Va alternativa

Esta va se inicia en presencia de grmenes y no necesita la presencia de anticuerpos para activarse, por lo que representa un mecanismo de defensa importante en los estadios iniciales de la infeccin, cuando an no se ha hecho efectiva la respuesta inmune humoral. El primer factor de esta va, es el C3, que se est activando permanentemente pero a una tasa muy moderada. Esta baja tasa de activacin de C3, junto con otros factores de control, hace que la va no se dispare y se amplifique indebidamente. La activacin y amplificacin ocurren solamente en presencia de ciertos agentes, Por ello dos principalmente bacterias. distinguimos

situaciones en esta va: enestado de reposo y en estado activacin. La va alternativa en estado de reposo En el plasma existen enzimas naturales que escinden lentamente a C3 en un proceso denominado "marcapasos de C3". Como consecuencia de esta lisis queda un pequeo fragmento C3a y otro mayor C3b. En este ltimo queda un enlace tioster expuesto. En ausencia de infeccin el C3b permanece en la fase fluida y se combina con una molcula de agua, quedando as el enlace tioster hidrolizado y el C3b inactivado (Figura 4). Va alternativa en estado de amplificacin C3b, como todos los factores del complemento, se encuentra tanto en la sangre como en todos los tejidos del organismo. En cualquier parte del organismo, por tanto, est efectundose permanentemente la escisin lenta de C3, descrita en el apartado anterior. La aparicin en la escena de un microorganismo apropiado cambia el destino de C3b, pues en vez de entrar en una va de catabolismo forma un enlace covalente con la superficie del germen que amplifica la va alternativa (Figura 5). Adems, otro factor del complemento, el factor B, se une a C3b, bloqueando la unin del factor H. Se forma as sobre la bacteria el complejo C3bB, significando este paso el inicio de la cascada de reacciones de la va alternativa C3bB tiene una vida media de milisegundos y esto representa un efectivo mecanismo de control del sistema, dado que si C3bB no queda adherido sobre la superficie del germen se inactivar rpidamente, disminuyendo el riesgo de que se adhiera a un componente de nuestro propio organismo. Sobre el factor C3bB acta el factor D del suero, que tienen actividad serinesterasa sobre B. La escisin de un pequeo fragmento de B (Ba) deja sobre la superficie del germen el complejo C3bBb, que ahora tiene vida media de 1 minuto (Figura 4). de

Este complejo C3bBb se denomina convertasa de C3 de la va alternativa porque posee poder hidroltico sobre C3, el factor ms abundante del complemento. La accin sucesiva de C3bBb sobre muchas molculas de C3 del entorno produce gran cantidad de fragmentos de C3b que quedan adheridos a la superficie del germen. El germen termina siendo opsonizado por cientos o miles de molculas de C3b, es decir, es "marcado" para que sea fcilmente reconocido y fagocitado por clulas fagocitarias, que poseen receptores para este C3b. En paralelo a la liberacin de C3b se producen fragmentos de C3a de gran importancia funcional como veremos despus. Existe todava otro factor, la properdina, que se une a C3bBb para dar el complejo C3bBb properdina (C3bBbP), que adquiere ahora una vida media de 5 minutos. Antiguamente a esta va se le llamaba de la properdina. Como se puede observar, los factores del complemento se van estabilizando progresivamente sobre la superficie del germen adquiriendo cada vez una vida media ms larga. La fagocitosis de microorganismos opsonizados por C3b es el mecanismo de muerte ms importante de esta va alternativa. No obstante, existe un mecanismo de muerte de reserva por el que esta va alternativa puede dar muerte a los grmenes incluso en ausencia de fagocitos. Cuando C3bBb se acopla con otra molcula de C3b se forma el complejo C3bBb3b que posee actividad enzimtica sobre el factor C5. La escisin de C5 es el primer paso de la va ltica que concluye con la formacin del complejo de ataque y perforacin de la membrana como se ver ms adelante.

Va clsica
Se inicia en la superficie de una clula o bacteria cuando a ella se unen anticuerpos (unin Ag-Ac), a los que se unen la fraccin C1, provocando su activacin siempre que el anticuerpo que participe en ello sea del tipo IgM o IgG de las clases IgG1, IgG2 o IgG3. En el caso de la IgG (monomrica), se necesitan al menos dos complejos Ag-Ac cercanos para que las fracciones Fc de la IgG unan y activen el factor C1. En el caso de la IgM (pentamrica) solo es necesario un complejo Ag-Ac. La unin de la Ig al antgeno induce un cambio conformacional en los dominios de la regin Fc que permite la unin del factor C1.

Activacin del factor C1 El factor C1 est compuesto por tres subunidades proteicas, C1q, C1r y C1s. El C1q est formado por cadenas polipeptdicas idnticas, cada una de las cuales posee un extremo fibroso y otro globular por donde reconoce a la regin constante de los anticuerpos (Figura 6). Los C1r y C1s son serinproteasas. El complejo C1 est formado por una molcula de C1q, dos de C1s y dos de C1r. La subunidad C1q es por donde se fija al extremo Fc del anticuerpo. La activacin de C1q provoca que una molcula de C1r del complejo C1qr2s2 pierda por autocatalisis un fragmento de bajo peso molecular, quedando activada. Esta molcula activa a la otra molcula de C1r. Las dos molculas de C1r atacan a las dos molculas de C1s, liberando sendos fragmentos de bajo peso molecular, dejando expuestos sus dominios catalticos (Figura 7). La activacin de C1 es Ca++ dependiente. Desta forma C1s se convierte e una enzima del tipo serin-proteasa cuyo substrato Un importante entender patologas que forma activa de inmunoglobulinas se en activa son los factores C2 y C4. aspecto para algunas las el de es las las a

complemento anmala cuando

que C1 solamente se regiones constantes

las que ha de unirse se encuentran a una distancia apropiada sobre una superficie estable. Esto explica por qu el complemento no se activa por complejos antgeno-anticuerpo solubles en la sangre y en los lquidos biolgicos. Por el contrario, en algunas enfermedades autoinmunes los complejos antgeno-anticuerpo van depositndose lentamente a lo largo de los aos en los filtros biolgicos hasta que el factor C1 acaba por encontrar las condiciones idneas para depositarse

sobre dichos complejos y activarse. Estos rganos terminan siendo daados por el complemento, sin tener nada que ver con la reaccin inmune que ha dado lugar a los complejos.

