, pricas y pirimidnicas. Las bases pricas derivadas de la purina (fusin de un anillo pirimidnico y uno de imidazol) son la Adenina (6-aminopurina) y la Guanina (2amino-6-hidroxipurina). Las bases pirimidnicas (derivadas de la pirimidina) son la Timina (2,6-dihidroxi-5-metilpirimidina o tambin llamada 5 metiluracilo),

Citosina (2-hidroxi-6-aminopirimidina) y Uracilo (2,6-dihidroxipirimidina). Las bases nitrogenadas que forman normalmente parte del ADN son: Adenina (A), Guanina (G), Citosina y Timina (T). Las bases nitrogenadas que forman parte de el ARN son: Adenina (A), Guanina (G), Citosina (C) y Uracilo (U). Por tanto, la Timina es especfica del ADN y el Uracilo es especfico del ARN.
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Adems de las bases nitrogenadas anteriormente descritas, se han encontrado otras bases nitrogenadas en algunos virus o formando parte de algunos tipos especiales de ARNs. Ejemplos de algunas de estas bases pricas poco corrientes son: Hipoxantina, Xantina, 2-metiladenina, 6-metil-aminopurina. Entre las bases

pirimidnicas podramos citar la 5-metilcitosina (propia del ADN) y la 5-hidroximetil citosina (HMC) que sustituye a la citosina en los fagos T-pares. En los ARN transferentes (ARN-t) que intervienen en el proceso de traduccin de protenas se encuentran la Ribotimidina, Dihidrouridina, Seudouridina e Inosina (I). La unin de la base nitrogenada a la pentosa recibe el nombre de nuclesido y se realiza a travs del carbono 1 de la pentosa y los nitrgenos de las posiciones 3 (pirimidinas) o 9 (purinas) de las bases nitrogenadas mediante un enlace de tipo Nglucosdico. La unin del nuclesido con el cido fosfrico se realiza a travs de un enlace de tipo ster entre el grupo OH del carbono 5 de la pentosa y el cido fosfrico, originando un nucletido. Los nucletidos son las unidades o monmeros utilizados para construir largas cadenas de polinucletidos.

Nuclesido = Pentosa + Base nitrogenada. Nucletido = Pentosa + Base nitrogenada + cido fosfrico. Polinucleotido = Nucletido + Nucletido + Nucletido + ....

Nucletido Tanto los nucletidos como los nuclesidos pueden contener como azcar la Dribosa (ribonucletidos y ribonuclesidos) o la pentosa 2-desoxi-D-ribosa

(desoxirribonucletidos y desoxirribonuclesidos). Adems, los nucletidos pueden tener 1, 2 3 grupos fosfato unidos al carbono 5 de la pentosa, existiendo por tanto, nucletidos 5 monofosfato, nucletidos 5 difosfato y nucletidos 5 trifosfato. En algunos casos el cido fosfrico se une a la pentosa por el carbono 3, existiendo nucletidos 3 monofosfato, difosfato o trifosfato segn el nmero de grupos fosfato que posea. La terminologa empleada para referirse a los nuclesidos y nucletidos es la siguiente:

Base Nitrogenada Adenina Guanina Citosina Timina Uracilo

Nuclesido Adenosina Guanidina Citidina Timidina Uridina

Nucletido cido Adenlico cido Guanlico cido Citidlico cido Timidlico cido Uridlico

Los nucletidos se unen entre si para formar largas cadenas de polinucletidos, esta unin entre monmeros nucletidos se realiza mediante enlaces fosfodister entre los carbonos de las posiciones 3 de un nucletido con la 5 del siguiente.
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Polinucletido

1.1

PROPORCIONES

DE

LAS

BASES

NITROGENADAS:

REGLAS

DE

CHARGAFF Al principio se pensaba que los cidos nucleicos eran la repeticin montona de un tetranucletido, de forma que no tenan variabilidad suficiente para ser la molcula biolgica que almacenara la informacin. Sin embargo, Chargaff (1950) demostr que las proporciones de las bases nitrogenadas eran diferentes en los distintos organismos, aunque seguan algunas reglas. Estas reglas de Chargaff se cumplen en los organismos cuyo material hereditario es ADN de doble hlice y son las siguientes: 1.1.1 REGLAS DE CHARGAFF PARA ADN DE DOBLE HLICE Edwin Chargaff

La proporcin de Adenina (A) es igual a la de

Timina (T). A = T. La relacin entre Adenina y Timina es igual a la unidad (A/T = 1).

La proporcin de Guanina (G) es igual a la de Citosina (C). G= C. La relacin entre Guanina y Citosina es igual a la unidad (G/C=1).

La proporcin de bases pricas (A+G) es igual a la de las bases pirimidnicas (T+C). (A+G) = (T + C). La relacin entre (A+G) y (T+C) es igual a la unidad (A+G)/(T+C)=1.

Sin embargo, la proporcin entre (A+T) y (G+C) era caracterstica de cada organismo, pudiendo tomar por tanto, diferentes valores segn la especie estudiada. Este resultado indicaba que los cidos nucleicos no eran la repeticin montona de un tetranucletido. Exista variabilidad en la composicin de bases nitrogenadas.

En la siguiente tabla se observan las proporciones de las bases nitrogenadas en algunos organismos.

Procedencia del ADN Timo de Bovino Esperma de bovino Germen de trigo Saccharomyces Escherichia coli

A 28,2 28,7 27,3 31,3 26,0

G 21,5 22,2 22,7 18,7 24,9 34,9 24,5 26,2 19,5 18,3 G 25,4 17,2 24,0 23,5

C 21,2 20,7 16,8 17,1 25,2 35,4 18,2 27,7 19,5

T 27,8 27,3 27,1 32,9 23,9 14,6 32,3 23,5 30,8 32,4

5-Me-C 1,3 1,3 6,0 17,0 HMC

Mycobacterium tuberculosis 15,1 X174 T3 T5 T7 Virus ARN Mosaico del tabaco (TMV) Mosaico amarillo nabo Poliomielitis Encfalo
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24,3 23,7 30,3 32,4 A 29,8 22,6 28,6 del 27,3

C 18,5 38,0 22,0 23,2

U 26,3 22,2 25,4 25,9

miocarditis

ratn Reovirus Tipo 3 Tumor de las heridas 28,0 31,1 22,3 18,6 22,0 19,1 27,9 31,3

De la observacin de la tabla anterior pueden extraerse las siguientes conclusiones:

Todos los ADN estudiados cumplen la relacin A=T y G=C, excepto el ADN del bacteriofago X174. El ADN de este virus es de una sola hlice.

En los virus ARN no se cumple la equimolaridad de las bases excepto en el caso del virus del Tumor de las heridas y de los Reovirus que tienen ARN de doble hlice. En estos virus se cumple que A=U y G=C, adems se cumple que A+G/U+C=1.

El fago T2 y los otros fagos T-pares (T4 y T6) en vez de citosina tienen hidroximetil-citosina (HMC).

Algunos organismos tiene en su ADN una pequea proporcin de 5-metilcitosina (5-Me-C) que sustituye a la citosina.

Igualmente, en la siguiente tabla puede observarse como la proporcin A+T/G+C varia de un organismo a otro.

Organismo Escherichia coli Diplococcus pneumonia Mycobacterium tuberculosis Levadura Paracentrolus lividus (erizo mar) Arenque Rata Hombre Hombre Hombre

Tejido Esperma Esperma Mdula sea Timo Hgado Esperma

A+T/G+C 1,00 1,59 0,42 1,79 1,85 1,23 1,33 1,52 1,53 1,52

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Por tanto, la proporcin A+T/G+C es especfica de cada organismo y como veremos ms adelante cuando hablemos de las propiedades fsico- qumicas de los cidos nucleicos, dicha proporcin est relacionada con la densidad y la temperatura de fusin. TEMA 2. EL MODELO DE LA DOBLE HLICE: WATSON Y CRICK (1953) Una vez demostrado que los cidos nucleicos eran los portadores de la informacin gentica, se realizaron muchos esfuerzos encaminados a determinar su estructura con exactitud. Watson y Crick (1953) fueron los primeros investigadores en proponer una estructura para los cidos nucleicos y su labor investigadora se vio recompensada con el Premio Nobel en 1962, Premio Nobel que compartieron con M. H. F. Wilkins y que se les concedi por sus descubrimientos en relacin con la estructura molecular de los cidos nuclecos y su significacin para la transmisin de la informacin en la materia viva. Para realizar su trabajo emplearon dos tipos de datos ya existentes.

Francis H. C. Circk

James D. Watson

Maurice H. F. Wilkins

Por un lado, utilizaron los datos obtenidos varios aos antes por Chargaff (1950), relativos a la composicin de bases nitrogenadas en el ADN de diferentes organismos.

El otro tipo de datos eran los procedentes de estudios de difraccin de rayos X sobre fibras de ADN. Para determinar la estructura tridimensional o disposicin espacial de las molculas de ADN, se hace incidir un haz de rayos X sobre fibras de ADN y se recoge la difraccin de los rayos sobre una pelcula fotogrfica. La pelcula se impresiona en aquellos puntos donde inciden los rayos X, produciendo al revelarse manchas. El ngulo de difraccin presentado por cada una de las manchas en la pelcula suministra informacin sobre la posicin en la molcula de ADN de cada tomo o grupo de tomos.

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Mediante esta tcnica de difraccin de rayos X se obtuvieron los siguientes resultados:

Las bases pricas y pirimidnicas se encuentran unas sobre otras, apiladas a lo largo del eje del polinucletido a una distancia de 3,4 . Las bases son estructuras planas orientadas de forma perpendicular al eje (Astbury, 1947).

El dimetro del polinucletido es de 20 y est enrollado helicoidalmente alrededor de su eje. Cada 34 se produce una vuelta completa de la hlice.

Existe ms de una cadena polinucleotdica enrollada helicoidalmente (Wilkins et el. 1953, Frankling y Gosling, 1953).

Difraccin de Rayos X: ADN-B

Rosalin Franklin

Basndose en estos dos tipos de datos Watson y Crick propusieron su Modelo de estructura para el ADN conocido con el nombre de Modelo de la Doble Hlice. Las caractersticas del Modelo de la Doble Hlice son las siguientes:

El ADN es una doble hlice enrollada helicoidalmente a derechas (sentido dextrorso). Algo parecido a dos muelles entrelazados.

Enrollamiento de tipo plectonmico: para separar las dos hlices es necesario girarlas como si fuera un sacacorchos.

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Mdelo de la Doble hlice: ADN-B

J. Watson y F. Crick

Cada hlice es una serie de nucletidos unidos por enlaces fosfodister en los que un grupo fosfato forma un puente entre grupos OH de dos azcares sucesivos (posiciones 3 de un azcar y 5 del siguiente).

Las dos hlices se mantienen unidas mediante puentes o enlaces de hidrogeno producidos entre las bases nitrogenadas de cada hlice. Siguiendo los datos de Chargaff (1959), la Adenina de una hlice aparea con la Timina de la hlice complementaria mediante dos puentes de hidrgeno. Igualmente, la Guanina de una hlice aparea con la Citosina de la complementaria mediante tres puentes de hidrgeno.

Par A-T

Par G-C

Pares A-T y G-C

Las dos hlices por razones de complementaridad de las bases nitrogenadas son antiparalelas, teniendo secuencias de tomos inversas. Una hlice lleva la secuencia 5P 3 OH, mientras que la hlice complementaria sigue la secuencia de tomos 3OH 5P.

El dimetro de la doble hlice es de 20 .

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Las bases nitrogenadas son estructuras planas perpendiculares al eje de la doble hlice y estn apiladas unas sobre otras a una distancia de 3,4 . Cada 10 bases, cada 34 se produce una vuelta completa de la doble hlice (360).

Las bases se encuentran en sus configuraciones cetnicas, cumpliendo as las reglas de apareamiento A-T y G-C.

La secuencia de bases nitrogenadas puede ser cualquiera, no existe ninguna restriccin.

Adems, la estructura en doble hlice propuesta por Watson y Crick (1953) sugera varas propiedades importantes del material hereditario:

Las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas A-T y G-C sugieren una forma sencilla de replicacin del material hereditario. Esta forma sencilla de replicacin se denomina mtodo Semiconservativo. Cuando el ADN se replica sus dos hlices se separan y cada una de ellas sirve de molde para sintetizar una nueva hlice siguiendo las reglas de apareamiento de las bases nitrogenadas.

La mutacin a nivel molecular consistira en un cambio en la secuencia de bases nitrogenadas del ADN.

Al no existir ninguna restriccin en la secuencia de bases nitrogenadas, el ADN posea la suficiente variabilidad como para ser el material hereditario.

Adems, esta estructura sugera la existencia de algn cdigo que permitiera pasar de la secuencia lineal de bases nitrogenadas en el ADN a la secuencia lineal de aminocidos en las protenas.

Es necesario tener en cuenta que no todos los organismos vivos tienen como material hereditario ADN de doble hlice, algunos virus tienen ADN de hlice sencilla, ARN de una y de doble hlice.

Palndromos: plegamiento o apareamiento de una hlice consigo misma. El palndromo tambin es una figura gramatical que se lee igual en los dos sentidos, por ejemplo: DABALE ARROZ A LA ZORRA EL ABAD. Existe ADN palindrmico de hlice sencilla y de hlice doble. En el palndromo de doble cadena la secuencia de bases se lee igual en direccin 5 P 3OH en ambas cadenas.

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Secuencias palindrmicas

Palndromos en ADN de una y doble hlice

Existen algunos virus cuyos cidos nucleicos son de una sola hlice: el ADN de los fagos X174 y M13 es circular de hlice sencilla, sin embargo, se ha comprobado que una pequea parte resiste la accin de enzimas que digieren especficamente ADN de hlice sencilla. Por tanto, estas regiones resistentes de ADN presentan complementaridad interna o autoapareamiento, formando ADN duplex o doble hlice, teniendo secuencias

palndrmicas. Una situacin semejante se ha observado en el ARN de hlice sencilla del bacteriofago MS2 (3569 ribonucleotidos y tres genes). En este caso, el gen de la protena de la cubierta del virus presenta segmentos que tienen complementaridad interna (autoapareamiento) que se pliegan sobre si mismos formando horquillas (regiones de ARN de doble hlice).

ARN Fago MS2: protena de la cpside

El ARN transferente (ARN-t) que transporta los aminocidos y el ARN ribosmico (ARN-r) que intervienen en el proceso de traduccin, son cidos ribonucleicos de una sola hlice y tambin presentan autoapareamiento.

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Esquema ARN-transferente

Esquema Tetrahymena

ARN-ribosmico

de

2.1 PROPIEDADES FSICO-QUMICAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS Las principales propiedades fsico-qumicas de los cidos nucleicos que vamos a considerar son las siguientes: 2.1.1 DENSIDAD DE LOS CIDOS NUCLEICOS Densidad: existe una relacin lineal entre el contenido en G+C y la densidad del ADN determinada en un gradiente de densidad. A mayor contenido en G+C mayor densidad posee el ADN.

Cuanto mayor es el contenido en (G+C) mayor es la densidad.

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Meselson y col. (1957) desarrollaron una tcnica de centrifugacin en gradiente de densidad. Cuando se centrifuga a alta velocidad un solucin densa (saturada) de un soluto de bajo peso molecular (ClCs 7,7 M, sucrosa, etc.) se produce un equilibrio entre dos fuerzas opuestas, la de difusin del soluto y la fuerza de sedimentacin, como consecuencia se produce un gradiente de densidad que aumenta en la direccin de la fuerza centrifuga (aumenta a medida que avanzamos hacia el fondo del tubo de centrifuga). Si aadimos al centrifugar una molcula de ADN, est migrar hacia el fondo del tubo hasta llegar al punto en que la densidad del soluto de bajo peso molecular (la densidad del ClCs) coincide con la densidad del ADN centrifugado (densidad de flotacin). Posteriormente, es posible aislar las molculas de ADN de diferente densidad practicando un orificio en el fondo del tubo y sacando varias fracciones diferentes. Tambin es posible pinchar el tubo con una jeringa, justo en la posicin de la banda y extraer el ADN contenido de esa zona del tubo.

Centrifugacin en gradiente de CsCl Basndose en mltiples estudios de la densidad de los ADNs de diferentes organismos y de su composicin en bases nitrogenadas, se ha establecido una frmula emprica que relaciona la densidad de flotacin () con el contenido en G+C expresado en moles por ciento. Est frmula es la siguiente: = 1,660 + 0,00098(G+C).

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2.1.2 DESNATURALIZACIN: TEMPERATURA DE FUSIN Desnaturalizacin: la proporcin A+T/C+G est relacionada en primer lugar con la estabilidad de la molcula de ADN de doble hlice. Cuanto mayor es el contenido en G+C de una molcula, mayor cantidad de pares G-C presentar, como consecuencia tendr una mayor cantidad de triples enlaces y, por consiguiente, ser necesario suministrar una mayor cantidad de energa a esa doble hlice para separar sus dos hebras (desnaturalizacin o fusin del ADN). Cuanto mayor es el contenido en G+C mayor cantidad de calor que hay que suministrar a un ADN de doble hlice para desnaturalizarlo. La temperatura de fusin (Tm) necesaria para desnaturalizar la mitad del ADN de una mezcla (punto medio de la reaccin ADN doble hlice ADN hlice sencilla) esta directamente relacionada con el contenido en G+C, a mayor contenido en G+C mayor temperatura de fusin (Tm).

Relacin entre el contenido en (G+C) y Curvas de desnaturalizacin de diferentes Tm 2.1.3 ABSORBANCIA A 260 nm Absorbancia a 2.600 : El estado fsico de los cidos nucleicos est relacionado con su capacidad de absorcin de la luz ultravioleta (UV) a 2.600 . El menor grado de absorcin se produce en estado de doble hlice, la absorcin aumenta cuando se produce la desnaturalizacin pasando a estado de hlice sencilla (efecto hipercrmico, aumento de la absorbancia) y, por ltimo, si degradamos este ADN de hlice sencilla a nivel de nucletidos libres, de nuevo aumenta la absorbancia. ADNs

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Esquema efecto hipercrmico Por tanto, la absorbancia a 2.600 se puede utilizar como una medida del estado fsico de la molcula de ADN. Las curvas de fusin tienen forma de S observndose un aumento brusco de la absorbancia al llegar a una temperatura determinada, la temperatura de fusin. 2.2 CINTICA DE RENATURALIZACIN: CURVAS CoT Velocidad de renaturalizacin: la velocidad de renaturalizacin del ADN de un organismo est relacionada con su complejidad. La complejidad se define como la suma del nmero de nucleotidos que tiene cada tipo de secuencia sin tener en cuenta el nmero de veces que esta repetida. El ADN de los virus y las bacterias en su mayora slo tiene secuencias que estn una sola vez en el genoma (secuencias nicas). Sin embargo, el organismo ms complejo, como los eucariontes, presentan distintos tipos de secuencias en su genoma. Los eucariontes tienen secuencias nicas (SU), secuencias de bajo nmero de copias (SBNC, 2-10 copias), secuencias repetidas (SR, alrededor de 102 copias) y altamente repetidas (SAR, 103 a 106 copias).

Tipo de Secuencia A (SU) B (SU) C (SBNC) D (SBNC) E (SR)

N de repeticiones 1 1 4 6 200

N de nucletidos 5.700 7.530 3.720 4.350 500

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F (SAR) G (SAR) Complejidad

10.000 1.000.000

300 200 22.300

Si imaginamos un organismo eucarionte con los tipos de secuencias indicados en la tabla anterior, su complejidad sera la suma del nmero de nucletidos de cada tipo de secuencia (22.300) sin tener en cuenta el nmero de veces que est repetida cada una de ellas. No es difcil imaginar que la velocidad de renaturalizacin del ADN (paso de dos hlices sencillas a una doble hlice) este relacionada con el nmero de veces que esta repetida una determinada secuencia. Supongamos que tenemos dos organismos hipotticos distintos, ambos con la misma cantidad de ADN (1.000.000 de pares de nucletidos). El organismo A posee 1.000 secuencias nicas diferentes, cada una con una longitud media de 1.000 nucletidos. El organismo B tiene una secuencia de 100 nucletidos de longitud que est repetida 10.000 veces. Si extraemos el ADN de estos dos organismos por separado, lo desnaturalizamos y las piezas de ADN desnaturalizado de cada organismo se ponen en condiciones de renaturalizar (tamao uniforme de los fragmentos de ADN, entre 250 y 450 pb, temperatura, condiciones inicas, etc), es evidente que el ADN del organismo B renaturalizar mucho antes, ms rpidamente, que el del organismo A, ya que es mucho ms probable que la secuencia que est repetida 10.000 veces encuentre otra complementaria en el medio de reaccin para formar la doble hlice.

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Las curvas de renaturalizacin o curvas Cot, de organismos que carecen de secuencias repetidas como virus y bacterias, tienen forma de S, tienen un slo punto de inflexin o punto medio de la reaccin. Todas las secuencias son nicas y tienen la misma probabilidad de encontrar a su complementaria para formar la doble hlice.

Curvas Cot de virus y bacterias

Curvas Cot de un eucarionte

Las curvas Cot de organismos eucariontes con diferentes tipos de secuencias, poseen varios puntos de inflexin. Cada uno de ellos correspondiente a un tipo de secuencias (nicas, moderadamente repetidas, y altamente repetidas). Como en el caso de las curvas de fusin, tambin se utiliza como medida el punto medio de la reaccin de renaturalizacin, es decir, el Cot o tiempo al que se ha reasociado la mitad del ADN. El Cot es directamente proporcional a la complejidad del ADN del organismo. Valores de Cot bajos (10 -4 a 10-1) corresponden a secuencias altamente repetidas, valores de Cot comprendidos entre 10 y 102 corresponden a secuencias moderadamente repetidas y las secuencias nicas o de bajo nmero de copias dan lugar a valores de Cot altos (mayores de 10 3) . 2.3 HIBRIDACIN DE LOS CIDOS NUCLEICOS Las tcnicas de desnaturalizacin y posterior renaturalizacin se utilizan para conseguir la hibridacin de cidos nucleicos, es decir, una vez separadas las dos hebras del ADN doble hlice, es posible volver a formar una doble hlice con una hebra de ADN que sea complementaria (hibridacin de ADN con ADN) o volver a formar una doble hlice con un segmento de ARN que contenga la secuencia complementaria (hibridacin de ADN con ARN).

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2.3.1 Endonucleasas de restriccin Las tcnicas de hibridacin (desnaturalizacin y posterior renaturalizacin) permiten, por ejemplo, identificar el gen que ha dado lugar a un determinado ARN-mensajero. Si se asla un mensajero determinado en una clula, es posible hibridar este ARN con el ADN de la clula previamente fragmentado mediante el uso de endonucleasas de restriccin. Las endonucleasas de restriccin de tipo II son enzimas que reconocen secuencias cortas de ADN (de 4 a 6 pares de bases) de tipo palindrmico y cortan por el interior de la secuencia diana a la misma altura en las dos hlices de ADN (corte simtrico) o a distinto nivel en cada hlice (corte asimtrico).

Eco RI

Hae III

Dichas endonucleasas de restriccin fueron descubiertas por Werner Arber, Hamilton O. Smith y Daniel Nathans en la bacteria E.coli , trabajos por los que recibieron el premio Nobel. Estas enzimas forman parte del sistema de defensa (sistema de modificacin-restriccin) de las bacterias frente a la entrada de ADN exgeno en su interior. Existen cientos de endonucleasas diferentes que reconocen distintas secuencias cortas de tipo palndrmico. En la siguiente tabla se indican algunas de las endonucleasas ms frecuentes:

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Endonucleasa de restriccin Eco RI Eco RII Hae III Hin dII Hin dIII Hpa I Hpa II Ava I

Bacteria de la que procede Escherichia coli Escherichia coli Haemophilus aegyptus Haemophilus influenzae Haemophilus influenzae

Secuencia

que

reconoce

(5' 3') y lugar de corte () 5' GAATTC 3' (asimtrico) 5' CCTGG 3' (asimtrico) 5' GGCC 3' (simtrico) 5' GTPiPu AC 3' (simtrico) 5' AAGCTT 3' (asimtrico)

Haemophilus parainfluenzae 5' GTTAAC 3' (simtrico) Haemophilus parainfluenzae 5' CCGG 3' (asimtrico) Anabaena variabilis 5' CGPuPiCG 3' (simtrico)

La utilizacin de diferentes endonucleasas y la separacin por tamaos de los fragmentos producidos mediante electroforesis permite construir lo que se denomina Mapas de restriccin. Cuando el ADN de un organismo eucarionte se fragmenta con una endonucleasa de restriccin, se producen cientos de miles o incluso hasta millones de fragmentos. Dichos fragmentos se separan por tamaos mediante electroforesis en geles de agarosa, una vez se parados por tamaos se transfieren los fragmentos a una membrana de nylon en condiciones desnaturalizantes y de forma que permanezcan en la misma posicin. Los fragmentos desnaturalizados y pegados a la membrana se pueden renaturalizar o hibridar utilizando una segmento de ADN o de ARN (habitualmente denominado sonda) marcado radiactivamente. Dicha sonda, hibridar solamente con aquellos fragmentos de ADN que contengan la secuencia complementaria. La tcnica que permite transferir los fragmentos de ADN desnaturalizados a una membrana de nylon y posteriormente hibridar con una sonda de ADN marcada se denomina Tcnica Southern (hibridacin ADN-ADN), cuando la hibridacin se realiza con una sonda de ARN marcada se denomina Northern (hibridacin ADN-ARN). El empleo combinado de endonucleasas de restriccin y de diferentes sondas de ADN de secuencia nica marcadas permite obtener Polimorfismos para

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Longitudes de Fragmentos de Restriccin (RFLPs), muy utilizados en la construccin de mapas de ligamiento. 2.3.2 Hibridacin "in situ" Las tcnicas de hibridacin "in situ" permiten localizar un segmento concreto de ADN (por ejemplo un gen) en una posicin determinada de un cromosoma eucaritico. Es posible obtener preparaciones citolgicas de cromosomas en metafase mittica o en otras fases del ciclo, desnaturalizar el ADN de los cromosomas en la propia preparacin citolgica y posteriormente hibridar con la pieza de ADN deseada marcada. Actualmente, el marcaje suele ser de tipo fluorescente, denominndose dicha tcnica Hibridacin "in situ" mediante fluorescencia (abreviadamente FISH). Tambin, es posible marcar todo el ADN de un genomio o juego de cromosomas completo y realizar una Hibridacin "in situ" Genmica (abreviadamente GISH) que permite averiguar si los cromosomas de un determinado genomio estn presentes. Otra aplicacin, consiste en detectar determinados cromosomas o regiones cromosmicas concretas utilizando sondas o piezas de ADN marcadas mediante fluorescencia y procedentes solamente del cromosoma deseado, de esta manera, se obtiene lo que se denomina Pintura Cromosmica.

FISH

trigo

(Triticum GISH: (Liliaceae)

Hbrido

Pintura cromosmica (ratn)

Pintura (humanos)

cromosmica

intermedium)

2.4 SECUENCIACIN DEL ADN: MTODO DIDESOXI Y MTODO AUTOMTICO El anlisis ms detallado de la estructura del ADN consiste en averiguar la secuencia de nucletidos. A lo largo del tiempo se han desarrollado diferentes mtodos para obtener la secuencia de nucletidos del ADN, sin embargo, actualmente los mtodos ms utilizados son el de secuenciacin automtica y el

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mtodo enzimtico de terminacin de cadena de Sanger tambin conocido por el mtodo didesoxi. 2.4.1 Mtodo enzimtico de terminacin de cadena o mtodo didesoxi de Sanger Para obtener la secuencia de bases nitrogenadas de un segmento de ADN por el mtodo enzimtico de terminacin de cadena, se necesitan los siguientes compuestos:

El ADN molde o segmento de ADN que se desea secuenciar. Para poder secuenciar un segmento de ADN, previamente se necesita tener gran cantidad de ese fragmento, y por tanto, hay que clonarlo en un vector apropiado. Adems, debe estar en estado de hlice sencilla.

Un enzima que replique el ADN, normalmente la ADN Polimerasa I del bacteriofago T4. La ADN Polimersa I del fago T4 emplea como molde ADN de hlice sencilla y siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas va aadiendo nucletidos a partir de un cebador o "primer".

Un cebador o "primer" que suele ser un oligonucletido corto de alrededor de 20 bases de longitud necesario para que la ADN polimerasa I comience a aadir nucletidos por el extremo 3' OH. Este cebador debe poseer una secuencia de bases complementaria a la del fragmento de ADN que se desea secuenciar. Debido a que la secuencia de nucletidos del segmento que se quiere secuenciar es desconocida, se emplea un "primer" con secuencia complementaria al vector empleado para clonar el fragmento de ADN, adems, este cebador procede de una regin del vector muy cercana al punto de insercin del ADN problema cuya secuencia se conoce. El "primer" utilizado suele marcarse radiactivamente.

Los cuatro nucletidos trifosfato (dATP, dCTP, dGTP y dTTP). A veces en vez de marcar radiactivamente el cebador, se marca radiactivamente uno de los cuatro nucletidos trifosfato en cada reaccin.

Por ltimo, se necesitan nucletidos didesoxi (ddATP, ddTTP, ddCTP y ddGTP). Los nucletidos didesoxi son nucletidos modificados que han perdido el grupo hidroxilo de la posicin 3' de la desoxirribosa. Estos nucletidos pueden incorporarse a la cadena de ADN naciente, pero no es posible que se una a ellos ningn otro nucletido por el extremo 3'. Por tanto,

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una vez incorporado un nucletido didesoxi se termina la sntesis de la cadena de ADN.

2.4.2 Breve descripcin del mtodo enzimtico de terminacin de cadena

En primer lugar, deben realizarse en cuatro tubos diferentes, cuatro mezclas de reaccin. Cada mezcla de reaccin contiene los cuatro nucletidos trifosfato (dATP, dCTP, de dTTP y dGTP), ADN polimerasa I, un cebador marcado radiactivamente y un nucletido dideoxi, por ejemplo ddATP, a una concentracin baja. El nucletido didesoxi utilizado (ddATP en este ejemplo) competir con su homlogo (dATP) por incorporarse a la cadena de ADN que se est sintetizando, produciendo la terminacin de la sntesis en el momento y lugar donde se incorpora.

Por este sistema, en cada mezcla de reaccin se producen una serie de molculas de ADN de nueva sntesis de diferente longitud que terminan todas en el mismo nucletido y marcadas todas radiactivamente por el extremo 5' (todas contienen en el extremo 5' el cebador utilizado).

Los fragmentos de ADN de nueva sntesis obtenidos en cada mezcla de reaccin se separan por tamaos mediante electroforesis en geles verticales

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de acrilamida muy finos (0,5 mm de espesor) y de gran longitud (cerca de 50 cm) que permiten distinguir fragmentos de ADN que se diferencian en un solo nucletido.Los productos de cada una de las cuatro mezclas de reaccin se insertan en cuatro calles o carriles diferentes del gel.

Una vez terminada la electroforesis, el gel se pone en contacto con una pelcula fotogrfica de autorradiografa. La aparicin de una banda en una posicin concreta de la autorradiografa en una de las cuatro calles nos indica que en ese punto de la secuencia del ADN de nueva sntesis (complementario al ADN molde) est la base correspondiente al nucletido didesoxi utilizado en la mezcla de reaccin correspondiente.

Esquema de las electroforesis de las reacciones de secuenciacin

Autorradiograf a

Teniendo en cuenta que el ADN de nueva sntesis crece en la direccin 5' 3', si comenzamos a leer el gel por los fragmentos de menor tamao (extremo 5') y avanzamos aumentando el tamao de los fragmentos (hacia 3'), obtendremos la secuencia del ADN de nueva sntesis en la direccin 5' 3'.

2.4.3 Breve descripcin del mtodo automtico de secuenciacin

La principal diferencia entre mtodo enzimtico de terminacin de cadena y el mtodo automtico de secuenciacin radica, en primer lugar en el tipo de

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marcaje. En el mtodo automtico en vez de radiactividad se utiliza fluorescencia y lo habitual es realizar cuatro mezclas de reaccin, cada una con nucletido trifosfato (dTTP) marcado con un fluorocromo distinto. Este sistema permite automatizar el proceso de manera que es posible leer al mismo tiempo los ADNs de nueva sntesis producto de las cuatro mezclas de reaccin.

La segunda diferencia radica en el sistema de deteccin de los fragmentos de ADN. La deteccin del tipo de fluorescencia correspondiente a cada reaccin se lleva a cabo al mismo tiempo que la electroforesis, de manera que los fragmentos de ADN de menor tamao que ya han sido detectados se dejan escapar del gel, permitiendo este sistema aumentar el nmero de nucletidos que se pueden determinar en cada electroforesis y, por consiguiente, en cada secuenciacin.

El siguiente esquema representa de forma abreviada el mtodo automtico de secuenciacin.

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Esquema del mtodo automtico de secuenciacin

En la siguiente figura se muestra un ejemplo de una secuencia obtenida por el mtodo automtico de secuenciacin. Cuando aparece la letra N significa que no ha sido posible determinar el nucletido existente en esa posicin de la secuencia.

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Secuencia obtenida por mtodos automticos

2.5 DEFINICIN DE CROMOSOMA Y CROMATINA La palabra cromosoma procede del griego y significa "cuerpo que se tie". La palabra cromatina significa "sustancia que se tie". El cromosoma, como ya hemos dicho en el tema anterior, es el material gentico organizado. En el caso de los organismos eucariontes el cromosoma nace fundamentalmente de la interaccin entre el ADN, las histonas y las protenas no histnicas. Los cromosomas eucariticos son molculas muy largas de ADN doble hlice en interaccin con protenas (histonas y no histonas) que se pueden encontrar desde estados relajados o poco compactados como en los ncleos de las clulas en interfase hasta en estados altamente compactados como sucede en la metafase mittica. La cromatina fue inicialmente definida por Fleming (1882) como "la sustancia que constituye los ncleos interfsicos y que muestra determinadas propiedades de tincin". Esta definicin, al igual que la inicial de cromosoma es puramente citolgica. Sin embargo, desde el punto de vista gentico, tanto la cromatina como el cromosoma son el material gentico organizado. Algunos autores piensan que la cromatina es solamente la interaccin entre el ADN y las histonas. Otros consideran que en la estructura de la cromatina tambin intervienen las protenas no histnicas, e incluso algunos autores piensan que el ARN tambin juega un papel importante en la estructura de la cromatina. 2.6 COMPOSICIN QUMICA DE LA CROMATINA: EL NUCLEOSOMA Principales componentes Los principales componentes que se obtienen cuando se asla la cromatina de los ncleos interfsicos son el ADN, las histnicas, las protenas no histnicas y el ARN. Si se toma como unidad de comparacin la cantidad de ADN, los dems componentes aparecen en las siguientes proporciones: ADN 1 HISTONAS 1 NO HISTONAS 0,5 - 1,5 ARN 0,05

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La cantidad de las protenas no histnicas puede variar de unos tejidos a otros en el mismo individuo y dentro del mismo tejido a lo largo del desarrollo. 2.6.1 Las Histonas Las son protenas bsicas, ricas en residuos de lisina y arginina, que muestran un elevado conservadurismo evolutivo y que interaccin con el ADN formando una subunidad que se repite a lo largo de la cromatina denominada Nucleosoma. Los principales tipos de histonas que se han aislado en los ncleos interfsicos en diferentes especies eucariontes son: H1, H2A, H2B, H3 y H4. Las caractersticas ms sobresalientes de estas histonas aparecen en la siguiente tabla: Contenido en moles Histona N residuos 213 129 Pm % de Lys H1 H2A 21.000 27,7 13.900 10,9 Arg 1,4 9,3 19,78 1,17 V. Lys/Arg Modificacin cambio evolutivo Fosforilacin 4 Fosforilacin, acetilacin Fosforilacin, acetilacin Acetilacin, H3 135 15.273 9,6 13,3 0,72 metilacin fosforilacin Acetilacin, H4 102 11.236 10,8 13,7 0,79 metilacin fosforilacin La velocidad del cambio evolutivo se mide como el nmero de cambios por cada 100 aminocidos por cada 100 millones de aos Adems de estas histonas, tambin existen otras que son especficas de tejido como es la histona H5 muy rica en lisina (25 moles%) especfica de eritrocitos nucleados de vertebrados no mamferos, y de las histonas del esperma. 0,06 0,1 1

H2B

125

13.774 15,2

6,1

2,49

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Una de las caractersticas ms destacables es su elevado conservadurismo evolutivo, sobre todo de las histonas H3 y H4. La histona H4 de guisante y de timo de ternera se diferencia solamente en dos aminocidos. Este dato, indica que las interacciones entre el ADN y las histonas para formar la cromatina deben ser muy semejantes en todos los organismos eucariontes. Los genes para las histonas se encuentran agrupados en nichos (o clusters) que se repiten decenas o centenas de veces (erizo de mar). Cada cluster o grupo contiene el siguiente orden de los genes para histonas: H1-H2A-H3-H2B-H4. Los genes para las histonas son ricos en pares G-C ya que codifican protenas con elevado contenido en Lys y Arg, pero estn separados por secuencias espaciadoras ricas en pares A-T.

Agrupamientos ("cluster") de genes de histonas. 2.6.2 El nucleosoma La observacin de la cromatina interfsica mediante tcnicas de microscopia electrnica podra describirse como la repeticin de una subunidad esfrica o globular (los nucleosomas) que estaran unidos por fibras de ADN. Esto le da un aspecto como de cuentas de un collar o de un rosario.

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Cromatina eucaritica

Cromosoma metafsico de abeja

Un nucleosoma tpico est asociado a 200 pares de bases (pb) y est formado por una mdula ("core") y un ligador (o "linker"). La mdula est formada por un octmero constituido por dos subunidades de las siguientes histonas: H2A, H2B, H3 y H4. Se trata de un dmero de las histonas (H2A, H2B, H3 y H4)2. Los trabajos de A. Klug y colaboradores (1980) sobre la disposicin de las histonas en la mdula del nucleosoma le valieron el Premio Nobel de Qumica en 1982.

Nucleosoma Tpico

Mdula de nucleosoma

Aaron Klug

Alrededor de la mdula se enrolla el ADN (140 pb) dando casi dos vueltas (una vuelta y tres cuartos). El resto del ADN (60 pb) forma parte del ligador ("linker") y est interaccionando con la histona H1. La cantidad de ADN asociado con un nucleosoma varia de una especie a otra, de 154 pb a 241 pb, esta variacin se debe fundamentalmente a la cantidad de ADN asociada al ligador ("linker").
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Las fibras de ADN dplex desnudo tienen un grosor de 20 . La asociacin del ADN con las histonas genera los nucleosomas que muestran unos 100 de dimetro, a su vez los nucleosomas se pueden enrollar helicoidalmente para formar un solenoide (una especie de muelle) que constituye las fibras de cromatina de los ncleos intefsicos con un dimetro aproximado de 300 . Los solenoides pueden volverse a enrollar para dar lugar a supersolenoides con un dimetro de 4.000 a 6.000 que constituiran las fibras de los cromosomas metafsicos.

Mdula ("core") del Nucleosoma Formacin del Solenoide (papel de la histona H1)

2.7 Protenas Cromosmicas No Histnicas: El Armazn Proteico Las protenas cromosmicas no histnicas son protenas diferentes de las histonas que se extraen de la cromatina de los ncleos con ClNa 0.35M (solucin salina), tienen un alto contenido en aminocidos bsicos (25% o ms), alto contenido en aminocidos cidos (20-30%), una elevada proporcin de prolina (7%), bajo contenido en aminocidos hidrofbicos y una alta movilidad electrofortica. Las protenas cromosmicas no histnicas que se extraen de la cromatina de los ncleos varan mucho dependiendo de la tcnica de aislamiento empleada. Un grupo de estas protenas cromosmicas no histnicas presentan alta movilidad electrofretica y se denominan abreviadamente HMG (grupo de alta movilidad). Se han detectado ms de 20 protenas HMG, habindose encontrado las protenas HMG-1, HMG-2 , HMG-14 y HMG-17 en todas las especies de mamferos, aves y peces estudiadas hasta el momento. Las protenas HMG-1 y HMG-2 se encuentran slo en el ncleo, estn implicadas en la replicacin, se unen preferentemente a ADN de hlice sencilla, desenrollan el ADN dplex y se estima que existe una molcula de HMG-1 HMG-2 por cada 15 nucleosomas. Las protenas HMG-14 y HMG-17 se
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encuentran en el ncleo y en el citoplasma, estn relacionadas con la regulacin de la transcripcin y se estima que existe una molcula de HMG14 HMG-17 por cada 10 nucleosomas. Muchos estudios citogenticos muestran que los cromosomas estn claramente enrollados cuando se observan al microscopio, un buen ejemplo de esta situacin son los cromosomas de los ncleos de algunos protozoos. El dimetro de las fibras de solenoides (enrollamiento helicoidal de las fibras de nucleosomas) observadas en ncleos en interfase es de 30 nm, sin embargo, el dimetro observado al microscopio para las fibras cromosmicas durante la divisin celular es de 700 nm. Por tanto, se han tenido que producir nuevos superenrollamientos. De qu forma se producen estos nuevos niveles de compactacin?. Laemmli y colaboradores en 1977 consiguieron aislar cromosomas metafsicos desprovistos de histonas mediante un tratamiento con sulfato de dextrano y heparina. Estos cromosomas metafsicos desprovistos de histonas presentan una mdula central densamente teida que ha sido denominada scaffold (armazn). Este armazn proteico (scaffold) es resistente a la accin de la ADN asa, ARN asa y tambin a soluciones de ClNa 2M. Sin embargo, desaparece por tratamientos con urea 4M y dodecil sulfato sdico o por tratamiento con enzimas proteolticas. Por tanto, se trata de un armazn proteco. La observacin a microscopa electrnica pone de manifiesto que de este armazn proteico (scaffold) salen y llegan lazos o fibras que pueden hacerse desaparecer mediante tratamiento con ADNasa. Por tanto, estos lazos o dominios que arrancan del armazn proteico son lazos de ADN. Uno de los principales componentes del armazn proteico es la enzima topoisomerasa II que produce cortes en el ADN dplex a nivel de ambas hlices. La toposiomerasa II (girasa) interviene durante la replicacin del ADN creando o relajando los superenrollamientos. La aparicin de la topoisomerasa II (girasa) slo en el armazn proteico sugiere que se encuentra en la base de los lazos o dominios de ADN, indicando que esta organizacin en dominios podra estar relacionada con la replicacin y transcrpcin. Otras enzimas como la topoisomerasa I que produce cortes en el ADN dplex a nivel de una sola hlice y la HMG-17 se encuentran slo en los lazos o dominios y no en el armazn proteico.

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Armazn proteico no histnico

Armazn histnico

proteico

noUlrich Laemmli

K.

La evidencia existente hasta el momento sugiere que las fibras de solenoides (30 nm) formaran los lazos o dominios que emanan del armazn proteico y que este armazn estara a su vez enrollado formando una espiral.

Organizacin en Dominios y Armazn proteico

Lazos en cromosomas sin extraer (Laemmli)

Los dominios de ADN parecen estar unidos al armazn proteico por unas regiones especficas
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denominadas

abreviadamente

SARs

(regiones

de

asociacin

especficas) que se detectan cuando los cromosomas metafsicos desprovistos de histonas se tratan con endonucleasas de restriccin. Despus de este tratamiento quedan regiones de ADN unidas al armazn que a su vez resisten la digestin con exonucleasas gracias a que estn protegidas por una protena. Cuando se digiere esta protena, las regiones de ADN protegidas contienen secuencias que se sabe que son especificas para la unin de topoisomerasas. Estas regiones regiones de unin especficas de los dominios al armazn proteico son las regiones SARs.

Unin de los dominios al armazn a tr avs de las regiones SAR

2.7.1 Papel del ARN El ARN, al igual que suceda en el caso de la organizacin del nucleoide bacteriano, parece jugar algn papel en el plegamiento del cromosoma eucaritico. Al menos en humanos y en Drosophila se han encontrado evidencias de este papel estructural del ARN. Sin embargo, hay que tener en cuenta que el armazn proteico descrito por
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Laemmli y colaboradores (1977) no se ve afectado por el tratamiento con ARNasa. Podra ser que las propias protenas del armazn protegieran al ARN de la accin de la ARNasa. En cualquier caso, es conveniente recordar que el ADN del cromosoma bacteriano tambin est organizado en dominios y que el ARN podra jugar algn papel en el mantenimiento de dicha estructura. En organismos con caractersticas intermedias entre las de procariontes y eucariontes como los dinoflagelados, tambin existen existen datos que apoyan el papel estructural del ARN en la organizacin cromosmica. 2.8 El Valor C Y Paradoja Del Valor C El valor C se defina como la cantidad de ADN por genoma haploide (un solo juego cromosmico) en estado de un cromatidio (en fase G1). En el caso de la especie humana con 2n=46 cromosomas, especie diploide (2n), con dos juegos de cromosomas, uno recibido del padre y otro de la madre, cada uno formado por 23 cromosomas, el valor C sera la cantidad de ADN correspondiente a un juego de 23 cromosomas en estado de un solo cromatidio (en fase G1 antes del periodo S de sntesis). Una forma mucho ms sencilla de definir el valor C, en el caso de las especies diploides, con dos juegos cromosmicos, sera el contenido de ADN de un gameto de la especie. Un espermatozoide humano y un vulo humano (gametos) contienen 23 cromosomas en estado de un cromatidio, el valor C sera la cantidad de ADN de los 23 cromatidios de un gameto humano. Cuando se estudia el valor C de distintas especies a lo largo de la escala evolutiva, se observa que no existe relacin entre el contenido en ADN y la posicin que una especie tiene en la escala evolutiva. Es decir, especies como la humana poseen una menor cantidad de ADN que algunas especies de salamandras, peces no telesteos y muchas plantas. Existe una gran variacin en la cantidad de ADN (valor C) entre especies pertenecientes a familias o o grupos filogenticos distintos, y adems, dentro de una misma familia de especies tambin se encuentra una enorme variacin en la cantidad de ADN. Por ejemplo, la cantidad de ADN en las plantas con flore varia entre 5 x 108 y 1011 pares de bases, o por ejemplo, en los anfibios varia entre 9 x 108 y 9 x 1010 pares de bases. En la siguiente tabla se indican los valores en pares de bases de algunas especies utilizadas en la investigacin (pb).

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Grupo Taxonmico Algas Mycoplasma Bacterias Levaduras Hongos Nematodos Insectos Aves Anfibios Mamferos

Especie Pyrenomas salina

Valor C (pb) 6,6 x 105

Mycoplasma pneumoniae 1,0 x 106 Escherichia coli Saccharonyces cerevisiae D. discoideum Caenorhabditis elegans 4,2 x 106 1,3 x 107 5,4 x 107 8,0 x 107

Drosophila melanogaster 1,4 x 108 Gallus domesticus Xenopus laevis Homo sapiens 1,2 x 109 3,1 x 109 3,3 x 109

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Variacin de la cantidad de ADN (pb) en diferentes grupos de especies

Sin embargo, si dentro de cada familia de especies (por ejemplo los anfibios) elegimos la que tiene menor cantidad de ADN y comparamos este contenido con el de las especies de menor valor C dentro de cada familia o grupo filogentico (por ejemplo, aves, mamferos, peces, etc), encontramos que la cantidad de ADN aumenta con la complejidad evolutiva. Podra pensarse que para pertenecer a un determinado grupo taxonmico se necesita una cantidad mnima de ADN.

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Especie con menor contenido en ADN de cada grupo taxonmico 2.81 La paradoja del valor C Surge cuando se compara la cantidad de ADN o tamao del genoma con las funciones para las que lleva informacin: La cantidad de ADN de una especie eucarionte es mucho mayor que la esperada para codificar enzimas o protenas. En la especie humana se estima que existen 100.000 genes diferentes que codifican protenas, el tamao medio de una protena es de 500 aminocidos (1.500 pares de bases), por tanto necesitaramos 1,5 x 108 pares de bases. La especie humana tiene 2,8 picogramos de ADN y cada picogramo equivale a 9,1 x 108 pares de bases (2,8 x 9,1 x 108 pares de bases = 25,48 x 108 pb). Por tanto, solamente alrededor de un 6% del ADN humano estara destinado a codificar protenas. Que funcin tendra el 94% restante?. Hoy sabemos que los genes en eucariontes son mucho ms largos que la secuencia necesaria para codificar una protena (existen intrones o zonas que no se traducen a aminocidos). Por tanto, disminuye la cantidad de ADN de funcin desconocida. Sin embargo, sigue existiendo una enorme cantidad de ADN cuya funcin no estara identificada. Por otro lado, existen especies con una complejidad evolutiva semejante que presentan una enorme variacin en la cantidad de ADN. Recuerde el ejemplo de los anfibios, en los que la cantidad de ADN varia entre 9 x 10 8 y 9 x 1010 pb. Es difcil creer que esta variacin pueda reflejar una diferencia de 100 veces en el nmero de genes necesarios para especificar dos especies de anfibios. Por consiguiente
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necesitamos otro tipo de explicacin. Una posible explicacin es como veremos la existencia de duplicaciones, genes que estn en ms de una copia en el genoma de los individuos. Esto nos lleva a considerar la existencia de distintos tipos de secuencias en el genoma de las especies eucariticas. TEMA 3. EUCROMATINA Y HETEROCROMATINA La cromatina o sustancia que compone los ncleos de las clulas y que resulta de la interaccin del ADN con las protenas histnicas, no histnicas y ARN; puede presentar distintos grados de empaquetamiento o contraccin. Cuando los cromosomas se tien con sustancias qumicas que se unen al ADN aparecen regiones densamente teidas y regiones menos densamente teidas. La cromatina mayoritaria, la que constituye la mayor parte del ncleo recibe el nombre de eucromatina y la minoritaria el de heterocromatina. La heterocromatina puede aparecer ms densamente teida que la eucromatina (heteropicnosis positiva) o menos densamente teida que la eucromatina (heteropicnosis negativa). La aplicacin de determinados tratamientos experimentales en combinacin con diferentes tipos de tincin de los cromosomas, puede producir la aparicin de zonas heterocromticas en los cromosomas de muchas especies.

Eucromatina (menos teida) y Heterocromatina (ms teida) Estas zonas heterocromticas presentan una distribucin caracterstica o patrn de bandas tpico de cada cromosoma que permite identificar cromosomas distintos. Estas tcnicas reciben el nombre de tcnicas de bandeo cromosmico y son
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enormemente tiles en la identificacin individual de los cromosomas y en la construccin de cariotipos. La eucromatina y la heterocromatina son ADN pero presentan algunas diferencias:

Diferencias genticas: Los experimentos de construccin de mapas demuestran que la mayor parte de los genes activos se localizan en la eucromatina. En los nucleos interfsicos, la eucromatina se tie menos densamente debido al menor grado de empaquetamiento, en general se acepta que este es el estado ms compatible con la actividad gnica y la transcripcin. La heterocromatina se encuentra en muchos organismos flanqueando las regiones cntromericas, algunas veces tambien se encuentra en regiones telomricas, e incluso se ha observado en algunos casos la existencia de cromosomas completos heterocromticos, por ejemplo, el cromosoma Y de Drosophila melanogater. La funcin de la heterocromatina no es an conocida, se han detectado muy pocos genes activos en la heterocromatina, en Drodophila existen mutaciones letales en genes que se localizan en regiones heterocromticas, por tanto, estos genes deben poseer alguna actividad. En cualquier caso, el porcentaje de genes activos localizados en regiones heterocromaticas es muy bajo comparado con el de genes activos situados en la eucromatina. La principal diferencia entre la eucromatina y la heterocromatina radica por tanto en la actividad de estos dos tipos de cromatina.

Diferencias citolgicas: A nivel estructural, en los nucleos interfsicos, existe un mayor grado de enrollamiento o empaquetamiento en la heterocromatina que en la eucromatina. La forma en la que se mantiene esta diferencia aun no es conocida. Alociclia: la heterocromatina sigue un ciclo de condensacin y

descondensacin distinto a la eucromatina. La heterocromatina puede aparecer ms intensamente teida que la eucromatina o menos intensamente teida dependiendo del estado celular (alociclia). La alociclia a su vez esta relacionada con la replicacin del ADN. La heterocromatina se replica ms tarde que la eucromatina. A su vez es posible distinguir dos clases de heterocromatina:
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- Heterocromatina constitutiva: cromatina que aparece siempre ms intensamente teida que la eucromatina (heteropicnosis positiva), o menos intensamente teida que la eucromatina (heteropicnosis

negativa), independientemente del estado de desarrollo o fisiolgico. Un ejemplo es el ADN satlite de las regiones centromricas.

Heterocromatina

constitutiva:

regiones

cercanas a los centrmeros

- Heterocromatina facultativa: cromatina que aparece ms intensamente teida que la eucromatina, o menos intensamente teida que la eucromatina dependiendo del estado fisiolgico o del momento de desarrollo. El cromosoma X, en algunas especies animales, como el

saltamontes Schistocerca gregaria, aparece ms intensamente teido que el resto de los cromosomas durante la Diplotena de la Profase I de meiosis.

Saltamontes: heteropicntico positivo

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XInterfase: Cromatina sexual, X inactivo en la mujer (cuerpo de Barr)

En la especie humana, todos los cromosomas X que estn en exceso de uno aparecen ms intensamente teido que el resto de los cromosomas (heteropicnosis positiva) en los ncleos de clulas en interfase. Por tanto, las mujeres normales que tienen dos cromosomas X, tienen un cromosoma X que aparece ms intensamente teido y que est inactivado. Sin embargo, durante las primeras etapas del desarrollo embrionario (durante los 16 primeros das de gestacin en la especie humana) ambos cromosomas X son activos.

Diferencias en las secuencias: En algunas especies eucariontes, el ADN satlite o ADN minoritario que presenta un contenido en G+C distinto al ADN principal o mayoritario, est constituido por unas secuencias cortas de ADN que estn repetidas millones de veces. En concreto en ratn se ha demostrado que el ADN satlite esta localizado en la zona centrmerica, este ADN satlite constituye un ejemplo de heterocromatina constitutiva cuya presencia y accin es constante en el cromosoma.

TEMA 4. ESTRUCTURA EXTERNA DE LOS CROMOSOMAS: FORMA, TAMAO Y NMERO El estudio de la estructura externa de los cromosomas de cualquier especie eucaritica consiste en analizar la forma tamao y nmero de los cromosomas que posee. El mejor momento para llevar a cabo dicho estudio suele ser aquel en el que los cromosomas han alcanzado su mximo grado de contraccin y tienen sus bordes perfectamente definidos. Dicho momento suele ser la metafase mittica. El estudio de la estructura externa de los cromosomas culmina con la obtencin del cariotipo. Naturalmente, los cromosomas se pueden estudiar en distintos momentos segn la especie y dependiendo de los objetivos planteados. Algunas especies tienen cromosomas que se pueden observar con gran detalle en interfase, tal es el caso de Drosophila melanogaster, que posee cromosomas politnicos gigantes que se observan en las glndulas salivales de dicho insecto y el deChironomus tentans otro diptero.

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Cromosomas (interfsicos) 4.1 Forma

Politnicos

de

Chironomus

tentans

En metafase mittica los cromosomas ya han pasado por un periodo de sntesis de ADN y estn constituidos por dos cromatidios o

cromatidas idnticas en grosor y longitud. Los cromosomas en estado de dos cromatidios han alcanzado su mximo grado de contraccin y estn en el centro de la clula, en la placa ecuatorial. La forma de los cromosomas viene determinada por la posicin del centrmero o constriccin primaria, regin por la que los cromatidios interaccionan con las fibras del huso acromtico para separarse a polos distintos. El centrmero aparece menos teido que el resto del cromosoma. La mayora de los cromosoma de las especies eucariticas tienen el centrmero localizado en una regin concreta.

Existen cromosomas Metacntricos, con el centrmero en el centro que divide al cromosoma en dos brazos iguales, existen cromosomas Submetacntricos, con el centrmero desplazado hacia un lado que lo divide al cromosoma en dos brazos, uno
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un

poco

ms

largo

que

el

otro;

hay

cromosomas Subtelocntricos oAcrocntricos que tienen el centrmero situado hacia el extremo dividiendo al cromosoma en dos brazos muy desiguales, uno bastante largo y el otro muy corto, y por ltimo hay cromosomas Telocntricos que tienen el centrmero en un extremo y, por consiguiente poseen un solo brazo. Un cromosoma metafsico tpico est constituido por dos cromatidios hermanos idnticos (en groso, longitud y con igual informacin gentica), dichos cromatidios contienen un centrmero y telmeros en el extremo. Los extremos de los cromatidios poseen una estructura caracterstica denominada Telmero, un cromosoma metacntricos presenta telmeros al final de los dos brazos (en ambos extremos), mientras que un cromosoma telocntrico tiene telmeros al final de su nico brazo (en un extremo), por el otro extremo se encuentra en centrmero. Existen especies que tienen cromosomas con el centrmero difuso, situado a todo lo largo del cromosoma, sin localizar en un solo punto concreto.

Algunos cromosomas eucariticos, adems de la constriccin primaria o centrmero, poseen constricciones secundarias, la ms importante es la Regin Organizadora del Nucleolo (abreviadamente NOR), dicha zona contiene la informacin para producir el ARN-ribosmico y aparece menos teida que el resto del cromosoma. Los cromosomas con NOR en muchos casos tienen despus de la regin NOR, entre est y el telmero un segmento ms o menos grande que se denomina Satlite o Trabante (no confundir con el ADN satlite).

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En el caso de la especie humana, existen cinco pares de cromosomas que poseen regiones NOR, los pares 13, 14, 15, 21 y 22.

Metafase mittica de Vicia Faba (2n=12)

Metafase mittica de un hombre (2n=46)

4.2Tamao Los cromosomas sufren grandes variaciones en su tamao a lo largo del ciclo celular, pasando de estar muy poco compactados (interfase) a estar muy compactados (metafase), por tal motivo, los estudios sobre el tamao suelen realizarse en metafase mittica. Adems, es necesario tener en cuenta que los tratamientos para teir los cromosomas y para obtener las metafases mitticas influyen de manera muy importante en el tamao de los cromosomas. En cualquier caso, en general es posible decir que hay especies eucariticas con cromosomas grandes y especies con cromosomas pequeos. Las monocotiledneas (vegetales) y
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los anfibios y ortpteros (animales) poseen cromosomas muy largos (10 a 20 micras). Las dicotiledneas, las algas, los hongos y la mayora de las especies animales poseen cromosomas pequeos (longitud inferior a 5 micras). Naturalmente, existen algunas excepciones en los ejemplos citados. El cromosoma 1 humano tiene 0,235 pg de ADN, que equivalen a una longitud total de ADN doble hlice 7,3 cm y en metafase mittica presenta una longitud aproximada de 0,001 cm. 4.3 Nmero Las clulas somticas de la mayora de las especies eucariticas tienen dos juegos de cromosomas, se trata de especies diploides, con un juego de cromosomas materno y otro paterno. El nmero de cromosomas se denomina nmero diploide y se representa como 2n. El nmero de cromosomas de un juego cromosmico y que se corresponde con el nmero de cromosomas de un gameto de la especie se le denomina nmero haploide y se representa como n. Todos los cromosomas de las clulas somticas aparecen por parejas de cromosomas homlogos (uno procedente del padre y otro de la madre) existiendo por tanto n parejas de homlogos. Los dos cromos omas homlogos tienen informacin para los mismos tipos de genes, aunque no poseen idntica secuencia de bases nitrogenadas, ya que en un posicin determinada o locus puede encontrase la informacin que determina el color azul de ojos mientras que en el homlogo puede existir informacin para el color marrn. Sin embargo, los dos cromatidios hermanos de un mismo cromosoma poseen exactamente la misma informacin gentica (la misma secuencia de bases nitrogenadas). El nmero de cromosomas 2n vara mucho de unas especies a otras y no existe relacin entre el nmero de cromosomas, existen especies vegetales con pocos cromosomas como Haplopappus gracilis (2n=4), Crepis capillaris (2n=6) y Secale cereale (2n=14), especies vegetales con bastantes cromosomas

como Triticum aestivum (2n=42) y especies vegetales con muchos cromosomas como Ophioglossum petiolatum (n >500). En animales sucede algo semejante, hay especies con pocos cromosomas como la hormiga australiana Myrmecia

pilosula cuyos machos tienen un cromosoma (2N01) y las hembras dos cromosomas (2n=2), especies con bastantes cromosomas como la humana Homo

sapiens (2n=46) y especies con muchos cromosomas como el lepidoptero Lysandra atlantica (2n=434-466). No existe ninguna relacin entre el nmero de cromosomas 2n y la complejidad evolutiva, ni entre el nmero de cromosomas y la cantidad de ADN. Un ejemplo claro de esta situacin es el de los ciervos del gneroMuntiacus en
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el que hay especies muy similares (denominadas especies gemelas) una con 2n=6 (M. muntjak) y otra con 2n=46 (M. reevesi).

Muntiacus muntjak

Cariotipo 2n=6

Muntiacus reevesi

Caritotipo 2n=46

Nmero diploide de diferentes especies animales y vegetales N Organismo Cromosomas Organismo (2n) Hombre, Homo sapiens Chimpanc, Pan troglodytes Mono mulata Caballo, Equus caballus
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N Cromosomas (2n) Roble alba Pino ponderosa Cerezo cerasus Col oleracea (repollo), Brassica cido, Prunus amarillo, Pinus blanco, Quercus 24

46

48

24

rhesus, Macaca

48

32

64

18

Asno, Equus asinus Perro, Canis familiaris

62 78

Rbano, Raphanus sativus 18 Guisante de jardn, Pisum sativum Guisante, Lathyrus odoratus Frijol, Phaseolus vulgaris Pepino, Cucumis sativus Algodn, Gossypium hirsutum Patata, Solanum tuberosum Tomate, Solanum lycopersicum Tabaco, Nicotiana tabacum Trigo aestivum candeal, Triticum 14

Gato, Felis domesticus Ratn musculus Rata, Ratus norvegicus Zarigeya, Didephys virginiana Pollo, Gallus domesticus domestico, Mus

38

14

40 42 22

22 14 52

78

48

Pavo, Meleagris gallopavo 82

24

Rana, Rana pipiens

26

48

Platypoecilus maculatus Estrella de mar, Asterias forbesi Gusano de seda, Bombix mori Mosca domestica, Musca

48

42

36

Trigo duro, Triticum durum 28

56

Cebada, Hordeum vulgare 14

domestica Mosca fruta, Drosophila

12

Centeno, Secale cereale

14

melanogaster Mosquito, Culex pipiens Cucaracha, Blatta germanica Cangrejo ermitao, Eupagurus
52

Arroz, Oryza sativa Boca de

24

dragn, Anthirrinum majus Levadura, Saccharomyces cerevisiae Alga verde, Acetabularia

16

23, 24

18

254

mediterranea

20

ochotensis

Tabla tomada del libro de Gentica Moderna (F. J. Ayala y J. A. Kiger). Ed. Omega. 1984.

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4.4 El Cariotipo El cariotipo de una especie se obtiene cuando a partir de varias clulas en metafase mittica de muchos individuos distintos de la especie se determina el nmero, forma y tamao de los cromosomas. En las especies diploides, como la especie humana, el nmero de cromosomas normal (el ms frecuente) es 2n=46, de manera que existen 22 pares deautosomas y un par de cromosomas sexuales. Como se trata de una especie diploide, con dos juegos de cromosomas (dos genomios), uno de origen materno (23 cromosomas) y otro de origen paterno (23 cromosomas), todos los cromosomas estn por parejas de homlogos. Genomio: el conjunto de los n cromosomas distintos de una especie. Una vez fijado el nmero cromosmico normal, se procede a elegir la mejor clula disponible de una metafase mittica en la que todos los cromosomas estn bien definidos y separados. Seguidamente se realiza una foto de dicha clula y despus se recortan todos los cromosomas. Una vez recortados todos los cromosomas, se ordenan por parejas con el brazo corto hacia arriba, posteriormente se ordenan por tamaos (de mayor a menor) y dentro de un tamao semejante por la posicin del centrmero ( de metacntricos a submetacntricos, acrocntricos y telocentricos). En el caso de existir cromosomas sexuales diferenciados, como sucede en la especie humana, los cromosomas sexuales ( X e Y) pueden colocarse en el grupo que les corresponde por tamaos o bien pueden colocarse formando el par sexual separados de los autosomas (cromosomas no sexuales). Cuando no existan las tcnicas de bandeo cromosmico era muy difcil diferenciar unas parejas cromosmicas de otras en algunas especies, ya que el nico criterio para ordenarlos era el tamao y la posicin relativa del centrmero (longitudes relativas de cada brazo).

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Metafase bandear

mittica

de

un

varn

sinMetafase mittica de un varn con bandas G

Sin embargo, con las tcnicas de bandeo cromosmico que se desarrollaron posteriormente fue mucho ms fcil identificar los diferentes pares de cromosomas.

Cariotipo de un varn normal (Bandas G)

Idiograma humano (bandas G)

Caritipo: Ordenacin de los cromosomas por parejas, tamao y posicin del centrmero. Idiograma: Representacin esquemtica mediante un dibujo a escala, que incluya las bandas e interbandas, del cariotipo de una especie. Tcnicas de Bandeo cromosmico: Existen diferentes sistemas de tratamiento y de tincin de los cromosomas que permiten obtener una secuencia caracterstica de bandas e interbandas transversales sobre los cromosomas. Las tcnicas de bandeo
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ms frecuentes suelen ser las bandas G (Giemsa) bandas C, Bandas R, Bandas Q, etc. El desarrollo de estas tcnicas ha permitido identificar cromosomas que no era posible distinguir con los mtodos convencionales de tincin (no producen bandas transversales). Inclusive permiten distinguir anomalas cromosmicas, como translocaiones (intercambios de segmentos entre cromosomas), deleciones (prdidas de segmentos, etc). Tambin es posible utilizar tcnicas de hibridacin "in situ" mediante fluorescencia (FISH) para identificar cromosomas.

FISH Gc-1R) TEMA

de Aegilops

speltoides (clon Translocaciones con bandas C

5.

ESTRUCTURA

INTERNA

DE

LOS

CROMOSOMAS:

CROMATIDIO, CENTRMEROS, TELMEROS Y ORGANIZADOR NUCLEOLAR Cromatidio: El cromatidio es una doble hlice de ADN lineal. Existen experimentos, realizados en Vicia faba, en los que se demuestra que en la replicacin el cromatidio se comporta como una doble hlice de ADN (Taylor y col. 1957). Los cromosomas pueden estar en estado de un solo cromatidio (perodo G 1, anafase y telofase) o bien en estado de dos cromatidos despus de haber pasado por el preodo de Sntesis (S) como sucede en el periodo G2, profase y metafase.

Molcula de ADN de Drosophila melanogaster (1,5 cm longitud). Cromosoma 1

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Telmero: Son los extremos de los brazos cromosmicos y tienen una estructura especial (formacin de ADN cuadruplexo) que protege al cromosoma de su degradacin por los extremos y que adems permite la replicacin de los extremos cromosmicos mediante la actuacin de encimas especficas como las telomerasas. Los telmeros poseen extremos 3' monocatenarios (de una sola hlice) constituidos por una secuencia corta rica en Guanina que est repetida en tndem cientos de veces. En la siguiente tabla se indican algunas secuencias telomricas encontradas en humanos, protozoos, algas y vegetales:

Organismo Tetrahymena Paramecium Tripanosoma Arabidopsis Homo

Secuencia repetida 5' TTGGG 3' 5' TTGGGG 3' 5'TTAGGG 3' 5' TTTAGGG 3' 5' TTAGGG 3'

Modelo de estructura de los telmeros Centrmero: Zona por la que el cromosoma interacciona con las fibras del huso acromtico en las anafases mitticas y meiticas y que es responsable de los movimientos cromosmicos que tienen lugar durante estas fases. Las estructuras centromricas que interaccionan con las fibras del huso se denominan cinetocoros. En la estructura del centrmero tambin intervienen protenas centrmricas. Es la constriccin primaria y aparece menos teida que el resto del cromosoma. Los anlisis llevados a cabo enSaccharomyces cerevisiae (levadura) han permitido aislar el ADN centromrico (ADN CEN) de todos sus cromosomas, habindose encontrado
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que en todos los centrmeros estudiados existen tres regiones muy conservadas, en la siguiente tabla se indican dichas regiones: Regin pb) PuTCACPuTG I (8

Regin II (76-86 pb)

Regin III (25 pb)

rica en pares AT (87- TGTTT(T/A)TGNTTTCCGAAANNNAAAA 95%) Palndromo

El centrmero tiene un comportamiento diferentes durante la Anafase mittica y la Anafase-I de la meiosis, de manera que durante la Anafase mittica los cromatidios hermanos se separan a polos opuestos (Segregacin Anfitlica) mientras que en la Anafase-I de la meiosis lo que se separa a polos opuestos son los cromosomas homlogos completos, cada uno constituido por dos cromatidios (Segregacin Sintlica).

Segregacin Anfitlica

Segregacin Sintlica

Crommero: son regiones ms condensadas de los cromosomas que se observan al microscopio como partculas discretas y que suelen verse con mayor claridad en determinados estados celulares, como por ejemplo, en paquitena de la Profase-I meitica en algunas especies. TEMA 6. ORGANIZACIN DEL MATERIAL HEREDITARIO EN SECUENCIAS: NICAS, REPETIDAS, MODERADAMENTE REPETIDAS Y ALTAMENTE

REPETIDAS Los virus y las bacterias presentan secuencias que en su inmensa mayora estn una sola vez en el genoma. Las bacterias poseen algunos genes que estn

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repetidos muy pocas veces, entre 5 y 10, como los genes que llevan informacin para el ARN ribosmico (ARN-r). Los estudios de la cintica de renaturalizacin o reasociacin ( curvas Cot) ponen de manifiesto, como ya hemos visto, que los virus y bacterias presentan curvas Cot ideales correspondientes a ADN sin secuencias repetidas. Sin embargo, las curvas Cot de organismos eucariontes revelan a existencia de distintos tipos de secuencias que varan en el grado de repeticin.

Tipos de secuencias de los organismos eucariticos Los distintos tipos de secuencias que se observan en el ADN de organismos eucariticos son los siguientes: 6.1 Secuencias Unicas

Genes o secuencias de copia nica. En general, la mayor parte de los genes que codifican para polipptidos, los llamados genes estructurales, se encuentran en una sola copia en el genoma.

6.2 Secuencias Repetidas

Secuencias o genes que estn repetidas pocas veces. Se trata de genes o secuencias funcionales que codifican para protenas relacionadas y que se han originado por duplicacin de secuencias individuales y una posterior

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evolucin divergente (las mutaciones afectan de forma diferente a las dos copias existentes de la secuencia). Suelen ser familias de genes y de pseudogenes relacionados. Los pseudogenes (y ) son secuencias de ADN que debido a mutaciones han dejado de ser funcionales y que por tanto no se transcriben. El mejor ejemplo de este tipo de familias de genes son los que llevan informacin para los polipptidos o cadenas de globina (a, b, d, g, y e) que forman las hemoglobinas humanas. En este grupo tambin se pueden incluir las familias de genes dispersas por el genoma. Algunos tipos de protenas estn codificadas por familias de genes homlogos distribuidas por todo el genoma. Tales familias puede estar formadas por unos pocos o por muchos genes. Algunos ejemplos son: los genes que codifican para la actina (de 5 a 30 copias), las keratinas (ms de 20 copias), la cadena pesada de la miosina (de 5 a 10 copias), las tubulinas (de 3 a 15 copias) y las protenas de la cubierta del huevo de los insectos (50 copias). Dentro de este grupo tambin podran incluirse los genes que llevan informacin para el ARN transferente (ARN-t), en Saccharomyces existen de 5 a 7 copias de cada uno de los 61 ARN-t diferentes y en D. melanogaster unas 13 copias de cada ARN-t. Los genes de una familia, al igual que los genes para las cadenas de globina, pueden diferir algo en su secuencia y tambin en su funcin.

Familias de genes de las globinas humanas

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6.3 Secuencias Moderadas

Secuencias moderadamente repetidas. Familias de secuencias repetidas en tndem. En este caso, se trata de genes que existen en varias copias esencialmente idnticas que derivan por duplicacin de secuencias ancestrales. Se trata de genes funcionales y las copias son idnticas tanto en secuencia como en funcin. La existencia de este tipo de genes permite a los organismos generar una gran cantidad de determinados productos en poco tiempo. Algunos ejemplos de este tipo de secuencias son:

- ADN-r: los genes que llevan informacin para el ARN-r , que se encuentran localizados en una zona concreta de los cromosomas que es el Organizador nucleolar (NOR). Esta zona aparece menos teida que el resto del cromosoma (heteropicnosis negativa). En D. melanogaster existen unas 130 copias de estos genes, enXenopus laevis alrededor de 400 a 500 copias por genoma haploide. En algunos organismos como Neurospora crassa se encuentran dispersos por el genoma en vez de en tndem. - ADN-5S: los genes que codifican para el ARN-5S que forma parte de la subunidad grande de los ribosomas. En D. melanogaster existen 200 copias, en Xenopus laevis 25.000 y en la especie humana 2.000. - ADN-t: Los genes que codifican para los ARN-transferentes encargados de transportar los aminocidos durante el proceso de traduccin. - ADN-h: genes para las histonas: aparecen en familias o cluster que incluyen los cinco genes (H1, H2A, H2B, H3 y H4) y que estn repetidas decenas de veces (Xenopus laevis) o centenas de veces (erizo de mar). - ADN-a: genes para anticuerpos o inmunoglobulinas. La regin variable de los anticuerpos o inmunoglobulinas (500 secuencias no idnticas entre si).

Tambin existen secuencias de ADN que se han originado por duplicacin de otras existentes, que derivan de familias multignicas en tndem (genes de histonas o genes para ARN-r) y que se encuentran aislados (separados de su familia) y dispersos por el genoma. Este tipo de secuencias recibe el nombre de Orfones.

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Telmeros: secuencias repetidas con funcin conocida pero que no codifican para ningn ARN o protena. Los extremos de los cromosomas o telmeros tienen una secuencia de ADN repetida en tndem. Esta secuencia en el caso del ciliado Tetrahymena es TTGGGG y en humanos es TTAGGG. Esta secuencia esta repetida varias veces en el extremo de los cromosomas (telmero) y tiene la propiedad de aparearse consigo misma formando enlaces de hidrgeno entre guaninas (situacin inusual). Este autoapareamiento suministra un extremo 3 libre que permite la replicacin de los extremos de las molculas de ADN doble hlice lineal.

6.4 Secuencias Altamente Repetidas

Secuencias altamente repetidas y que carecen de funcin conocida. Son secuencias cortas de ADN repetidas entre 1.000 y 1.000.000 de veces y las copias no son totalmente idnticas.

- Secuencias centromricas altamente repetidas (1.000.000 de copias) que suelen agruparse en zonas concretas de los cromosomas. El tamao de estas secuencias es variable, desde menos de 10 pares de bases por repeticin hasta 200 300 pb. En Drosophila melanogaster la secuencia AATAACATAG este repetida en tndem en regiones prximas al centrmero. Dado que que estas secuencias cortas de 10 pb no son representativas del genoma de una especie, suele suceder que su contenido en G+C es diferente al contenido en G+C del resto del genoma. Esta causa hace que cuando se centrifuga en gradiente de densidad (ClCs) el ADN de una especie eucarionte, aparezca una banda principal que contiene la mayor parte del ADN de la especie y una banda satlite (minoritaria) que est formada por una secuencia corta de ADN repetida en tndem. El ADN satlite en algunas especies tiene mayor densidad que el ADN principal (mayor contenido en G+C) y en otras especies tiene menor densidad y, por tanto, menor contenido en G+C que el ADN principal. Cuando el ADN satlite de ratn se marca radiactivamente y se realiza una hibridacin in situ con el ADN de cromosomas metafsicos mitticos, se observa que el marcaje radiactivo (hibridacin) se produce en regiones prximas al centrmero. Los cromosomas de ratn son telocntricos.

62

ADN

satlite

de

ratn

localizado

en

regiones

centromricas

- Secuencias repetidas del orden de miles de veces y dispersas por el genoma entre las secuencias de copia nica. Algunos ejemplos de estas secuencias son: - VNTRs: Secuencias repetidas en tndem un nmero variable de veces. Se trata de unas secuencias cortas (entre 10 y 100 pb) que pueden estar repetidas por ejemplo 5 veces en un lugar concreto del cromosoma (locus) y estar repetida 4 veces en otro locus distinto y 7 veces en otra posicin. El nmero de veces que esta repetida vara de un lugar a otro del mismo cromosoma y entre cromosomas distintos. Tambin vara de unos individuos a otros. Este tipo de secuencias se llaman tambin minisatlites .En la especie humana, la primera secuencia VNTR fue descrita por A. Jeffries y era una secuencia de 33 pb encontrada en el interior del primer intrn del gen de la mioglobina. Gracias a la existencia de este tipo de secuencias se han desarrollado tcnicas que permiten identificar con un gran poder el ADN de dos personas diferentes. Estas tcnicas se llaman huellas dactilares de ADN y se emplean en estudios de medicina forense. Tambin hay VNTRs en los que el tamao de la secuencia que se repite es ms pequeo (entre 1 y 10 pb) y que se denominanmicrosatlites, los microsatlites ests distribuidos (dispersos) de manera uniforme sobre los cromosomas, mientras que los minisatlites tienden a concentrarse cerca e los telmeros.

63

VNTRs: Secuencias repetidas en tndem en nmero variable - Transposones: tambin es posible encontrar en los genomas de especies eucariontes secuencias o elementos que pueden cambiar de posicin dentro del genoma, transposones. Algunos genomas muestran mltiples copias de estos elementos genticos mviles, o versiones truncadas de ellos dispersas a lo largo del genoma. Algunos ejemplos son: - Retrotransposones: Secuencias que se han dispersado en el genoma despus de una transcripcin inversa a partir de ARN. La transcriptasa inversa es una enzima que produce ADN tomando como molde ARN. Posteriormente estas copias de ADN pueden ingresar en los cromosomas. Un ejemplo son las secuencias Alu humanas, llamadas as por contener generalmente en su interior una diana para la endonucleasa de restriccin Alu. El genoma humano contiene cientos o miles de secuencias completas o parciales Alu que se localizan en el interior de intrones y entre genes. Esta secuencia Alu tiene una longitud de 200 pb y representa el 5% del genoma humano. Tienen un importante parecido con el ARN-7S y se piensa que se han producido a partir de l por transcripcin inversa. Las secuencias cortas interpuestas como las Alu se han denominado genricamente

como SINEs (elementos interpuestos cortos). - Secuencias que muestran homologa con retrovirus, virus ARN que se replican produciendo ADN que se integra en los cromosomas. Un ejemplo son los elementos copia
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de Drosophila (secuencia

de

Kb

repetida

50

veces)

los

elementos Ty (secuencia de 6 Kb repetida 30 veces) de levaduras. En mamferos se han descrito secuencias de 1 a 5 Kb repetidas de 20.000 a 40.000 veces por genoma humano y que se han denominado LINEs (elementos interpuestos largos).

ADN espaciador: la funcin de este tipo de secuencias no es conocida, posiblemente sea simplemente separar a los genes. Se encuentran por ejemplo entre los genes de histonas y son en este caso secuencias ricas en pares A-T.

TEMA 7. ADN DE MITOCONDRIAS Y CLOROPLASTOS Los organismos eucariontes adems de poseer ADN en el ncleo, tambin tienen ADN en orgnulos citoplsmicos. Las especies vegetales contienen en el citoplasma de sus clulas cloroplastos y mitocondrias, mientras que las clulas de especies animales contienen mitocondrias en su citoplasma. Al igual que el ADN nuclear est organizado en cromosomas, tambin el ADN de los orgnulos citoplsmicos est organizado en cromosomas. 7.1 ADN Mitocondrial. El ADN mitocondrial (ADNmt) es una molcula doble hlice circular cuyo tamao vara de unas especies a otras. El tamao del ADN miotocondrial es las especies animales es inferior al de las especies vegetales y oscila entre 15 y 18 Kpb. En los hongos oscila entre 18 y 78 Kpb y en las plantas vara entre 250 y 2.500 Kpb. El ADNmt humano tiene 16.800 pb. Una clula tpica de levadura puede tener de 1 a 45 mitocondrias en su citoplasma, cada mitocondria posee entre 10 y 30 nucleoides, y a su vez cada nucleoide est constituido pos 4 5 molculas de ADNmt doble hlice circular. Por tanto, una clula de levadura puede llegar a tener en su interior 45 x 30 x 5 = 6750 molculas de ADNmt doble hlice. El nmero de mitocondrias de las clulas humanas varia de unos tejidos a otros y dentro de cada mitocondria hay un nucleoide que contiene 5 molculas ADNmt doble hlice circular.

65

Mitocondria

Organismo gracilis

unicelular:

Euglena

El ADN mitocondrial de mamferos se replica de forma semiconservativa pero de manera particular, ya que existen dos orgenes de replicacin diferentes, uno para la hlice H (pesada) y otro para la hlice L (ligera). La sntesis de ambas hlices no se lleva a cabo al mismo tiempo, primero comienza replicndose de forma unidireccional la hlice H y ms adelante y con un origen de replicacin distinto se inicia la replica unidireccional de la hlice L en sentido opuesto al de la hlice H. La replicacin del ADNmt sigue lo que se denomina mecanismo de replicacin de lazo D o lazo de desplazamiento. 7.2 ADN de cloroplastos. El ADN de cloroplastos (ADNcp) de las clulas de plantas es una molcula doble hlice circular que posee un tamao que vara entre 120 y 160 Kpb. En algas verdes el rango de variacin es mayor, oscila entre 85 y 292 Kpb, con la excepcin de Acetabularia cuyo ADNcp tiene 2.000 Kpb.

Cloroplasto
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Los cloroplastos presentan regiones que se tien intensamente con colorantes de ADN, dichas regiones se denominan nucleoides. El nmero de cloroplastos vara de unas clulas a otras dentro de la misma especie y de unas especies a otras. Las clulas de hojas de la remolacha contienen en su citoplasma alrededor de 40 cloroplastos, cada cloroplasto posee entre 14 y 18nucleoides y cada nucleoide puede estar constituido por 4 a 8 molculas de DNcp. Por tanto, una clula de remolacha puede llegar a contener 40 x 18 x 8 = 5760 molculas de ADNcp doble hlice circular. En maz se estime que existen entre 20 y 40 mleculas de ADNcp doble hlice circular por cada cloroplasto. En Chlamydomonas reindardii existe un solo cloroplasto por clula que contiene entre 500 y 1500 mleculas de ADNcp doble hlice circular empaquetadas en varios nucleoides. Teora endosimbionte: los antepasados de las mitocondrias y los cloroplastos seran organismos procariticos unicelulares. Los antepasados de las mitocondrias seran las bacterias y los de los cloroplastos seran por ejemplo las cianobacterias. Tanto las mitocondrias como los cloroplastos poseen un cromosoma mucho ms pequeo que el de sus antepasados procariontes, de manera que durante la evolucin se ha reducido drsticamente el tamao del genoma de los orgnulos citoplasmas en un perodo relativamente breve a partir de su origen endosimbionte. TEMA 8. SIGNIFICADO BIOLGICO DE LA MITOSIS Todos los organismos vivos utilizan la divisin celular, bien como mecanismo de reproduccin, o como mecanismo de crecimiento del individuo. Lo seres unicelulares utilizan la divisin celular para la reproduccin y perpetuacin de la especie, una clula se divide en dos clulas hijas genticamente idnticas entre s e idnticas a la original, manteniendo el nmero cromosmico y la identidad gentica de la especie. En organismos pluricelulares la divisin celular se convierte en un proceso cclico destinado a la produccin de mltiples clulas, todas idnticas entre s, pero que posteriormente pueden derivar en una especializacin y diferenciacin dentro del individuo. Desde un punto de vista puramente evolutivo un organismo unicelular es simplemente una estructura dentro de la cual se realizan las funciones vitales bsicas de nutricin y reproduccin. Las nicas presiones selectivas son
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la

adquisicin de alimento y las fuerzas de tensin superficial. El organismo unicelular debe por tanto aislarse del medio mediante una membrana o pared que le permita adquirir alimento a la vez que soporte las fuerzas de tensin superficial del medio en que se desarrolla. Dicho organismo, en su lucha contra el medio, y para poder crecer y optimizar sus funciones, va adquiriendo nuevas funciones como la excrecin, la relacin, etc, para ello va adquiriendo o desarrollando diversos orgnulos, pero llega un momento en que la clula no podra albergar en su interior tantos orgnulos y funciones, pues la presin del medio impedira que la clula adquiriera el tamao y volumen necesario para ello. Bajo este supuesto los organismos evolucionan convirtindose de unicelulares a pluricelulares, as cada clula puede especializarse en diversas funciones y diferenciarse en un trabajo especfico. Los organismos pasan de luchar contra las fuerzas de tensin superficial, a combatir contra la fuerza de la gravedad, para ello se convierten en organismos pluricelulares, en el cual las clulas se agrupan en tejidos, rganos y sistemas, cada uno especializado en una funcin determinada y cada clula diferenciada en realizar una actividad concreta. Para un organismo pluricelular, la divisin celular es un mecanismo cclico el cual le permite el aumento del nmero de clulas, y a partir de esas clulas lograr una especializacin y una funcionalidad concreta. 8.1 El Ciclo Celular Cuando una clula se divide en dos, uno ambos productos de la divisin pueden volver a dividirse, establecindose de esta forma un ciclo de divisin celular, el perodo entre dos mitosis consecutivas, se denomina interfase. El estado normal de una clula es con los cromosomas en estado de un cromatidio, es decir en estado de una doble hlice de ADN. Indudablemente para que una estructura pueda dividirse en dos exactamente iguales, esta estructura ha de estar duplicada, es decir todos sus componente repetidos y separados en estructuras diferenciadas. El cromosoma antes de dividirse debe pasar a un estado en el que posea dos cromatidios, genticamente idnticos. La duplicacin del materia gentico ha de ser previo a la divisin celular.

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En la interfase del ciclo de divisin celular podemos distinguir tres perodos: G1.- Es un estado que se caracteriza por ser genticamente activo, el ADN se transcribe y se traduce, dando lugar a protenas necesarias para la vida celular y sintetizando las enzimas y la maquinaria necesaria para la sntesis del ADN. Fase S.- Es la fase en la cual se duplica por entero el material hereditarios, el cromosoma pasa de tener un cromatidio a tener dos, cada uno de ellos compuesto por una doble hlice de ADN producto de la duplicacin de la original, como la replicacin del ADN es semiconservativa, las dos dobles hlices hijas sern exactamente iguales, y por tanto los cromatidios hermanos, genticamente idnticos. G2.- Durante este perodo se ultima la preparacin de todos los componentes de la divisin celular, al final de esta fase, se produce una seal que dispara todo el proceso de la divisin celular. La divisin celular se compone de dos partes, la divisin del ncleo (cariocinesis, o mitosis) y la del citoplasma (citocinesis). La divisin del ncleo es exacta, se reparte equitativamente el material hereditario, mientras que la citocinesis puede no serlo, es decir el reparto de orgnulos citoplsmicos y el tamao de las dos clulas puede no ser equitativo ni igual. Durante la mitosis el ADN va a estar totalmente empaquetado y supernrollado, inaccesible a polimerasas y transcriptasas, es por ello que toda la actividad funcional del ADN ha de realizarse en la interfase previa a la cariocinesis. Al final de la mitosis, la clula entra en interfase, si esa clula ya no se va a dividir ms, entra en lo que se denomina perodo G0, si por el contrario esa clula va a
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volver a dividirse entra de nuevo en el perodo G1 previo a la sntesis del ADN, e inicindose un nuevo ciclo de divisin celular. 8.1.1 Fases de la mitosis De una forma tradicional y basndose en aspectos morfolgicos observados al microscopio ptico, la mitosis suele dividirse en 4 fases o estados Profase, Metafase, anafase y Telofase. Aunque esta diferenciacin es correcta, y se corresponde con etapas concretas de la cariocinesis, no hemos de pensar que ello ocurre en etapas diferenciadas, sino ms bien en un proceso totalmente continuo, sin pausa en el tiempo, y que todo se engloba en un ciclo de la clula. Durante la interfase, el ncleo eucaritico aparece encerrado dentro de la membrana nuclear, con el nucleolo perfectamente diferenciado y con una fibra de cromatina, fcilmente observable por su facilidad para teirse. La fibra de cromatina contiene el ADN y las protenas asociadas al mismo, su aspecto es similar al de una madeja de hilo o lana, totalmente indiferenciado. Es una fibra muy larga y fina, a manera de ejemplo la fibra de cromatina de un ncleo humano mide aproximadamente 2 metros. Aunque al microscopio ptico es imposible diferenciarlo, realmente esta fibra est organizada en unas estructuras individuales que son los cromosomas, lo que ocurre es que al estar desespiralizados y descondensados dentro del ncleo, parece como si todo fuera una estructura nica. Cromatina y cromosoma son genticamente lo mismo, el material hereditario, ADN unido a protenas. Durante la interfase el cromosoma pasa de estar compuesto por un slo cromatidio (G1), a tener dos cromatidios (G2), ya hemos dicho anteriormente que esto ocurre durante la Fase de sntesis (S).

Interfase Celular antes de la divisin

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Al final del perodo G2, empieza la mitosis, y la cromatina sufre una progresiva condensacin debido al superempaquetamiento y superenrrollamiento de los cromosomas. Esto es el principio de la profase mittica. Segn avanza la profase, los cromosomas van individualizndose y van apareciendo como estructuras perfectamente diferenciadas dentro del ncleo celular. Este empaquetamiento de la cromatina es fcilmente entendible desde un punto de vista funcional del proceso. Pensemos en esa madeja de la que hablbamos al principio de la profase, separar todo ese material sera muy difcil, es ms sencillo si todo esta condensado, individualizado, y las dos partes a separar (en este caso los cromatidios) perfectamente diferenciadas. Mientras los cromosomas continan condensndose y hacindose visible su estructura de dos cromatidios, en el citoplasma y ms concretamente en dos polos opuestas del mismo, se van organizando unos centros emisores de microtbulos. El nucleolo desaparece y la membrana nuclear se rompe y disgrega. De esta forma esos microtbulos puenden entrar en contacto con las regiones centromricas de los cromosomas y unirse a los cinetocoros. Este haz de microtbulos es lo que se denomina huso mittico o huso acromtico debido a su forma fusiforme. Cada uno de los cinetocoros de cada cromatidio empieza a captar estos microtbulos, como consecuencia de ello el cromosoma se mueve por el citoplasma en movimientos de polarizacin u orientacin (cada cromatidio se orienta hacia un polo celular) y de congresin: cada cinetocoro capta micrtbulos de un polo, su hermano del polo contrario, por fuerzas de tensin el cromosoma se mueve hacia uno u otro polo, cuando el nmero de microtbulos captado por cada cinetocoro hermano es aproximadamente igual, las fuerzas de tensin se equilibran y el cromosoma tiende a quedarse en el centro de la clula, al ocurrir este fenmeno en todos los cromosomas, decimos que se produce una congresin de los cromosomas en el centro de la clula, en la zona del ecuador de la misma.

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Profase mittica

Metafase mittica

Esta congresin de todos los cromosmas en la placa ecuatorial de la clula es lo que denominamos metafase, los cromosomas adems de estar en el centro, estan orientados anfitlicamente, esto es, los dos cromatidios orientados hacia polos opuestos de la clula. Algunos autores distinguen una fase intermedia de la mitosis, entre la profase y la metafase. Dicha fase se denomina prometafase y estara comprendida desde que los microtbulos entran en contacto con los cinetocoros hasta que se forma la placa ecuatorial con los cromosomas dispuestos en ella. Cuando todos los cromosomas estn dispuestos en la placa ecuatorial, se produce una nueva seal en la clula, que produce que cada cinetocoro hermano sea arrastrado hacia un polo distinto de la clula. Esta separacin de cinetocoros conlleva la separacin de los cromatidios hermanos, con lo cual el cromosoma se escinde en sus dos cromatidios y cada uno de ellos migra hacia un polo celular distinto. Como cada cromatido es genticamente igual a su hermano a cada polo celular se dirige una idntica informacin gentica. Esta es la fase que denominados Anafase, y que se caracteriza por la separacin y migracin de cromatidios hermanos a polos opuestos celulares. Cuando este viaje anafsico se culmina, tenemos dos ncleos opuestos e idnticos, que empiezan a ir adoptando la situacin primigenia de la interfase. La cromatina empieza a descondensarse, el nucleolo y la membrana nuclear vuelven a recontruirse, se forman dos ncleos hijos. Esto es lo que denominamos Telofase y con ella termina propiamente la cariocinesis.

Anafase mittica

Telofase mittica

Para que la divisin celular se complete ha de formarse un tabique o pared que asle los dos ncleos, esto se produce durante la citocinesis o divisin del citoplasma.
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Interfase postmittica 8.1.2 Duracin y medida del ciclo celular La estimacin de la duracin o medida del ciclo celular se realiza mediante la utilizacin de algn tipo de marcaje celular y su seguimiento en el tiempo. En un tejido en crecimiento o en un cultivo celular, las clulas proliferantes no son sincrnicas, no se encuentran en la misma fase. Si miramos al microscopio ptico observamos que hay clulas en todos los estados posibles del ciclo celular. Una primera aproximacin de la medida del ciclo celular puede hacerse, contando un determinado nmero de clulas (por ejemplo 1000) y viendo cuantas de ellas estn en mitosis. Esto es lo que se denomina ndice mittico: nmero de clulas en mitosis dividido por nmero total de clulas contadas. De igual forma se puede estimar cada uno de los ndices de fase, si contamos por ejemplo 100 clulas en mitosis, los cuatro ndices de fase (profase, metafase, anafase y telofase) se calcularan como el nmero de clulas en esa fase dividido por el total de clulas en mitosis contadas, en este caso 100. El clculo de los ndices mittico y de cada una de las fases, no nos da una medida temporal del ciclo de divisin celular, sino simplemente una relacin entre lo que duran cada una de las fases. Para una medida en escala temporal de das u horas, se suele emplear un marcaje celular y un seguimiento de esas clulas marcadas. El procedimiento ms habitual es marcar las clulas con timidina tritiada. Si en un tejido o cultivo en proliferacin, aadimos al medio timidina tritiada, las clulas que estn en perodo de sntesis incorporarn dicho marcaje y podremos distinguirlas del resto debido a su radiactividad. Supongamos que damos un pulso de timidina tritiada de una duracin de aproximadamente media hora, y posteriormente vamos tomando muestras cada cierto tiempo (por ejemplo cada una o dos horas) y anotando el porcentaje de

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clulas en mitosis (por ejemplo telofases) que estn marcadas. Obtendramos una grfica aproximadamente igual a la de este esquema:

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Las primeras clulas marcadas que aparecen, seran las que estaban al final del perodo S cuando dimos nuestro pulso radiactivo, por lo tanto la duracin en horas de la fase G2 + Mitosis (o mas concretamente G2 + profase + metafase + anafase) nos lo marca el tiempo que tardan en aparecer dichas clulas. Dentro del cultivo o

tejido, no todas las clulas van a la misma velocidad, hay algunas que son ms rpidas que otras, esto lo observamos porque no pasamos de un 0 a un 100% de marcaje, sino que tanto el ascenso como el descenso de clulas marcadas no es brusco sino progresivo. Se ha establecido por convenio por convenio que todos los clculos se realicen sobre el 50% de marcaje. De esta forma la diferencia entre dos 50% ascendentes ser la duracin total de un ciclo celular completo. La diferencia en horas entre un 50% descendente y su 50% ascendente previo, nos dar la duracin de la fase S ya que este tiempo representa cuantas horas han estado "marcndose" las clulas. La estima de la fase G1 sera el resultado de restar a la duracin del ciclo celular completo, la duracin de G2+mitosis y la duracin de la fase S. Aunque este mtodo es ms exacto y nos da unas medidas en horas, no es realmente exacto, ya que esas medidas dependen de muchos factores, como son las condiciones de temperatura, los nutrientes del medio y tambin la propia naturaleza del tejido o cultivo en cuestin. En clulas embrionarias el ciclo es muy corto y la interfase casi se reduce a solamente el perodo S. Como norma general suele decirse que a mayor vejez celular y a temperaturas ms bajas el ciclo celular se alarga, y en clulas jvenes y temperaturas altas el ciclo se acorta.
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8.2 Alteraciones Del Ciclo Celular La mitosis es prcticamente un proceso universal y se realiza prcticamente igual en todos los seres vivos. Sien embargo, bien por fallos en la clula o bien de forma artificial por administracin de drogas, podemos observar determinadas alteraciones en el ciclo celular. La alteracin natural ms comn es la endorreduplicacin, que consiste en varios perodos de sntesis de ADN sin divisin celular. Los cromosomas homlogos estn perfectamente alineados y juntosy al terminar la fase S del ciclo celular no se entra en mitosis, sino que se inicia una nueva ronda de replicacin, as durante 10 perodos, de tal forma que el cromosoma politnico contiene ms de 1000 fibras de cromatina. Esta fibra tiene un patrn constante de una alternancia de zonas ms o menos condensadas lo que simula una alternancia de bandas e interbandas en el cromosoma. Los cromosomas politnicos peden estar todos juntos por la regin centromrica (ej. Drosophila) o permanecer separados en el ncleo celular (ej Chironomus)

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Los crommeros son las regiones ms condensadas del cromosoma politnico, cuando una regin est muy desespiralizada, se denomina Puff. Estos puff son la expresin citolgica de la transcripcin del ADN. Cuando estos Puffs son muy grandes se denominan Anillos de Balbiani, (BR o Balbiani Rings), y en fotografas al microscopio electrnico se puede observar a lo largo de la fibra de cromatina en transcripcin molcular de polimerasas y ARN cada vez de mayor tamao.

Dentro de las alteraciones artificiales por administracin de drogas, vamos a estudiar tres de ellas que son las ms utilizadas en Citogentica. C-mitosis: Se produce por la administracin de la droga Colchicina. Esta sustancia inhibe la formacin del huso acromtico, al llegar a metafase los cromosomas estn muy condensados y con los cromatidios separados y en forma de "X" ya que las cromtidas han perdido la cohexividad entre ellas y slo aparecen unidas por la regin del centrmero. Los cromosomas aparecen perfectmente individualizados y se puede apreciar perfectamente su forma, y nmero. Esta droga se utiliza para
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resaltar la forma cromosmica y para facilitar el contar el nmero cromosmico de una clula.

Bi-mitosis: Se produce por la administracin de cafena a tejidos vegetales. La cafena inhibe la formacin del fragmoplasto o tabique de separacin celular, no se produce la citocinesis y los dos ncleos permencen separados pero dentro del mismo citoplasma. En la siguiente divisin los dos ncleos entran de nuevo en mitosis y podemos ver Bi profases, bimetafases, bianafases y bi telofases. Esta droga se utiliza para estudiar controles del ciclo celular y para determinaciones de la duracin del ciclo. En una segunda ronda de divisin bajo los efectos de la cafena observaramos la mitosis en clulas polinucleadas.

Biprofase

Bimetafase Bianafase

Bitelofase

Clulas Profase Metafase

Polinucleadas Anafase Telofase

Mitosis multipolares: Se produce mediante drogas tales como la carbetamida, que producen husos multipolares, los cromosomas no emigran a dos polos opuestos, sino a varios, 3 o 4, producindose clulas con distinto nmero de cromosomas.
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8.3 Funciones Que Debe Cumplir El Cromosoma: Significado Gentico De La Replicacin Las principales funciones que debe cumplir un cromosoma son la de replicarse (producir copias de si mismo), la de transmitirse de una clula a otra y de una generacin a la siguiente y la de expresar la informacin que contiene.

Bacteria

Bacteria dividindose

Bacterias descendientes

El significado gentico de la replicacin es el de conservar la informacin informacin gentica, de manera que cuando una bacteria se divide, de lugar a una bacteria hija que contenga la misma informacin gentica. En organismos eucariontes el significado de la divisin celular es el mismo, una clula cuando se divide origina dos clulas hijas idnticas con la misma informacin gentica.

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8.4 Modelos De Replicacin Propuestos: Semiconservativo, Conservativo Y Dispersivo Modelo Semiconservativo: Cuando Watson y Crick (1953) propusieron el modelo de la Doble Hlice indicaron que dicho modelo sugera una forma sencilla de replicacin. El modelo de replicacin propuesto por Watson y Crick supona que el ADN doble hlice separa sus dos hebras y cada una sirve de molde para sintetizar una nueva hebra siguiendo las reglas de complementariadad de las bases nitrogenadas. Dicho modelo recibin el nombre de Semiconservativo, ya que las dos dobles hlices recin sintetizadas poseen una hebra vieja (una mitad vieja) y otra hebra nueva (mitad nueva). Frente al modelo Semiconservativo propuesto por Watson y Crick (1953) se postularon otros posibles modelos de replicacin del ADN, uno de ellos se denomin Modelo Conservativo y otro Modelo Dispersivo. Modelo Conservativo: cuando el ADN doble hlice se replica se producen dos dobles hlices, una de ellas tienen las dos hebras viejas (esta intacta, se conserva) y la otra doble hlice posee ambas hebras de nueva sntesis. Modelo Dispersivo: Cuando el ADN doble hlice se replica se originan dos dobles hlices, cada una de ellas con hebras que poseen tramos viejos y tramos de nueva sntesis en diferentes proporciones. Los siguientes esquemas representan los tres Modelos de Replicacin:

Semiconservativo

Conservativo

Dispersivo

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8.4.1 LA REPLICACIN DEL ADN BACTERIANO SE AJUSTA AL MODELO SEMICONSERVATIVO: EXPERIMENTOS DE MESELSON Y STAHL (1958) Meselson y Stahl (1957) disearon un experimento para tratar de averiguar la forma en la que se realiza la replicacin del ADN en E. coli, es decir, la pregunta que se plantearon fue: Qu modelo de replicacin del ADN sigue E. coli, semiconservativo, conservativo o dispersivo?. Para contestar a esta pregunta, disearon un experimento en el que marcaban el ADN de la bacteria E. coli con Nitrgeno pesado N15, para ello hicieron crecer las bacterias durante 14 generaciones sucesivas en un medio que contena como nica fuente de Nitrgeno N 15. Durante estas 14 generaciones el ADN de las bacterias las bacterias se haba sintetizado con bases nitrogenadas con Nitrgeno pesado (N15). Posteriormente, comprobaron que podan distinguir el ADN del las bacterias que crecan en un medio normal (con N 14) del ADN de las bacterias que haban crecido durante 14 generaciones en N 15. Para ello extrajeron el ADN de ambos tipos de bacterias y lo centrifugaron en un gradiente de densidad de CsCl. El resultado fue que la densidad del ADN de las bacterias que haban crecido en presencia de N15 era mayor que el ADN de las bacterias que haban crecido con N14. Una vez comprobado que eran capaces de distinguir el ADN de ambos tipos de bacterias, continuaron el experimento de la siguiente forma: Las bacterias que haban estado creciendo en Nitrgeno pesado (N15) las pasaron a un medio de cultivo que contena N14 (Nitrgeno normal) y a distintos tiempos, media generacin, una generacin, dos generaciones, tres generaciones de replicacin, tomaban una muestra del cultivo bacteriano, extraan el ADN y centrifugaban en gradiente de densidad de CsCl.

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Esquema Experimentos Meselson y Stahl (1958)

Cuando extraan el ADN de la bacteria que llevaban una generacin creciendo en N14 y centrifugaban en CsCl, obtenan una sola banda de densidad intermedia (N 1415

) entre la del ADN N14 y el ADN N15. Si extraan el ADN de las bacterias que

llevaban dos generaciones creciendo en N14 y centrifugaban en gradiente de CsCl obtenan dos bandas, una correspondiente al ADN N 14 y otra de densidad intermedia
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(N14-15) entre la del ADN N14 y el ADN N15. La absorbancia a 260 nm es directamente proporcional a la cantidad de ADN que contiene una banda, de manera que al medir la absorbancia de las dos bandas obtenidas en la segunda generacin, obtenan que ambas contenan igual cantidad de ADN (1:1). Al extraer y centrifugar en CsCl el ADN de las bacterias que llevaban tres generaciones creciendo en N14, obtenan dos bandas, una correspondiente al ADN N14 y otra de densidad intermedia (N14-15) entre la del ADN N14 y el ADN N15. La cantidad de ADN que contena la banda correspondiente al ADN N14 era tres veces mayor que la encontrada en la banda de densidad intermedia (N14-15), proporcin (3:1). Los resultados obtenidos por Meselson y Stahl (1958) se ajustaban a un modelo de replicacin semiconservativo. Para asegurarse, aislaron la banda de ADN de densidad intermedia (N14-15) obtenida a partir de las bacterias que llevaban una generacin en N14, desnaturalizaron el ADN de la banda mediante calor para separar sus dos hlices y, mantenindolas desnaturalizadas, centrifugaron en CsCl. Si la replicacin de E. coli se ajustaba al modelo semiconservativo, una de las hlices debera estar construida con N15 (la vieja) y la otra hlice con N14 (la nueva) y, al centrifugar en gradiente de densidad esperaramos obtener dos bandas una ms densa correspondiente a la hlice construida con N15y otra menos densa sintetizada con N14. El resultado obtenido por Meselson y Stahl (1958) fue precisamente el esperado para una replicacin semiconservativa.

Resultados centrifugacin CsCl

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Matthew Meselson y Franklin W. Stahl

Si la replicacin del ADN de E. coli se ajustar al modelo Conservativo al centrifugar el ADN de las bacterias despus de un generacin en medio con N 14, hubieran obtenido dos bandas una de densidad correspondiente al N 14 y otra de densidad correspondiente al N15. Nunca habran observado, en este caso, una banda de ADN de densidad intermedia (N14-15). 8.5 La Divisin Celular En Eucariontes: Mitosis Y Citocinesis. El ciclo celular consta esencialmente de dos fases que habitualmente se alternan, La interfase y la divisin celular. A su vez la Interfase de subdivide en periodo G1, periodo de sntesis S y periodo G2. La duracin relativa de G1, S y G2 vara de un organismo a otro y dentro del mismo organismo segn el tejido. La divisin celular comprende a su vez dos fenmenos diferentes e independientes que son la mitosis o cariocinesis (reparto del material nuclear) y la citocinesis (reparto del citoplasma). Habitualmente, despus de una mitosis se produce una citocinesis. En G1 los cromosomas estn constituidos por un solo cromatidio procedente de la segregacin anafsica anterior. Para que una clula somtica vuelva a entrar en divisin es necesario que antes se replique el material hereditario, por tanto, las clulas que entran en mitosis han pasado previamente por un perodo S de sntesis de ADN. De forma que cuando las clulas entran en mitosis, los cromosomas estn en estado de dos cromatidios. La Mitosis o Cariocinesis (reparto del material nuclear) consta de laza siguientes fases: Profase, Metafase, Anafase y Telofase. Cuando una clula somtica con 2n cromosomas entra en mitosis, todos sus cromosomas estn en estado de dos cromatidios. Los dos cromatidios hermanos de cada cromosoma son idnticos, contienen la misma informacin gentica ya que se han originado a partir de doble hlice de ADN mediante replicacin semiconservativa. En la Interfase el material nuclear, la cromatina, se encuentra descondensada y se observa el nucleolo.

Profase: la cromatina se va contrayendo gradualmente y al final de la profase desaparece la membrana nuclear y el nucleolo y los cromosomas comienzan a dirigirse al centro de la clula al ecuador.

Metafase: los cromosomas alcanzan su mximo grado de condensacin presentando sus bordes ntidos y se sitan en la placa ecuatorial (centro de la

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clula). Tiene lugar la insercin de los microtbulos (fibras) del huso acromtico en los cinetocoros centromricos. En la placa ecuatorial hay 2n cromosomas constituidos por dos cromatidios.

Anafase: segregacin o separacin de los cromatidios hermanos de cada cromosoma y emigracin a polos opuestos. Este tipo de segregacin se denomina Anfitlica, los dos cromatidios de un cromosoma se separan y viajan a polos anafsicos opuestos. A cada polo viajan 2n cromatidios.

Telofase: Termina la emigracin a polos opuestos se descondensan los cromatidios se reconstruye la membrana nuclear y se reorganiza el nucleolo. Finalmente aparecen dos ncleos hijos idnticos que cada uno contiene 2n cromatidios.

Despus la citocinesis reparte el material citoplasmtico y aparecen dos clulas hijas idnticas. La citocinesis en clulas vegetales se produce por coalescencia de vesculas del aparto de Golgi que dan lugar al fragmoplasto figura en forma de tonel que adquiere el huso acromtico, al ser empujadas sus fibras hacia fuera, el crecimiento de dicho tabique se produce del interior hacia el exterior de la clula. En las clulas animales la citocinesis tiene lugar por estrangulamiento de fuera hacia dentro.

Fases del ciclo celular : meristemo radicular de cebolla Anafase Temprana

Interfase

Profase

Metafase

Anafase Tarda

Telofase temprana

Telofase tarda

Dos clulas

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8.5.1 Alteraciones Del Ciclo Celular Lo habitual es que despus de un perodo S de sntesis se produzca una mitosis o cariocinesis seguida de una citocinesis. Sin embargo, en ocasiones en algunos tipos de clulas animales o vegetales de forma natural o bien mediante tratamientos con determinados compuestos, es posible obtener variaciones en el ciclo de divisin. Las principales variaciones en el proceso de divisin celular se han resumido en la siguiente tabla:

VARIACIONES EN EL CICLO DE DIVISIN CELULAR Endorreduplicacin: Varios perodos S sucesivos sin entrar en mitosis. Cuadruplocromosomas. Politenia

Variaciones en la Replicacin reparto material hereditario y del

(cromosomas gigantes de Drosophila melanogaster). Haplocromosomas: Dos mitosis sucesivas sin perodo S entre ambas. Endomitosis: No desaparece la membrana nuclear,

mitosis dentro del ncleo. Aparecen clulas poliploides. Variaciones afectan estados mitticos a que Variaciones en la anafase: inhibicin de la formacin del los huso acromtico. Con colchicina (c-mitosis) mediante anoxia (a-mitosis). Se duplica el nmero de cromosomas y aparece una clula poliploide. No reorganizacin del nucleolo: por mutaciones en la ARN Polimerasa I Variaciones afectan citocinesis relacin con que Cariocinesis sin Citocinesis: La cafena inhibe la a la citocinesis, aparecen clulas binucleadas (con dos ncleos) en la Citocinesis sin Cariocinesis: el bromuro de etidio provoca que las clulas se paren en profase y se reparta el citoplasma (citocinesis) sin haberse repartido el material del

cariocinesis

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ncleo. Citocinesis en clulas anucleadas: en algunos

organismos en determinados momentos se observa que clulas sin ncleo reparten su citoplasma.

TEMA 9. CARACTERSTICAS DE LA REPLICACIN EN BACTERIAS: NICO PUNTO DE ORIGEN, REPLICN Como ya hemos visto la replicacin en bacterias se ajusta al modelo semiconservativo. En las bacterias existe un solo origen de replicacin, denominado Ori C y, a partir de este nico punto de origen, la replicacin progresa en dos direcciones, de manera que existen dos puntos de crecimiento (PC) u horquillas de replicacin. El cromosoma bacteriano ser una unidad de replicacin se le denomina replicn.

El origen de replicacin en E. coli es una secuencia de 245 pb que contiene una secuencia de 13 pb repetida tres veces en tndem. Adems esta regin contiene cuatro zonas de unin a la protena Dna A que se encarga de separar las hlices para comenzar la replicacin.

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Cuando las molculas de ADN circular se replican se observan lo que se denominan "ojos o burbujas" de replicacin. La forma que adoptan los intermediarios de la replicacin se parece a de la letra griega .

Burbuja

Forma

9.1 EUCARIONTES: MUCHOS ORGENES DE REPLICACIN. MLTIPLES REPLICONES. La principal diferencia de la replicacin de virus y bacterias con la replicacin de eucariontes radica en que los eucariontes poseen muchos orgenes de replicacin, probablemente debido a la enorme cantidad de ADN que poseen y a que su material hereditario en la inmensa mayora de los casos esta repartido en varias molculas de ADN distintas o varios cromosomas. Por tanto, los eucariontes tienen en cada
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cromosoma muchos orgenes de replicacin, y como consecuencia, muchos replicones (unidades de replicacin).

Muchos Esquema con mltiples orgenes de replicacin replicacin

orgenes en

de D.

Melanogaster

9.1.1 Direccin De Sntesis 5' - 3', Bidireccional Las ADN polimerasas de E.coli (las enzimas encargadas de sintetizar ADN) solamente saben sintetizar ADN en la direccin 5' - 3'. Es decir, solamente son capaces de aadir nucletidos al extremo 3' OH de otro nucletido trifosfato. Las ADN polimerasas necesitan un extremo 3' OH al que aadir nucletidos trifosfato para comenzar la sntesis de ADN. La replicacin del ADN en E. coli es bidireccional, ya que a partir de un punto de origen progresa en dos direcciones opuestas, existiendo dos puntos de crecimiento (PC) u horquillas de replicacin. Cuando se mira solamente una de las horquillas de replicacin, una de las hlices se sintetiza de forma continua, la hlice conductora (tambin llamada hlice lder), mientras que la otra hlice se sintetiza de manera discontinua, hlice retardada (tambin llamada hlice retrasada), a base de fragmentos cortos. Si se observan simultneamente las dos horquillas de

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replicacin, a un lado del origen la hlice de nueva sntesis se polimeriza de forma continua, mientras que al otro lado del origen se polimeriza de forma discontinua.

Para demostrar que la replicacin es bidireccional se pueden realizar experimentos que se denominan de pulso y caza, en los que la clula es expuesta durante un breve periodo de tiempo en un medio con timidina tritiada TH3 (pulso) y despus se pasa a un medio con timidina no radiactiva (fra) en exceso (caza). Posteriormente se extiende el ADN se un portaobjetos y despus se realiza una autorradiografa.

Replicacin bidireccional: Experimento de pulso y caza

9.2 Semidiscontinua, Fragmentos De Okazaki Debido al antiparalelismo de las dos hlices del ADN y a que las ADN polimerasas solamente saben sintetiza ADN en la direccin 5'P - 3'OH, la sntesis de una de las hebras se puede realizar de forma continua, mientras que la otra hlice para poder sintetizarla al mismo tiempo se necesita polimerizarla a base de ir aadiendo pequeos fragmentos (fragmentos o piezas de Okazaki). Como una hlice se sintetiza de forma continua y la otra lo hace de forma discontinua, se dice que la Replicacin es Semidiscontinua.
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9.3 Iniciacin Mediante Arn Cebador Como ya hemos dicho anteriormente, las ADN polimerasas solamente saben sintetizar ADN en la direccin 5' - 3' aadiendo nucletidos al extremo 3' OH de otro nucletido. Para que puedan iniciar la sntesis de ADN necesitan un extremo 3' OH al que ir aadiendo nucletidos, y ese extremo 3' OH lo suministra un ARN de pequeo tamao alrededor de 25 a 30 ribonucletidos que se denomina ARN cebador o "primer". La sntesis de ADN comienza, por tanto, sintetizando un corto segmento de ARN denominado cebador, dicho cebador lo sintetiza un enzima denominado Primasa. La Primasa es una ARN polimerasa que utiliza como molde ADN. Todos los fragmentos de Okazaki comienzan por un Cebador. Posteriormente, la Holoenzima de ADN polimerasa III lleva a cabo la sntesis del fragmento de ADN correspondiente hasta llegar al siguiente cebador. En ese momento, la ADN polimerasa I sustituye a la Holoenzima de ADN polimerasa III. La ADN polimerasa I se encarga de retirar el ARN cebador mediante su actividad exonuetdica 5'P - 3' OH y al mismo tiempo rellena el hueco sintetizando ADN.

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Por ltimo, los dos fragmentos de Okazaki tienen que unirse, es necesario enlazar el extremo 3'OH de un fragmento con el 5'P del siguiente fragmento. Dicha labor de sellado y unin de los sucesivos fragmentos la realiza la Ligasa. 9.4 Crculo Rodador Los mecanismos de replicacin en virus y bacterias dependen de la propia estructura del material hereditario o cromosoma de la especie procarionte estudiada. Por tanto, el mecanismo de replicacin vara segn se trata de molculas de ADN circulares doble hlice (E. coli, papovavirus), ADN cirlar de una hlice (fX174), ADN doble hlice lineal con redundancia terminal (fago T7) o ADN doble hlice lineal con extremos cohesivos (fago l). El mecanismo de replicacin puede adoptar la forma que (E. coli, plasmidios), el modelo del circulo rodador (fX174, Fago l) o el Lazo de desplazamiento o lazo D (ADN mitocondrial). En el modelo del crculo rodador una endonucleasa corta una de las hlices (hlice externa en el esquema) y el extremo 5' se fija a la membrana. El extremo 3'OH producido por el corte lo utiliza la ADN polimerasa como cebador para ir aadiendo nucletidos y copiando la otra hlice (hlice interna en el esquema). Por el otro
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extremo de la hlice cortada (el extremo 5') tambin se va sintetizando una nueva hebra. Lo que se supone que sucede es que la hlice interna girara de forma continua en el sentido indicado haciendo que cada vez saliera ms cantidad de la hlice inicialmente cortada por la endonucleasa. La hlice interna seguira dando vueltas de forma que sera copiada varias veces al igual que la hlice que emerge por el lado derecho, formndose una molcula ADN doble hlice muy larga que contienen varias copias sucesivas del ADN del fago. Estas molculas reciben el nombre de multmeros o concatmeros. El el caso del fago l, posteriormente una endonucleasa denominada ter reconoce la secuencia de doce pares de bases de los extremos cohesivos del fago y produce un corte asimtrico para liberar copias independientes del ADN doble hlice lineal del fago.

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Esquema Circulo rodador

Circulo rodador

9.5 REPLICACIN DE LOS TELMEROS Las molculas ADN doble hlice lineal tienen problemas para replicar sus extremos, ya que las ADN polimerasas necesitan un extremo 3' OH al que ir aadiendo nucletidos. Uno de los extremos de cada hlice (el extremo 5') se puede copiar sin problemas debido a que viene cebado desde atrs, sin embargo, el extremo contrario (extremo 3') no podra replicarse ya que no puede ser cebado desde atrs. Como consecuencia quedara un corto segmento al final sin copiarse y se ira acortando el ADN por ese extremo en cada ronda de replicacin.

Problemas de replicacin de los extremos

Algunos virus resuelven este problema de una manera sencilla. Por ejemplo, el fago l cuyo material hereditario es ADN doble hlice lineal con extremos cohesivos, lo primero que hace cuando infecta a E. coli y va a replicar su ADN es convertirse en ADN doble hlice circular a travs de los extremos cohesivos. De este manera, ya han desaparecido los problemas de replicacin de los extremos lineales. Otros virus, como los Adenovirus resuelven el problema gracias a la existencia de una protena que se une al extremo 5' y que contiene un residuo de serina unido a un nuclotido CTP que suministra el extremo 3' necesario para que la ADN polimerasa pueda cebarse y copiar el extremo. La protena que forma un complejo con la ADN polimerasa tiene 80 Kd, sin embargo, la protena que aparece en el interior de las partculas virales maduras tiene solamente 55 Kd. Por tanto, durante la maduracin del virus debe ser procesada y pasar de 80 Kd a 55 Kd. El virus f29
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tambin tiene protenas unidas al extremo 5' implicadas en la replicacin y algunos virus ARN como el virus de la polio poseen protenas de bajo peso molecular (Vpg) con solo 22 aminocidos estn unidas al extremo 5' .

Replicacin de los extremos en Adenovirus La replicacin de los extremos de los cromosomas eucariticos tambin supone un problema, ya que los cromatidios son molculas de ADN doble hlice lineal y se iran acortando en las sucesivas replicaciones. La manera de solventar este problema consiste en disponer de secuencias repetidas en los extremos, los telmeros eucariticos contienen una secuencia corta rica en Guanina repetida cientos de veces ( por ejemplo la secuencia 5' TTGGGG 3' en el ciliado Tetrahymena). Adems, los telmeros poseen extremos 3' monocatenarios que pueden autoaprearse y suministrar un extremo 3' para replicar los extremos cromosmicos.

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Un enzima denominado Telomerasa aade estas secuencias a los extremos cromosmicos. La Telomerasa lleva una corta secuencia de ARN (por ejemplo AACCCC) que sirve de molde para sintetiza la secuencia repetida de los extremos (TTGGGG). La telomerasa, es una transcriptasa inversa, ya que tomando como molde ARN sintetiza ADN. La adicin de estas secuencias cortas que lleva a cabo la Telomerasa contrarresta la tendencia al acortamiento de los telmeros durante la replicacin normal.

La telomerasa tiene un pequeo fragmento de ARN 9.6 Las adn polimerasas de e. coli. En la bacteria E. coli Arthur Kornberg encontr tres ADN polimerasas diferentes, la ADN Pol I, ADN Pol II y ADN Pol III. Por sus estudios sobre la replicacin del ADN y las polimerasas le concedieron el Premio Nobel en 1959. Las principales etapas de la sntesis de ADN son:

Sntesis de los desoxirribonucletidos monofosfato (dNMPs): dAMP, dTMP, dGMP y dCMP.

Fosforilacin mediante Quinasas de los dNMP, para convertirlos en desorribonucletidostrifosfato dNTPs: dATP, dTTP, dGTP y dCTP.

Polimerizacin o sntesis del ADN: seleccin de los dNTPs complementarios a las de la cadena molde y formacin del enlace fosfodister entre el extremo 3' del nucletido (dNTP) anteriormente incorporado y el extremo 5'P del siguiente dNTP.

Las ADN Polimerasas de E. coli solamente saben sintetizar (polimerizar) ADN en la direccin 5'P - 3'OH.

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Las principales caractersticas de las ADN Polimerasas de E.coli, se pueden resumir en la siguiente tabla:

ADN Pol I

ADN Pol II

ADN Pol III

Estructura PM (dalton) Constitucin N Polimerasas/clula Actividad/Funcin Polimeras /Elongacin Exonucleasa 5'/Correctora Exonucleasa 3'/Reparacin 5'3'5'-3' SI SI SI SI SI NO SI SI NO 109.000 90.000 900.000 Multmero asimtrico 10-20

Monmero Monmero 400 Desconocido

La ADN Pol III y la ADN Pol I son las enzimas que intervienen directamente en la replicacin del ADN de E. coli. La ADN Pol I tiene un papel reparador, retira los cebadores con su actividad exonucleasa 5'- 3' y rellena el hueco con su actividad polimerrasa 5'- 3'. A la ADN Pol II se la asigna exclusivamente una funcin reparadora, pero la muchas de sus caractersticas y el papel que juega en la replicacin del ADN, si es que juega alguno, son desconocidas. La ADN Pol III es la enzima que realiza la mayora de la replicacin del ADN, el corazn cataltico del enzima lo constituyen las subunidades a (encargada de la polimerizacin), e (realiza la funcin correctora de pruebas) y q (ensamblaje de las
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subunidades?). Realmente, el complejo enzimtico que lleva a cabo la replicacin es un multmero denominadoHoloenzima de ADN Pol III que posee muchas cadenas o subunidades polipeptdicas. Este multmero es realmente un dmero asimtrico, una mitad del dmero se encarga de sintetizar la hlice retardada y la otra mitad sintetiza la hlice conductora. La subunidad t interviene en la unin del dmero, el complejo gd produce la unin al ADN molde y la subunidad b sujeta el enzima al ADN.

Esquema de la formacin y composicin del Holoenzima de

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ADN Pol III

El proceso de sntesis de ADN tiene que producir dos molculas exactamente iguales, ya que cualquier error que se cometa durante la replicacin, si no se repara, se convertir en una mutacin. Por tanto, Las ADN polimerasas deben ser bastante fieles copiando el ADN. Para ello poseen una funcin correctora de pruebas que retira el ltimo nucletido que la polimerasa haya introducido de forma incorrecta, dicha funcin, se denomina funcin exonucleasa 3' - 5' y la lleva a cabo la subunidad e de la ADN Pol III.

En el siguiente esquema se indica como la subunidad e de la ADN Pol III retira la Adenina introducida de forma incorrecta mediante la funcin exonucleasa 3' - 5'.

9.6.1 Las Adn Polimerasas Eucariticas Las ADN polimerasas eucariticas tienen una diferencia interesante con las ADN polimerasas de E. coli, ya que se utilizan dos polimerasas diferentes una para sintetizar la hlice conductora y otra para producir la hlice retardada. La ADN
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polimerasa sintetiza la hlice retardada mientras que la ADN polimerasa sintetiza la hlice conductora. En la siguiente tabla se resumen las polimerasas de mamferos:

ENZIMA

FUNCIN Sntesis Hlice retardada. Sntesis del cebador: 10 bases de ADN y 25 de ARN. Sntesis de la Hlice conductora. Polimerizacin de las Piezas de Okazaki. Unin de los fragmentos de Okazaki ( de aproximadamente 250 pb). Sntesis ADN mitocondrial.

ADN Pol

ADN Pol ADN Pol

ADN Pol

ADN Pol

9.7 Replicacin Del Adn Mitocondrial: Lazos D La replicacin del ADN mitocondrial en mamferos se ajusta al modelo del Lazo de Desplazamiento o lazo D. Las dos hlices del ADN mitocondrial se pueden diferenciar en base a su densidad, existiendo una hlice Ligera (L) y otra hlice pesad (H). En primer lugar, se inicia la replicacin o sntesis de la nueva Hlice Ligera (L), sin que se comience la replicacin de la nueva hlice pesada. El origen de replicacin de la hlice ligera (L) es diferente al de la hlice pesada (H), de forma que existen dos orgenes de replicacin diferentes para cada una. Adems, una vez iniciada la replicacin de la nueva hlice ligera (L), la sntesis es unidireccional, tienen lugar en una sola direccin y avanza desplazando a la otra hebra. Cuando se ha sintetizado, aproximadamente, 2/3 de la nueva hlice ligera, comienza la sntesis de la nueva hlice pesada (H), en una sola direccin opuesta a la de sntesis de la hlice ligera L. Por consiguiente, la sntesis de la nueva hlice L termina antes que la de la nueva hlice H. Como se puede ver, la replicacin del ADN mitocondrial es diferente a la del cromosoma de E. coli, existen dos orgenes de replicacin diferentes para cada hlice y la replicacin es unidireccional.

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Replicacin ADN mitocondrial

ADN mitocondrial

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9.8 Otras Enzimas Que Intervienen En La Replicacin: Ligasas, Girasas, Topoisomerasas, Etc. Adems de las ADN polimerasas I y III, de la ARN-Polimerasa o Primasa que sintetiza el cebador y de las Ligasas que unen las piezas de Okazaki, en la replicacin del ADN intervienen otras enzimas. Algunas de estas enzimas son las siguientes:

Helicasas: son enzimas que rompen los puentes de hidrgeno que mantienen unidas las dos cadenas de la doble hlice. Entre las helicasas de E. coli se encuentran las protenas Dna B y Rep. La protena Rep parece ayudar a desenrollar la doble hlice por delante de la polimerasa.

La protena SSB: se une al ADN de hlice sencilla y lo estabiliza retrasando la regeneracin de la doble hlice.

La accin de las Helicasas durante la replicacin genera retorcimientos que deben ser eliminados. El ADN circular puede sufrir enrollamientos y retorcimientos, dichos superenrollamientos Topoisomerasas.

se

generan

eliminan

por

enzimas

denominadas

Topoisomerasas: pueden producir o eliminar nudos o enlaces en una hlice. existen toposiomerasas de la clase I que cortan solamente una de las dos hlices y topoisomerasas de la clase II que cortan ambas cadenas. En E. coli, las enzimas Topi I i Topo III pertenecen a la clase I, mientras que la la Girasa es de la clase II. Cuando se separan las dos hlices durante el avance de la horquilla de replicacin se producen superenrollamientos positivos en otras regiones que relajan la tensin. La Girasase necesita para eliminar los superenrollamientos positivos que se generan por delante de la horquilla de replicacin.

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Retorcimientos y enrollamientos del ADN circular

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Superenrrolamiento en ADN doble hlice circular. TEMA 10. CDIGO GENTICO: CARACTERSTICAS Y DESCIFRAMIENTO Una vez que Crick (1958) propuso la Hiptesis de la Secuencia ("existe una relacin entre la ordenacin lineal de nucletidos en el ADN y la ordenacin lineal de aminocidos en los polipptidos"), la comunidad cientfica la admiti y se plantearon dos preguntas:

Existe algn cdigo o clave que permite pasar de la secuencia de nucletidos en el ADN a la secuencia de aminocidos en las protenas?

Cmo se convierte la informacin contenida en la secuencia de ADN en una estructura qumica de protena?

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La primera pregunta conlleva el estudio del desciframiento del cdigo gentico y el estudio de sus caractersticas. La segunda pregunta consiste en el estudio de los procesos genticos de la sntesis de protenas: la transcripcin y la traduccin. 10.1 CARACTERSTICAS DEL CDIGO GENTICO Las caractersticas del cdigo gentico fueron establecidas experimentalmente por Fancis Crick, Sydney Brenner y colaboradores en 1961. Las principales caractersticas del cdigo gentico son las siguientes:

Francis Crick

Sydney Brenner

El cdigo est organizado en tripletes o codones: cada tres nucletidos (triplete) determinan un aminocido.

El cdigo gentico es degenerado: existen ms tripletes o codones que aminocidos, de forma que un determinado aminocido puede estar codificado por ms de un triplete.

El cdigo gentico es no solapado o sin superposiciones: un nucletido solamente pertenece a un nico triplete.

La lectura es "sin comas": el cuadro de lectura de los tripletes se realiza de forma continua "sin comas" o sin que existan espacios en blanco.

El cdigo gentico nuclear es universal: el mismo triplete en diferentes especies codifica para el mismo aminocido. La principal excepcin a la universalidad es el cdigo gentico mitocondrial.

Si cada nucletido determinara un aminocido, solamente podramos codificar cuatro aminocidos diferentes ya que en el ADN solamente hay cuatro nucletidos distintos. Cifra muy inferior a los 20 aminocidos distintos que existen. Si cada dos nucletidos codificarn un aminocido, el nmero total de dinucletidos distintos que podramos conseguir con los cuatro nucletidos diferentes (A, G, T y C)
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seran variaciones con repeticin de cuatro elementos tomados de dos en dos VR4,2 = 42 = 16. Por tanto, tendramos solamente 16 dinucletidos diferentes, cifra inferior al nmero de aminocidos distintos que existen (20). Si cada grupo de tres nucletidos determina un aminocido. Teniendo en cuenta que existen cuatro nucletidos diferentes (A, G, T y C), el nmero de grupos de tres nucletidos distintos que se pueden obtener son variaciones con repeticin de cuatro elementos (los cuatro nucletidos) tomados de tres en tres: VR4,3 = 43 = 64. Por consiguiente, existe un total de 64 tripletes diferentes, cifra ms que suficiente para codificar los 20 aminocidos distintos. 10.1.2 El Cdigo Gentico Es Degenerado Como hemos dicho anteriormente existen 64 tripletes distintos y 20 aminocidos diferentes, de manera que un aminocido puede venir codificado por ms de un codn. Este tipo de cdigo se denomina degenerado. Wittmann (1962) induciendo sustituciones de bases por desaminacin con nitritos, realiz sustituciones de C por U y de A por G en el ARN del virus del mosaico del tabaco (TMV), demostrando que la serina y la isoleucina estaban determinadas por ms de un triplete. Las molculas encargadas de transportar los aminocidos hasta el ribosoma y de reconocer los codones del ARN mensajero durante el proceso de traduccin son los ARN transferentes (ARN-t). Los ARN-t tienen una estructura en forma de hoja de trbol con varios sitios funcionales:

Extremo 3': lugar de unin al aminocido (contiene siempre la secuencia ACC).

Lazo dihidrouracilo (DHU): lugar de unin a la aminoacil ARN-t sintetasa o enzimas encargadas de unir una aminocido a su correspondiente ARN-t. Lazo de T C: lugar de enlace al ribosoma. Lazo del anticodn: lugar de reconocimiento de los codones del mensajero.

Normalmente el ARN-t adopta una estructura de hoja de trbol plegada en forma de L o forma de boomerang.

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Estructura transferente

ARN

Estructura ARN transferente Estructura ARN transferente

Los ARN-t suelen presentar bases nitrogenadas poco frecuentes como son la pseudouridina (), metilguanosina (mG), dimetilguanosina (m 2G), metilinosina (mI) y dihidrouridina (DHU, UH2). El que realiza el reconocimiento del codn correspondiente del ARN-m es el anticodn del ARN-t y no el aminocido. Mediante un experimento se demostr que era posible transformar el cisteinil-ARN-t mediante tratamiento con hidruro de nquel en alanil-ARN-t. Este tratamiento convierte la cistena en alanina. De esta manera se consigui un ARN-t especfico de cisteina que en lugar de llevar unida cisteina llevaba unida alanina. Cuando se empleo este ARN-t hbrido para sintetizar protenas se pudo comprobar que en el lugar en el que deba aparecer cisteina en la secuencia del polipptido apareca alanina. Por tanto, el que llevaba a cabo el reconocimiento del codn del ARN-m era el anticodn del ARN-t y no el aminocido. La degeneracin de l cdigo se explica teniendo en cuenta dos motivos:

Algunos aminocidos pueden ser transportados por distintas especies moleculares (tipos) de ARN transferentes (ARN-t) que contienen distintos anticodones.

Algunas especies moleculares de ARN-t pueden incorporar su aminocido especfico en respuesta a varios codones, de manera que poseen un anticodn que es capaz de emparejarse con varios codones diferentes. Este emparejamiento permisivo se denomina Flexibilidad de la 3 base del anticodn o tambaleo.

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Flexibilidad de la 3 base del anticodn, tambaleo: La tercera base del anticodn, la que ocupa la posicin 5' no est especialmente confinada de forma que en algunos casos puede emparejarse con distintas bases del codn. En la siguiente grfica se observa que cuando en la posicin 5' del anticodn hay una G, esta guanina puede emparejarse con un uracilo (U) de la posicin 3' del codn o con una citosina (C).

Flexibilidad de la tercera base del anticodn, tambaleo

En la siguiente tabla se indican los emparejamientos codn-anticodn permitidos por la regla del tambaleo: Emparejamientos codn-anticodn permitidos Extremo 5' del anticodn (ARNt) G C A U I

Extremo 3' del codn (ARN-m)

UoC slo G slo U AoG U, C o A

En la siguiente tabla se indican tres ARN-t de serina que pueden leer cada uno de ellos dos codones diferentes en el ARN-m. Estos tres ARN-t se denominan isoaceptores porque se unen (aceptan) al mismo aminocido pero estn codificados por genes distintos.
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Codn UCU y UCC UCA y UCG AGU y AGC

ARN-t ARN-tSer1 ARN-tSer2 ARN-tSer3

Anticodn AGG + tambaleo AGU + tambaleo UGG + tambaleo

10.1.3 El Cdigo Gentico Es No Solapado O Sin Superposiciones Un nucletido solamente forma parte de un triplete y, por consiguiente, no forma parte de varios tripletes, lo que indica que el cdigo gentico no presenta superposiciones. Por tanto, el cdigo es no solapado. Wittmann (1962) induciendo mutaciones con cido nitroso en el ARN del virus del mosaico del tabaco (TMV) pudo demostrar que las mutaciones habitualmente producan un cambio en un solo aminocido. El cido nitroso produce desaminaciones que provocan sustituciones de bases, si el cdigo fuera solapado y un nucletido formar parte de dos o tres tripletes, la sustitucin de un nucletido dara lugar a dos o tres aminocidos alterados en la protena de la cpside del TMV.

Diferencias entre un cdigo solapado yCdigo uno no solapado

solapado:

restricciones en

la

secuencia de aminocidos

Otra forma de comprobar que el cdigo es sin superposicin es que no hay ninguna restriccin en la secuencia de aminocidos de las protenas, de manera, que un determinado aminocido puede ir precedido o seguido de cualquiera de los 20 aminocidos que existen. Si dos codones sucesivos compartieran dos nucletidos, cualquier triplete solamente podra ir precedido o seguido por cuatro codones determinados. Por consiguiente, si el cdigo fuera superpuesto, un aminocido
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determinado solamente podra ir precedido o seguido de otros cuatro aminocidos como mucho. 10.1.4 La lectura del cdigo gentico es "sin comas" Teniendo en cuenta que la lectura se hace de tres en tres bases, a partir de un punto de inicio la lectura se lleva a cabo sin interrupciones o espacios vacos, es decir, la lectura es seguida "sin comas". De manera, que si aadimos un nucletido (adicin) a la secuencia, a partir de ese punto se altera el cuadro de lectura y se modifican todos los aminocidos. Lo mismo sucede si se pierde (delecin) un nucletido de la secuencia. A partir del nucletido delecionado se altera el cuadro de lectura y cambian todos los aminocidos. Si la adicin o la delecin es de tres nucletidos o mltiplo de tres, se aade un aminocido o ms de uno a la secuencia que sigue siendo la misma a partir del la ltima adicin o delecin. Una adicin y una delecin sucesivas vuelven a restaurar el cuadro de lectura. En la siguiente tabla se da un ejemplo con una frase que contiene solamente palabras de tres letras. A partir de la adicin de una letra cambia la pauta de lectura y el significado de la frase, lo mismo sucede cuando se pierde una letra. Una adicin y una delecin sucesivas recuperan el significado de la frase. Una adicin de tres letras aade una palabra pero despus se recupera la pauta de lectura y el sentido de la frase. Secuencia normal: ejemplo con una frase UNO MAS UNO SON DOS

Adicin de una A despus de la primera N: cambia el cuadro de lectura UNA OMA SUN OSO NDO S

Delecin (prdida) de la primera O: cambia el cuadro de lectura UNM ASU NOS OND OS

Adicin de A y delecin de A: se recupera el cuadro de lectura UNA

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OMS

UNO

SON

DOS

Adicin de tres letras (AAA) UNO AAA MAS UNO SON DOS

10.2 Desciframiento Del Cdigo Gentico La asignacin de un aminocido a cada triplete o el desciframiento de la clave gentica, se llev a cabo fundamentalmente gracias al esfuerzo de tres grupos de investigacin, el grupo de M. W. Nirenberg, el grupo de S. Ochoa y el equipo de H. G. Khorana. Parece lgico pensar que el desciframiento del cdigo gentico se debera haber realizado comparando las secuencia de nucletidos de un gen y la de aminocidos del polipptido codificado por dicho gen. Sin embargo, en la poca en la que se realizaron estos trabajos no era posible todava obtener la secuencia de los cidos nucleicos.

Severo Ochoa

Marshall Nirenberg

W. Har Gobind Khorana

La mayora de los trabajos realizados por estos tres grupos de investigacin consistieron en sintetizar ARN mensajeros (ARN-m) para utilizarlos posteriormente como mensajeros artificiales en un sistema acelular de traduccin "in vitro". Estos sistemas acelulares de traduccin "in vitro" procedan de la bacteria E. coli y contenan todo lo necesario para llevar a cabo la traduccin: ribosomas, todos los ARN transferentes, aminocidos, enzimas, etc. Sin embargo, a estos sistemas acelulares se les quitaban los ARN mensajeros de E. coliy se les aada un ARN sintetizado artificialmente. En estos sistemas acelulares se sintetizaba un polipptido. Posteriormente, se comparaba la secuencia del ARN -m sinttico utilizado en el experimento con la secuencia de aminocidos del polipptido producido.

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La puesta a punto de estas tcnicas requera poder sintetizar ARN-m de forma enzimtica (grupo de Ochoa) o de forma qumica (grupo de Khorana) y conseguir un sistema acelular estable para sintetizar protenas (grupo de Nirenberg). En esencia, los grupos de investigacin anteriormente mencionados realizaron los siguientes tipos de esperimentos:

Utilizacin de homopolmeros. Uso de copolmeros. Empleo de polmeros de secuencia conocida. Tcnica de incorporacin de ARN transferente.

10.2.1 Utilizacin De Homopolmeros Un homopolmero es un ARN sinttico que solamente contiene un tipo de ribonucletido. Por ejemplo, el ARN sinttico UUUUUUUUUUUUU....... Gruberg-Manago y Ochoa (1955) aislaron a partir de timo de ternera un ezima denominada Polirribonucletido fosforilasa que tena la capacidad de sintetizar ARN a partir de ribonuclesidos difosfato y sin necesidad de molde. Este enzima iba tomando al azar los ribonuclkeosidos del medio para originar un ARN. Matthei y Nirenberg (1961) consiguieron sintetizar polipptidos "in vitro" aadiendo un ARN sinttico de secuencia conocida a un sistema acelular estable de traduccin. Usando la Polirribonucletido fosforilasa sintetizaron poli-uridlico (poli-U:

UUUUUUUUUUUUUU...). Cuando emplearon este ARN sinttico en su sistema acelular de traduccin daba lugar a la formacin de un polipptido que solamente contena el aminocido fenilalanina (Poli-fenilalanina: phe-phe-phe-phe-..). Por tanto, el triplete UUU codificaba para fenilalanina (phe). Tambin comprobaron que el ARN snttico Poli C (Poli-citidlico: CCCCCCCCCC....) daba lugar a un polipptido que contena solamente prolina (Poli-prolina: pro-pro-pro-pro-pro-...), por tanto, el codn CCC significaba prolina (pro). Poco tiempo despus, Ochoa sintetiz Poli-adenlico (Poli-A: AAAAAAAAA....) y observ que el polipptido que apareca solamente tena el aminocido lisina (Polilisina: lys-lys-lys-lys-....). Por consiguiente el triplete AAA codificaba para el aminocido lisina (lys). Tambin corrobor que el Poli-C daba lugar a Poli-prolina. El
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ARN Poli-guanlico no produca protena alguna, probablemente debido a que adquira una estructura terciara helicoidal que impeda su traduccin a protena. Triplete CCC UUU AAA Aminocido prolina fenilalanina lisina

10.2.2 Uso De Copolmeros El siguiente paso fue la utilizacin de copolmeros, es decir, de ARN sintticos que contenan ms de un ms de un ribonucletido distinto. Para ello emplearon la Polirribonucletido fosforilasa y pusieron en el medio dos ribonuclesidos distintos. Por ejemplo, U y G, de manera que haba 5 veces ms U que G en el medio (5U:1G). Debido a que el enzima toma los ribonuclesidos difosfato del medio al azar, la probabilidad de que tome un U del medio es 5/6, mientras< que la probabilidad de que tome una G es 1/6. El ARN sinttico formado presentaba una secuencia al azar de uracilos y guaninas y aparecan en l ocho tripletes diferentes con las siguientes probabilidades: Triplete 5 3 UUU UUG UGU GUU UGG GUG GGU GGG Probabilidad 5/6 x 5/6 x 5/6 = 125/216 5/6 x 5/6 x 1/6 = 25/216 5/6 x 1/6 x 5/6 = 25/216 1/6 x 5/6 x 5/6 = 25/216 5/6 x 1/6 x 1/6 = 5/216 1/6 x 5/6 x 1/6 = 5/216 1/6 x 1/6 x 5/6 = 5/216 1/6 x 1/6 x 1/6 = 1/216 Valor relativo 100 20 20 20 4 4 4 0,08

Cuando se analiz el polipptido que se sintetizaba con este mensajero sinttico, se observ que contena fenilalanina (phe), cisteina (cys), valina (val), glicina (gly) y triptfano (trp). Tomando como valor 100 el de el aminocido ms frecuente, cys y
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val presentaban un valor de 20 mientras que trp y gly mostraban un valor de 4 a 5. Se confirmaba que UUU significaba fenilalanina y se deduca que 2U y 1G (UUG, UGU y GUU) codificaban para cistena y valina. Tambin se deduca que 1U y 2G (UGG, GUG y GGU) codificaban para triptfano y glicina. Sin emabrgo, no era posible asignar un triplete concreto para cistena y valina, o para triptfano y glicina. Parece raro, que en estos experimentos no detectaran el aminocido leucina (leu) que esta codificado por el triplete UUG, tampoco dedujeron que el aminocido valina estaba codificado por 1U y 2 G (GUG). Uno e los problemas, de estos experimentos radica en asignar el valor 100 al aminocido ms frecuente y comparar las proporciones de aminocidos obtenidas de esta manera con las de los distintos tripletes del mensajero, ya que el aminocido ms frecuente puede estar codificado por ms de un triplete. Oto inconveniente es que los mensajeros sintticos producidos no presenten la frecuencia de codones esperada por azar. Este tipo de experimentos fueron realizados por los grupos de Nirenberg y de Ochoa y no rindieron grandes resultados. 10.2.3 Empleo De Polmeros De Secuencia Conocida La siguiente forma de abordar el desciframiento de la clave gentica fue utilizar ARN mensajeros sintticos de secuencia conocida obtenidos por mtodos de sntesis qumica o enzimtica. Estos mtodos fueron empleados por Khorana y col. (1965). Utilizando el Poli-UCde 116 residuos de longitud, ARN mensajero sinttico en el que se repite muchas veces seguidas el dinucletido UC (UCUCUCUCUCUCUC...) obtuvieron un polipptido que contena los residuos de serina y leucina en secuencia alternada (ser-leu-ser-leu-ser-leu-ser-leu-....). El Poli-UC contiene dos tripletes diferentes, UCU y CUC, por consiguiente uno de ellos codifica serina y el otro leucina, pero no se puede determinar cul a cul. Tambin se emplearon los mensarejos sintticos Poli-AC, Poli-AG y Poli-UG que codificacban para los siguientes aminocidos:

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ARN sinttico Poli(ACACACAC..) Poli-AG (AGAGAGAG..) Poli-UG (UGUGUGUG..) Poli-UC (UCUCUCUC..) AC

Codones

Polipptido sintetizado Aminociods

ACA y CAC

thr-his-thr-his-thr-his

treonina e histidina

AGA y GAG arg-glu-glu-arg-glu-arg

arginina glutmico

UGU y GUG cys-val-cys-val-cys-val- cistena y valina

UCU y CUC

ser-leu-ser-leu-ser-leu- serina y leucina

En 1965, Nishimura y colaboradores utilizaron el Poli-AAG, mensajero sinttico en el que se repite muchas veces seguidas el trinucletido AAG

(AAGAAGAAGAAGAAG...) y encontraron la aparicin de tres polipptidos distintos en el sistema acelular de traduccin, detectaron Poli-lisina (lys-lys-lys-lys-...), Poliarginina (arg-arg-arg-arg-..) y Poli-glutamato (glu-glu-glu-glu-..). Estos resultados adems de confirmar que el cdigo gentico se compone de grupos de tres bases o codones, indican que en los sistemas acelulares de traduccin, la iniciacin de la traduccin del mensajero puede realizarse por cualquier ribonucletido. Si comienza por la primea A, se repite AAG-AAG-AAG-.., si la traducin comienza por la segunda A, se repite AGA-AGA-AGA-AGA-..., y si la traduccin comienza por la G, se repite el triplete GAA-GAA-GAA-GAA-GAA-.... El punto de iniciacin de la lectura de los mensajeros sintticos en su

sistema acelular de traduccin "in vitro", en ausencia de triplete de

iniciacin (AUG), puede ser cualquier ribonucletido. En el ejemplo de la figura,

dependiendo del punto de iniciacin aparece un polipptido distinto,

cuando comienza por la primera A se

116

sintetiza Poli-lys, en la segunda A se produce Poli-arg y en cuando se inicia en la G aparece Poli-glu.

Naturalmente, en este experimento no se sabe cul de los tres aminocidos corresponde a cada uno de los tres tripletes ARN sinttico Codones AAG, GAA AGA y Polipptido sintetizado Aminocidos

Poli- AAG

Poli-lys, Poli-arg, Poly-glu lys, arg y glu

AAGAAGAAGAAG.. AAG

Poli- lys: lys-lys-lys-lys-.. lisina Poli-arg: arg-arg-arg arg..

AGAAGAAGAAGA.. AGA

arginina

GAAGAAGAAGAA.. GAA

Poli-glu: glu-glu-glu-glu-.. glutmico

10.2.4 Tcnica De Incorporacin De Arn Trasnferentes En esta tcnica se utilizan ARN mensajeros sintticos de secuencia conocida con la siguiente estructura: los grupos de Khorana y Nirenberg emplearon trinucletidos, mientras que el equipo de Matthei utilizaba oligonucletidos del tipo

ABCCCCCCCCCCC.... (el tercer nucletido estaba repetido 100 veces). En este ltimo caso solamente se analiza en primer triplete, ABC. En todos los casos, en lugar de analizar los polipptidos sintetizados, se analiza la especificidad con que el ARN transferente (ARN-t) con o sin su aminocido correspondiente se incorpora al ribosoma. Dicha especificidad viene determinada por la secuencia de ribonucletidos del ARN-m sinttico empleado. Para averiguar el ARN-t que es capaz de unirse en el ribosoma al trinucletido analizado, es necesario marcar radiactivamente uno de los ARN-t de todos los utilizados. Se lleva a cabo esta operacin marcadndo radiactivamente cada vez un ARN-t distinto.

117

Con este sistema fue posible descifrar todos los tripletes que an no haban sido descifrados. 10.3 EL CDIGO GENTICO ES UNIVERSAL El desciframiento del cdigo gentico se ha realizado fundamentalmente en la bacteria E. coli, por tanto, cabe preguntarse si el cdigo gentico de esta bacteria es igual que el de otros organismos tanto procariticos como eucariticos. Los experimentos realizados hasta la fecha indican que el cdigo gentico nuclear es universal, de manera que un determinado triplete o codn lleva informacin para el mismo aminocido en diferentes especies. Hoy da existen muchos experimentos que demuestran la universalidad del cdigo nuclear, algunos de estos experimentos son:

Utilizacin de ARN mensajeros en diferentes sistemas acelulares. Por ejemplo ARN mensajero y ribosomas de reticulocitos de conejo con ARN transferentes de E. coli. En este sistema se sintetiza un polipptido igual o muy semejante a la hemoglobina de conejo.

Las tcnicas de ingeniera gentica que permiten introducir ADN de un organismo en otro de manera que el organismo receptor sintetiza las protenas del organismo donante del ADN. Por ejemplo, la sntesis de protenas humanas en la bacteria E. coli.

El desciframiento del cdigo gentico dio como resultado la siguiente asignacin de aminocidos a los 64 tripletes. SEGUNDA BASE U C A G

UUU Phe UCU Ser UAU Tyr UGU Cys U P UUC Phe UCC Ser UAC Tyr UGC Cys C R I UUG Leu UCG Ser UAG FIN UGG Trp G U UUA Leu UCA Ser UAA FIN UGA FIN A R E T

118

M E C R A

CUU Leu CCU Pro CUA His CGU Arg U CUC Leu CCC Pro CAC His CGC Arg C CUA Leu CCA Pro CAA Gln CGA Arg A CUG Leu CCG Pro CAG Gln CGG Arg G AUU Ile ACU Thr AAU Asn AGU Ser ACC Thr AAC Asn AGC Ser U C

C E R A

B A A S E

AUC Ile AUA Ile

B A S E

ACA Thr AAA Lys AGA Arg A

AUG Met ACG Thr AAG Lys AGG Arg G GUU Val GCU Ala GAU Asp GGU Gly GUC Val GCC Ala GAC Asp GGC Gy G GUA Val GCA Ala GAA Glu GGA Gly GUG Val GCG Ala GAG Glu GGG Gly A G U C

El cdigo gentico nos indica que aminocido corresponde a cada triplete o codn del ARN mensajero.

El triplete de iniciacin suele ser AUG que codifica para Formil-metionina. Tambin pueden actuar como tripletes de iniciacin GUG (Val) y UGG (Leu) aunque con menor eficacia.

Existen tres tripletes sin sentido o codones de terminacin (FIN) que no codifican para ningn aminocido: UAA (ocre), UAG (ambar) y UGA (palo).

La mayora de los aminocidos estn determinados por ms de un triplete, excepto la metionina (AUG) y el triptfano (UGG) que son los nicos que poseen un solo triplete.

Cuando un aminocido est codificado por varios tripletes suele variar la tercera base, por ejemplo, la glicina es GGX, la alanina es GCX, la valina es GUX, la treonina es ACX. Sin embargo, hay varias excepciones en las que

119

tambin puede variar la primera base, por ejemplo, la arginina es AGPu y CGX, la leucina es CUX y UUPu y la serina es UCX y AGPi. El cdigo gentico mitocondrial es la nica excepcin a la universalidad del cdigo, de manera que en algunos organismos los aminocidos determinados por el mismo triplete o codn son diferentes en el ncleo y en la mitocondria. 10.3.1 Excepciones a la Universalidad del Cdigo Significado en Significado Cdigo Mitocondrial Trp Thr Ser FIN en

Organismo

Codn

Cdigo Nuclear

Todos Levadura Drosophila

UGA CUX AGA

FIN Leu Arg Arg

Humao, bovino AGA, AGC Humano, bovino Ratn

AUA

Ile

Met (iniciacin)

AUU, AUC, AUA Ile

Met (iniciacin)

TEMA 11. LA MUTACIN La definicin que dio De Vries (1901) de la mutacin era la de cualquier cambio heredable en el material hereditario que no se puede explicar mediante segregacin o recombinacin. La definicin de mutacin a partir del conocimiento de que el material hereditario es el ADN y de la propuesta de la Doble Hlice para explicar la estructura del material hereditario (Watson y Crick,1953), sera que una mutacin es cualquier cambio en la secuencia de nucletidos del ADN.

120

La mutacin es la fuente primaria de variabilidad gentica en las poblaciones, mientras que la recombinacin al crear nuevas combinaciones a partir de las generadas por la mutacin, es la fuente secundaria de variabilidad gentica. 11.1 Mutacin Somtica Y Mutacin En La Lnea Germinal Mutacin somtica: afecta a las clulas somticas del individuo. Como

consecuencia aparecen individuos mosaico que poseen dos lneas celulares diferentes con distinto genotipo. Una vez que una clula sufre una mutacin, todas las clulas que derivan de ella por divisiones mitticas heredarn la mutacin (herencia celular). Un individuo mosaico originado por una mutacin somtica posee un grupo de clulas con un genotipo diferente al resto, cuanto antes se haya dado la mutacin en el desarrollo del individuo mayor ser la proporcin de clulas con distinto genotipo. En el supuesto de que la mutacin se hubiera dado despus de la primera divisin del cigoto (en estado de dos clulas), la mitad de las clulas del individuo adulto tendran un genotipo y la otra mitad otro distinto. Las mutaciones que afectan solamente a las clulas de la lnea somtica no se transmiten a la siguiente generacin. Mutaciones en la lnea germinal: afectan a las clulas productoras de gametos apareciendo gametos con mutaciones. Estas mutaciones se transmiten a la siguiente generacin y tienen un mayor importancia desde el punto de vista evolutivo. 11.2 Niveles Mutacionales Es una clasificacin de las mutaciones basada en la cantidad de material hereditario afectado por la mutacin: Mutacin gnica: mutacin que afecta a un solo gen. Mutacin: cromosmica: mutacin que afecta a un segmento cromosmico que incluye varios genes. Mutacin genmica: mutacin que afecta a cromosomas completos (por exceso o por defecto) o a juegos cromosmicos completos.

121

11.2.1 Mutaciones Gnicas Sustituciones de bases: cambio o sustitucin de una base por otra en el ADN.

Transiciones: cambio de una purina (Pu) por otra purina, o bien cambio de una pirimidina (Pi) por otra pirimida.

Transversiones: cambio de una purina (Pu) por una pirimidina (Pi) o cambio de una pirimidina (Pi) por una purina (Pu).

Inserciones o adiciones y deleciones de nucletidos: se trata de ganancias de uno o ms nucletidos (inserciones o adiciones) y de prdidas de uno o ms

nucletidos (deleciones). Tienen como consecuencia cambios en el cuadro o pauta de lectura cuando el nmero de nucletidos ganado o perdido no es mltiplos de tres. Duplicaciones: consiste en la repeticin de un segmento de ADN del interior de un gen. Inversiones: un segmento de ADN del interior de un gen se invierte, para ello es necesario que se produzcan dos giros de 180 , uno para invertir la secuencia y otro para mantener la polaridad del ADN. Transposiciones: un segmento de un gen cambia de posicin para estar en otro lugar distinto del mismo gen o en otro lugar del genoma. En la siguiente tabla se resumen algunos tipos de mutaciones gnicas en el ADN y en sus consecuencias en las protenas. Tipos gnicas En el ADN de mutaciones

Resultados y ejemplos

En el ADN PuPu o PiPi: ATGC, GCAT, CGTA y TACG PuPi o PiPu: ATCG, ATTA, GCTA,

Transiciones

Transversiones

GCCG, TAGC, TAAT, CGAT y CGGC

122

En la protena Mutacin silenciosa

En la protena Tripletes que codifican para el mismo aminocido: AAG(arg)CGG(arg) Tripletes que codifican para aminocidos equivalentes

Mutacin neutra

distintos.

AAA(lys)AGA(arg).

Ambos

son

aminocidos bsicos Aparece un nuevo triplete que codifica para un Mutacin cambio de sentido aminocido de distinto tipo. La protena pierde su funcin. Aparece un triplete de terminacin o FIN:

Mutacin sin sentido

CAG(gln)UAG(FIN) Adicin o delecin de un nico par de nucletidos o de varios pares de nucletidos, siempre que no sean mltiplo de tres.

Mutacin cambio de fase o pauta de lectura

Es importante aclarar el concepto de mutacin silenciosa, una mutacin silenciosa es cualquier alteracin en la secuencia de nucletidos del ADN que no produce cambio en el fenotipo estudiado. Imaginemos que la caracterstica externa o fenotipo analizado es simplemente la funcin de un enzima, es evidente que existen mutaciones en la secuencia de nucletidos del ADN que no producen cambios en la secuencia de aminocidos, pero tambin hay mutaciones en el ADN que producen cambios en la secuencia de aminocidos que no alteran la funcin del enzima analizado. Ambas tipos de mutaciones son silenciosas, ya que ninguna altera la funcin del enzima. 11.3 Mutacin Espontnea E Inducida Mutacin espontnea: se produce de forma natural o normal en los individuos. Mutacin inducida: se produce como consecuencia de la exposicin a agentes mutagnicos qumicos o fsicos.

123

11.3.1 Mutaciones Espontneas Las principales causas de las mutaciones que se producen de forma natural o normal en las poblaciones son tres:

Errores durante la replicacin. Lesiones o daos fortuitos en el ADN. Los elementos genticos transponibles.

11.3.1.1 Errores En La Replicacin Vamos a considerar tres tipos de errores durante la replicacin del ADN:

La tautomera: las bases nitorgenadas se encuentran habitualmente en su forma cetnica y con menos frecuencia aparecen en su forma tautomrica enlica o imino. Las formas tautomricas o enlicas de las bases nitrogenadas (A*, T*, G* y C*) muestran relaciones de apareamiento distintas: A*-C, T*-G, G*-T y C*-A. El cambio de la forma normal cetnica a la forma enlica produce transiciones. Los errores en el apareamiento incorrecto de las bases nitrogenadas pueden ser detectados por la funcin correctora de pruebas de la ADN polimerasa III.

Las mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura: se trata de inserciones o deleciones de uno o muy pocos nucletidos. Segn un modelo propuesto por Streisinger, estas mutaciones se producen con frecuencia en regiones con secuencias repetidas. En las regiones con secuencias repetidas, por ejemplo, AAAAAAAAAAA..., o por ejemplo, ATATATATATATATAT...., durante la replicacin se puede producir el deslizamiento de una de las dos hlices (la hlice molde o la de nueva sntesis) dando lugar a lo que se llama el "apareamiento errneo deslizado". El deslizamiento de la hlice de nueva sntesis da lugar a una adicin, mientras que el deslizamiento de la hlice molde origina una delecin. En el gen lac I (gen estructural de la protena represora) de E. coli se han encontrado puntos calientes (regiones en las que la mutacin es muy frecuente) que coinciden con secuencias repetidas: un ejemplo es el punto caliente CTGG CTGG CTGG.

Deleciones y duplicaciones grandes: las deleciones y duplicaciones de regiones relativamente grandes tambin se han detectado con bastante frecuencia en regiones con secuencias repetidas. En el gen lac I de E. coli se

124

han detectado deleciones grandes que tienen lugar

entre secuencias

repetidas. Se cree que estas mutaciones podran producirse por un sistema semejante al propuesto por Streisinger ("Apareamiento errneo deslizado") o bien por sobrecruzamiento desigual. Del sobrecruzamiento desigual

hablaremos ms adelante en el curso.

Tautomera

La

tautomera

origina

transiciones

Puntos calientes gen lacI

Tautomera

Hiptesis de Streisinger

Deleciones gen lacI

11.3.1.2 Lesiones O Daos Fortuitos En El Adn Pueden darse tres tipos de daos fortuitos en el ADN:

Despurinizacin: rotura del enlace glucosdico entre la base nitrogenada y el azcar al que est unida con prdida de una Adenina (A) o de una Guanina (G). Como consecuencia aparecen sedes Apurnicas. Existe un sistema de reparacin de este tipo de lesiones en el ADN. Este tipo de lesin es la ms recurrente o frecuente: se estima que se produce una prdida de 10.000 cada 20 horas a 37C.

Desaminacin: consiste en la prdida de grupos amino. La Citosina (C) por desaminacin se convierte en Uracilo (U) y el Uracilo empareja con Adenina (A) producindose transiciones: GCAT. El Uracilo (U) no forma parte del ADN, existindo un enzima llamada glucosidasa de uracilo encargada de detectar la presencia de U en el ADN y retirarlo. Al retirar el Uracilo (U) se produce una sede apirimidnica. La 5-Metil-Citosina (5-Me-C) por

125

desaminacin se convierte en Timina (T). La Timina (T) es una base normal en el ADN y no se retira, por tanto estos errores no se reparan. Este tipo de mutacin tambin genera transiciones.

Daos oxidativos en el ADN: El metabolismo aerbico produce radicales superoxido O2, perxido de hidrgeno H2O2 e hidroxilo. Estos radicales producen daos en el ADN, y una de las principales alteraciones que originan es la transformacin de la Guanina (G) en 8-oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina que aparea con la Adenina (A). La 8-oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina recibe el nombre abreviado de 8-oxo-G. Esta alteracin del ADN produce transversiones: GCTA. La Timidina se convierte en Glicol de timidina.

Desaminacin de Citosina

Daos oxidativos en el ADN

Desaminacin 5-Metilcitosina

11.3.1.3 Elementos Genticos Transponibles Los elementos genticos transponibles son secuencias de ADN que tienen la propiedad de cambiar de posicin dentro del genoma, por tal causa tambin reciben el nombre de elementos genticos mviles. Por tanto, cuando cambian de posicin y abandonan el lugar en el que estaban, en ese sitio, se produce un delecin o prdida de bases. Si el elemento transponible estaba insertado en el interior de un gen, puede que se recupere la funcin de dicho gen. De igual forma, si el elemento gentico mvil al cambiar de posicin se inserta dentro de un gen se produce una adicin de una gran cantidad de nucletidos que tendr como consecuencia la

126

prdida de la funcin de dicho gen. Por consiguiente, los elementos genticos transponibles producen mutaciones. Su existencia fue propuesta por B. McClintock (1951 a 1957) en maz, sin embargo, su existencia no se demostr hasta mucho ms tarde en bacterias. En el fenmeno de la transposicin no se ha encontrado una relacin clara entre la secuencia de la sede donadora (lugar en el que est el transposn) y la sede aceptora (lugar al que se incorpora el transposn). Algunos transposones muestran una preferencia por una determinada regin (zona de 2000 a 3000 pares de bases), pero dentro de ella parecen insertarse al azar. 11.4 Transposones En Bacterias La existencia de transposones o elementos genticos mviles se demostr en bacterias. En bacterias existen dos tipos de elementos genticos mviles: 11.4.1 Tipos de transposones

Transposn Simple, Secuencia de Insercin o Elemento de Insercin (IS): los transposones simples contienen una secuencia central con informacin para la transposasa y en los extremos una secuencia repetida en orden inverso. Esta secuencia repetida en orden inverso no es

necesariamente idntica, aunque muy parecida. Cuando un transposn simple se integra en luna determinado punto del ADN aparece una repeticin directa de la secuencia diana (5-12 pb).

Transposn Compuesto (Tn): contienen un elemento de insercin (IS) en cada extremo en orden directo o inverso y una regin central que adems suele contener informaciin de otro tipo. Por ejemplo, los Factores de transferencia de resistencia (RTF), poseen informacin en la zona central para resistencia a antibiticos (cloranfenicol, kanamicina, tetraciclina, etc.).

127

Transposn compuesto

simple

transposnPuntos de integracin de IS1, IS2, IS3 y Tn1000

En la siguiente tabla se resumen las principales caractersticas de algunos elementos IS: Repeticin Elemento Longitud terminal invertida IS1 IS2 IS4 IS5 786 pb 23 pb

Repeticin directa de la diana

Seleccin de la diana

9 pb 5 pb 11-12 pb 4 pb

Regional Zona caliente AAAX20 .........XTTT Zona caliente

1327 pb 41 pb 1428 pb 18 pb 1195 pb 16 pb

En la siguiente tabla se resumen las principales caractersticas de algunos Transposones compuestos (Tn): MDULOS TERMINALES Relacin ambos Divergencia 2,5% Difieren en 1 pb entre

Marcador Elemento Longitud gentico (resistencia) Tn 10 Tn 5 9300 pb Tetraciclina 5700 pb Kanamicina

IS

Orientacin

IS 10 IS 5

Invertida Invertida

128

Tn 903 Tn 9

3100 pb Kanamicina 2500 pb Cloranfenicol

IS 903 IS 9

Invertida Directa

Idnticos Idnticos (?)

Tanto los elemntos IS como los trasnposones compuestos (Tn) tienen que estar integrados en otra molcula de ADN, el cromosoma principal bacteriano o en un plasmidio, nunca se encuentran libres. En la grfica anterior se pueden ver los puntos de integracin de los Elementos de Insercin IS1, IS2, IS3 y del Transposn compuesto Tn1000 en el cromosoma de E. coli. 11.4.2 Transposones En Eucariontes 11.4.2.1 Transposones en maz Los transposones fueron descubiertos por B. McClintock (1951 a 1957) en maz, sin embargo, cuando postul su existencia la comunidad cientfica no comprendi adecuadamente sus trabajos. Aos ms tarde, ella misma compar los "elementos controladores" que haba descrito (elementos cromosmicos transponibles) de maz con los transposones de los plasmidios. Sus trabajos recibieron el Premio Nobel en 1983. Dentro de las familias de elementos controladores de maz hay que distinguir dos clases:

Los elementos autnomos: capaces de escindirse de la sede donadora y transponerse.

Los elementos No autnomos: son estables, y solamente se vuelven inestables en presencia de los autnomos en posicin trans.

129

B. McClintock

Transposones en maz

En el sistema Ac-Ds (Activador-Disociacin) estudiado por B. McClintock, Ac es el elemento autnomo y Ds es el elemento No autnomo. Adems del sistema AcDs en maz se han descrito otros sistemas como el Mu (Mutador), Algunas

sistema Spm (Supresor-Mutador),

sistema R-stippled y

sistema MrRm.

caractersticas de estos sistemas son las siguientes: Repeticin directa diana 8 pb 8 pb 3 pb de la

Elemento Longitud

Cuadros de lectura Repeticin abiertos invertida

terminal

Ac Mu Spm

4563 pb 1367 pb 8287 pb

3 4 1

11 pb 213 pb 13 pb

11.4.1.2 Transposones en boca de dragn, petunia y soja: Tambin se han encontrado transposones en otras especies de plantas:

Boca de dragn (Anthirrhinum majus): familia de transposones Tam1 (1700 pb), Tam2 y Tam3 (5000 pb).

Petunia, soja (Glycine max), etc..

130

11.4.1.3 Transposones en levaduras Igualmente en levaduras tambin se han detectado transposones, por ejemplo, el sistema "flip-flop" de control del tipo de apareamiento en Schizosaccharomyces pombe, el modelo en "casette" de Saccharomyces cerevisiae. Tambin, se han dscrito los transposones de la familia Ty (6300 pb). 11.4.1.4 Transposones en Drosophila melanogaster: En Drosophila melanogaster se han descrito varias familias de transposones, siendo las ms importantes los elementos "copia", elementos P y los

elementos FB (foldback). Algunas de sus caractersticas son las siguientes: Copias Elemento por genoma Copia FB P 20-60 30 50 60 Repeticin terminal directa 267 pb Repeticin directa diana 5 pb 9 pb 8 pb de la

Longitud (pb)

Repeticin terminal inversa

5000

13 pb 250-1250 pb 31 pb

500-5000 No 500-2000 No

En Drosophila melanogaster se ha descrito el fenmeno d la Disgnesis hbrida, uno de los sistemas responsables es el sistema P-M. En los cruzamientos P x M (machos P capturados en la naturaleza por hembras M del laboratorio) la descendencia hbrida es viable y aparentemente normal, aunque es estril. En cruzamientos M x P (machos del laboratorio por hembras capturadas en la naturaleza) la descendencia es normal y frtil en las sucesivas generaciones. Este diferente comportamiento de los hbridos en las dos direcciones del cruzamiento, se denomina Disgnesis hbrida y se debe a la activacin de un elemento P en la lnea germinal. Los Retrovirus tambin pueden ser considerados como elementos genticos mviles, presentando algunos una analoga con los elementos copia de Drosophila.

131

Parecido entre los retrovirus y transsposones de levaduras (Ty y 912) y Drosophila (Copia) 11.4.1.5 Transposones en mamferos En mamferos se conocen tres clases de secuencias que son capaces de transponerse o cambiar de posicin a travs de un ARN intermediario:

Retrovirus endgenos: semejantes a los retrovirus, no pueden infectar nuevas clulas y estn restringidos a un genoma, pero pueden transponerse dentro de la clula. Poseen largas secuencias repetidas en los extremos (LTR), genes env (con informacin para la protena de la cubierta) y genes que codifican para la trasnrciptasa inversa, como los presentes en retrovirus.

Retrotransposones

retroposones: carecen

de

LTR

de

los

genes env (con informacin para la protena de la cubierta) de retrovirus. Contienen genes para latranscriptasa inversa y pueden transponerse. Tienen una secuencia rica en pares A-T en un extremo. Un ejemplo, son los elementos LINE-1 (elementos largos dispersos) en humanos y ratones.

Retropseudogenes: carecen de genes para la transcriptasa inversa y por consiguiente son incapaces de transponerse de forma independiente, aunque si pueden cambiar de posicin en presencia de otros elementos mviles que posean informacin para la trasncriptasa inversa. Poseen una regin rica en pares A-T en un extremo y los hay de dos tipos:
o

Pseudogenes procesados: estn en bajo nmero de copias y derivan de genes transcritos por la ARN Poilimerasa II, siendo genes que

132

codifican para polipptidos. Estos pseudogenes procesados carecen de intrones.

o

SINES (elementos cortos dispersos): estn en alto nmero de copias en mamferos. Dos ejemplos son la secuencia Alu de humanos y B1 de ratn, que derivan de genes transcritos por la ARN polimerasa III utilizando un promotor interno.

Esquema de diferentes tipos transposones en mamferos

La secuencia Alu es la ms abundante en el genoma humano, existiendo 750.000 copias dispersas por el genoma, aproximadamente existe una copia cada 4000 pb. Esta secuencia posee un contenido relativamente alto en (G+C) y presenta una elevada homologa (70-80%) con la secuencia B1 de ratn. Se la denomina secuencia Alu por poseer en su interior una diana para la endonucleasa de restriccin Alu. Las secuencias Alu humanas tienen alrededor de 280 pb y estn flanqueadas por repeticiones directas cortas (6-18 pb). Una secuencia tpica Alu es un dmero repetido en tandem, la unidad que se repite tiene un tamao aproximado de 120 pb y va seguida de una corta secuencia rica en pares A-T. Sin embargo, existe una asimetra en las unidades repetidas, de manera que la segunda unidad contiene una secuencia de 32 pb ausente en la primera. Las unidades repetidas de la secuencia Alu muestran un elevado parecido con la secuencia del ARN 7SL, un componente que juega un papel importante en el transporte de las protenas a travs de la membrana del retculo endoplasmtico.

133

11.5. Tipos de transposicin En general se distinguen dos tipos o formas de transposicin:

Transposicin conservativa: el transposn sale de la sede donadora que queda vaca y se incorpora en una nueva sede (sede receptora). No aumenta el nmero de copiasz del transposn en el interior de la clula.

Transposicin replicativa: el transposn permanece en la sede donadora y mediante un mecanismo combinado de replicacin y recombinacin se incorpora en la sede aceptora. Aumenta el nmero de copias del transposn en el interior de la clula.

Mecanismo de transposicin

Transposicin conservativa y replicativa

TEMA 12. MUTACIONES ESPONTNEAS Y ENFERMEDADES HUMANAS En el siguiente resumen se citan algunos ejemplos de mutaciones espontneas en la especie humana: Mutaciones de cambio de sentido, Mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura y Mutaciones sin sentido: Existen muchos ejemplos de este tipo de mutaciones en la especie humana. Muchos de los errores congnitos del metabolismo se producen por mutaciones de cualquiera de los tres tipos anteriores. Algunos ejemplos de mutaciones de cambio de sentido son: la anemia falciforme con la aparicin de la hemoglobina de tipo S (HbS), o la hemoglobina de tipo C (HbC). Otros ejemplos de alteraciones de este

134

tipo son la Alcaptonuria (acumulacin de cido homogentsico o alcaptn) y la fenilcetonuria (PKU). 12.1 Deleciones entre secuencias repetidas

Encefalopata mitocondrial: afecta al sistema nervioso central y a los msculos. Se produce por un funcionamiento defectuoso de las fosforilacin oxidativa. Este mal funcionamiento se produce consecuencia de una delecin de 5000 pares de bases del ADN mitocondrial entre secuencias repetidas.

Enfermedad de Fabry: afecta al catabolismo de los glicoesfingolpidos, el enzima -galactosidasa cuyo gen est en el cromosoma X es defectuosa debido a una delecin entre repeticiones directas de una secuencia corta.

Delecin en el ADN mitocondrial 12.2 Expansiones de trinucletidos En los genomas de las especies eucariontes existen secuencias cortas repetidas en tandem un nmero variable de veces, que se denominan abreviadamente VNTRs (Variable Number Tandem Repeat). Las VNTRs se pueden clasificar a su vez en Minisatlites y Microsatlites en base a la longitud de la secuencia repetida, en los Minisatlites la longitud de la secuencia que se repite es superior 10 bases, en los Microsatlites es inferior a 10. Los Microsatlites ms frecuentes son dinucletidos repetidos muchas veces, por ejemplo: TCTCTCTCTCTCTCTC.... Tambin hay trinucletidos repetidos muchas veces, por ejemplo, CGGCGGCGGCGGCGG..... En las mutaciones producidas por expansiones de trinucletidos el nmero normal de repeticiones de un determinado trinucletido en una determinada posicin del genoma (locus) se altera, aumentando su nmero de repeticiones. Un posible mecanismo propuesto para explicar este aumento en el nmero de repeticiones sera el "apareamiento errneo deslizado", sin embargo, est hiptesis no explica
135

incrementos demasiado grandes en el nmero de repeticiones. Algunos ejemplos de enfermedades producidos por expansiones de trinucletidos en la especie humana son las siguientes:

Sndrome X-frgil: es la causa ms comn de retraso mental en varones. El trinucletido que se repite en el cromosoma X en el locus (FRM-1) es CGG. El nmero normal de repeticiones oscila entre 6 y 50, existe un alelo premutacional con un nmero de repeticiones que vara entre 50 y 200 y la enfermedad se manifiesta cuando el nmero de repeticiones oscila entre 100 y 1.300.

Corea de Huntington: enfermedad neurodegenerativa de la edad adulta, se suele manifestar despus de la poca reproductiva. Este microsatlite se localiza cerca el telmero del brazo corto del cromosoma 4, el trinucletido repetido es CAG. El nmero normal de repeticiones oscila entre 11 y 34 y el nmero de repeticiones en los individuos enfermos vara entre 42 y 100. Se trata de una enfermedad con herencia autosmica dominante.

Distrofia miotnica: afecta al sistema nervioso central y al sistema muscular. El trinucletido que se repite se localiza en el cromosoma 19 y es CAG, el nmero normal de repeticiones vara entre 5 y 35, las personas enfermas poseen entre 50 y 200 repeticiones. Tambin tiene herencia autosmica dominante.

Atrofia muscular espino bulbar: microsatlite localizado en el cromosoma X. El trinucletido repetido es CTG, el nmero normal de repeticiones oscila entre 11 y 31, mientras que las personas afectadas por esta enfermedad muestran entre 40 y 65 repeticiones.

Sndrome X frgil: expansin de trinucletidos

136

12.3 Mutagnesis Inducida Existen diferentes agentes fsicos y qumicos que producen mutaciones en el ADN. Durante los primeros tiempos de la Gentica (1900 a 1930) los investigadores trataron de producir artificialmente mutaciones sin conseguirlo, hasta que Muller en 1927 y Stadler en 1928 demostraron los efectos mutagnicos de los rayos X en Drosophila, maz y cedbada. H. J. Muller recibi el Premio Nobel en 1946 por su descubrimiento de la induccin de mutaciones mediante radiacin con rayos X.

H. J. Muller

Stadler

Entre los agentes fsicos que producen mutaciones, estn las radiaciones ionizantes (por ejemplo los Rayos X) y las radiaciones no ionizantes (la luz ultravioleta). Las radiaciones ionizantes producen los siguientes efectos a nivel celular:

Efectos genticos: alteraciones en los genes. Efectos citogenticos: alteraciones en los cromosomas: roturas

cromosmicas y translocaciones.

Efectos fisiolgicos: alteraciones en las enzimas y hormonas.

Posteriormente, se demostr que otros agentes fsicos y qumicos producan mutaciones. 12.4 Especificidad Mutacional La especificidad mutacional significa que muchos agentes mutgenos tienden a producir un determinado tipo de mutacin, por ejemplo:

137

Etilmetanosulfonato GCAT.

(EMS): produce

fundamentalmente

transiciones

Nitrosoguanidina (NG): produce esencialmente transversiones GCTA. Luz ultravioleta (UV): produce transiciones y transversiones.

Especificidad mutacional del EMS, la luz UV y de la Aflatoxina 12.4.1 MECANISMOS DE MUTAGNESIS Los principales mecanismos por los que se producen las mutaciones son los siguientes: Remplazar una base en el ADN: Los anlogos de bases son compuestos qumicos que pueden remplazar a una base determinada. Por ejemplo, el 5-Bromouracilo (5BU) es anlogo de la Timina (T) y puede remplazarla. El 5BU en su forma cetnica empareja con la Adenina (A) mientras que en su forma enlica (5BU*) empareja con la Guanina (G). El 5BU es ms inestable y produce transiciones. La 2-Aminopurina
138

(2AP) es anlogo de la Adenina (A) y puede remplazarla. La 2AP aparea con la Timina (T) pero en su forma imno (2AP*) empareja con la Citosina (C). Esta alteracin produce transiciones. 12.4.1.1 Mutgenos que alteran las bases produciendo emparejamientos errneos especficos Existen varios tipos de agentes mutagnicos que alteran las bases nitrogenadas produciendo emparejamientos errneos

Agentes alquilantes: como el EMS que aade radicales etilo y produce transiciones GCAT. La NG aade radicales metilo y produce tambin transiciones GCAT.

Hidroxilamina (HA): produce especficamente transiciones GCAT. Iones bisulfito y cido nitroso: producen desaminacin. El cido nitroso transforma la Citosina (C) en Uracilo (U), el Uracilo (U) empareja con la Adenina (A) produciendo transiciones. La desaminacin de las Adenina (A) la convierte en hipoxantina (H) que empareja con la Citosina (C) produciendo transiciones.

12.4.1.2 Agentes de tipo intercalante como la Proflavina, Naranja de acridina y Compuestos ICR Son compuestos con estructuras planas que se meten o intercalan entre las bases nitrogenadas del ADN produciendo adiciones o deleciones de un solo par de nucletidos. 12.4.1.3 Mutgenos que producen prdida del emparejamiento especfico Estos mutgenos daan muchas bases nitrogenadas y producen como

consecuencia un bloqueo de la replicacin del ADN. La mayora de los compuestos cancergenos producen este tipo de alteraciones. Debido a la gran cantidad de alteraciones que producen en el ADN como primera medida se produce un bloqueo de la replicacin y se ponen en marcha un sistema de emergencia denominado abreviadamente SOS para reparar los daos y permitir que la clula se replique y pueda seguir viviendo. El sistema SOS consta de al menos tres genes denominados recA, umuC y umuD. Este sistema produce un relajamiento de la
139

especificidad de apareamiento de la ADN polimerasa III de E. coli. Algunos ejemplos de esta situacin son:

Luz ultravioleta (UV): produce dmeros de pirimidinas. Cuando hay dos pirimidinas sucesivas en la misma hlice la luz UV hace que se produzcan puente de hidrgeno entre ambas. Los ms frecuentes son los dmeros de Timinas.

Aflatoxina B1: se une a la Guanina (G) modificndola de manera que la Guanina modificada se separa del azcar al que estaba unida produciendo una sede apurnica. El sistema SOS pone habitualmente en la sede apurnica una Adenina (A) dando lugar a transversiones. Es un potente carcingeno.

Benzopireno: es un producto resultante de los motores de combustin y es un potente carcingeno.

2-Aminopurina

2-Iminopurina

Molcula intercalante

5-Bromouracilo

Transicin debida a 5-BU

Aflatoxina B1

EMS

Agentes intercalantes

Dmeros de Timina

140

TEMA 13. REPARACIN DE LOS DAOS EN EL ADN Cono hemos venido viendo hasta el momento, existen muchos agentes fsicos y qumicos que pueden producir lesiones en el ADN. Por tanto, deben existir mecanismos que permitan prevenir y reparar los daos que se producen en el material hereditario tanto de forma espontnea como los inducidos. Como ya hemos visto cuando hablamos de la replicacin del ADN, la propia ADN polimerasa III posee la subunidad que tiene una funcin correctora de pruebas que permite detectar cuando la ADN polimerasa ha introducido un nucletido que no es el correcto y retirarlo. Este es un primer mecanismo que evita que se produzcan mutaciones durante la replicacin. Adems de este mecanismo existen otros que previenen posibles daos y que reparan las lesiones producidas: 13.1 Sistemas Que Evitan Los Errores Antes De Que Ocurran Superxido dismutasa: este enzima convierte los radicales superxido en perxido de hidrgeno. Catalasa: este enzima convierte el perxido de hidrgeno en agua. Gen mutT: este gen codifica para un enzima que impide la incorporacin de la 8oxo-G al ADN. Este enzima hidroliza el trifosfato de la 8-oxo-G a la forma monofosfato. 13.2 Reparacin Directa De Las Lesiones En El Adn Fotorreactivacin: sistema de reparacin directa de los daos producidos por la luz UV. La luz UV produce dmeros de pirimidinas, fundamentalmente dmeros de Timinas. El enzima Fotoliasa codificada por el gen phr reconoce en la oscuridad los dmeros de Timina y se une a ellos, y cuando se expone a la luz (mediante un fotn) deshace el dmero de Timinas. Transferasa de grupos alquilo (metilo o etilo): elimina los gupos alquilo producidos por el EMS o por NG. El enzima metiltransferasa transfiere el grupo metilo de la O-6-metilguanina a una cistena (cys) de la enzima.

141

13.3 Sistemas De Reparacin Por Escisin Reparacin de los daos de la luz UV (Endonucleasa uvrABC): La Endonucleasa uvrABC es una escilnucleasa codificada por los genes uvrA, uvrB y uvrC que corta el ADN. La Helicasa II de ADN separa las dos hlices y retira 12 nucletidos. La ADN polimerasa I rellena el hueco producido por la Helicasa II y la Ligasa sella los extremos. Reparacin AP: reparacin de las sedes apurnicas o apirimidnicas. La llevan a cabo las Endonucleasas AP de la clase I que cortan por el extremo 3' y las de la clase II que cortan por el extremo 5'. Una exonucleasa elimina una pequea regin que contiene entre dos y 4 nucletidos, la ADN polimerasa I rellena el hueco y la Ligasa sella los extremos. 13.4 Reparacin Mediante Glucosidasas Estas enzimas detectan las bases daadas y las retiran rompiendo el enlace Nglucosdico con el azcar. Como consecuencia se origina una sede AP que se repara de la forma indicada anteriormente (reparacin AP). La Glucosidasa de Uracilo elimina el Uracilo (U) del ADN. La Glucoxidasa de Hipoxantina, elimina la Hipoxantina (H) del ADN. Adems diferentes. Sistema GO: dos glucosidasas producto de los genes mutM y mutY actan conjuntamente para eliminar las lesiones que produce la 8-oxo-G (GO). 13.5 Reparacin Posterior A La Replicacin Reparacin de apareamientos incorrectos: la reparacin de apareamientos incorrectos posterior a la replicacin requiere la existencia de un sistema que sea capaz de realizar las siguientes operaciones:

de estas dos glucosidasas existen otras

Reconocer las bases mal apareadas. Determinar cual de las dos bases es la incorrecta. Eliminar la base incorrecta y sintetizar.

Esta reparacin la realizan los productos de los genes mutH, mutL, mutS y mutU. Adems, para distinguir la hlice de nueva sntesis de la hlice molde y as saber
142

eliminar la base incorrecta, el sistema consiste utiliza el hecho de que la hlice de nueva sntesis tarda un cierto tiempo en metilarse la Adenina (A) de la secuencia GATC, mientras que la A de la secuencia GATC de la hlice molde ya est metilada. El enzima que reconoce la secuencia GATC metilando la A que contiene es

la Metilasa de Adenina.

Reparacin directa: Fotorreactivacin

Reparacin por escisin: daos UV

Reparacin posterior a la replicacin

Reparacin sedes AP

Reparacin por recombinacin: cuando la ADN polimerasa III encuentra un dmero de Timina (T) producido por luz UV no sabe que nucletido poner saltando la regin y dejando un hueco. Como consecuencia esa regin queda como ADN de hlice sencilla. Debido a que la luz UV produce muchos dmeros de Timina, se produce un bloqueo en la replicacin y para evitar que la clula muera y pueda replicarse se dispara el sistema de emergencia SOS. La puesta en marcha del sistema SOS comienza porque el ADN de hlice sencilla activa a la

protena RecA que a su vez interacciona con la protena LexA. La protena LexA es un represor de los genes uvrA, uvrB, uvrD, sulA y sulB. Todos estos genes tienen en
143

el promotor una secuencia denominada caja SOS. La protena LexA normalmente impide la transcripcin o expresin de los genes citados anteriormente, pero cuando interacciona con la protena RecA deja de impedir la expresin de estos genes, pudindose sintetizar las protenas correspondientes y reparar los daos producidos por la luz UV. 13.6 Reversin Restauracin total o parcial del fenotipo normal (apariencia externa, actividad proteica) a partir de un individuo mutante. Reversin genotpica: se produce por causas genticas. Reversin fenotpica: se produce por causas no genticas (ambientales). 1 mutacin Individuo Normal Mutante Fenotipo mutante 2 mutacin Reversin Revertiente Fenotipo normal

La reversin es una 2 mutacin que restaura total o parcialmente el fenotipo normal a partir de un individuo mutante. Al individuo que recupera el fenotipo normal por medio de esta 2 mutacin se le denomina Revertiente. 13.6.2 Reversin Genotpica La reversin genotpica se puede conseguir de dos maneras:

Retromutacin (en sentido estricto): consiste en recuperar la secuencia exacta de nucletidos en el ADN.

Mutacin supresora: es una mutacin secundaria que restaura total o parcialmente la funcin prdida.

13.6.2.1 Retromutacin Consiste en recuperar la secuencia exacta de nucletidos en el ADN, un ejemplo de esta situacin sera: AAA (lys)GAA(glu)AAA(lys).

144

A veces tambin se habla de retromutacin en sentido funcional, de manera, que se recupera la actividad enzimtica normal pero no se recupera la secuencia original de nucletidos en el ADN, por ejemplo: UCC(ser)UGC(cys)AGA(ser). Sin embargo, el concepto de retromutacin funcional no se diferencia del concepto de mutacin supresora y puede inducir a error. 13.6.2.2 Mutacin Supresora Es una mutacin secundaria que restaura total o parcialmente la funcin prdida. En la siguiente tabla se resumen los diferentes tipos de mutacin supresora: Mutacin Supresora intragnica segunda Cambio de sentido en un La segunda mutacin recupera la mutacin afecta al 2 sitio actividad de la protena o enzima. mismo gen que la primera. Mutacin supresora de codones sin sentido o de FIN. Por ejemplo, ARN-t de tyr que lee un codn de Mutacin supresora intergnica La segunda Mutaciones supresoras informacionales fin (UAG) Mutacin supresora de cambio e fase o pauta de lectura. Por ejemplo, ARN-t que lee un codn de 4 bases y suprime una adicin. Mutacin supresora de cambio de sentido. Por ejemplo, ARN-t de gly que lee codones de arg. Defecto en una ruta metablica compensado mutacin por una segunda otra ruta La Cambio de fase o pauta de La 1 mutacin es una adicin y la lectura de signo opuesto 2 mutacin es una delecin.

mutacin afecta a un gen distinto al que afect la

primera mutacin.

Mutaciones fisiolgicas

supresoras

que

abre

145

alternativa con el mismo resultado.

13.6.2.3 Carcter Preadaptativo De La Mutacin Una de las preguntas ms importantes acerca de las mutaciones es saber si estas se producen en los individuos de las poblaciones independientemente de si confieren o no al individuo alguna ventaja adaptativa, en cuyo caso la mutacin tendra un carcter preadaptativo, o si por el contrario, las mutaciones se producen como consecuencia de una adaptacin fisiolgica de los individuos al ambiente, en cuyo caso la mutacin tendra un carcter postadaptativo, ya que estara inducida por el propio ambiente. 13.7 Prueba De Fluctuacin (Luria Y Delbrck, 1943) Las mutaciones que confieren resistencia a agentes ambientales especficos que no son tolerados por los individuos normales o silvestres, se pueden estudiar con facilidad en bacterias. El fago T1 infecta y mata a la mayora de las clulas de E.coli. Si se siembra una placa con un gran nmero de bacterias (alrededor de 10 9) y fagos, la mayora de las bacterias morirn y unas pocas sobrevivirn produciendo colonias de bacterias resistentes que pueden ser aisladas. Cuando se observaron las primeras bacterias resistentes a T1 se pens que podan explicarse por mutacin al azar de un alelo sensible Ton S a un alelo resistente TonR o bien a una adaptacin fisiolgica de la bacteria que detectara la presencia del fago y ajustara su metabolismo resistiendo la infeccin. Este ajuste fisiolgico sera semejante al realizado por las bacterias cuando se aade al medio un nuevo nutriente.

146

Adaptacin Fisiolgica

Mutacin al azar

Luria y Delbrck (1943) disearon un experimento ya clsico para distinguir entre estas dos hiptesis y la metodologa empleada serva para calcular tasa de mutacin y continua utilizndose hoy da. Este experimento se ha denominado Prueba o test de Fluctuacin. Luria y Delbrck recibieron en 1969 el Premio Nobel por sus descubrimientos sobre el ciclo de reproduccin de los virus y el papel del material gentico en las bacterias y los virus.

Salvadore E. Luria

Max Delbrck

Luria y Delbrck pensaron que si la causa de la resistencia a T1 era un suceso de mutacin poco frecuente, tal suceso podra producirse pronto o tarde durante el crecimiento del cultivo bacteriano, ya que la mutacin es un fenmeno aleatorio a lo largo del tiempo. Si se produce pronto en la historia del cultivo dara lugar a una gran cantidad de clulas resistentes, por el contrario, si se produce tarde originara muy pocas clulas o bacterias resistentes. Por consiguiente, si se analizan muchos cultivos bacterianos pequeos, esperaramos una gran variacin en el nmero de bacterias resistentes de un cultivo a otro. Sin embargo, si se trata de una adaptacin fisiolgica no hay razn para esperar dicha variacin, ya que la adaptacin fisiolgica sera bastante constante en su funcionamiento. Para llevar a cabo el experimento utilizaron 20 cultivos pequeos de 0.2 ml con una concentracin inicial de 103 clulas de E.coli por mililitro. Adems iniciaron un cultivo grande de 10 ml con igual concentracin (103 clulas de E.coli por mililitro). Dejaron crecer ambos tipos de cultivos hasta alcanzar una concentracin de 109 clulas por mililitro (alrededor de 20 generaciones). Cada uno de los cultivos pequeos d 0.2 ml se sembr por separado en una placa que haba sido cubierta con una densa capa
147

de fago T1. Por otro lado, tomaron 10 muestras de 0.2 ml del cultivo grande o masivo y las sembraron por separado en 10 placas cubiertas con una densa capa de fago T1. Si la resistencia se debiera a una mutacin al azar y poco frecuente que ha tenido lugar en alguna de las 20 generaciones transcurridas desde el inicio de los cultivos, en cada cultivo pequeo la mutacin se habra producido en un momento distinto, en algunos al principio (apareciendo como resultado muchas clulas resistentes), en otros al final (apareciendo pocas clulas resistentes) y en otros incluso ni se habra producido (no habra clulas resistentes). Por tanto, en los cultivos pequeos se observara una variacin grande en el nmero de colonias resistentes. Por el contrario, si la resistencia se debe a una adaptacin fisiolgica inducida por la presencia del fago T1, sera esperable que la tasa de clulas resistentes fuera la misma de un cultivo a otro. El cultivo grande o masivo sirve como control, ya que lo que se espera en las 10 muestras de 0.2 ml tomadas de dicho cultivo es que todas tengan el mismo comportamiento ya que proceden del mismo cultivo grande y comparten la misma historia, por consiguiente, el nmero de colonias resistentes en las placas procedentes de las 10 muestras del cultivo grande debera ser semejante y la variacin sera muy pequea. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: Cultivos procedentes del cultivo

Cultivos pequeos de 0.2 ml

grande o masivo colonias N de colonias

Nmero de cultivo

de

resistentes a T1 1 0 3 0

Nmero de cultivo

resistentes a T1 14 15 13 21

1 2 3 4

1 2 3 4

148

5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Media = 11.3 Varianza = 694

0 5 0 5 0 6 107 0 0 0 1 0 0 64 0 35

5 6 7 8 9 10

15 14 26 16 20 13

Media = 16.7 Varianza = 15 Coeficiente de variacin =0.9

Coeficiente de variacin =61

Como

puede

observarse,

los

resultados

obtenidos

apoyan

el carcter

preadaptativo de la mutacin, es decir, la mutaciones se producen al azar independientemente de si confieren o no alguna ventaja adaptativa a los individuos.

149

13.8 Tasa Y Frecuencia De Mutacin Tasa de mutacin: es el nmero de mutaciones que se producen por unidad de tiempo, las unidades de tiempo que se emplean habitualmente son el perodo correspondiente a la vida de una clula, de un organismo (generacin) o de una divisin celular. Como puede observarse, las unidades de tiempo corresponden a unidades biolgicas. En el esquema de la izquierda ha tenido lugar una sola mutacin (M) y el perodo de tiempo completo para que la mutacin haya tenido lugar es o bien el nmero total de lneas (14 perodos generacionales) o bien el nmero total de divisiones celulares (siete). En este ltimo caso la tasa de mutacin sera 1/7. Esquema de tasa y frecuencia de mutacin Explicacin clculo de la tasa de mutacin

En general, las mutaciones son poco frecuentes, en la siguiente tabla (datos recopilados por Stadler) se indican las frecuencias de mutacin de diferentes loci en maz. N de gametos N mutaciones 273 28 7 4 4 3 de N medio de mutaciones por milln de gametos 492.0 106.0 11.0 2.4 2.2 1.2

Gen Rr Ii

analizados 554786 265391

Prpr 647102 Susu 1678736 Yy 1745280

Shsh 2469285

150

Wxwx 1503744

0.0

Como se puede observar en el caso de maz, diferentes genes muestran diferentes frecuencias de mutacin. 13.8.1 Frecuencia de mutacin Es la frecuencia con la que se observa un tipo particular de mutacin (o mutante) en una poblacin de clulas o de individuos. La poblacin de clulas puede referirse a gametos, esporas sexuales o casi cualquier otro tipo celular. En el esquema anterior la frecuencia de mutacin de la poblacin final de 8 clulas sera 2/8 = 0.25. En la siguiente tabla se indican algunas tasas y frecuencias de mutacin en varios organismos diferentes. Organismo T2 (fago) Mutacin Inhibicin lisis rr+ Valor 1 x 10-8 Unidades Tasa: mutantes T2 (fago) Rango de hospedador h+h 3 x 10-9 replicacin gnica E. coli (bacteria) Fermentacin laclac
+

Alelos por

de

lactosa

2 x 10-7 Tasa: 4 x 10
-8

E. coli (bacteria)

Requerimiento his-his+

de

histidina

clulas por

mutantes

divisin celular Chlamydomonas reinhardtii (alga) Neurospora crassa (hongo) Neurospora crassa (hongo) Sensibilidad a estreptomicina str sts
s r

1 x 10-6

Requerimiento inos inos

+

de

inositol

8 x 10-8 Frecuencia por 4 x 10-8 espora asexual

Requerimiento de adenina adad+ Susu, (ver tabla anterior)

Zea mays (maz)

2.4 x 10-6

Frecuencia por gameto

151

Drosophila melanogaster (mosca) Mus musculus (ratn) Homo sapiens (humanos)

Color de los ojos Ww Pelaje de color diluido Dd

4 x 10-5
-5

Frecuencia por gameto

3 x 10

Mutacin

Valor 0.1 x 10-5 0.2 x 10-5 0.4-0.8 10-5 x

Unidades

Enfermedad de Huntington Sindrome "ua-rtula"

Epilopia Autosmicos dominantes Poliposis mltiple en intestino grueso Acondroplasia (enanismo) Neurofibromatosis Hemofilia A Ligados al X recesivos Distrofia Duchenne Cultivo de clulas Normalresistencia azaguanina a muscular de

1-3 x 10-5 Frecuencia por gameto 4-12 x 10

-5

3-25 x 10-5 2-4 x 10-5 4-10 x 10-5

Tasa: 7 x 10
-4

clulas por

mdula sea

mutantes

divisin celular TEMA 14 EXPERIMENTOS DE MENDEL Mendel public sus experimentos con guisantes en 1865 y 1866. Los principales motivos por los que Mendel eligi el guisante como material de trabajo fueron los siguientes:

Material: Pisum sativum (guisante). Los guisantes eran baratos y fciles de obtener en el mercado. Ocupaban poco espacio y tenan un tiempo de generacin relativamente corto.

152

Producan muchos descendientes. Existan variedades diferentes que mostraban distinto, color, forma, tamao, etc. Por tanto, presentaba Variabilidad Gentica.

Es una especie Autgama, se autopoliniza, de manera que el polen de las anteras de una flor cae sobre el estigma de la misma flor.

Era fcil realizar cruzamientos entre distintas variedades a voluntad. Es posible evitar o prevenir la autopolinizacin castrando las flores de una planta (eliminando las anteras).

Esquema de flor de guisante

Eliminacin de anteras (castrar)

Segn Mendel las caractersticas que deben reunir las plantas experimentales son:

Poseer caracteres diferenciales constantes. Los hbridos entre variedades deben protegerse de la influencia de polen extrao durante la floracin (embolsando las flores).

Experimento control: las 34 variedades que emple las someti a prueba durante dos aos (dos generaciones sucesivas por autofecundacin) para comprobar que todas producan descendencia constante. Es decir, si las caractersticas de una variedad eran que todas las plantas producan semillas redondas y amarillas, comprobaba durante dos generaciones sucesivas de autofecundacin que todas las semillas de la variedad eran redondas y lisas. Solamente una variedad de las 34 no produjo descendencia constante, por lo que no la emple en sus estudios. Las variedades utilizadas por Mendel

153

eran Lneas Puras constituidas por individuos idnticos para los caracteres analizados. Mendel realizaba siempre el mismo esquema de cruzamientos: cruzaba dos variedades o lneas puras que diferan en uno o varios caracteres, obtena la 1 generacin filial (F1), seguidamente autofecun generacin filial (F1) y obtena la 2 generacin filial (F2) y, por ltimo, autofecundaba
2)

y consegua la 3 generacin filial (F3).

El cruzamiento inicial lo llevaba a cabo en las dos direcciones posibles, es decir, en un caso utilizaba como donador de polen al P 2 y en otro al P1, realiz cruzamientos recprocos: P1 x P2 y P2 x P1. P1 x P2 F1 P2 x P1 F1
2 3

P1 = Parental 1; P2 = Parental 2 F1 F2 y F3

Adems, llev a cabo Retrocruzamientos, es decir, cruzamientos de los hbridos de la 1 generacin filial (F1) por los dos parentales utilizados, en las dos direcciones posibles:

F1 x P2 y P2 x F1 (cruzamientos recprocos) F1 x P1 y P1 x F1 (cruzamientos recprocos)

G. Mendel

Monasterio de Brno

Los principales aciertos de Mendel fueron los siguientes:

154

Utilizar en sus experimentos una especia autgama, ya que de esta manera se aseguraba de que las variedades que manejaba eran Lneas puras, constituidas por individuos idnticos y homocigticos.

Elegir caracteres cualitativos fcilmente discernibles en sus alternativas. Por ejemplo, flores color blanco o prpura.

Iniciar los experimentos fijndose cada vez en un slo carcter. De est manera obtena proporciones numricas fciles de identificar.

Utilizar relaciones estadsticas en varias generaciones sucesivas. Contar el nmero de individuos de cada tipo en las sucesivas generaciones y proponer proporciones sencillas.

Llevar

cabo

experimentos

control

cruzamientos

adicionales

(retrocruzamientos) para comprobar sus hiptesis.

Analizar caracteres independientes para demostrar su principio de la combinacin independiente.

14.1 Caracteres Del Guisante Analizados Por Mendel Mendel estudi los siguientes siete caracteres en guisante:

Forma de la semilla: lisa o rugosa Color de la semilla: amarillo o verde. Color de la Flor: prpura o blanco. Forma de las legumbres: lisa o estrangulada. Color de las legumbres maduras: verde o amarillo. Posicin de las flores: axial o terminal. Talla de las plantas: normal o enana.

155

Antes de continuar con los experimentos de Mendel es preferible introducir la nomenclatura actual y definir los siguientes trminos: Genotipo: constitucin gentica para el conjunto de los genes de un individuo. Normalmente se refiere a uno o muy pocos genes. En las especies diploides (dos juegos de cromosomas, uno de origen materno y otro de origen paterno) como el guisante, en un locus (posicin del genoma) en el que solamente se han encontrado dos alelos distintos (A y a), hay tres genotipos posibles:

Homocigoto dominante: AA Heterocigoto: Aa Homocigoto recesivo: aa

Fenotipo: apariencia externa para el carcter analizado, es la expresin del genotipo en un determinado ambiente. En las especies diploides (dos juegos de cromosomas, uno de origen materno y otro de origen paterno) como el guisante, en un locus (posicin del genoma) en el que solamente se han encontrado dos alelos distintos (A y a) y con dominancia de A sobre a (A>a), existen dos fenotipos posibles:

Fenotipo Dominante: A Fenotipo Recesivo: a

La relacin entre Genotipos y Fenotipos cuando existe dominancia es la siguiente:

156

Los Genotipos AA y Aa presentan Fenotipo Dominante A Los Genotipos aa muestran Fenotipo Recesivo a.

Se dice que existe una relacin de dominancia completa entre los alelos de un locus cuando un el heterocigoto presentan el mismo fenotipo que uno de los homocigotos. 14.1.2 Cruzamientos De Un Solo Carcter Mendel analiz en primer lugar cada carcter por separado. Cruzando variedades que diferan en un slo carcter. Por ejemplo, analiz el carcter color de las flores y para ello cruz una variedad de flores de color prpura por otra variedad de color de flores blanca. Cruzamiento inicial: Parentales Prpura x Blanca F1 Ppura Cruzamiento recproco: Parentales Blanca x Prpura F1 Ppura Prpura X F1 Prpura F2 Genotipos 1/4 AA 1/2 Aa Fenotipos 3/4 A 1/4 a 3/4 A 1/4 aa 1/4 AA Blanca Blanco X F1 Prpura F2 Genotipos 1/2 Aa Fenotipos 1/4 a 1/4 aa Prpura

El cruzamiento de plantas con flores prpura por plantas con flores blancas di lugar en cualquiera de las dos direcciones realizadas a una 1 generacin filial (F 1) uniforme, todas las plantas de la F1 eran de color prpura. La autofecundacin de los hbridos de la F1 origin una 2 generacin filial (F2) con 3/4 parte de plantas de color prpura y 1/4 de plantas con flores blancas. Mendel adems autofecund todas las plantas de la (F2) y obtuvo la 3 generacin filial (F3). Todas las plantas de flores blancas de la F2 daban lugar solamente a plantas con flores blancas en la F3 (se comportaban como la variedad parental de flores blancas). Sin embargo, las plantas con flores de color prpura en la F2 daban en la F3resultados distintos, 1/3 de la plantas con flores prpuras de la daban en la F3 solamente plantas de color prpura
157

(se comportaban como la variedad parental prpura), mientras que 2/3 de las plantas de flores prpuras de la F2 daban lugar en la F3 a 3/4 de plantas con flores prpura y 1/4 de plantas con flores blancas (se comportaban como los hbridos de la F1). Prpura X F1 Prpura F2 Genotipos 1/4 AA 1/2 Aa Fenotipos 3/4 Prpuras 1/3 2/3 F3 Todas Prpuras 3/4 Prpuras Fenotipos Utilizando la nomenclatura actual podemos escribir de la siguiente forma los resultados obtenidos por Mendel: Parentales Genotipo Fenotipo Gametos Prpura X AA A Todos A Blanca aa a Todos a 1/4 Blancas Todas Blancas 1/4 Blancas 1/4 aa Blanca

1 Generacin filial Genotipo Fenotipo

F1 Prpura Aa A

Gametos F1
158

1/2 A

1/2 a

2 Generacin filial Genotipos Fenotipos Fenotipos 1/4 AA 3/4 A

F2 1/2 Aa 1/ aa 1/4 a 1/4 Blancos

3/4 Prpuras

Basndose en estos resultados Mendel propus las dos siguientes Leyes de la Transmisin de los caracteres de una generacin a las siguientes:

1 Ley de Mendel o Principio de la Uniformidad: Las plantas hbridas (Aa) de la 1 generacin filial (F1) obtenidas por el cruzamiento de dos lneas puras que difieren en un solo carcter tienen todas la misma apariencia externa (fenotipo) siendo idnticas entre si (uniformes) y se parecen a uno de los dos parentales. Al carcter que se manifiesta en las plantas de la F1 (hbridos Aa) se le denomina Dominante y al carcter que no se manifiesta se le denomina Recesivo. Este resultado es independiente de la direccin en la que se ha llevado a cabo el cruzamiento.

Principio uniformidad: Prpura x Blanca Principio uniformidad: Blanca x Prpura

2 Ley de Mendel o Principio de la Segregacin: La autofecundacin de las plantas hbridas (Aa) procedentes del cruzamiento entre dos lneas puras que

159

difieren en un carcter origina una 2 generacin filial (F2) en la que aparecen 3/4 partes de plantas de apariencia externa (fenotipo) Dominante y 1/4 de plantas con apariencia externa (fenotipo) Recesiva. De manera, que el carcter Recesivo reaparece en la F2 y de cada cuatro plantas una tiene fenotipo Recesivo. Este resultado se debe a que cuando los hbridos de la F1 forman sus gametos, los alelos del mismo locus segregan (se separan) dando lugar dos clases de gametos en igual proporcin, mitad del gametos con el alelo dominante (A) y mitad con alelo recesivo (a). Esto sucede tanto por el lado femenino como por el lado masculino. El principio de la segregacin se puede resumir de la siguiente manera: Los heterocigotos Aa de la F1 producen dos clases de gametos en igual proporcin: 1/2 A y 1/2 a por el lado masculino y por el femenino. Como consecuencia la segregacin genotpica en la F2 es 1/4 AA 1/2 Aa y 1/4 aa y la segregacin fenotpica es 3/4 A y 1/4 a. Gametos Femeninos F1 1/2 A 1/4 AA (Fenotipo A) 1/2 a 1/4 (A) Aa (Fenotipo

Principio de la Segregacin

Gametos F1

Masculinos 1/2 A 1/2 a

1/4 Aa (Fenotipo A) 14 aa (Fenotipo a)

En el siguiente esquema se resumen el Principio de la Uniformidad y el Principio de la Segregacin propuestos por Mendel para el carcter color de las flores: Generacin parental Prpura 1 Generacin filial F1 Prpura (Aa)

X Blanco

160

2 Generacin filial

Fenotipos F2 Genotipos F2

Prpura Prpura AA Aa

Prpura Blanco Aa aa

3 Generacin filial Fenotipos F3 3 Generacin filial Fenotipos F3 3 Generacin filial Fenotipos F3 3 Generacin filial Fenotipos F3 Prpura Blanco Blanco Blanco Prpura Prpura Prpura Blanco Prpura Prpura Prpura Blanco Prpura Prpura Prpura Blanco

Los siete caracteres analizados por Mendel se comportaron de igual forma en los cruzamientos realizados cuando los analizaba por separado. Los resultados que obtuvo fueron los siguientes: Fenotipo parental 1 Semilla lisa x rugosa 2 Semilla amarilla x verde F1 Todas lisas Todas amarillas F2 Relacin

5474 lisas y 1850 rugosas 2.96 : 1 6022 verdes amarillas y 2001 3.01 : 1

3 Flores prpuras x blancas Todas prpuras 705 prpuras y 224 blancas 3.15 : 1 4 Legumbre lisa x Todas lisas 882 lisas y 299 2.92 : 1

estrangulada

estranguladas

5 Legumbre verde x amarilla Todas verdes 6 Flores axiales x terminales Todas axiales 7 Talla normal x enana
161

428 verdes y 152 amarillas 2.82 : 1 651 axiales y 207 3.14 : 1 2.84 : 1

terminales 787 largos y 277 cortos

Todas normal

El carcter que se manifiesta en la F1 es el dominante y el que no se manifiesta el recesivo. 14.1.3 Cruzamiento Prueba Para Comprobar El Principio De La Segregacin Con objeto de comprobar que su Principio de la Segregacin era correcto decidi realizar cruzamientos adicionales para corroborarlo. Pare ello realiz

retrocruzamientos de los hbridos de la F1 por el parental recesivo (aa), en las dos direcciones posibles. Este tipo de retrocruzamientos se denominan Cruzamientos Prueba, ya que permiten probar o averiguar el tipo y proporcin de gametos que producen los heterocigotos, debido a que la apariencia externa (fenotipo) de los descendientes del Cruzamiento Prueba coincide con los gametos producidos por el hbrido. Dado que el parental recesivo solamente produce gametos de tipo a (recesivo), cuando estos se unan con los gametos producidos por el hbrido no enmascararn el fenotipo de los descendientes. Parental (aa) Todos a recesivo

C. Prueba Gametos

F1 (Aa) 1/2 A y 1/2 a Descendencia

Genotipo Fenotipo

1/2 Aa 1/2 aa

1/2 Fenotipo A 1/2 Fenotipo a

Los resultados que se obtienen en el cruzamiento recproco son los mismos: Parental (aa) Todos a recesivo

C. Prueba Gametos

F1 (Aa) 1/2 A y 1/2 a Descendencia

Genotipo Fenotipo

1/2 Aa 1/2 aa

1/2 Fenotipo A 1/2 Fenotipo a

Como se puede observar, en un Cruzamiento Prueba las apariencia externa (fenotipo) de los descendientes coincide con los tipos de gametos que ha producido el hbrido.

162

14.2 Cruzamientos De Dos Caracteres Una vez que haba averiguado las leyes que rigen la transmisin de cada carcter por separado, comenz a estudiar dos caracteres al mismo tiempo, para ello realiz cruzamiento entre variedades de guisante (lneas puras) que diferan

simultneamente en dos caracteres. Dado que para observar el color de flor es necesario sembrar las semillas y esperar que produzcan plantas adultas, para ahorrar tiempo y esfuerzos, decidi estudiar caracteres que se manifestaban en las semillas, como la forma y el color de las semillas. Por tal motivo, cruz plantas de semilla lisa y verde (AAbb) por plantas de semilla rugosa y amarilla (aaBB). La F1 que obtuvo fue uniforme (genotipo AaBb) y todas las semillas eran lisas y amarillas (Fenotipo AB), indicando este resultado que el carcter dominante para la forma de la semilla es el liso (A) y para el color de la semilla era el amarillo (B). Posteriormente, autofecund las plantas de la F1 y la descendencia obtenida (F2) estaba formada por 9/16 de semillas lisas y amarillas, 3/16 de lisas verdes, 3/16 de rugosas amarillas y 1/16 de rugosas verdes. En el siguiente esquema se resumen los resultados del cruzamiento realizado por Mendel:

163

Cruzamiento de dos caracteres: forma y color de las semillas Mendel explic los datos de esta descendencia como la Combinacin independiente de lo que le sucede a cada carcter por separado. El carcter forma de la semilla est controlado por el locus (A,a) y el carcter color de la semillas por el locus (B,b). Las plantas diheterocigticas (AaBb) de la F1 segregan simultneamente para el locus (A,a) y para el Locus (B,b), de manera que las segregacin fenotpica en la F2 para el carcter forma de la semilla es 3/4 A y 1/4 a y la segregacin fenotpica para el carcter color de la semilla es 3/4 B y 1/4 b. La segregacin conjunta para ambos caracteres se obtiene combinando de forma independiente la segregacin de cada locus: Forma semilla (3/4 A + 1/4 a) Locus A,a X Color semilla (3/4 B + 1/4 = b) Locus B,b

Segregacin combinada en la F2 9/16 AB 3/16 Ab 3/16 aB 1/16 ab

La segregacin fenotpoca 9:3:3:1 observada en la F2 para dos caracteres se obtena debido a que cuando el diheterocigoto de la F1 formaba sus gametos, los alelos de diferentes loci se combinan de forma independiente para producir cuatro clases de gametos en igual proporcin.

Mazorca de maz con segregacin 9:3:3:1 (forma y color de las semillas) Es decir, en los diheterocigotos AaBb, el locus A,a produce dos clases de gametos en igual proporcin (1/2 A y 1/2 a) y el locus B,b, produce tambin dos clases de gametos en igual proporcin (1/2 B y 1/2 b). Los alelos el locus A,a se combinan de
164

forma independiente con los del locus B,b de manera que se producen cutaro clases de gametos en igual proporcin: (1/2 A + 1/2 a) x (1/2 B + 1/2 b) = 1/4 AB + 1/4 Ab + 1/4 aB + 1/4 ab. Esto sucede tanto por el lado masculino como por el lado femenino. Gametos (1/2 A + 1/2 a) Locus A,a X Gametos (1/2 B + 1/2 = b) Locus B,b Gametos Diheterocigoto AaBb 1/4 AB 1/4 Ab 1/4 aB 1/4 ab

En el siguiente esquema se indican los genotipos y fenotipos obtenidos en la F2 de un cruzamiento entre plantas con semillas lisas y verdes por rugosas y amarillas, suponiendo que tanto por el lado masculino como por el femenino se producen las cuatro clases de gametos en igual proporcin. Esta forma de representar los datos de cruzamiento en forma de tabla se debe a Punnet.

Punnet

Cuadro o tabla de Punnet

165

Basndose en estos resultados Mendel propuso su 3 ley o Principio de la Combinacin Independiente.

3 Ley o Principio de la Combinacin independiente: los miembros de parejas allicas diferentes se distribuyen o combinan de forma independiente cuando se forman los gametos de un heterocigoto para los caracteres correspondientes. Es decir, en el caso de un diheterocigoto (AaBb), los alelos del locus A,a y los del locus B,b se combinan de forma independiente para formar cuatro clases de gametos en igual proporcin. Gametos (1/2 A + 1/2 a) Locus A,a X Gametos (1/2 B + 1/2 = b) Locus B,b Gametos Diheterocigoto AaBb 1/4 AB 1/4 Ab 1/4 aB 1/4 ab

14.2.1 Cruzamiento Prueba Para Comprobar El Principio De La Combinacin Independiente Con objeto de corroborar su principio de la combinacin independiente Mendel volvi a realizar cruzamientos prueba de los hbridos de la F1 (AaBb) por el parental recesivo (aabb) en las dos direcciones posibles. Los resultados obtenidos para los caracteres de forma y colos de las semillas se resumen en las siguientes tablas: Parental (aabb) semilla rugosa, verde Todos ab recesivo

C. Prueba

F1 (AaBb) semilla lisa, amarilla

Gametos

1/4 AB, 1/4 Ab, 1/4 aB, 1/4 ab Descendencia

Genotipo Fenotipo

1/4 AaBb 1/4 AB

1/4 Aabb 1/4 Ab 25 lisa, verde

1/4 aaBb 1/4 aB 22 rugosa, amarilla

1/4 aabb 1/4 ab 26 rugosa, verde

N semillas 29 Fenotipo lisa, amarilla

166

Los resultados obtenidos en la otra direccin del cruzamiento (cruzamiento recproco) fueron los siguientes: Parental (aabb) semilla rugosa, verde Todos ab recesivo

C. Prueba

F1 (AaBb) semilla lisa, amarilla

Gametos

1/4 AB, 1/4 Ab, 1/4 aB, 1/4 ab Descendencia

Genotipo Fenotipo

1/4 AaBb 1/4 AB

1/4 Aabb 1/4 Ab 26 lisa, verde

1/4 aaBb 1/4 aB 27 rugosa, amarilla

1/4 aabb 1/4 ab 26 rugosa, verde

N semillas 31 Fenotipo lisa, amarilla

Como se puede observar, en ambos cruzamientos, la apariencia externa de los descendientes coincide con los gametos producidos por la planta diheterocigtica (AaBb) de la F1. Por consiguiente, las plantas AaBb forman tanto por el lado masculino, como por el lado femenino, cuatro clases de gametos en igual proporcin (1/4 AB + 1/4 Ab + 1/4 a B + 1/4 ab). 14.3 Cruzamientos De Tres Caracteres Mendel tambin realiz cruzamientos entre variedades o lneas puras que diferan en tres caracteres (AABBCC x aabbcc). La segregacin fenotpica obtenida en la F2 estos casos se calculan combinando de forma independiente lo que le sucede a cada locus por separado: (3/4 A + 1/4 a) x (3/4 B + 1/4 b) x (3/4 C + 1/4 c) = 27/64 ABC + 9/27 ABc + 9/64 AbC + 9/64 aBC + 3/64 Abc + 3/64 aBc + 3/64 abC + 1/64 abc. Otra manera de indicar la segregacin fenotpica obtenida en la F2 es: (3A:1a)x(3B:1b)x(3C:1c) = 27 ABC : 9 ABc : 9 AbC : 9 aBC : 3 Abc : 3 aBc : 3 abC : 1abc

167

Tambin es posible realizar un cruzamiento prueba de un triheterocigoto (AaBbCc) por un homocigoto recesivo (aabbcc). En este caso la segregacin fenotpica obtenida en la descendencia de este cruzamiento prueba sera la siguiente: AaBbCc x aabbcc = 1/8 ABC + 1/8 ABc + 1/8 AbC + 1/8 aBC + 1/8 Abc + 1/8 aBc + 1/8 abC + 1/8 abc. Comno se puede observar aparecen ocho fenotipos distintos en igual proporcin (1/8). El resultado obtenido se explica combinando de forma independiente lo que le suceda a cada locus por separado. De manera que cada locus, en un cruzamiento prueba, segrega 1/2 Dominante + 1/2 recesivo. (1/2 A + 1/2 a) x (1/2 B + 1/2 b) x (1/2 C + 1/2 c) = 1/8 ABC + 1/8 ABc + 1/8 AbC + 1/8 aBC + 1/8 Abc + 1/8 aBc + 1/8 abC + 1/8 abc. 14.3.1 Consecuencias De La Autofecundacin Dado que Mendel trabajaba con una especie autgama (Pisum sativum, guisante), trat de explicar lo que suceda durante sucesivas generaciones de

autofecundacin. Para ello supuso que parta de una planta heterocigtica Aa que se autofecundaba y dejaba 4 descendientes. Las cuatro plantas de la 1 generacin de autofendacin volvan a autofecundarse dejendo cada una de ellas otros 4 descendientes, y as sucesivamente durante las siguientes generaciones de autofecundacin. Los resultados obtenidos se muestran en la siguiente tabla: GENERACIN a partir del N DE DESCENDIENTES AA 1 6 28 120 496 Aa 2 4 8 16 32 Aa 1 6 28 120 496 PROPORCIONES AA 1: 3: 7: 15: 31: 2n-1: Aa 2: 2: 2: 2: 2: 2 Aa 1 3 7 15 31 2n-1:

hbrido 1 2 3 4 5 n

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Como se puede observar, a medida que aumenta el nmero de generaciones de autofecundacin disminuye la proporcin de individuos heterocigticos. Por cada generacin de autofecundacin la proporcin de heterocigotos se reduce a la mitad, de manera que la proporcin de heterocigotos en la generacin n de autofecundacin es 1/2n. Por tanto, la autogamia (sistema de reproduccin por autofecundacin) conduce a la homocigosis, de manera que en pocas generaciones de autofecndacin la inmensa mayora de los individuos de la poblacin son homocigotos. Las variedades de guisante utilizadas por Mendel, dado que el guisante es una especia que es autgama, son lneas puras constituidas por individuos homocigticos. 14.4 Interacciones Entre Alelos Del Mismo Locus Las primeras excepciones a las Leyes de Mendel se describieron a principios del siglo XX. De Vries (1900), Correns (1900) y Tschermak (1900) redescubrieron las Leyes de Mendel y encontraron las primeras excepciones a la Dominancia completa descrita por Mendel.

De Vries

Correns

Tschermak

Todos los caracteres analizados por Mendel presentaban Dominancia Completa, de manera que el fenotipo (apariencia externa) de los heterocigotos de la F1 era igual a la de uno de los parentales. De forma que el carcter que se manifiesta en la F 1 es el Dominante y que no se manifiesta es el recesivo, como consecuencia, se dice que un alelo domina sobre otro, de forma resumida puede decirse que A>a. Sin embargo, adems de este tipo de interaccin entre los alelos de un mismo locus, existen otros. Los principales tipos de interacciones entre alelos del mismo locus se

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basan nicamente en la apariencia externa (fenotipo) de los individuos heterocigotos (Aa) y son los siguientes: Dominancia completa: el aspecto externo del heterocigoto (Aa) se parece al de un homocigoto (AA), de manera que los individuos AA y Aa poseen la misma apariencia externa (Fenotipo A). El alelo A domina sobre el alelo a (A>a). Como ejemplo se pueden citar los siete caracteres estudiados en el guisante por Mendel. Dominancia intermedia: el aspecto externo del heterocigoto (Aa) es intermedio entre el de los parentales homocigticos (AA y aa). Por ejemplo, el color de las flores enAntirrhinum majus (Boca de dragn) presenta dominancia intermedia, de forma que cuando se cruzan plantas homocigticas de flores rojas (AA) por plantas de flores blancas (aa) se obtienen hbridos heterocigticos (Aa) de flores color rosa. Antirrhinum majus (Boca de gragn)

Plantas con diferentes colores de las flores El aspecto de estos heterocigotos (Aa) es intermedio entre el rojo y el blanco de los parentales. Cuando se autofecundan las plantas de color rosa de la F 1, se obtiene una F2 con la siguiente segregacin genotpica y fenotpica 1/4 AA Rojas + 1/2 Aa
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Rosas + 1/4 aa Blancas. Como se puede ver, cuando hay Dominancia intermedia la segregacin genotpica y la fenotpica de la F2 coinciden, de manera que a cada fenotipo le corresponde un genotipo distinto. Boca de dragn Antirrhinum majus Boca de dragn

Rojo (AA)

Rosa (Aa)

Blanco (aa)

El carcter "pluma rizada" de las gallinas muestra tambin dominancia intermedia con respecto al normal. De manera que el cruzamiento de un gallo Aa por una gallina Aa, ambos con plumaje "rizado suave" da lugar a una descendencia con 1/4 parte de individuos con plumaje normal (AA), 1/2 de descendientes con plumaje "rizado suave" (Aa) y 1/4 de individuos con plumaje "rizado fuerte" (aa). Los resultados obtenidos por Landauer y Dunn en un cruzamiento semejante, de un gallo con "rizado suave" (Aa) por una gallina con "rizado suave " (Aa) fueron 20 nornales (AA), 50 de "rizado suave" (Aa) y 23 de "rizado fuerte" (aa).Como se puede ver, cuando hay Dominancia intermedia la segregacin genotpica y la fenotpica de la F2 coinciden, de manera que a cada fenotipo le corresponde un genotipo distinto. Gallinas

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Diferencias en el color del plumaje Carcter nuevo: A veces los heterocigotos o individuos de la F1 presentan un fenotipo que no coincide con ninguno de los parentales y que tampoco es intermedio entre el de los parentales. En estos casos suele hablarse de una apariencia externa nueva o fenotipo nuevo. Coleus

Diferentes variedades

Hoja de dos colores

Hoja de dos colores

Correns estudiando plantas del gnero Coleus observ que al cruzar plantas de color Prpura (AA) por plantas de color verde (aa) los hbridos eran de color pardo (Aa). El cruzamiento de plantas de color pardo (Aa x Aa) originada una descendencia con 1/4 de plantas prpura (AA), 1/2 de plantas de color pardo (Aa) y 1/4 parte de plantas de color verde (aa). Como es lgico el color pardo aparece como consecuencia de la interaccin de los pigmentos de color prpura (Producido por el alelo A) y verde (producido por el alelo a).Como se puede ver, cuando se

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detecta un carcter nuevo la segregacin genotpica y la fenotpica de la F2 coinciden, de manera que a cada fenotipo le corresponde un genotipo distinto. Coleus

Verde (aa)

Pardo (Aa)

Prpura (AA)

Codominancia: Cuando la accin de los dos alelos presentes en el heterocigoto se manifiesta simultneamente se dice que existe codominancia. Los alelos que se manifiestan simultneamente en el heterocigoto reciben el nombre de codominantes. Un ejemplo tpico de codominancia en la especie humana son los genes responsables de las especificidades antignicas A y B del sistema ABO de los grupos sanguneos. Las personas heterocigticas con sangre del tipo AB presentan simultneamente los antgenos A y B, de manera que ambos alelos se estn expresando en el heterocigoto. La unin entre individuos heterocigotos de tipo AB (AB x AB) da lugar a 1/4 de descendientes de tipo AA 1/2 de individuos de tipo AB y 1/4 de personas BB. Por consiguiente, la segregacin es 1/4 AA 1/2 AB y 1/4 BB. Algunos casos de Dominancia intermedia, pueden ser interpretados como Codominancia, ya que algunos fenotipos de aspecto intermedio entre el de los parentales se pueden producir por la expresin simultnea de ambos alelos en el heterocigoto. El mejor ejemplo de codominancia lo constituyen las isoenzimas. Las isoenzimas son diferentes formas moleculares de una misma enzima que se diferencian entre s por su tamao molecular o por su carga o por ambas causas y que presentan especificidad por el mismo sustrato. Por ejemplo, cuando se analizan las isoenzimas de alcohol deshidrogenasa (ADH) de un individuo, se pueden observar en algunos de ellos tres formas moleculares diferentes, con distinta carga elctrica, pero las tres son capaces de deshidrogenar el alcohol y convertirlo en aldehido. Por tanto, las tres
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formas moleculares o isoenzimas, tienen especificidad por el mismo sustrato, en este caso el alcohol. En los individuos heterocigotos (Aa) se expresan al mismo tiempo el alelo A y el alelo a. Por ejemplo, el alelo A codifica para un polipptido, el simultneamente los polipptidos y

consiguiente, el cruzamiento de dos

heterocigotos (Aa x Aa) da lugar a 1/4 de individuos homocigotos AA (solo con polipptido ), 1/2 de individuos heterocigotos Aa (con ambos tipos de polipptidos, y puede ver, cuando hay Codominancia la segregacin genotpica y la fenotpica de la F2 coinciden, de manera que a cada fenotipo le corresponde un genotipo distinto. Isoenzimas de aconitasa en centeno

De izquierda a derecha hay 11 plantas Se trata de dos loci distintos e independientes. Uno de mayor migracin denominado locus A,a y otro de menor migracin denominado locus B,b. En cada locus existen dos alelos codominantes y se pueden observar individuos heterocigotos (Aa) con dos isoenzimas en el locus A,a, e individuos homocigotos (AA) con una sola isoenzima de mayor migracin e individuos homocigotos (aa) con una sola isoenzima de menor. En los heterocigotos (Aa) se expresan al mismo tiempo el alelo A que codifica para el poiliptido y el a que codifica para el polipptido . Lo mismo sucede en el locus B,b, existe dos alelos codominantes y hay heterocigotos Bb con dos isoenzimas y homocigotos BB y bb con una sola isoenzima..

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Por tanto, hay individuos que pueden presentar cuatro isoenzimas distintas al mismo tiempo, como los diheterocigotos AaBb. La mayora de los marcadores moleculares de ADN, como los RFLPs (Polimorfismos para longitudes de fragmentos de restriccin), los minisatlites y microsatlites (secuencias repetidas en tandem un nmero variable de veces, VNTRs) suelen presentar una herencia de tipo codominante. Para terminar con las interacciones entre alelos del mismo locus, cabe sealar que excepto en el caso de la Dominancia completa en el que la segregacin en F 2 es 3/4 A y 1/4 a, en todas las dems situaciones (Dominancia intermedia, Carcter nuevo y codominancia) la segregacin es 1/4 AA, 1/2 Aa y 1/4 aa. TEMA 15 CITOPLASMA Y HERENCIA Las mitocondrias y los cloroplastos son orgnulos celulares autnomos, ambos poseen ADN que es capaz de replicarse, transcribirse y traducirse

independientemente del nuclear. A la vista de este hecho, podramos pensar, si esos genes contenidos en el cromosoma de mitocondrias y cloroplastos, tuvieran o no influencia en el fenotipo de un individuo. De ser as, su herencia no sera de tipo mendeliana. Los genes nucleares segregan en meiosis, pero los genes de estos orgnulos segregaran en mitosis, cuando se produce la distribucin al azar de los orgnulos celulares. En la fecundacin la aportacin citoplsmica del gameto masculino es muy pequea, s no nula, por lo tanto hemos de pensar que los individuos reciben slo aportacin de mitocondrias y cloroplastos va materna, es decir slo recibe los genes extranucleares de la madre. Un ltimo aspecto a considerar es que si el individuo empieza su desarrollo en el citoplasma del vulo, tendrn influencia las protenas (productos gnicos de genes nucleares maternos) all presentes sobre el fenotipo del individuo?

175

176

Ante estos planteamientos hemos de abordar el estudio de la herencia citoplsmica bajo tres puntos de vista, la herencia debida a las mitocondrias, a los cloroplastos y la influencia del citoplasma en el desarrollo del individuo. Existen mltiples pruebas y experimentos genticos que prueban la influencia del citoplasma en el fenotipo de un individuo cuando consideramos los supuestos anteriores. 15.1 Gentica de los cloroplastos Los cloroplastos eucariticos derivan evolutivamente de las cianobacterias, su ADN es una molcula circular, bicatenaria y que contiene entre 120 y 160 Kpb. Este contenido en ADN es inferior al que presentan las algas verdes, por lo que se supone que a lo largo de la evolucin se ha reducido el tamao del mismo, bien por prdida de material o bien por integracin de genes dentro del genoma eucaritico. El nmero de molculas de ADN por cloroplasto es muy variable. En plantas este
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nmero oscila entre 20 y 60molculas por cloroplasto, mientras que en algas superiores el nmero es mayor. La organizacin es muy sencilla ya que apenas posee secuencias repetidas, aunque en la mayora de las especies vegetales se ha demostrado la presencia de una duplicacin invertida que incluye genes de ARNt. La secuenciacin del ADN de los cloroplastos ha revelado que existen alrededor de 150 genes. Adems de los ARNt y los ARNr hay unos 90 genes que estn implicados en la fisologa de los cloroplastos, principalmente en la fijacin fotosinttica del carbono. Estos genes suelen agruparse en pequeos nichos cuya organizacin se ha mantenido a lo largo de la evolucin. El orden de estos genes dentro del genoma del cloroplasto, no se ha mantenido constante en todas las especies estudiadas, lo cual indica que en el proceso evolutivo han existido variaciones cromosmicas estructurales.

178

Como en todo anlisis gentico, para estudiar la herencia asociada a los cloroplastos, hemos de buscar variantes y estudiar su transmisin. El anlisis ms comn es el que estudia la transmisin del carcter variegado en plantas. En todas las especies vegetales aparecen individuos que presentan en las zonas verdes (tallos, hojas, etc.) una alternancia entre zonas verdes y blancas (variegacin), estas zonas blancas o ms plidas de lo normal, es debido a la constitucin gentica de los cloroplastos.

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Correns estudi la herencia de este fenmeno en Mirabilis jalapa. Esta planta presenta tres tipos de ramas segn su color, verde, variegadas o blancas.

Realiz todos los posibles cruzamientos obteniendo los siguientes resultados: Fenotipo de la rama Fenotipo de la rama Fenotipo de la descendencia Blanca Blanca Blanca

utilizada como hembra Blanca Blanca Blanca

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utilizada como macho Blanca Verde Variegado

Verde Verde Verde Variegado Variegado Variegado

Blanca Verde Variegado Blanca Verde Variegado

Verde Verde Verde Variegado, verde o blanca Variegado, verde o blanca Variegado, verde o blanca

De estos resultados fcilmente se deducen que el fenotipo de la descendencia se encuentra determinado nicamente por el parental femenino. Este tipo de herencia se denomina herencia materna, y en ella el fenotipo de la descendencia es funcin del genotipo materno. En este caso los caracteres verde o blanco estn codificados por dos alelos de un gen del ADN de los cloroplastos. Los nicos cloroplastos que se heredan son los del vulo, el grano de polen no aporta ninguno.

181

15.2 Gentica de las mitocondrias

El ADN mitocondrial fue descubierto por Chevremont en 1972. El nmero de molculas presentes en una mitocondria, as como el tamao depende de las especies. El ADN-mt es una molecula de doble hlice circular que oscila entre 15 18KB (animales), y 250 - 2500 KB en plantas. Cada mitocondria contiene entre decenas y cientos de molculas de este ADN. El ADNmt de clulas animales y de
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las levaduras es bastante similar en su organizacin y contenido, pero distinto al de las plantas. El ADNmt de las plantas es ms grande, con mas secuencias no codificadoras, con ms genes y con distinta organizacin (exones e intrones) en los mismos. La mayora de las protenas presentes en las mitocondrias son de codificacin nuclear, tan slo unas pocas se traducen dentro de la mitocondria.

183

El sistema de traduccin mitocondrial es exclusivo de las mismas (traduccin mit). Los ARNs ribosmicos y de transferencia estn codificados por el ADNmt, y el cdigo gentico utilizado para la traduccin es distinto al universal.

La replicacin de ADNmit de mamferos es tambien especial, empieza en la hlice pesada (H) a partir de un origen especfico que da lugar a un lazo de desplazamiento denominado lazo D. La sntesis de la cadena ligera (L), tambien se inicia en un punto especfico, pero no se inicia hasta que en esa regin no se ha sintetizado la cadena pesada. La transcripcin presenta as mismo sus particularidades, ya que las dos hebras se transcriben totalmente a partir de unos promotores que se encuentran en la regin del lazo D. Estos productos son procesados posteriormente en los ARNr, ARNt y mensajeros que son poliadenilados en el extremo 3'. El ADNmt humano fue secuenciado por el grupo de Sanger en 1981, contine unas 17000 bases, y posee un juego completo de genes para los ARNr de la subunidad grande y pequea, un juego completo de ARNt, e informacin para una docena de genes

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El auge del estudio del ADNmit se ha desarrollado mucho en los ltimos aos del siglo XX, debido principalmente a dos causas. La primera de ellas es su relacin con ciertas enfermedades humanas, que hasta entonces se haban relacionado con la vejez del individuo. Algunas de estas enfermedades tienen su base en el ADNmit, concretamente a un acmulo de mutaciones, como por ejemplo 3 tipos de deleciones, que se van produciendo a lo largo de la vida del individuo. Este
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polimorfismo va dando lugar a una heterogeneidad en la informacin gentica presente en la mitocondria (heteroplasmia) y va produciendo una prdida de la efectividad de la maquinaria energtica celular. Tambin es posible que dicha heteroplasmia est presente en las primeras etapas del desarrollo embrionario, lo cual puede originar una sintomatologa clnica que afectan principalmente al sistema nervioso y al aparato muscular del individuo. La segunda causa del proliferante estudio del ADNmit lo constituye el hecho de que dado que slo se transmite por va materna, su estudio sirve para establecer rboles filogenticos y anlisis evolutivo, en ciertas familias o grupos tnicos. Este tipo de anlisis se realiza tambin en prcticas forenses. El anlisis gentico de la herencia mitocondrial se ha realizado en muchas especies principalmente en levaduras. Existen unos mutantes en Neurospora denominados poky, que se caracterizan por un lento crecimiento, y que tienen deficiencias en la cantidad de citocromos a y b, y un exceso de citocromo c. Cuando se cruzan individuos poky y normales su herencia es de tipo citoplsmico, es decir todos los individuos son iguales al parental femenino. Para demostrar que esos genes estn en el citoplasma y no en el ncleo, el anlisis gentico se suele realizar poniendo tambin un marcador nuclear.

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Los descendientes de cada cruzamiento muestran el carcter poky o normal dependiendo del fenotipo materno, sin embargo muestran el carcter nuclear (ad) con una transmisin mendeliana normal. TEMA 16 DESARROLLO Y EFECTO MATERNO No siempre los efectos maternos son debidos a genes extranucleares. En los organismos multicelulares, en el inicio de su desarrollo embrionario, en el citoplasma estn presentes las protenas y los ARNm codificados por el ncleo. En el embrin las primeras divisiones celulares estn determinadas por la codificacin de genes maternos, y es posteriormente cuando empiezan a expresarse los genes presentes en el feto. Un ejemplo muy interesante de efecto materno debido a genes nucleares maternos, es el que ocurre en los caracoles del gnero Linnaea. Sturtevant en 1923, observ que el enrollamiento de la concha de estos caracoles dependa del genotipo de la hembra utilizada en los cruzamientos.
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La concha de estos caracoles puede enrollarse a derecha o izquierda, el carcter est controlado por un gen con dos alelos. El alelo s+ enrolla hacia la derecha y el recesivo "s" enrolla hacia la izquierda. El momento en que empieza el enrollamiento de la concha, est determinado por los productos gnicos codificados por la madre, no por los del embrin. Es en la siguiente generacin cuando el individuo muestra su genotipo al codificar el enrollamiento de la concha de sus descendientes. Si observamos las generaciones, podemos darnos cuenta que las leyes de Mendel se cumplen pero con una generacin de retraso, la F3 muestra las segregaciones de la F2 mendeliana (3:1), y la F2 es uniforme como la F1 mendeliana. Este tipo de herencia tambin se denomina, por este hecho, herencia retrasada.

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TEMA 17 INICIOS DE LA APARICION DE LOS TRANSGENICOS Con todos los antecedentes anteriores sobre los descrubrimientos de la cruza de especies se inicia la creacin de trangenicos.

El hombre es independiente de las leyes que rigen los equilibrios ecosistemticos, si ello no fuera as, no existiran problemas ambientales, porque las sociedades humanas estaran regidas por las mismas leyes que determinan el crecimiento y el comportamiento poblacional de cualquier especie. Pero el hombre modifica todas las leyes ecosistemticas en funcin de su cultura; lo que sta modifica son todas aquellas regulaciones biofsicas, Inter e intraespecficas que actan sobre los ciclos de la materia y los flujos de la energa en el ordenamiento ecosistemtico. Desde hace miles de aos los agricultores han estado alterando la estructura gentica de los cultivos que siembran. La seleccin efectuada por el hombre para obtener caractersticas tales como el crecimiento ms rpido, semillas ms grandes o frutos ms dulces ha modificado notablemente a las especies vegetales, en comparacin de sus parientes silvestres. El desarrollo en los ltimos aos de las tcnicas de la biologa molecular ha dotado al hombre de herramientas que le permiten acceder y manipular el ADN de los organismos. Una de las aplicaciones de lo que se ha llamado "ingeniera gentica" consiste en el desarrollo de tcnicas moleculares para la modificacin gentica de variedades de plantas, animales y microorganismos utilizados como alimentos o que intervienen en el proceso de obtencin de alimentos. Estos alimentos as obtenidos son llamados alimentos "transgenicos" pues provienen de organismos portadores de material gentico perteneciente a especies no emparentadas que le han sido transferidos por medio de ingeniera gentica; la manipulacin de la informacin gentica de diferentes especies se hace con el fin de mejorar la calidad de vida del hombre; es evidente por ende su uso en la solucin de problemas que aquejan a la sociedad como lo es el hambre.

La tecnologa transgenica permite que organismos que hasta ahora haban estado por completo fuera de la gama de posibilidades de ser donadores de genes pueden ser usados para donar caractersticas deseables a plantas de cultivo. Estos organismos no proporcionan su conjunto completo de genes, mas bien donan solo uno o unos cuantos genes a la planta receptora. Las plantas transgnicas fueron
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creadas por primera vez a comienzos de los aos 80 por cuatro grupos que trabajaban de manera independiente en la universidad de Washington, St. Louis, Missouri, la Rijksunivesiteit en Gante(Blgica), la empresa Mosanto en St. Louis, Missouri, y la universidad de Wisconsin. Estas primeras plantas Transgenicas eran especmenes de laboratorio, pera la investigacin posterior ha desarrollado plantas transgenicas con caractersticas tiles desde el punto de vista comercial, manipulando la informacin interna de los cultivos seleccionados al introducirles cambios de color, sabor, resistencias a plagas obtenidas principalmente de bacterias u otros vegetales con el fin de producir un alimento de mejor calidad tanto en nutrimento como en rendimiento econmico.

Por la reciente aplicacin de esta nueva tcnica en cultivos de consumo humano se han encontrado inconsistencias en los productos resultantes lo que han que algunas comunidades cientficas y grupos sociales se inclinen por la agricultura orgnica; la cual integra los aspectos benficos de la agricultura tradicional (indgena, negra, campesina) y los adelantos cientficos. Busca producir alimentos de la mejor calidad sin alterar el medio ambiente, ni agotar los recursos naturales, evitando todas las formas de contaminacin, manteniendo y ampliando la biodiversidad generando un entorno laboral saludable. El hombre lleva varios miles de aos modificando los vegetales que utiliza como alimento. Tal es el caso de muchas frutas que son productos de mezclas de diferentes plantas.

Se denominan alimentos transgnicos a los obtenidos por manipulacin gentica que contienen un aditivo derivado de un organismo sometido a ingeniera gentica; tambin se llaman as a aquellos que son resultado de la utilizacin de un producto auxiliar para el procesamiento, creado gracias a las tcnicas de la ingeniera gentica. Los objetivos y mejoras principales a los que se apuntaba eran los de obtener mayor vida comercial en los productos, resistencia a condiciones ambientales ms agresivas (heladas, sequas, distintos tipos de suelos), resistencia a herbicidas ms fuertes y potenciar la autodefensa contra plagas e insectos. La biotecnologa de alimentos aplica los instrumentos de la gentica moderna a la mejora de localidad de los productos derivados de las plantas, animales y
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microorganismos. Desde tiempos remotos, l hombre ha seleccionado, sembrando y cosechado las semillas que permiten la obtencin de los alimentos necesarios para el mantenimiento de su metabolismo. De la misma manera, se ha fabricado pan, cerveza, vino o queso sin conocimiento alguno acerca de la ciencia gentica involucrada en estos procesos. Desde muy antiguo, los genes de los alimentos han sufrido una modificacin, destinada a aumentar sus cualidades benficas. La biotecnologa moderna permite a los productores de alimentos hacer exactamente lo mismo en la actualidad, pero con mayor nivel de comprensin y capacidad selectiva. En un principio, el hombre se alimentaba de los animales que poda cazar o de las especies vegetales que crecan en su entorno ms inmediato, Posteriormente se idearon tcnicas para cultivar ciertas plantas. Cuando los primeros seres humanos decidieron establecerse y cultivar sus alimentos, en lugar de vagar para encontrarlos, nacieron la agricultura y la civilizacin. Con el tiempo, los mtodos se han vuelto ms sofisticados, pero todos los intentos por mejorar los cultivos de alimentos han dependido, del enfoque popular de la naturaleza hacia la produccin. Las aves y abejas an permiten a los reproductores cruzar cultivos con sus parientes silvestres. La reproduccin de hbridos desarrolla caractersticas deseables, tales como un sabor ms agradable, un color ms intenso y mayor resistencia a ciertas enfermedades vegetales. La era de los denominados alimentos transgnicos para el consumo humano directo se inaugur el 18 de mayo de 1994, cuando la Food and Drug Adminstration de los Estados Unidos autoriz la comercializacin del primer alimento con un gen extrao el tomate Flavr-Savr; obtenido por la empresa Calgene. Desde entonces se han elaborado cerca de cien vegetales con genes ajenos insertados. Los productos que resultan de la manipulacin gentica se pueden clasificar de acuerdo con los siguientes criterios: Organismos susceptibles de ser utilizados como alimento y que han sido sometidos a ingeniera gentica como, por ejemplo, las plantas manipuladas genticamente que se cultivan y cosechan. Alimentos que contienen un aditivo derivado de un organismo sometido ingeniera gentica.

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 Alimentos que se han elaborado Utilizando un producto auxiliar para el procesamiento (por ejemplo, enzimas), creado gracias a las tcnicas de la ingeniera gentica. Este tipo de sustancias suelen denominarse alimentos recombinantes. Para incorporar genes forneos comestibles en la planta o en el animal, es preciso introducir vectores o parsitos genticos, como plsmidos y virus, a menudo inductores de tumores y otras enfermedades por ejemplo, sarcomas y leucemias. Estos vectores llevan genes marcadores que determinan la resistencia a antibiticos como la kanamicina o la ampicilina, que se pueden incorporar a las poblaciones bacterianas (de nuestros intestinos, del agua o del suelo). La aparicin de ms cepas bacterianas patgenas resistentes a antibiticos constituye un peligro para la salud pblica. Existen diferentes alternativas para conseguir la mejora vegetal mediante la utilizacin de la ingeniera gentica. En el caso de los vegetales con genes antisentido, el gen Insertado da lugar a una molcula de mRNA que es complementaria del mRNA de la enzima cuya sntesis se quiere inhibir. Al hibridarse ambos, el mRNA de la enzima no produce su sntesis. En el caso de los tomates Flavr-Savr la enzima cuya sntesis se inhibe es la poligalacturonasa responsable del ablandamiento y senescencia del fruto maduro. Al no ser activo, este proceso es muy lento, y los tomates pueden recolectarse ya maduros y comercializarse directamente Los tomates normales se recogen verdes y se maduran artificialmente antes de su venta, con etileno, por lo que su aroma y sabor son inferiores a los madurados de forma natural. En este caso, el alimento no Contiene ninguna protena nueva. La misma tcnica se ha utilizado para conseguir soja con un aceite de alto Contenido en cido oleco (89% o ms, frente al 24% de la soja normal), inhibiendo la sntesis deja enzima oleato desaturasa. La introduccin de genes vegetales, animales o bacterianos da lugar a la sntesis de protenas especficas. La soja resistente al herbicida glifosato, Contiene un en bacteriano que codifica la enzima 5enolpiruvil-shikimato-3-fosfato sintetasa. Esta enzima participa en la sntesis de los aminocidos aromticos y la propia del vegetal es inhibida por el glitosato; de ah su accin herbicida. La bacteriana no es inhibida. El maz resistente al ataque de insectos contiene un gen que codifica una protena de Bacillus thuringiensis, que tiene accin insecticida al ser capaz de unirse a
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receptores especficos en el tubo digestivo de determinados insectos, interfiriendo con su proceso de alimentacin y causndoles la muerte. La toxina no tiene ningn efecto sobre las personas ni sobre otros animales. La utilizacin de plantas con genes de resistencia a insectos y herbicidas permite reducir el uso de plaguicidas y conseguir un mayor rendimiento. Adems, se ha obtenido una colza con un aceite de elevado contenido en cido larico, mediante la inclusin del gen que determina la sntesis de una tioesterasa de cierta especie de laurel. Los vegetales resistentes a los virus se consiguen haciendo que sinteticen una protena vrica que interfiere con la propagacin normal del agente infeccioso. Estos vegetales contienen protena vrica, pero en menor proporcin que las plantas normales cuando estn severamente infectadas. Los vegetales transgnicos ms importantes para la industria alimentaria son, por momento, la soja resistente al herbicida glifosato y el maz resistente al insecto conocido como taladro. Aunque en algunos casos se emplea la harina, la utilizacin fundamental del maz en relacin con la alimentacin humana es la obtencin del almidn, y a partir de ste, de glucosa y de fructosa. La soja est destinada a la produccin de aceite, lecitina y protena. 17.1 Caractersticas modificadas en cultivos masivos Las aplicaciones de la ingeniera gentica reconocidas para obtener productos de caractersticas mejoradas son las siguientes: Apio - Zanahoria: - Prolongar el caroteno crujiente en el momento de ser ingerido. Achicoria (radicheta): - Incremento de la dulzura en su sabor. Caf: - Mejorar la resistencia al ataque de insectos, - Incrementar el rinde productivo. (Rendimiento de la plantacin y la cosecha), - Reforzar el aroma, - Reducir el contenido de cafena. Maz: - Incrementar la resistencia al ataque de insectos.
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Papas: - Potenciar su resistencia a ser afectada por virus, - Aumentar su resistencia al ataque de insectos, - Reducir su capacidad de absorcin de aceites (durante la fritura), - Obtener variedades mas dulces, Soja: - Reducir la necesidad de utilizacin de fertilizantes, - Favorecer su resistencia a herbicidas mas selectivos, - Incrementar su aporte nutritivo aumentando su valor proteico, - Eliminar los componentes causantes de alergias. Uvas: - Conseguir nuevas variedades sin semillas

17.1.1 Los ingredientes Son sustancias transgnicas ms habituales y a tener en cuenta al momento de leer una etiqueta de alimentos son los siguientes:

lecitina de soja protena vegetal texturizada protena texturada de soja dextrosa aceite vegetal hidrogenado emulsificante - protena de soja aislada, harina de soja

Actualmente la mayora de los productos contienen bases de soja o lecitina de soja, y suelen aparecen camuflados bajo la inscripcin 322. Por ejemplo, en la Repblica Argentina, la zona donde existen cultivos de semillas y productos genticamente alterados es la de la pampa hmeda y sobre el total de la produccin de su zona, el proporcional de productos transgnicos es el siguiente:

Soja: 85% Maz: 20%

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Algodn: 0,9%

17.2 Obtencin De Alimentos Transgnicos Conociendo pues donde esta la informacin necesaria que determina las caractersticas de un individuo, se han desarrollado tecnologas de ingeniera gentica, basadas en el conocimiento de los genes y la biologa de los seres vivos, mediante las cuales es posible manipularlos de tal manera que se puedan introducir nuevos genes que sean funcionalmente iguales a los que posea previamente el individuo manipulado pero que le confiera una caracterstica especial que antes no posea. 17.2.1 Mtodos de obtencin La tecnologa del ADN interviene en este proceso ya que existen mtodos para la insercin en plantas de nuevos genes y por tanto modificacin de estas: Mtodo fsico: se trata de un metos balstico (bombardeo con partculas) mediante el cual se realiza un disparo de una secuencia de ADN que se desea insertar a un tejido concreto de la plata con semillas vegetales. Un pequeo cilindro de acero que contiene una carga de polvora se usara para disparar sobre la clulas diana particfulas revestidas con cido nucleico. Las partculas bombardean las clulas transpasando las paredes celulares y las membranas sin provocar realmente la muerte de las clulas.

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Agrobacterium tumefaciens: esta bacteria tiene la capacidad de atacar ciertas plantas e insertar trazas de su propio ADN que se comporta como parte del ADN de la planta. Por este mecanismo de accin, la planta posee un nuevo genotipo (puesto que tiene unos genes de mas que antes no posea). Los cientficos han utilizado esta bacteria para transferir genes exgenos en plantas de formacin dirigida. Se puede exponer las clulas de una planta al efecto de una bacteria Agrobacterium que haya sido modificada previamente y por tanto se le haya insertado una secuencia de ADN conocida igual que si fuera propio y de esta manera ser pasado a todas las nuevas clulas. Este proceso puede utilizarse para crear nuevos fenotipos en plantas. En ambos casos, muchos genes que se ha intentado insertar no se expresan correctamente en plantas, esto es debido a que necesita de una pequea secuencia anicial llamada promotor y que permite que la informacin que hay en el gen sea procesable, ya que el sistema de procesamiento de la planta va a reconocer esta pequea secuencia como propia pudiendo expresar aquello que lleve detrs de ella. Existen distintos promotores, actualmente se utiliza en plantas el promotor p35S que proviene del virus del mosaico de la cliflor. Es un promotor constitutivo, esto es, que puede expresar todo lo que lleva detrs de el en el cualquier tejido de la planta. Del mismo modo debe llevar la secuencia de un fracmento pequeo de terminacin de lectura.

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17.2.2 Diagrama de la clula de Agrobacterium tumefaciens El ADN de una clula de A. tumefaciens est contenido en el cromosoma bacteriano y en otra estructura llamada plsmido Ti (inductor de tumores). El plsmido Ti contiene:

un segmento de ADN llamado ADN-T (~20 kb de largo) que es transferido a la clula de la planta en el proceso de la infeccin.

una serie de genes vir (de la virulencia) que dirigen el proceso de la infeccin.

La bacteria A. tumefaciens slo puede infectar a una planta a travs de lesiones. Cuando la raz o el tallo de una planta sufren una lesin, emite ciertas seales qumicas. En respuesta a esas seales los genes vir de A. tumefaciens se activan y dirigen una serie de acontecimientos necesarios para la transferencia del ADN-T desde el plsmido Ti al cromosoma de la planta. Distintos genes vir:

Copian el ADN-T.

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Unen un producto a la hebra del ADN-T copiado para que acte como lder. Agregan protenas a lo largo del ADN-T, posiblemente como mecanismo de proteccin.

Abren un canal en la membrana celular bacteriana a travs del cual pasa el ADN-T.

El ADN-T entra entonces en la clula de la planta a travs de la lesin. No est claro cmo el ADN bacteriano se traslada desde el citoplasma al ncleo de la clula de la planta, ni cmo el ADN-T se integra en el cromosoma de la planta. Recuerde que la mayora de las veces el ADN de la planta no existe como una hebra expuesta sino que est envuelto con las protenas histonas y tiene una estructura superarrollada. Una hiptesis es que el ADN-T espera hasta que el ADN de la planta est siendo replicado o transcripto y entonces se inserta en el ADN expuesto de la planta. Para utilizar A. tumefaciens como vector del transgen, los cientficos han eliminado la seccin de ADN-T inductora de tumores y han conservado las regiones fronterizas del ADN-T y los genes vir. El transgen es insertado entre las regiones fronterizas del ADN-T, desde donde es transferido a la clula de la planta para integrarse en los cromosomas de sta.

Agalla de la corona de la frambuesa causada por Agrobacterium tumefaciens. 17.3 Localizacin De Los Genes Que Determinan Las Caractersticas De Las Plantas La identificacin y localizacin de los genes que determinan caractersticas importantes desde el punto de vista agrcola es la etapa ms limitante en el proceso transgnico. Todava sabemos relativamente poco acerca de los genes especficos necesarios para aumentar el potencial de rendimiento, mejorar la tolerancia a los
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factores desfavorables, modificar las propiedades qumicas del producto cosechado o de alguna otra forma afectar las caractersticas de la planta. En general, no basta identificar a un solo gen relacionado con una caracterstica; los cientficos deben conocer cmo est regulado el gen, qu otros efectos podra tener en la planta y cmo interacta con otros genes activos en la misma va bioqumica. Los programas pblicos y privados de investigacin estn invirtiendo mucho en tecnologas nuevas que permitan establecer con rapidez la secuencia y determinar las funciones de los genes de las especies cultivadas ms importantes. Estos esfuerzos deben conducir a la identificacin de una gran cantidad de genes en potencia tiles para producir variedades transgnicas. 17.3.1 Diseo de genes para la insercin Una vez que se ha aislado y clonado (amplificado en un vector bacteriano) un gen, debe ser sometido a varias modificaciones antes de que pueda ser efectivamente insertado en una planta.

17.3.1.1 Representacin simplificada de un transgen construido, que contiene los componentes necesarios para la integracin y expresin con xito. 1. Es preciso agregar una secuencia promotora para que el gen sea expresado correctamente (es decir, traducido como un producto protenico). El promotor es la llave de encendido y apagado que controla cundo y dnde se expresar el gen en la planta. Hasta la fecha, la mayora de los promotores en las variedades de cultivos transgnicos han sido "constitutivos", es decir, que causan la expresin del gen durante todo el ciclo biolgico de la planta en la mayora de los tejidos. El promotor constitutivo usado ms comnmente es CaMV35S, proveniente del virus del mosaico de la coliflor, que generalmente produce un alto grado de expresin en las plantas. Otros promotores son ms especficos y responden a seales indicadoras en el medio interno o externo de la planta. Un ejemplo de un promotor inducible por la luz es el promotor del gen "cab", que codifica la principal protena fijadora de clorofilas a y b.
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2. A veces, el gen clonado es modificado para lograr una mayor expresin en una planta. Por ejemplo, el gen Bt para la resistencia a los insectos es de origen bacteriano y tiene un porcentaje ms elevado de pares de nucletidos A-T, en comparacin con las plantas, que prefieren los pares de nucletidos G-C. En una modificacin inteligente, los investigadores sustituyeron los nucletidos A-T con nucletidos G-C en el gen Bt, sin modificar considerablemente la secuencia de aminocidos. El resultado fue una mayor produccin del producto gnico en las clulas de la planta. 3. La secuencia de terminacin indica a la maquinaria celular que se ha alcanzado el final de la secuencia gnica. 4. Se agrega un gen marcador seleccionable al "constructo" gnico con el fin de identificar las clulas o tejidos de la planta que han integrado con xito el transgen. Esto es necesario porque rara vez se produce la incorporacin y expresin de transgenes en clulas de plantas, que se logran en apenas un pequeo porcentaje de los tejidos o clulas beneficiarios. Los genes marcadores seleccionables codifican protenas que proporcionan resistencia a agentes normalmente txicos para las plantas, como los antibiticos o herbicidas. Como se explica ms adelante, slo las clulas vegetales que han integrado el gen marcador seleccionable sobrevivirn cuando se las cultive en un medio que contenga el antibitico o herbicida pertinente. En cuanto a otros genes insertados, los genes marcadores tambin requieren secuencias promotoras y de terminacin para funcionar en forma apropiada. 17.4 Seleccin y regeneracin Seleccin de tejidos transformados con xito: Despus del proceso de insercin del gen, los tejidos de la planta son transferidos a un medio selectivo que contiene un antibitico o un herbicida, segn el marcador seleccionable que se us. Slo las plantas que expresan el gen marcador seleccionable sobrevivirn, como se muestra en la figura, y se supone que estas plantas tambin poseern el transgen de inters. Por lo tanto, en los pasos subsiguientes del proceso se utilizarn nicamente estas plantas sobrevivientes.

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Cuando se los cultiva en medios selectivos, slo sobrevivirn los tejidos de las plantas que han integrado con xito el constructo del transgen. Regeneracin de plantas completas: Para obtener plantas completas a partir de tejidos transgnicos como los embriones inmaduros, se cultivan stos en condiciones ambientales controladas en una serie de medios que contienen nutrimentos y hormonas, proceso conocido como cultivo de tejidos. Una vez que se generan plantas completas y stas producen semillas, comienza la evaluacin de la progenie. Este paso de la regeneracin ha sido un obstculo al producir plantas transgnicas en muchas especies, pero ahora se pueden transformar y regenerar variedades especficas de la mayora de los cultivos. 17.5 El fitomejoramiento y las pruebas Un elemento intrnseco de la produccin de plantas transgnicas es el extenso proceso de evaluacin para verificar si el gen insertado se ha incorporado de manera estable sin efectos nocivos sobre otras funciones de la planta, la calidad del producto o el agroecosistema para el cual est destinado. La evaluacin inicial incluye prestar atencin a:

La actividad del gen introducido La herencia estable del gen Efectos no buscados sobre el crecimiento de la planta, el rendimiento y la calidad

Cuando una planta pasa estas pruebas, lo ms probable es que no sea usada directamente para la produccin del cultivo sino que ser cruzada con variedades mejoradas. Sucede esto porque slo unas cuantas variedades de un determinado cultivo pueden ser transformadas eficientemente y estas variedades en general no
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poseen todas las cualidades que los productores y consumidores esperan encontrar en las variedades modernas. La cruza inicial con la variedad mejorada debe ser seguida de varios ciclos de cruzamientos repetidos con el progenitor mejorado, proceso conocido como retrocruzamiento. La meta es recuperar tanto como sea posible del genoma del progenitor mejorado, con el agregado del transgen del progenitor transformado. El prximo paso del proceso son los ensayos en mltiples sitios y en mltiples aos tanto en el invernadero como en los campos para comprobar los efectos del transgen y el desempeo general de la planta. Esta fase incluye tambin la evaluacin de los efectos ambientales y la inocuidad alimentaria. 17.5.1 La ingeniera gentica salta las barreras de las especies

Es muy posible que uno de los principales factores que contribuyeron al reciente incremento tanto del alcance como de la frecuencia de la transferencia horizontal de genes sean los actos deliberados de los cientficos de la ingeniera gentica para saltar las barreras de las especies. Para ello construyen una serie de vectores sintticos para la clonacin y transferencia de genes, los cuales tienen las siguientes caractersticas que aumentan la transferencia horizontal de genes:

Ya han sido derivados de elementos que median ms efectivamente en la transferencia horizontal de genes. Su naturaleza artificial significa que poseen homologas de secuencias de ADN de una amplia variedad de especies diferentes y sus patgenos, plsmidos y transposons virales, facilitando as una exitosa recombinacin y transferencia horizontal de genes. Habitualmente contienen genes marcadores con resistencia a antibiticos que aumentan las posibilidades de transferencia ante la presencia de antibiticos, ya sean aplicados intencionalmente en el ambiente o como xenobiticos. Con frecuencia tienen orgenes de replicacin y secuencias de transferencia, todo lo cual facilita la transferencia y la recombinacin de genes horizontales. En este contexto, el hecho de que sean "lisiados" de manera de eliminar su movilidad y/o virulencia, es irrelevante ya que pueden ser ayudados por otros virus, plsmidos y elementos genticos mviles presentes en el donante, el
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husped o una tercera cepa de bacterias. Por otra parte, los genes virulentos pueden ser recuperados por recombinacin. Es ampliamente conocido que los plsmidos y vectores virales sintticos estn sujetos a una inestabilidad estructural que los hace ms propensos a recombinarse. La inestabilidad de los vectores es un problema permanente para los ingenieros genticos y la industria de la biotecnologa en lo que tiene que ver con la estabilidad de los genes transferidos. Tambin aumenta la probabilidad y el alcance de la transferencia horizontal de genes secundaria y no intencional. Por ltimo, los vectores estn destinados a escapar a las restricciones, con lo cual tambin aumenta la probabilidad de ltransferencia horizontal de genes.

La construccin de vectores sintticos es fundamental para la ingeniera gentica. Para construir vectores se ha usado toda clase de elementos genticos que median en la transferencia horizontal de genes: plsmidos, fagos, transposons, ms una gama de virus patgenos de plantas y animales. Como se establece en un texto estndar sobre manipulacin gentica: "Varios virus de animales han sido sojuzgados como vectores.

Prcticamente todos los virus que han sido estudiados en detalle y que tienen un genoma ADN o un estadio ADN en su ciclo de replicacin, han sido manipulados de esta forma".

Si bien se distinguen distintas clases de vectores sobre la base de la secuencia marco principal, prcticamente todos son sintticos. Los vectores sintticos importantes son los vectores lanzadera, que permiten la clonacin (multiplicacin) de genes del E. coli y su transferencia a especies no emparentadas.

De igual modo, los vectores utilizados en la manipulacin de plantas y animales suelen contener secuencias de una variedad de patgenos virales de plantas y animales, as como genes con resistencia a los antibiticos, a menudo originados de plsmidos y transposones promiscuos con resistencia.

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Los vectores fagos y los vectores fsmidos (hbridos de fagos y plsmidos) tambin son ampliamente utilizados y pueden tener especial importancia para la evolucin de las islas patognicas de los patgenos bacterianos.

La ingeniera gentica abri ya no puertas sino autopistas para la transferencia y recombinacin de genes horizontales, donde previamente haba slo un acceso restringido a travs de senderos estrechos y tortuosos.

Estas autopistas de transferencia de genes conectan diversas especies con las poblaciones microbianas a travs del vehculo de mezcla universal, el E. coli.

Consideramos que hay pruebas circunstanciales de que los vectores sintticos de transferencia de genes aumentan el espectro y la frecuencia de la transferencia horizontal de genes.

17.5.2 Vectores sintticos de transferencia de genes aumentan la transferencia horizontal

No es fcil transferir genes entre especies ya que hay barreras que impiden o por lo menos dificultan mucho la transferencia horizontal de genes, por lo que sta, aparte de los transposons que son promiscuos, ocurri muy pocas veces en la evolucin de nuestro planeta.

Por ejemplo, diversos anlisis de 145 secuencias de genes globina invertebrados demostraron que probablemente hubo dos casos de transferencia horizontal de genes, uno, del ancestro comn de los ciliares y las cloroficeas o algas verdes al ancestro de las cianobacterias, y el otro del ancestro de las levaduras al ancestro de las bacterias.

Probablemente siempre existieron vectores naturales de transferencia de genes virus, plsmidos y transposons-, especialmente en las especies microbianas; pero en diverso grado eran especficos del husped, de manera que la frecuencia de las transferencias por apareamientos fue mayor entre las mismas especies que con otras especies.

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Los vectores naturalmente aislados -incluso los que llevan genes con resistencia a antibiticos y por lo tanto ya sufrieron una evolucin por transferencia horizontal de genes- no exhibieron la misma amplia variedad de capacidad de transferencia.

Se demostraron directamente transferencias de genes horizontales entre bacterias del medio marino, de agua dulce y del suelo. Nuevamente, en todos los experimentos las transferencias horizontales de genes estuvieron mediadas por vectores plsmidos hbridos construidos especialmente, del tipo utilizado en la ingeniera gentica.

La transferencia horizontal de genes ocurre preferentemente en las zonas de contacto de aire y agua, y en el sedimento, y especialmente en condiciones de agotamiento de los nutrientes, refutando as el argumento de que son necesarios medios ricos en nutrientes para apoyar la transferencia horizontal de genes.

Se ha demostrado la transferencia horizontal de genes con resistencia a antibiticos en los estanques de tratamiento de aguas residuales, cuyo efluente se utiliza cada vez ms para el riego en los pases en desarrollo.

De hecho, las frecuencias de la transferencia horizontal de genes puede ser mayor en condiciones naturales que en el laboratorio.

La transferencia horizontal de genes no est limitada al entorno externo. Ha sido demostrada entre las bacterias del intestino de ratones y pollos, y las del intestino y el tracto urogenital y respiratorio del ser humano.

Stephenson y Warnes escribieron: "La amenaza de que ocurra una transferencia horizontal de genes de organismos recombinantes a organismos indgenas es muy real y existen mecanismos por lo cuales, por lo menos tericamente, cualquier caracterstica manipulada genticamente puede ser transferida a cualquier organismo procariota y a varios eucariotas".

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Un ao despus, otro genetista molecular que trabaja en plantas transgnicas admiti que "el potencial para la transferencia horizontal puede ser mayor de lo que se haba pensado anteriormente". 17.5.3 Avances futuros en la tecnologa transgnica Las tcnicas nuevas para producir plantas transgnicas mejorarn la eficiencia del proceso y contribuirn a mitigar algunas de las inquietudes en cuanto a efectos sobre el medio ambiente y la salud. Entre los cambios previstos estn los siguientes:

Una transformacin ms eficiente, es decir, un porcentaje ms elevado de clulas de la planta incorporarn con xito el transgen.

Mejores genes marcadores para reemplazar el empleo de genes de la resistencia a antibiticos.

Mejor control de la expresin gnica mediante promotores ms especficos, de tal modo que el gen insertado ser activo slo cuando y donde se requiera.

Transferencia de fragmentos de ADN de mltiples genes para modificar caracteres ms complejos.

17.5.3.1 Algunos hallazgos cientficos Las cepas de bacterias biolgicamente "lisiadas" en el laboratorio a menudo pueden sobrevivir en el medio ambiente e intercambiar genes con otros organismos. Los mtodos habituales de desactivacin qumica pueden dejar hasta un 10 por ciento de los virus y otros agentes patgenos en estado infeccioso. Los lmites legales para las "liberaciones toleradas" de la utilizacin confinada exceden ampliamente la dosis infecciosa mnima de algunos agentes patgenos: 10.000 unidades formadoras de colonia/ml en el aire o el agua contra una dosis ineficaz mnima de 50 bacterias para el E.coli 0157:H7. El ADN liberado de las clulas vivas y muertas persiste en el ambiente y se transfiere a otros organismos. El ADN viral desnudo y el ADN vector pueden ser ms infecciosos y tienen un mayor espectro de huspedes que el virus. El vector ADN resiste la digestin en el intestino del ratn, ingresa a la corriente sangunea donde infecta los glbulos blancos o leucocitos, las clulas del bazo y el hgado, y se integra al genoma de las clulas del ratn.
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17.6 Riesgos de la Biotecnologa de los alimentos La introduccin de genes nuevos en el genoma de la planta o del animal manipulado provoca transformaciones impredecibles de su funcionamiento gentico y de su metabolismo celular; el proceso puede acarrear la sntesis de protenas extraas para el organismo responsables de la aparicin de alergias en los consumidores; la produccin de sustancias txicas que no estn presentes en el alimento no manipulado, as como alteraciones de las propiedades nutritivas (proporcin de azcares, grasas, protenas, vitaminas, etc.). Hay suficientes peligros reales como para afirmar que estos alimentos no son seguros. Las experiencias pasadas con biocidas como el DDT, aconsejan una prudencia extrema. Junto a los riesgos sanitarios, la amenaza para el medio ambiente es, incluso, ms preocupante La extensin de Cultivos transgnicos pone en peligro la biodiversidad del planeta potencia la erosin y la contaminacin gentica, adems del uso de herbicidas (un importante foco de contaminacin de las aguas y de los suelos de cultivo). Segn un informe de la OCDE, el 66% de las experimentaciones de campo con cultivos transgnicos que se realizaron en aos recientes estuvieron encaminadas a la creacin de plantas resistentes a herbicidas La Agencia de Medio Ambiente de Estados Unidos advierte de que este herbicida de amplio espectro ha situado al borde de la extincin a una gran variedad de especies vegetales del pas; por otro lado, est considerado uno de los ms txicos para microorganismos del suelo, Como hongos, actinomicetos y levaduras. Otra de las preocupaciones fundadas es el posible escape de los genes transferidos haca poblaciones de plantas silvestres, relacionadas con dichos cultivos transgnicos, mediante el flujo de polen: la existencia de numerosas hibridaciones entre si todos los cultivos transgnicos y sus parientes silvestres ha sido bien documentada La introduccin de plantas transgnicas resistentes a plaguicidas y herbicidas en los campos de cultivo conlleva un elevado riesgo de que estos genes de resistencia pasen, por Polinizacin cruzada a malas hierbas silvestres emparentadas crendose as las denominadas sper malas hierbas, capaces de causar graves daos en plantas y ecosistemas naturales. A su vez, estas plantas transgnicas con caractersticas nuevas pueden desplazar a especies autctonas de sus nichos ecolgicos.La liberacin de organismos modificados genticamente al medio ambiente tiene consecuencias a menudo
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imprevisibles, pues una vez liberados el animal o la planta,se reproducen y se dispersan por su hbitat, imposibilitando cualquier control. Algunos de los peligros de estos cultivos para el medio ambiente y la agricultura son el incremento del uso de txicos en la agricultura, la contaminacin gentica, la contaminacin del suelo, la prdida de biodiversidad, el desarrollo de resistencias en insectos y "malas hierbas" o los efectos no deseados en otros organismos. Los efectos sobre los ecosistemas son irreversibles e imprevisibles. Los riesgos sanitarios a largo plazo de los OMG presentes en nuestra alimentacin o en la de los animales cuyos productos consumimos no se estn evaluando correctamente y su alcance sigue siendo desconocido. Nuevas alergias, aparicin de nuevos txicos y efectos inesperados son algunos de los riesgos. Los OMG refuerzan el control de la alimentacin mundial por parte de unas pocas empresas multinacionales. Los pases que han adoptado masivamente el uso de cultivos transgnicos son claros ejemplos de una agricultura no sostenible. En Argentina, por ejemplo, la entrada masiva de soja transgnica exacerb la crisis de la agricultura con un alarmante incremento de la destruccin de sus bosques primarios, el desplazamiento de campesinos y trabajadores rurales, un aumento del uso de herbicidas y una grave sustitucin de la produccin de alimentos para consumo local. La solucin al hambre y la desnutricin pasa por el desarrollo de tecnologas sostenibles y justas, el acceso a los alimentos y el empleo de tcnicas como la agricultura y la ganadera ecolgicas. La industria de los transgnicos utiliza su poder comercial e influencia poltica para desviar los recursos financieros que requieren las verdaderas soluciones. Defendemos la aplicacin del Principio de Precaucin y nos oponemos por lo tanto a cualquier liberacin de OMG al medio ambiente. Los ensayos en campo, incluso a pequea escala, presentan igualmente riesgos de contaminacin gentica, por lo que tambin deben prohibirse.

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17.6.1 La produccin de transgnicos produce reacciones negativas en la salud humana. Si un gen animal se introduce en un vegetal, puede traer graves consecuencias su consumo en la salud humana. El frijol transgnico de EMBRAPA que contiene un gene extrado de una castaa caus en los Estados Unidos reacciones alrgicas a los consumidores. Las investigaciones realizadas en 1998 demostraron que la papa transgnica con genes que producen lecitina (protena que destruye las clulas del sistema inmunolgico), puede modificar el metabolismo humano. Durante cien das, el investigador Arpad Pusztai aliment a ratas con estas papas transgnicas y el resultado fue el retardo del crecimiento de las ratas y menor resistencia a las infecciones. Consumir productos transgnicos puede ocasionar la resistencia a los antibiticos. Los caballos alimentados con transgnicos han mostrado alteraciones del sistema inmunolgico y endiversos rganos vitales. Como consecuencia de introducir genes extraos en los alimentos, se pueden padecer alergias a los alimentos. Por otro lado, la introduccin de nuevas protenas a los alimentos pueden aumentar la potencia de algunas sustancias txicas que ya existen en los alimentos. Otras sustancias del cuerpo que protegen contra el cncer podran verse disminudas. Existen pruebas cientficas de la accin cancergena de los niveles actuales de residuos de glifosato permitidos por ley, mientras quien produce este herbicida, Monsanto, exige que se multiplique por diez el nivel de residuo permitido en la soya transgnica resistente a este herbicida. A finales de los aos 80, una empresa japonesa utiliz bacterias trasngnicas para producir un suplemento alimenticio que se venda sin receta en los Estados Unidos. De ello murieron 37 personas y al menos mil 500 padecieron una grave enfermedad de la sangre. Tambin la hormno artificial BST que se inyecta a las vacas para producir ms leche podra aumentar el riesgo de cncer en seres humanos. Los transgnicos tienen el potencial a aumentar la toxicidad de los alimentos, especialmente los cultivos Bt. Es decir, no se puede lavar los productos de Bt, tienen la toxina en cada clelua, aumentando riesgo/delacin/exposicin a tales toxinas. Los riesgos son mayores por los nios y ancianos. Varias toxinas Bt son alergenes o sospechadas alergenes, incluyendo la protena Cry9C del cultivo de maz "Starlink" de la empresa Aventis. Starlink es aprobado solo para forraje y usos industriales,
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pero no por consumo humano. En el ao 2000, Starlink entr al sistema alimentario de los Estados Unidos en varios productos de maz. El Departamento de Alimentos y Medicamentos (FDA) revoc ms de 300 productos en los supermercados contaminado con Starlink. La crisis de Starlink provoc la prohibicin de este producto en varios pases en Europa, Japn, Coreo de Sur, El Salvador, entre otros. Tambin hay reportajes que Starlink, por medio de polinizacin abierta, ha contaminado miles de costales de semillas para la siembra de este ao, hasta otras especies de maz. Es posible que cada da estemos consumiendo alimentos con O.G.M. sin saberlo, desconociendo los riesgos a que estamos sometidos. Segn Philippe Dejonghe, de " Recherche et Developpement Vandemortele ", de Blgica, dentro de 10 aos entre el 80 al 90% detodos los alimentos humanos estarn compuestos con O.G.M. Actualmente los O.G.M. estn en tomates, maz, las papas, el tabaco, algodn, la leche, soja, etc. pueden estar en la mantequilla, harina, margarina, el pan, los quesos, el jugo, la salsa, el chocolate, el dulce, el aceite, alimentos para nios, comidas rpidas, platos preparados, en fin, en cualquier comida o bebida.

Hasta ahora las repercusiones de los alimentos con O.G.M. en la salud humana son desconocidas, sin embargo, los cientficos reconocen que pueden producir varias alergias.

El 90% de las plantas son genticamente manipuladas por razones puramente econmicas, para el beneficio de sus productores, sin ningn inters de mejorar la CALIDAD. Las compaas de biotecnologa alegan falsamente que sus genticos naturales. Sin embargo las transferencias de genes de cruce de especies que se estn realizando, como entre cerdos y plantas, o peces y tomates, nunca sucederan en la naturaleza y pueden permitir transferirse enfermedades y debilidades entre especies, con efectos tan desastrosos como se han visto en BSE - enfermedad de las vacas locas. El conejillo de indias en esta experimentacin arriesgada es todo el pblico.

Los efectos daosos para la salud ocasionados por la ingeniera gentica

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continuarn siempre. Las compaas de biotecnologa alegan que sus mtodos son precisos y sofisticados. De hecho hay un elemento insercin del gen. Son inevitables los efectos secundarios y los accidentes y los riesgos se han evaluado cientficamente como ilimitados.

A diferencia de la contaminacin qumica o nuclear, la contaminacin gentica no puede recogerse; y los efectos txicos de equivocaciones genticas se pasarn a todas las futuras generaciones de una especie.

Los productos genticamente diseados conllevan ms riesgos que alimentos tradicionales.

Las compaas de biotecnologa dicen que los riesgos de los nuevos alimentos genticamente diseados son similares a los riesgos planteados por todos los alimentos: pero la experiencia ha mostrado que el proceso de ingeniera gentica introduce nuevos alergenos y toxinas peligrosos en alimentos que eran anteriormente naturalmente seguros.

17.6.1.1 Colapso catastrfico del balance fisiolgico humano.

El Triptfano genticamente diseado ha matado 37 personas e incapacitado permanentemente a 1,500. Otros efectos txicos resultarn inevitablemente de otros nuevos alimentos. La investigacin gentica indica que muchas enfermedades tienen su origen en minsculas imperfecciones del cdigo gentico.

Manipular con el cdigo gentico de cualquier forma trastornar el delicado balance entre nuestra fisiologa y los alimentos que comemos.

La estructura gentica de las plantas ha nutrido la humanidad por milenios. Cambiar repentinamente casi todos los alimentos mediante la ingeniera gentica es una amenaza muy peligrosa e irrevocable para la vida.

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TEMA 18 LOS ALIMENTOS GENTICAMENTE DISEADOS ESTN SIENDO INTRODUCIDOS SIN ETIQUETAR.

Las compaas de biotecnologa falsamente afirman que no se requiere ninguna etiquetacin, alegando que no hay diferencia material entre alimentos genticamente modificados y sus contrapartidas naturales. De hecho, la inteligencia gentica natural de alimentos, acumulada en millones de aos, est siendo alterada.

Los gobiernos apoyan las compaas de biotecnologa e ignoran los derechos de los consumidores a ser informados. Sin etiquetar, las causas de nuevas enfermedades pueden ser muy difciles de rastrear.

Por un lado, mientras todos los alimentos deberan etiquetarse fielmente, los alimentos genticamente diseados deberan prohibirse totalmente para proteger la vida.

Cuestiones ticas que afectan a vegetarianos, grupos religiosos, y defensores de los derechos de los animales.

Las compaas de biotecnologa alegan que el ADN de planta y animal son similares y que no hay cuestin tica cuando se transfieren molculas de ADN animales a plantas. Sin embargo, en los mtodos genticos se encuentran experimentaciones con animales que transfirieren informacin gentica nica de los animales a las plantas.

La transferencia gentica entre especies y la competicin de nuevas especies perjudiciales para el ambiente.

Despus de la introduccin en plantas, bacterias, insectos, u otros animales, la nueva informacin gentica se transferir a las formas relacionadas de vida, mediante procesos como la polinizacin cruzada, o desplaza a otras especies del ecosistema con efectos desastrosos como ocurre con las bacterias Klebsiella modificadas genticamente.

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18.1 Amenaza global al abastecimiento alimenticio de la humanidad.

Las compaas gigantes transnacionales de biotecnologa ya controlan grandes segmentos del abastecimiento alimenticio del mundo incluyendo patentes

alimentarias, compaas de semillas, y otros aspectos de la cadena alimentaria. Estn introduciendo productos genticamente diseados experimentales sin verificacin en un peligroso experimento global.

Si las intenciones de la industria se llevan a cabo, casi todos los alimentos que comemos se alteraran dentro de unos aos. Este cambio radical en el abastecimiento alimenticio de la humanidad resultar en muchos problemas irrevocables e inesperados tales como serias escaseces alimentarias y amenazas para la salud de amplias dimensiones.

Seis corporaciones agroqumicas gigantes se encuentran preparadas para dominar la produccin mundial de alimentos con productos elaborados a travs de la ingeniera gentica. Los resultados podran ser millones de agricultores

desempleados, pases pobres que pierden mercados completos de exportacin, una revuelta de consumidores en Europa y la concentracin de la agricultura en pocas manos.

La escala y velocidad con la que la revolucin de alimentos se abre paso en los Estados Unidos, est sorprendiendo a los gobiernos, industrias y analistas.

Las compaas sostienen que este ao se han sembrado ms de 30 millones de acres con cultivos producto de la ingeniera gentica; tres veces ms que en 1996 y con una cantidad de acres diez veces mayor que en 1995. "Se espera que el mercado se duplique nuevamente el prximo ao", seal un vocero de la empresa qumica y de biotecnologa Monsanto.

En gran Bretaa, se han estado desarrollando cultivos experimentales y se espera que los primeros permisos comerciales para las semillas producidas con ingeniera gentica sean aprobados en los primeros meses del prximo ao por la Unin Europea.

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La inversin de ocho mil millones de dlares realizada por la compaa Monsanto con sede en Estados Unidos, con los conglomerados internacionales Norvatis, AgroEvo, Dupont, Zeneca y Dow detrs de ella, crea polmicas de influencia corporativa en los gobiernos. La campaa para propulsar la ingeniera gentica ha involucrado una gran aprobacin de las organizaciones comerciales, cuerpos reguladores, legisladores, medios de comunicacin, y de los consumidores.

Las compaas afirman que las nuevas tecnologas no perjudican el ambiente y que producirn beneficios a la salud, tales como el final del hambre en el mundo y la reduccin en el uso de pesticidas.

Grupos

internacionales

de

consumidores

aconsejan

tomar

precauciones,

considerando que los valores cientficos, ticos y sociales se estn pasando por alto. Segn palabras de Julie Shepherd, de la Asociacin de Consumidores, " Los cientficos y la industria estn tomando decisiones por parte de los consumidores, con una mnima deliberacin pblica".

De la misma manera, la Profesora Vandana Shiva, Directora del Instituto de Investigaciones Cientficas y Tecnolgicas en Delhi afirma: Esto se sumar al hambre. Millones de pequeos agricultores, sin acceso a los avances tecnolgicos y a los mercados mundiales, se vern incapacitados para competir".

En un anlisis de los cambios que estn tomando lugar en la industria mundial de alimentos, el diario Guardian descubri lo siguiente: Una puerta giratoria entre el gobierno norteamericano y la industria biotcnica; Una gran aprobacin para reescribir los estndares de seguridad de alimentos en favor de la biotecnologa; Nueva leyes para proteger de la crtica a la industria norteamericana de alimentos; Problemas ambientales inesperados ; Contratos legales que limitan a los agricultores a un control corporativo de produccin ; Intentos por parte de las compaas PR para inclinar las deliberaciones a favor de la ingeniera gentica; El uso de organizaciones mundiales para retar a aquellos gobiernos que vayan en contra de los cultivos modificados genticamente; Consumidores a los que no se les proporcionar una seleccin efectiva de alimentos ; Miedo a que las economas de los pases en vas de desarrollo se vean adversamente afectadas. La revolucin se basa simplemente

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en una manipulacin de genes que modifica las semillas para as resistir a los herbicidas patentados por las mismas compaas.

Detrs de la visin de cultivos ms productivos que necesitan menos pesticidas, se est peleando una encarnizada batalla sobre la produccin de alimentos. El precio para la industria dominada por los Estados Unidos es un mercado mundial de 400 mil millones de dlares.

18.2 Los Transgnicos En Mxico

Un 96.5% de los consumidores mexicanos ignora qu son los transgnicos o no sabe si los que est comiendo y en qu alimentos, en tanto que un 98 % de los mexicanos opina que las empresas deben informar en sus etiquetas si sus productos contienen transgnicos.

Mxico importa de Estados Unidos ms de 6 millones de toneladas de maz cada ao, de las cuales un 45 por ciento son de maz transgnico.En nuestro pas est prohibido sembrar maz transgnico porque somos el centro de origen del maz y es necesario proteger nuestras variedades de maces mexicanos de la contaminacin transgnica que puede producirse si el polen del maz transgnico se cruza con el de nuestras variedades nativas e hbridas. Sin embargo, se han otorgado permisos para siembra no comercial de soya y algodn transgnicos. La autoridad sanitaria permite la comercializacin para consumo humano de 31 transgnicos de soya, canola, maz, algodn, papa, jitomate y alfalfa. Estos ingredientes entran en nuestras dietas sin control alguno y sin nuestro consentimiento expreso. 18.3 Ley Mosantos Cuando el 29 de enero de 2000 se firm y dio origen al Protocolo de Cartagena, fue aclamado ampliamente como una victoria de quienes queran poner freno a los transgnicos u organismos modificados genticamente (OMG). El Protocolo tena limitaciones y lagunas por llenar, pero en general haba acuerdo en que supona que el trabajo futuro en materia de bioseguridad estaba bien encaminado incorporando el principio de precaucin, reconociendo la importancia de consideraciones
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socioeconmicas y consultas pblicas y dejando la puerta abierta para que los pases instrumentaran reglamentaciones ms estrictas que el mnimo establecido en el Protocolo. Nada espectacular, pero por lo menos un piso mnimo a partir del cual construir.

Cinco aos despus, gran parte de este proceso multilateral est obstaculizado. La ltima ronda de negociaciones se frustr por apenas un par de pases que actuaron en nombre de la industria de la ingeniera gentica y todos los indicios sealan que este tipo de tctica se est intensificando. Por lo tanto, las posibilidades de avances futuros en las negociaciones son restringidas. Pero lo que es mucho peor, a nuestro juicio, es que el Protocolo no est generando la legislacin anticipada efectiva a escala nacional. Vemos que en pas tras pas se instalan leyes y polticas que facilitan el ingreso de cultivos transgnicos, an cuando los gobiernos proclaman su preocupacin por la bioseguridad y su adhesin al Protocolo. Los pueblos latinoamericanos llaman a estas leyes, las Leyes Monsanto.

Los cultivos transgnicos son completamente incompatibles con los principios de la soberana alimentaria. Los cultivos transgnicos son creaciones patentadas de una industria de alta tecnologa, que no pueden integrarse a los sistemas agrcolas de base local y dirigidos por los agricultores, sin perjudicarlos. En efecto, los cultivos transgnicos son una amenaza decisiva para esos sistemas. Los cultivos transgnicos plantean riesgos inherentes riesgos a la salud, riesgos ambientales, riesgos socioeconmicos y riesgos culturales. No hemos visto un solo cultivo transgnico en el mercado o en trmite de investigacin, que justificara tales riesgos, en especial para pases pobres con grandes poblaciones agrcolas. En este contexto, un rgimen de bioseguridad verdaderamente efectivo mantendra alejados a los cultivos transgnicos. No es posible tener las dos cosas a la vez: si entran los cultivos transgnicos, entonces la bioseguridad queda fuera. El problema es que los gobiernos crecientemente presionados por el agresivo grupo de inters de la industria de la ingeniera gentica cada vez ms a menudo hacen lo contrario: utilizar la legislacin en materia de bioseguridad para santificar el ingreso de los cultivos transgnicos.

El senado mexicano hizo odos sordos a la oposicin generalizada de acadmicos, agricultores y ecologistas y el 15 de febrero de 2005 aprob una ley de bioseguridad
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y transgnicos. Denominada la Ley Monsanto por la sociedad civil, es dbil en numerosos sectores, desde sus deficientes reglamentaciones en materia de etiquetado hasta su falta de un rgimen efectivo de responsabilidad y reparacin. En esencia, la ley facilita a la industria la aprobacin de sus cultivos transgnicos. Pero hay una intensa oposicin a los cultivos transgnicos en Mxico, especialmente desde que se descubri que las variedades tradicionales del centro de origen del maz fueron contaminadas con variedades transgnicas. Las autoridades han sabido de la contaminacin desde el ao 2001, pero todava no han adoptado medidas. Esta nueva ley bsicamente legaliza esa contaminacin y valida la situacin actual de impunidad.

A principios de 2006 se presentaron dos iniciativas en el Senado para que dicha ley establezca que el etiquetado de transgnicos sea obligatorio y as se respete a cabalidad el derecho legtimo e incuestionable de las personas a saber y decidir qu es lo que se comen. Considero que es muy importante prestar atencin al etiquetado: las etiquetas deberan decir cmo han sido obtenidos los productos y qu caractersticas especiales incorporan frente a los convencionales. De lo contrario se estara violando con el artculo 4 de la Ley 24.240 de Defensa del Consumidor que dice: quienes produzcan, importen, distribuyan o comercialicen cosas o presten servicios, deben suministrar a los consumidores o usuarios, en forma cierta y objetiva, informacin veraz, detallada, eficaz y suficiente sobre las caractersticas esenciales de los mismos. Por otro lado, el artculo 42 de la Constitucin Nacional, norma suprema, se vera vulnerado tambin ya que ste establece que los consumidores y usuarios de bienes y servicios, en la relacin de consumo, tienen derecho a la proteccin de su salud, seguridad a una informacin adecuada y veraz; a la libertad de eleccin. En nuestro pas, no es obligatorio el etiquetado indicando si el alimento ha sido genticamente modificado. En mi opinin, no se debera adquirir nunca productos sin ningn tipo de etiquetado. Adems, debemos enterarnos de si los productos han provocado algn tipo de rechazo hacia el gen extrao.

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TEMA 19 MTODOS DE ANALISIS Frete a la creciente alarma social despertada, debido a la necesidad por parte de las empresas que comienzan a comercializar este tipo de productos as como aquellas que lo utilizan como ingrediente en el producto final, se han desarrollado nuevos mtodos analticos basadas bsicamente en la deteccin de ADN transgnico y/o protenas transgnicas en alimentos primarios fundamentalmente y recientemente en alimentos procesados que ya se encuetran incluidas en los cdigos alemn y suizo como mtodos oficiales de anlisis, adems de existir proyectos en ejecucin con el objeto de desarrollar mtodos oficiales de anlisis.

Cada uno de estos mtodos se basa en dos tcnicas especficas, y a su vez existen distintas formas de abordar una tcnica. En lneas generales, para la deteccin de protenas de transgnicas se utiliza la tcnica de ELIZA (Enzyme Linked Immunosorbant Assay) y el LFA (Later Flow Strip), mientras que para la deteccin de ADN transgnicos se utiliza la PCR (Polymerasa Chain Reaction) y el Southem Blot.

19.1 Mtodos Analticos Basados En La Deteccin De Adn

Corrientemete,

cuando

el

alimento

ha

sido

procesado

bien

tratado

tecnolgicamente (calor, presin, etc.) es conveniente realizar el anlisis de ADN y no de poteina ya que esta puede haberse desnaturalizado o degradado en el proceso, y los mtodos analticos de protena requieren que esta se mantenga funcional. El ADN cambio puede haberse fragmentado durante el proceso en trozos pequeos pero ello no implica necesariamente que no puedan ser detectados.

19.1.1 Southern blot

PCR (reaccin en cadena de polimerasa) Fundamento: la tenica de PCR es un mtodo enzimtico que permite copiar de forma experimental una zona concreta de un genoma pudindose obtener hasta cien mil copias de ella en un tubo de ensayo. La PCR hace uso de la enzima ADN polimerasa escapaz de copiar molculas de ADN. La tcnica requiere que se conozca la secuencia de nucletidos de una regin del gen deseado, puesto que paraqu funcione la PCR es preciso disponer de cortos
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oligonucleidos iniciadores (trozo muy pequeos de ADN), complementarios de secuencias presentes en el gen o gnes de inters a partir de los cuales la ADN polimerasa ira incorporando nucletidos complementarios a la cadena que copia. Del mismo modo es necesario que en el tubo de ensayo hay nucleidos en cantidad equimolar.

Este proceso de copia es posible gracias a la utilizacin de equipos denominados termocicladores, que permite la propagacin de ciclos sucesivos con grandientes de tiempo/temperatura controlados.

El fundamento de la PCR se puede resumir en las siguientes etapas:

1.- El ADN diana se calienta para separar las dos hebras y, junto al ADN polimerasa, se aade un exceso de iniciadores complementarios a la cadena del ADN diana. 2.- Una vez unido el iniciador, la extensin de este proporciona una copia del ADn de doble cadena. 3.- Un calentamiento, y la posterior unin y extensin del iniciador, proporciona un segundo ADN de doble cadena. 4.- El segundo ADN de doble cadena sufre un proceso igualal indicado en los puntos anteriores. 5.- Dos ciclos adicionales de PCR rinden 8 y 16 copias respectivamente de la secuencia del ADN original. Posteriores ciclos incrementan en progresin goemtrica el nmero de copias.

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19.1.1.1 Etapas de anlisis

En el punto anterior comentamos la esencia de la PCR, sin embargo, para realizar completamente un anlisis de PCR se tequiere de unos previos al comentado anteriormente y otros posteriores que viene detallados en el siguiente esquema y que bsicamente constan de:

-Extraccin del ADN total. -Amplificacion de una zona concreta del ADN.
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Visualizacin de los fragmentos amplificados en un equipo de elctroforesis.

19.1.2 Aplicacin de la PCR ala deteccion de alimentos transgnicos

La PCR es un mtodo my sensible para la deteccin de alimentos transgnicos, ya que puede localizar especficamente cualquier gen del que se conozca su secuencia.

En los alimentos transgnicos, como ya se comento anteriormente, hay secuencias exgenas que corresponden a un promotor, al gen de inters y a un terminador.

Cuando se esta realizando un estudio de unos alimentos del que se desconoce que gen se ha introducido, se debe realizar un estudio de screening se basa en la deteccin del promoto p35s como se describe en el protocolo del estudio de validacin realizado por el Instituto Para La Salid Y Proteccin Del Consumidor.

Adems de este mtodo tambin se dispones de kits desarrollados para el anlisis de cualquier tipo de alimentos en los que pueden estar presentes ingredientes procedentes de material transgnico.

En todos los casos es necesario disponer de material de referencia con distintas concentraciones de ADN transgnico como el desarrollado por el Instituto Para Materiales De Referencia Y Medidas De La Comisin Europea.

Los ensayos de cada nuestra se analizan por duplicado y los presuntos positivos, se confirma mediante un anlisis de restriccin consiste en utilizar una enzima que a una temperatura determinada dicide especficamente el fragmento p35s, en dos fragmentos de una longitud en pares de base dterminada y que son detectados tambin por anlisis electrofortico, o bien se complementan con deteccin colorimtrica a travs de marcadores especficos.

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19.2 Equipo necesario e instalaciones

Si se desea incorporar esta tcnica al laboratorio se debe tener encuenta una inversin importante en equipos a si como en cambios y distribucin determinada del laboratorio. Los equipos indispensables en la tenica vienen detallados en la siguiente tabla:

Del mismo modo, al ser una tcnica muy sensible, existe un riesgo alto en la contaminacin. Para evitar esto aparte de utilizar controles en todod los anlisis, deben de existir en el laboratorio zona aislada que para realizar de las distintas etapas del anlisis asi como en la preparicion de lso distintos reactivos.

19.3 Metedo de anlisis basado en la deteccin de protenas

Unos de los mtodos ms utilizados para la deteccin de protenas es ELISA. Sin embargo, como alternativa a este mtodo, ha aprecido un sistema llamado LFA cuya diferencia fundamental es el formato ya que la base es la misma: deteccin de protenas usando anticuerpos de la protena de inters.

El LFA es un mtodo de captura que utiliza una convinacion de anticuerpos inmovilizados en un soporte solido. Sin embargo es un mtodo recin desarrollado y requiere de validaciones previas antes de ser utilizado como metod de rutina analtica.

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19.3.1 ELISA Los anlisis ELISA detectan o miden la cantidad de protenas de inters en una muestra que puede contener numerosas protenas distintas. Se utiliza un anticuerpo fijado al pocillo que se une especficamente a la protena transgnica, un segundo anticuerpoconjugado a una enzima cuyo producto genera un color que es visible al aadir un sustrato determinado y fcilmente cuantificable basado en la comparacin de una curva patrn de protena de inters.

Del mismo modo que la PCR, la tcnica de ELISA requiere de personal capacitado y equipo especializado. Las caractersticas claves de esta tcnica son las siguientes: Menos sensible que la PCR, sin embargo esto puede ser una ventaja en algunos casos ya que es menos suscptibles a falsos positivos Se necesita desarrollar previamente anticuerpos que reconozcan

especficamente la protena transgnica que se desee. Por lo tanto no puede utilizarse este mtodo como tcnica de screening. Por otra parte aunque el desarrollo de anticuerpos es una labor cuanto menos tediosa, una vez desarrollados, el resto de rectivos resultan mucho mas econmicos y rapidos que los utilizados en la PCR. Estos mtodos basados en la localizacin de la protena son aplicables simpre y cuando la protena no haya sufrido ninguna desnaturalizacin en el proceso de manipulacin del alimento (calentamiento y enfriamiento, presado, etc).
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19.3.1.1 ELISA aplicado actualmente a la deteccin de alimentos transgnicos El nico limite tesnico para utilizar este mtodo como anlisis rutinarios es que se debe de conocer que protena concreta se ha debido modicar en cada caso, y se deben desarrollar anticuerpos frente a esa protena. El desarrollo de estos anticuerpos es posteriror a las exigencias marcadas por la ley, que en la actualidad en Europa se aplican a la protena Bt-176 del maz y la CP4EPSPS (roundup ready) expresada en soja.

Actualmente se dispone de anticuerpos para la deteccin de la protena modificada en soja (grano, harina, concentrado, aislado) y en breve espacio de tiempo se espera dispone de los anticuerpos que reconocen la Bt-176 del maz.

TEMA 20 POR QU ES MEJOR NO COMER TRANSGNICOS?

Adems de los grandes riesgos para el medio ambiente, la principal razn para evitar los transgnicos en los alimentos es la gran incertidumbre cientfica que existe en torno a estos productos. Hasta la fecha, no se han hecho las pruebas y estudios necesarios para garantizar cientficamente que su consumo no tendr efectos nocivos a mediano y largo plazo.

La industria biotecnolgica, interesada en vender trans-gnicos, ha sealado que no hay datos para confirmar daos en la salud, pero tampoco existen datos cientficos publicados que Gua roja y verde de alimentos transgnicos garantice que no los habr. La ausencia de datos no significa ausencia de riesgos.

La experiencia con otras tecnologas nos obliga a tener precaucin. Un ejemplo claro es el de los plaguicidas y agro-txicos que hace 40 aos se vendan como solucin a diversos problemas rurales y se afirmaba que no entraaban riesgos ni causaban daos a la salud. Tras dcadas de aplicarlos sin control se confirmaron mltiples daos al medio ambiente y a la salud, por lo que ahora muchas de estas sustancias estn prohibidas, reguladas o en proceso de ser retiradas del mercado.

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En nuestro pas la autoridad sanitaria encargada de protegernos contra riesgos sanitarios NO realiza ninguna investigacin propia sobre los transgnicos: para autorizar el consumo de estos organismos, se basa en la informacin presentada por las compaas creadoras de los transgnicos interesadas en comercializarlos. Por esta irresponsabilidad, en Mxico nadie sabe quines estn comiendo transgnicos, cmo y en qu cantidades. Los propios consumidores ignoramos si los hemos comido y en qu cantidades. Sin este monitoreo bsico ser muy difcil o imposible documentar qu ocurre con quienes comen transgnicos y actuar en caso de que stos provoquen daos a la salud.

La investigacin cientfica sobre la seguridad de los transgnicos y sus impactos en los mexicanos debe realizarse en nuestro pas de manera imparcial, independiente y con un sentido de inters pblico. En tanto dicha investigacin cientfica no se lleve a cabo, los consumidores preocupados por su salud y la de su familia rechazan consumir transgnicos.

20.1 Los Transgnicos Crean Problemas, No Los Resuelven Los transgnicos no son ms que una forma nueva de concentrar la riqueza en manos de muy pocas transnacionales biotecnolgicas y agroalimentarias como Monsanto, Syngenta (antes Novartis), Dupont (al que pertenece Hbridos Pioneer), Bayer Crop Science y Dow. No se ha constatado que los rendimientos de las cosechas aumenten con las plantas transgnicas, pero s que disminuyen en muchos casos. En Estados Unidos se dan prdidas de produccin en soya transgnica de hasta 7% con respecto a la soya convencional. En Mxico los transgnicos no le sirven a la mayora de los agricultores mexicanos que tienen pequeas parcelas de tierra sembradas con cultivos diversos (frijol, haba, calabaza, quelites, adems de maz), bajo condiciones ambientales variables, inadecuadas para los transgnicos existentes.

Adems, la mayora de los campesinos mexicanos no pueden financiar el paquete tecnolgico (diseado para grandes superficies de monocultivo que cuentan con riego, maquinaria, fertilizantes y herbicidas) indispensable para que los transgnicos sean altamente productivos. De ah que esa propuesta tecnolgica resulte excluyente para los campesinos de autoconsumo, que son la mayora.

225

Segn el agroeclogo Vctor M. Toledo, los transgnicos slo podran beneficiar a unos cuantos agroindustriales mexi-canos, poniendo en riesgo a ms del 80 por ciento de los campesinos, a todos los consumidores y al ambiente.

Los transgnicos no producen ms ni ayudan a la soberana alimentaria de los pueblos; por el contrario, ponen la produccin de alimentos bajo el control de unas cuantas transnacionales. Para realmente acabar con el hambre en el mundo es necesario un sistema de comercio justo, equitativo y sustentable, as como polticas pblicas que promuevan la capacidad de cada pas de producir sus propios alimentos sanos y de distribuirlos con justicia.

20.2 Como puedo dejar de comer transgnicos? La primera sugerencia para NO comer transgnicos es preferir los alimentos frescos preparados en casa y evitar los alimentos industrializados, que pueden contener ingredientes transgnicos. Esta sencilla accin puede garantizar una alimentacin sana al evitar tambin el exceso de azcares, grasas parcialmente hidrogenadas (trans), aditivos, colorantes y conservadores que contienen los alimentos industrializados.

En nuestros mercados y tianguis tradicionales podemos comprar alimentos naturales frescos, productos elaborados a mano y alimentos preparados sin transgnicos.La segunda sugerencia es buscar y preferir los alimentos orgnicos. La certificacin y denominacin de orgnicos reconocida internacionalmente prohbe la utilizacin de transgnicos -o derivados de stos- en los productos de la agricultura y la ganadera. La agricultura orgnica tampoco permite el uso de hormonas, plaguicidas y agroqumicos que dejan residuos txicos en los alimentos.

La produccin de autoconsumo de pequeas huertas, ejidos y tierras comunales indgenas y campesinas puede ser orgnica, sin que su productor conozca la palabra o haya certificado su produccin. Organizaciones ambientales, sociales, redes de productores y empresarios responsables crearon el sello Sin OGMs libre de transgnicos para identificar en el mercado a productos de agricultura no orgnica que s garantizan ser libres de transgnicos. Busca y prefiere a los productos con este sello.
226

Para el medio ambiente, la economa y la salud de todos no hay nada mejor que comer lo que el propio pas produce. Pero para ampliar las opciones de alimentos sin transgnicos, hemos agregado varias marcas de alimentos importados de Europa, Canad y Asia que han sido clasificados como rojos o verdes de acuerdo a los compromisos pblicos y garantas que esas compaas le han dado a Greenpeace en sus pases de origen. En el mercado mexicano es posible adquirir alimentos importados de los 25 pases miembros de la Unin Europea, en donde (salvo los quesos y los crnicos) es obligatorio informarle al consumidor si los productos contienen transgnicos, por lo que para saber si un producto contiene estos ingredientes basta leer la etiqueta.

Mientras los diputados y senadores mexicanos esta-blecen como obligatorio el etiquetado de transgnicos al que tenemos derecho, los consumidores podemos protegernos de los transg-nicos eligiendo a las compaas que s nos informan y que se comprometen a no usar este tipo de ingredientes riesgosos.

20.3 Alimentos Transgenicos Ahora Disponible En Su Supermercado Greenpeace Mxico le ha solicitado formalmente a las compaas productoras de alimentos listadas en esta informacin sobre su poltica de utilizacin de ingredientes transgnicos o sus derivados en los productos que venden al pblico mexicano.

ACEITES
No utilizan transgnicos - Crisol -Todos los de aguacate, ajonjol, avellana, oliva, crtamo y girasol 100% puros. -Oleico Si utilizan transgnicos Aceite 1-2-3 Capullo La Nia Maceite Mazola La patrona Maravilla Primor

BEBES
Todos los productos de Gerber Enfapro Kindercal Miel Karo (Unilever) Nan (Nestl)

BEBIDAS
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 Lul Nectasis Pascual Boing

Ades

Clide Coca Cola

Delaware Punch Enerplex (Sabormex) Fanta Clight Florida 7 Frisco Gatorade Jumex Limolin Mirinda Pepsi Senzao Soyl Bbere CapriSun Fresca Frut Jugos del Valle Kool-Aid Manzana Lift Nestea Powerade SlimFast (Unilever) Sprite Tang

BOTANAS
BigMix (Barcel) Chicharrones (Barcel) Chip-otles (Barcel) Churritos (Barcel) Ondas (Barcel) Piquechos cronchers (Barcel) Quechitos cronchers (Barcel) Takis (Barcel) Tronix (Barcel) Tostachos (Barcel) Xplosivos

cronchers (Barcel) Cheetos Chips (Bimbo) Doritos Mafer Ruffles

Golden Nuts (Bimbo) Planters (Kraft) Sabritas

Tostitos Tostilunch

CHOCOLATES
Choco Dillis Ferrero Prestige Kinder Bueno Chocolate Ferrero Fiesta Ferrero Rocher Kindeer Kinder Chocolate Maxi Abuelita Cal-C-tose Carlos V Chocomilk Hersheys Milo

Kinder Delice Kinder Sorpresa Kinder Joy

228

La Vaquita Wongs

 Mon Amour Raffaello

Nutella

Nesquik

CARNES Y HUEVO
Bachoco Chimex Carnes Fras Fud Iberomex

Oscar Mayer Salchichas Viva San Antonio San Rafael Tangamanga

CEREALES
All Bran (Kelloggs) All Bran Orginal (Kelloggs) All Bran Linaza (Kelloggs) All Bran Yogurt fresa (Kelloggs) All Bran Flakes Natural Original (Kelloggs) All Bran barra natural (Kelloggs) All Bran barra linaza (Kelloggs) All Bran barra pasas (Kelloggs) All Bran barra chocolate (Kelloggs) Azucaradas (Maizoro) Basic 4 (Nestl) Basix (Nestl) Cereales Post (Kraft) Ciniminis (Nestl) Cookie crisp (Nestl) Corn Flakes (Kelloggs) Corn Flakes (Maizoro)(Kelloggs) Extra (Kelloggs) Extra tentacin (Kelloggs) Extra delicia (Kelloggs) Fibrauno (Nestl) Froot Loops (Kelloggs) Froot Loops barra (Kelloggs) Go! (Kelloggs) Gold (Nestle)
229

 Honey Smacks (Kelloggs) Kellness Granola (Kelloggs) Kellness Muslix chocolate (Kelloggs) Kellness Muslix tradicional (Kelloggs) Lucky Charms (Nestl) Madagascar (Kelloggs) Manzana All Bran flakes (Kelloggs) Nesquick (Nestl) Nutrida amaranto (Kelloggs) Nutrida chocolate (Kelloggs) Nutrida linaza integral (Kelloggs) Nutrida yogurt (Kelloggs) NutriK (Kelloggs) Nutrigrain Ciruela pasa (Kelloggs) Nutrigrain Ciruela pasa (Kelloggs) Nutrigrain Fresa (Kelloggs) Nutrigrain Manzana (Kelloggs) Nutrigrain Pia (Kelloggs) Princesas (Kelloggs) PoohHunnyBs (Kelloggs) Pop tarts canela (Kelloggs) Pop tarts chocolate Pop tarts fresa Raisins All bran flakes (Kelloggs) Rice krispies (Kelloggs) Quaker (PepsiCo) Trix (Nestl) Trix con yogurt (Nestl) Starwars (Kelloggs) Wheat Bran (Maizoro) Zucaritas (Kelloggs) Zucaritas Instant (Kelloggs) Zucosos (Nestl) Corn Flakes (Nestl) Corn Pops (Kelloggs) Count Chocula (Nestl)
230

 Crusli (Kelloggs) Crusli barra (Kelloggs) Chocapic (Nestl) Cheerios(Nestl) ChocoKrispies (Kelloggs) ChocoKrispies barra (Kelloggs) ChocoKrispies instant (Kelloggs) Chocoleche (Kelloggs) Choco Zucaritas (Kelloggs) Choco Zucaritas con malvaviscos (Kelloggs) Chokos (Kelloggs) Eggo (Kelloggs) Eggo waffles casero (Kelloggs) Eggo waffles mantequilla (Kelloggs) Eggo waffles minis

CERVEZAS
Cerveza Cosaco Carta Blanca Corona Estrella Modelo Superior XX Lager Indio Sol Tecate

CONGELADOS
Helados duros, suaves y paletas de Nutrisa Helados Santa Clara. La huerta Nutrifresco Nutriverde Comida refrigerada Chepina Peralta Helados Hagen Dazs Helados Holanda Helado Frizy (Nestl) Helado Crunch (Nestl)

DULCES, MERMELADAS Y POSTRES.

Aciditas ACME polvo ACME lquido Gelatinas DGari Minas de Frutas Spider Blast
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Canderel Clemente Jacques mermelada Equal Flan Lala Gelatinas Yomi (Lala) Jell-o

 Spider Legs Sussly Plus Sussly Light Sussly cubos de azcar Sussly azcar mascabado Tamborines Tamboreta Tama Chew Tamarrific Tic Tac

Kraft mermelada Laposse McCormick Mermelada Marinela (Bimbo) Nutra Sweet Pronto Productos de leche Coronado (Bimbo) Ricolino (Bimbo) Sonrics

ENLATADOS Y CONSERVAS.
Del Fuerte Embasa La Gloria Clemente Jacques (Sabormex) Herdez La Costea Rag (Unilever) Mostaza Kraft

HARINAS, TORTILLAS Y GRANOS.

Tortillas Nuestro maz Tortillas y ms Verde Valle Harina de arroz Tres Estrellas Harina de amaranto Quali Harina de amaranto Quali Hot cakes Aunt Jemima Hot cakes Pronto Hot cakes Tres Estrellas Maizena (Unilever) Maseca Minsa Frijoles La Sierra (Sabormex)

LCTEOS.
Todos los productos de Alpura Crema Chantilly LeChef Mantequilla La Gloria Margarina Untarella Todos los productos de Santa Clara Activia Becell (Unilever) Bio4 Chalet Chamito Cheese Wiz (Kraft) Choco Lala Country Valley
232

 Danone Danone Fruix Danonino Danup Iberia (Unilever) Kraft Singles Lala Licuado Lala Shot Lala Yogurt Licuado La villita Leche batida Lala Leches Maquiatto Licuado Nestl Natillas Yoplait (Sygma Alimentos) Nido Petite Suisse Primavera (Unilever) Quesos Nochebuena Yocreme Yogurt Nestl Yomi Lala bebible Yomi Lala Yop Yoplait Yopli Yopsi Vitalinea Zizi (Kraft)

MAYONESAS, SALSAS Y ADEREZOS.

Mayonea orgnica Heinz Las mayonesas preparadas con aceite de oliva Lee Kum y konig Bfalo (Herdez) Catsup Clemente Jacques (Sabormex) Doa Chonita Doa Mara (Herdez) Frenchs Hellmans (Unilever)
233

 Mayonesa McCormicks (Herdez) Mayonesa La Costea Salsa de soya Kikkoman

PAN Y GALLETAS.
Pan Filler MacMa Galletas de amaranto Quali sabor canela Galletas Santiver Galletas Gullon Galletas y panes Casado Bimbo El Globo (Bimbo) Empanizador Kellogs Lonchibon (Bimbo) Galletas Kraker Bran Galletas Lara Galletas Marian Galletas Nabisco (Kraft) Galletas Oreo Galletas Ritz (Kraft) Todas las galletas Gamesa (PepsiCo) Poptarts (Kellogs) Ta Rosa Suandy (Bimbo) Wonder

SOPAS, PASTAS.
La Moderna Nissin, todos los sabores menos el sabor Tlalpeo Pastas Cora Pinerollo Sopainstant (Gallina Blanca) Gallina Blanca Avecrem (Gallina Blanca) Frescavida (Gallina Blanca) El Pavo (Gallina Blanca) Sopas Santiver Sopas Gallo Sopa Gullon Sopas Knorr (Unilever) Maggi Maruchan Nissin, sabor Tlalpeo Rosa Blanca

234

20.4 Normativa sobre etiquetado de alimentos transgnicos La normativa actualmente vigente establece que:

Slo es obligatorio el etiquetado especfico, indicando que puede contener organismos modificados genticamente (OMGs), cuando pueda ser detectado en el alimento el ADN modificado por la manipulacion gentica o las proteinas procedentes de este ADN modificado.

Queda excluido de la obligatoriedad en el etiquetaje todos aquellos alimentos donde no pueda encontrarse el ADN y/o las proteinas extraas, aunque utilicen en su composicin componentes provenientes de OMGs como lecitinas, y aceites y grasas vegetales.

Quedan expresamente excluidos del etiquetado obligatorio los componentes de alimentos, aunque estos procedan de OMGs, que sean clasificados en la industria alimentaria como aditivos de alimentos, saborizantes de alimentos y disolventes utilizados en la industria del procesado de alimentos.

En la prctica, esta normativa deja fuera de la obligatoriedad del etiquetado aproximadamente al 90% de los alimentos comerciales que contienen OMGs o componentes de OMGs.

235

1. Absorbancia: Razn entre las radiaciones totales absorbidas e incidentes

2. Acido adenlico:

3. Acido fosfrico: Son productos formados por la sustitucin de parte o todo el hidrgeno del cido fosfrico por metales. Segn el nmero de tomos de hidrgeno sustituidos, el compuesto obtenido se define como fosfato primario, secundario o terciario. As, NaH2PO4, con un tomo de hidrgeno sustituido, se denomina fosfato primario de sodio (tambin dihidrogenofosfato de sodio), y Na3PO4, con tres tomos de hidrgeno sustituidos, fosfato terciario de sodio.

4. cido nitroso: Se trata de un agente mutgeno que provoca la desaminacin oxidativa de la adenina y la citosina, originando transiciones.

5. Actinomicetos: son un grupo de bacterias de mayora filamentosa, que tienen similitud con los hongos, por la morfologa, tipo reproduccin y crecimiento en medios de cultivo slidos y lquidos, son procariotes que mineralizan la materia orgnica que hongos y bacterias verdaderas

generalmente no degradan.

6. Adenina: base nitrogenada que forma parte de los cidos nucleicos ADN y ARN. Se une a la guanina en el ADN.

7. ADN: Molecula de la herencia, costituida por una dodle cadena en forma de hlice, en la que las bases nitrogenadas se enlazan por medio de puentes de hidrogeno: adenina con timina y guanina con citosina.

8. ADN-A: ADN con 75% de humedad, requiere Na, K o Cs como contraiones, presenta 11 pares de bases por giro completo y 23 de dimetro. Es interesante por presentar una estructura parecida a la de los hbridos ADNARN y a las regiones de autoapareamiento ARN-ARN.

236

9. ADN-B: ADN en disolucin, 92% de humedad relativa, se encuentra en soluciones con baja fuerza inica se corresponde con el modelo de la Doble

10. ADN-C: ADN con 66% de humedad, se obtiene en presencia de iones Li, muestra 9+1/3 pares de bases por giro completo y 19 de dimetro.

11. ADN cuadruplexo: "In vitro" se han obtenido cuartetos de Guanina (ADN cuadruplexo) unidas mediante enlaces tipo Hoogsteen, empleando

polinucletidos que solamente contienen Guanina (G).

12. ADN con enrollamiento paranmico: Las dos hlices se pueden separar por traslacin, cada hlice tiene segmentos alternantes dextrorsos y sinistrorsos de unas cinco bases.

13. ADN espaciador: el cual est formado por una secuencia sencilla de bases que
se dispone entre regiones codificantes del genoma

14. ADN de cloroplastos (ADNcp): de las clulas de plantas es una molcula doble hlice circular que posee un tamao que vara entre 120 y 160 Kpb.

15. ADN dplex:

16. ADN mitocondrial (ADNmt): es una molcula doble hlice circular cuyo tamao vara de unas especies a otras.

17. ADN polimerasa:

18. ADN-r:

19. ADN-5 S:

20. ADN triple hlice o ADN-H: "In vitro" es posible obtener tramos de triple hlice intercalando oligonucletidos cortos constituidos solamente por

pirimidinas (timinas y citosinas) en el surco mayor de una doble hlice.

237

21. ADN-Z: doble hlice sinistrorsa (enrollamiento a izquierdas), 12 pares de bases por giro completo, 18 de dimetro, se observa en segmentos de ADN con secuencia alternante de bases pricas y pirimidnicas

(GCGCGC), debido a la conformacin alternante de los residuos azcarfosfato sigue un curso en zig-zag.

22. Alanina:

23. Alelo: es la forma alternativa para un mismo gen, que codifica la informacin para dos o ms formas diferentes de una misma caracterstica.

24. Alrgeno:

25. Alociclia:

26. Aminocidos:

27. Anafase:

28. Anillos de balbini:

29. Antibitico: Compuesto natural o sinttico que inhibe el crecimiento o mata algunos
microorganismos. Los antibiticos se utilizan en medicina de manera generalizada para el control de bacterias patgenas, pero stas por mutacin pueden adquirir con

rapidez resistencia a determinados antibiticos.

30. Anticodones:

Triplete

de

nucletidos

de

un ARNt que

se

aparea

con

un codn complementario delARNm durante la traduccin.

31. Apoptosis: proceso en el cual la protena p53 induce a la clula a autodestruirse evitando que una clula anormal se reproduzca y d origen a un nuevo tumor.

32. Arginina:

33. Arlequn:
238

34. ARN: cido ribonucleico, esta formado por el azcar ribosa y las bases nitrogenadas: guanina, citosina, adenina y uracilo.

35. ARN transferente (ARN-t): que transporta los aminocidos

36. ARN ribosmico (ARN-r) que intervienen en el proceso de traduccin, son cidos ribonucleicos de una sola hlice y tambin presentan

autoapareamiento.

37. Autofecundacin:

38. Autorradiografa: Tcnica que permite visualizar la presencia, localizacin e intensidad

de la radiactividad en preparaciones histolgicas, cromatogramas en papel o separaciones electroforticas en gel, mediante la aplicacin, sobre la superficie de tales materiales, de una pelcula de rayos X permitiendo que las radiaciones formen en ella una imagen.

39. Autosomas: determinan diversas caractersticas somticas del organismo en general.

40. Bases nitrogenadas: 41. Bases pricas: Derivadas de la estructura de la purina

42. Bases Pirimidnicas: Derivadas de la estructura de la pirimidina

43. Biotecnologa:

44. Carbetamida:

45. Cariotipo: Ordenacin de los cromosomas por parejas, tamao y posicin del 46. centrmero.

47. Cspide:

48. Catalasa: esta enzima convierte el perxido de hidrgeno en agua.

239

49. Cebador: Oligonucletido de tamao pequeo que, al hibridar con un molde de ADN de un
hebra, le proporciona una estructura bicatenaria a partir de la cual, la ADN polimerasa sintetizar una nueva hebra de ADN para producir una molcula dplex.

50. Celulas: Entendemos por ella a una unidad mnima de un organismo capaz de
actuar de forma autnoma; absolutamente la totalidad de ellos estn formados por clulas y este es uno de los parmetros que se emplea para catalogar a un organismo, es decir, no se define como tal si no consta al menos de una clula.

51. Clulas anucleadas:

52. Centrmero: Zona por la que el cromosoma interacciona con las fibras del huso acromtico en las anafases mitticas y meiticas y que es responsable de los movimientos cromosmicos que tienen lugar durante estas fases.

53. Cianobacterias:

54. Ciclo celular: es el tiempo que transcurre una reproduccin y otra.

55. Cinetocoro: Estructura del centrmero de los cromosomas eucariticos. El cinetcoro

posee una estructura trilaminar que consta de una zona central con elementos de ADN repetitivo entre dos placas densas de electrones. Los cinetcoros estn implicados en el control del movimiento de los cromosomas en la divisin celular.

56. Cistena:

57. Citogentica: Ciencia que estudia la biologa de los cromosomas y su relacin con la
transmisin yrecombinacin de los genes.

58. Citoplasma: Material vivo de la clula, a excepcin del ncleo, que consta de una matriz
protenica compleja o gel en la que se encuentran membranas y orgnulos celulares (mitocondria, plastos, etc.) esenciales.

59. Cloroplastos: poseen forma lenticular y estn limitados por una doble membrana,
contienen estructuras membranosas apiladas (tilacoides) rodeadas de una matriz gelatinosa (estroma). Constituyen los centros de transferencia de la energa solar y de algunas

240

importantes reacciones involucradas en la sntesis de carbohidratos. Los cloroplastos tienen su propio ADN; estos genes se heredan solamente a travs del progenitor femenino y son independientes de los genes nucleares.

60. Cdigo gentico: es la clave de una clula para determinar que aminocidos deben colocarse para armar una protena a partir de una secuencia determinada de ADN. 61. Codominancia: situacin que consiste en que los dos alelos dominantes se expresan y son observables en el fenotipo.

62. Codn: conjunto de tres bases del ARNm o triplete, que codifica la informacin para un aminocido determinado.

63. Colesterol:

64. Colza:

65. Copolimeros: este enzima convierte el perxido de hidrgeno en agua.

66. Cromatidio: es una doble hlice de ADN lineal.

67. Cromatina: Sustancia de la que se componen los cromosomas eucariticos. Consta de un

complejo de ADN, protenas cromosmicas (principalmente histonas, pero tambin otras protenas cromosmicas) y una pequea cantidad de ARN.

68. Cromatina interfasica:

69. Crommero: son regiones ms condensadas de los cromosomas que se observan al microscopio como partculas discretas y que suelen verse con mayor claridad en determinados estados celulares, como por ejemplo, en paquitena de la Profase-I meitica en algunas especies.

70. Cromosomas: estructura presente en el ncleo de la clula que contiene los genes esta formada por ADN y en las clulas eucariontes se encuentra asocia do a protenas.

241

71. Delecin: Mutacin que implica la prdida de uno o ms pares de bases en una secuencia
de ADN. Las deleciones de tamao grande pueden a veces visualizarse a travs del microscopio en el anlisis del cariotipo.

72. Densidad: es una magnitud referida a la cantidad de masa contenida en un determinado volumen, y puede utilizarse en trminos absolutos o relativos.

73. Desanimaciones:

74. Desespiralizada (puff):

75. Desnaturalizacin: es un cambio estructural de lasprotenas o cidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su ptimo funcionamiento y a veces tambin cambian sus propiedades fsico-qumicas.

76. Despurinizacin:

77. Diheterocigoticas:

78. Diploide: Organismo que contiene dos juegos de cromosomas, uno heredado de padre y otro de su madre.

79. Diplotena:

Estado

de

la profase I

de

la meiosis,

que

sigue

al

estado

de paquitena y precede a ladiacinesis, donde cada par de cromtidas hermanas empieza a separase del otro par.

80. Drosophila: Mosca de la fruta, utilizada durante muchos aos como modelo en gentica
eucaritica. De los casi trescientos genes que causan enfermedades y que se han localizado en el genoma humano, ms de la mitad tienen un gen anlogo en el genoma de laDrosophila.

81. Duplicacin:

82. Electroforesis: Tcnica de biologa molecular, de uso generalizado y de la que existen

muchas variantes. Se utiliza para separar los componentes de mezclas complejas de macromolculas. Para ello, las muestras se someten a un campo elctrico aplicado a travs de una matriz porosa; bajo tales condiciones, las molculas migran a velocidades que

242

dependen de sus cargas elctricas y/o pesos moleculares. Vase: electroforesis en gel de agarosa, electroforesis en gel de poliacrilamida, electroforesis en gel desnaturalizante en gradiente, electroforesis capilar,electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecil sulfato sdico, electroforesis en gel de gradiente trmico, electroforesis de campo pulsante, e isoelectroenfoque.

83. Encefalopata mitocondrial:

84. Endomitosis:

85. Endonucleasas: es una enzima que puede reconocer una secuencia caracterstica de nucletidos dentro de una molcula de ADN y cortar el ADN en ese punto en concreto, llamado sitio odiana de restriccin, o en un sitio no muy lejano a ste, dependiendo de la enzima.

86. Endorreduplicacin: Reproduccin cromosmica durante la interfase. Durante esta fase

se observan cromosomas con cuatro cromtidas (diplocromosomas).

87. Enfermedad de Fabry:

88. Elementos autnomos: capaces de escindirse de la sede donadora y transponerse. 89. Elementos No autnomos: son estables, y solamente se vuelven inestables en
presencia de los autnomos en posicin trans.

90. Enzima: Protena que incluso a concentraciones muy bajas cataliza reacciones qumicas
especficas, sin consumirse ni modificarse en la reaccin. Las enzimas se clasifican en seis grandes grupos segn el tipo de reaccin que catalicen: 1. Oxidorreductasas; 2. Transferasas; 3. Hidrolasas; 4. Liasas; 5. Isomerasas; 6. Ligasas. Generalmente el nombre de las enzimas se forma aadiendo el sufijo -asa al nombre del sustrato; para su clasificacin se sigue un sistema numrico estandarizado establecido por la Enzyme Commission (EC).

91. Enzima helicasa: enzima que se introduce entre las dos cadenas y rompe los puentes de hidrogeno que existen entre ellas.

92. Epilopia:

243

93. Estreptomicina:

94. Etiologa:

95. Eucariotica: se les llama a todas las clulas que tienen su material hereditario fundamental (su informacin gentica) encerrado dentro de una doble membrana, la envoltura nuclear, que delimita un ncleo celular. Igualmente estas clulas vienen a ser microscpicas pero de tamao grande y variado comparado con las otras clulas.

96. Eucromatina: es una forma de la cromatina ligeramente compactada, con una gran concentracin de genes, y a menudo (no siempre) se encuentra en transcripcin activa. A diferencia de la heterocromatina, se encuentra tanto en eucariotas como en procariotas

97. Exgeno: rganos que se forman en el exterior de otro

98. Exonucleasas: Enzima que digiere ADN o ARN, empezando por el extremo de una
hebra. Requiere, por tanto, la presencia de un extremo libre para comenzar la degradacin. Las 5-exonucleasas requieren libre el extremo 5 y degradan la molcula en la direccin 5 3. Las 3-exonucleasas requieren libre el extremo 3 y la degradan en direccin opuesta.

99. Exonuetidica:

100.

Fenilalanina:

101.

Fenotipo: Aspecto observable de un individuo (con respecto a uno o ms

caracteres) que refleja la interaccin de su genotipo con un medio determinado.

102.

Filogenticos:

103.

Fosfodister:

104. 105.
244

Fosforilacin: Adicin de un grupo fosfato a un compuesto Fragmoplasto:

106.

Fuerza centrifuga:

107.

Gen: Es una secuencia de ADN que constituye la unidad funcional para

la transmisin de los caracteres hereditarios.

108. 109.

Gentica: Ciencia de la herencia. Gen mutT: este gen codifica para un enzima que impide la

incorporacin de la 8-oxo-G al ADN. Este enzima hidroliza el trifosfato de la 8oxo-G a la forma monofosfato. 110. Genoma: Dotacin completa de material gentico (genes y secuencias no
codificantes) que contiene cada clula de un organismo, virus u orgnulo. 2. Conjunto completo de cromosomas (y por lo tanto de genes) heredado de un progenitor como una unidad

111.

Genomio: es la cantidad de cromosomas distintos que se hallan en

una clula.

112.

Genotipo: constitucin gentica para el conjunto de los genes de un

individuo que se puede transmitir a la siguiente generacin.

113.

Glicina:

114.

Haplocromosomas:

115.

Haploide: Clula u organismo que contiene uno de cada uno de los pares de

cromosomas

116.

Helicasas: son enzimas que rompen los puentes de hidrgeno que

mantienen unidas las dos cadenas de la doble hlice. Entre las helicasas de E. coli se encuentran las protenas ADN B y Rep. La protena Rep parece ayudar a desenrollar la doble hlice por delante de la polimerasa.

117.

Hlice. Estructura con forma de espiral.

118.

Helicoidal:

119.
245

Helicoidalmente: que tiene forma de hlice

120.

Hemoglobina: Protena que contiene hierro y cuya importancia reside en su papel

transportador de oxgeno a las clulas del cuerpo. Se encuentra en los eritrocitos de los vertebrados.

121.

Heterocigoto: cuando en una pareja de cromosomas homlogos los

dos alelos para una caracterstica son distintos.

122.

Heterocromaticas:

123.

Heterocromatina: es una forma inactiva condensada localizada sobre

todo en la periferia del ncleo, que se tie fuertemente con las coloraciones. 124. Heterocromatina constitutiva:

125.

Heterocromatina facultativa:

126.

Heteropicnosis negativa: Propiedad de ciertos cromosomas, o

de algunas de sus partes, de permanecer ms condensados en el ciclo celular y por lo tanto, de teirse con mayor intensidad que otros.

127.

Hibrido:

128.

Hibridacin:

es

el

proceso

de

unir

dos

hebras

complementarias de ADN. Hibridacin

de cortes

129.

in
de

situ:
tejidos o de

Visualizacin

de

la

localizacin

de macromolculas (especficamente polinucletidos y polipptidos) in vivo por el teido histolgico preparaciones citolgicas tratadas con

sondas/anticuerpos marcados.

130.

Hidrofbicos:

131.

Hidrlisis: Reaccin qumica mediante la cual resultan dos nuevos

compuestos a partir de una sustancia compleja mediante la adicin de agua y su posterior descomposicin.

246

132.

Hidroximetil-citosina (HMC): relaciones entre las fibras de cromatina y

cromosomas fasicos

133.

Hipoxantina:

134.
masa

Histonas: Las protenas responsables del empaquetamiento del ADN se

de la cromatina. Hay 5 clases principales

denominan histonas. Estas protenas forman parte del alrededor de la mitad de la

de histonas: H1, H2A, H2B, H3 y H4, todas ellas contienen una gran cantidad de residuos cargados positivamente ( Arg y Lys).

135.

Holoenzima:

136.

Holoenzima de ADN Pol III:

137.

Homocigoto: cuando en una pareja de cromosomas

homlogos los dos alelos para una caracterstica son iguales.

138.

Homopolimeros: Polmero (cido nucleico, polipptido, etc.) que

contiene una sola clase deresiduos (p. ej., el polinucletido GGGGGGGGG...).

139.

Idiograma: Representacin esquemtica mediante un dibujo a escala,

que incluya las bandas e interbandas, del cariotipo de una especie.

140.

Infeccin:

141.

Inosina:

142.

Inversiones:

143.

Isoaceptores:

144.

Isotopo: Una de las dos o ms formas de un mismo elemento que difieren en el

nmero de neutrones que contienen sus ncleos. Los istopos radioactivos (radiostopos) se utilizan como marcadores en muchos anlisis bioqumicos.

247

145.

Leucina: Ligador (linker): Oligonucletido sinttico de doble hebra, que contiene la

146.

secuencia de reconocimiento de una o ms endonucleasas de restriccin. La unin de un ligador a cada extremo de un fragmento de ADN facilita la preparacin del fragmento para su clonacin en un vector.

147.

LINEs:

148.

Lisina:

149.

Mapas de restriccin: los fragmentos de ADN, resultantes de una

digestin con enzimas derestriccin, pueden ser separados por electroforesis Mdula (core):

150.

151.

Meiosis: Proceso de divisin celular especial en el que las clulas

sexuales reducen a la mitad su nmero de cromosomas.

152.

Metabolismo: Conjunto de procesos bioqumicos que determinan que el material

nutritivo se convierta en sustancia viva o contribuya a formarla, o que substancias complejas y alimentos se descompongan en otras ms simples.

153.

Metacntricos:

154.

Metafase: Etapa de la mitosis o meiosis (que sigue a la profase y precede a

la anafase) durante la cual los cromosomas, o al menos los cinetocoros, se encuentran en el ecuador del huso acromtico.

155.

Metstasis: es la capacidad de las clulas cancerosas de penetrar los

vasos sanguneos y viajar por la sangre hacia otros tejidos donde inician un nuevo tumor. 156. Mtodo automtico:

157.

Mtodo didesoxi:

248

158.

Microsatlites: Segmento de ADN que se caracteriza por contener un nmero

variable de copias (generalmente entre 5 y 50) de una secuencia de 5 o menos bases (llamada unidad de repeticin).

159.

Microtubulo:

Componentes autoensamblables del citoesqueleto. Los microtbulos son polmeros cilndricos de protenas, interconectados por protenas entrecruzadas, que organizan, dinmica y estructuralmente, actividades funcionales de las clulas vivas. Forman el huso acromtico durante la mitosis.

160.

Minisatlites:

Forma

de repeticiones en tndem de nmero variable, en las que el tamao de launidad de repeticin oscila entre 10 y 100 pb. Sirven para analizar la huella del ADN, despus de una hibridacin Southern. Generalmente se concentran en los extremos de los cromosomas y en regiones con alta frecuencia de recombinacin.

161.

Mitosis: en las clulas eucariontes, es la reproduccin basada en la

unin de dos clulas para procrear un nuevo individuo.

162.

Modelo conservativo:

163.

Modelo dispersivo:

164.

Modelo semiconservativo:

165.

Monocatenario: Cadena

nica

de desoxirribonucletidos que

se

encuentra en algunas bacterias y virus. Usualmente existe como un crculo covalentemente cerrado.

166.

Monogermen:

167.

Montona:

168.

Mutacin: Es el cambio espontneo o inducido que ocurre en la

informacin gentica, en el ADN.

249

169.

Mutacin cromosmica: se produce cuando el cromosoma se altera en su

morfologa.

170.

Mutaciones gnicas: son las que se producen cuando una base de ADN es

sustituida por otra y esto altera la conformacin de la protena codificada en dicho segmento de ADN.

171.

Nitrosoguanidina

(NG): produce

esencialmente

transversiones

GCTA.

172.

Northern: es una tcnica de deteccin de molculas de cido

ribonucleico (ARN) de una secuencia dada dentro de una mezcla compleja (por ejemplo, un ARN mensajero para un pptido dado en una extraccin de ARN total).

173.

No histnica:

174.

Nucleoides: Orgnulo nuclear, rico en ARN, de las clulas eucariticas, producido

El nucleolo consta de precursor ribosmico de ARN, ARN

por un organizador nucleolar. Constituye el lugar donde se almacenan los ribosomas y sus precursores.

ribosmico, protenas asociadas y parte, o quizs la totalidad, del equipamiento enzimtico (ARN polimerasa, ARN metilasa, enzimas que rompen ARN) que se necesita para la sntesis, conversin y ensamblaje de los ribosomas. Posteriormente, los ribosomas son transportados al citoplasma.

175.

Nuclolo:

176.

Nuclesido: Combinacin de un azcar pentosa con una base nitrogenada

prica o pirimidnica.

177.

Nucleosoma: es una estructura con forma de collar de cuentas y cada

una de ellas formada por ocho molculas de histona envueltas en un segmento de ADN.

178.

Octamro: es una secuencia corta de ADN o ARN, con cincuenta o

menos pares de bases.

250

179.

Oligonucletido: Su inters radica en su utilizacin como cebadoresen el

proceso de sntesis de ADN

180.

OMG: organismo modificado genticamente.

181.

Patologa:

182.

Palndromos: plegamiento o apareamiento de una hlice consigo

misma. El palndromo tambin es una figura gramatical que se lee igual en los dos sentidos, por ejemplo: DABALE ARROZ A LA ZORRA EL ABAD.

183.

Plsmido: Molcula circular de ADN extracromosmico de replicacin autnoma

que poseen muchas bacterias y que es transferible a otras clulas bacterianas de la misma y, ocasionalmente, de diferente especie. Generalmente, los genes de resistencia a antibiticos se localizan en plsmidos. Los plsmidos han adquirido una gran importancia como vectores en los procesos de ingeniera gentica.

184.

Plectonmico: quiere decir que para separar una hebra de otra es

preciso desenrollar previamente la hlice.

185.

Poliinsturados: Cualidad de un aceite para indicar que algunos de sus enlaces

carbono-carbono no estn completamente hidrogenados

186.

Polinucletidos: son cadenas lineales de nucletidos en los que los

grupos fosfato estn esterificados a los hidroxilos 5' y 3' de dos nucletidos consecutivos.

187.

Polipptido: Polmero lineal compuesto por aminocidos unidos por enlaces

peptdicos. Suele utilizarse como sinnimo de protena, aunque tambin incluye polmeros artificiales y otros de bajo peso molecular.

188.

Poliploides: Organismo, tejido o clulas con ms de dos juegos completos de

cromosomas. Muchas plantas de cultivo son poliploides, entre las que se incluyen trigo de panificacin (hexaploide, 6x), algodn y alfalfa (tetraploides, 4x), y pltano (triploide, 3x).

189.

Protena SSB: se une al ADN de hlice sencilla y lo estabiliza retrasando la

regeneracin de la doble hlice. 251

190.

Profase: Primer estadio de la divisin nuclear. Fase durante la cual se produce

los cromosomas en la primera divisin meitica

el apareamiento de

(Vase: leptonema, zigonema, paquinema,diplonema, diacinesis). En la mitosis y en la segunda divisin meitica, los cromosomas se acortan y se ensanchan como resultado de un enrollamiento.

191.

Pseudogen: Copia incompleta o mutada de un gen que no se transcribe porque

carece de un marco de lectura abierto continuo. Los que carecen de intrones se llaman pseudogenes procesados y son probablemente, copias de ADNc sintetizadas a partir del ARNm por la transcriptasa inversa.

192.

Reovirus:

193.

Regiones de asociacin especficas (SARs):

194.

Renaturalizacin: es hacer que protenas que han perdido su

estructura cuaternaria, por medio de detegentes como el SDS u otros agentes desnaturalizantes, recuperen cun conformacin tridimensional. Es un replegamiento, pero renaturalizacin es el trmino correcto.

195.

Replicacin: proceso de copia de una molecula de ADN en el que la

celula hija conserva intactas las caractersticas de la celula original.

196.

Retropseudogenes:

197.

Retrocruzamientos: Cruzamiento de un individuo con uno de sus progenitores o

con el organismo equivalente genticamente. A la descendencia de este cruzamiento se le denomina generacin o progenie de retrocruzamiento.

198.

Retromutacin: Segunda mutacin que tiene lugar en el mismo punto donde se

produjo una primera mutacin de un gen. La segunda mutacin restaura la secuencia protenica original. Vase:reversin.

252

199.

Retrovirus endgenos: Provirus de un retrovirus porcino. La posibilidad de que

los PERV puedan activarse despus de un trasplante de rganos de cerdos al hombre implica que la prctica del xenotransplante pueda ser una va para transferir infecciones nuevas a la poblacin humana.

200.

Retrotransposones o retroposones: Secuencias que se han

dispersado en el genoma despus de una transcripcin inversa a partir de ARN.

201.

Ribotimidina:

202.

Ribonuclesidos:

203.

Sarcomas: scanffold:

204.

205.

Secuencia: Orden lineal de nucletidos en las molculas de ADN o ARN (o de

aminocidos en protenas). El objetivo de la secuenciacin de un genoma es determinar el orden lineal de todos los nucletidos del ADN nuclear de un organismo.

206.

Seudouridina:

207.

Sonda: es un objeto de manipulacin remota cuya misin es llegar a un

objetivo prefijado y realizar algn tipo de accin o mandar informacin..

208.

Submetacntricos

209. 210.

Subtelocntricos o acrocntricos: Superxido dismutasa: este enzima convierte los radicales

superxido en perxido de hidrgeno.

211.
253

Tndem:

212.

Tautomera: Tipo de isomera en la cual los dos ismeros que resultan de

un cambio de tautomera estn en equilibrio.

213.

Tcnica southern: es una tcnica que permite la identificacin de

secuencias especficas deDNA, mediante el uso de electroforesis en gel y de hibridacin utilizando sondas especificas. 214. Tcnicas de Bandeo cromosmico: Existen diferentes sistemas de

tratamiento y de tincin de los cromosomas que permiten obtener una secuencia caracterstica de bandas e interbandas transversales sobre los cromosomas.

215.

Tejido: Grupo de clulas de estructura similar que, generalmente, desempea una

determinada funcin.

216.

Telocntricos:

217.

Telofase: ltima etapa de las divisiones mittica y meitica en la cual los

cromosomas se agrupan en cada polo de la clula en divisin.

218.

Telomeros: Son secuencias repetidas con funcin conocida pero que

no codifican para ningn ARN o protena, los extremos de los brazos cromosmicos y tienen una estructura especial (formacin de ADN cuadruplexo) que protege al cromosoma de su degradacin por los extremos y que adems permite la replicacin de los extremos cromosmicos mediante la actuacin de encimas especficas como las telomerasas.

219.

Tetranucletido:

220.

Tioesterasa:

254

221.

Topoisomerasas:

son enzimas isomerasas que

actan

sobre

la topologa del ADN. La configuracin de doble hlice del ADN les hace "difcil" su separacin, imprescindible si las enzimas estn trascribiendo la secuencia que codifica las protenas, o si los cromosomas se estn replicando.

222.

Toxina: Compuesto producido por un organismo que es perjudicial para el

crecimiento o la supervivencia de otro organismo de la misma o de distinta especie.

223.

Traduccin: se interpreta dicha informacin y se constituye una

protena de acuerdo con las instrucciones codificadas y transcritas.

224.

Transcripcin: el ARN mensajero obtiene la informacin contenida en

el ADN.

225.

Transcriptasa inversa: es una enzima que produce ADN tomando

como molde ARN.

226.

Transgnicos: Individuo en cuyo genoma se ha integrado un transgn. En los

transgnicos eucariotas, el transgn debe transmitirse por meiosis para ser heredado por la descendencia.

227.

Transposiciones: Proceso por el cual un transposn o secuencia de

insercin se inserta en un nuevo sitio de la misma o de otra molcula de ADN. No se ha llegado a entender por completo su mecanismo exacto, que puede diferir segn el tipo de transposn. La transposicin en bacterias no requiere una alta homologa entre el ADN del transposn y el ADN diana.

228.

Transversiones: Sustitucin de una purina por una piridimina o viceversa en

el ADN o ARN

229.

Triptfano:

255

230.

Tuberculosis:

231.

Vector: Organismo, normalmente un insecto que transporta y transmite patgenos.

2. Pequeamolcula de ADN (plsmido, virus, bacterifago, ADN artificial o fragmento de una molcula de ADN) que puede utilizarse para introducir ADN en una clula. Los vectores deben tener capacidad de replicarse y contener sitios de clonacin para la introduccin de ADN exgeno.

232.

Virus: Partcula infecciosa compuesta por una cpsula de protena y un centro

nucleico(ADN o ARN), que depende de un organismo hospedador para

de cido

su replicacin.

233.

VNTR: repeticiones en tndem de nmero variable.

234.

Xantina:

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257