Activacin de C4 y C2 C1s cadena (del complejo de C4 C1q2r2s) acta sobre la produciendo su escisin en dos fragmentos, uno pequeo C4a que es una anafilotoxina C4b, ster que o se de une a baja por la actividad y otro mayor enlace covalente de tipo amida superficie celular. La vida media de C4b es tan slo de milisegundos y esto representa un mecanismo de seguridad para que la reaccin solamente progrese si se realiza sobre la superficie de un germen y otra clula. C1s tambin acta sobre C2, provocando la escisin de esta molcula en dos fragmentos, uno pequeo C2b, sin actividad de anafilotoxina, y otro mayor C2a. Este ltimo se une al C4b para formar sobre la superficie del germen el clsica (Figura 8). La unin de C2a a C4b da estabilidad al complejo C4b2a que pasa a tener una vida media de 5 minutos. De esta manera se observa como tanto en la va alternativa como en la clsica a medida que progresan las reacciones no slose amplifica el fenmeno sino que sus componentes se van haciendo ms estables sobre la superficie celular. El complejo C4b2a, con centro activo en C2a, acta sobre la cadena alfa del factor C3 que se transforma por protelisis en dos fragmentos, uno pequeo la anafilotoxina C3a, que pasa al medio lquido, y C3b que se une a la membrana celular mediante enlace de tipo ster o amida. El germen se ve progresivamente rodeado por cientos tienen o miles de los fragmentos C3b para el cual receptores fagocitos. El germen es as complejo C4b2a. Este complejo tiene actividad estersica y su substrato es el C3 por lo que a C4b2a se le llama convertasa C3 de la va

opsonizado, o lo que es igual, "marcado" para ser reconocido, interiorizado y destruido por los fagocitos, siendo este el mecanismo de muerte ms importante del complemento. La fagocitosis de clulas mediada por C3b ilustra mejor que ningn otro fenmeno el paralelismo de las vas alternativa y clsica del complemento. Convertasa de C5 de la va clsica En un ambiente en el que se generan grandes cantidades de C3b uno de estos fragmentos se acopla con el ya existente en la membrana, C4b2a, para dar el complejo C4b2a3b, que tiene actividad enzimtica sobre C5 y se llama por eso convertasa de C5 de la va clsica. Como consecuencia de la accin de este enzima se escinden muchas molculas de C5 en un fragmento grande C5b, que queda anclado sobre la superficie de la clula y otro menor, C5a, que es la anafilotoxina con mayor actividad biolgica. La escisin de C5 en sus dos componentes es la ltima reaccin del complemento que implica hidrlisis de fragmentos y la unin de C5b a la membrana es el primer paso de la va ltica del complemento, que culminar en la formacin del complejo de ataque a la membrana como veremos ms adelante.

Va de las lectinas
La funcin que C1q cumple en la va clsica es reemplazada en esta va de la lectina por una protena srica de origen heptico de la familia de las lectinas llamada protena fijadora de manosa (MBP, mannose-binding protein) que puede reconocer restos de manosa en los polisacridos de membrana de una gran variedad de grmenes (bacterias, hongos, protozoos y virus). Por tanto esta va puede activarse en ausencia de anticuerpos y por tanto se puede poner en marcha incluso en individuos que no han sido previamente inmunizados. La estructura bsica de la MBP se puede polimerizar en grado variable pero su actividad biolgica requiere al menos el grado de complejidad del tetrmero. El extremo lectina reconoce la manosa en la superficie de los grmenes y el extremo colgeno activa la cascada del complemento, spero tambinpuede llevar a cabo otras funciones efectoras. La MBP es por tanto estructural y La funcionalmente MBP se encuentra a a muy en una C1s (MBPprotein, a MBP). actividad parecida a C1q. suero protena denominada associated protena MASP asociada con MASP binding

actividad

enzimticaparecida

asociada adquiere

enzimtica cuando el extremo lectina de la MBP reconoce a la manosa sobre la superficie de grmenes. MASP activada escinde a C2 y C4 de forma similar a como lo hace C1s, progresando entonces la cascada del complemento de forma idntica a cmo lo hace en la va clsica. MASP

existe en cuatro formas (MAS-1, 2, 3 y Map), si bien la ms importante funcionalmente es la MASP-2, aunque tambin se necesita la unin de MASP-1 para activar a la MBP. La MBP, adems de su funcin en la activacin de C2 y C4, se comporta como un factor opsonizante para los grmenes, facilitando as su fagocitosis y destruccin por parte de clulas del sistema fagoctico mononuclear (Figura 3).

Va ltica del complemento

La va alternativa, la va clsica y la va de la lectina confluyen en una va comn denominada va ltica,por la cual se formar el complejo final con capacidad citoltica propia del final de esta cascada del complemento. Las reacciones de esta va se encuentran esquematizadas en la (Figura 9). El primer paso de esta va es la escisin de C5 en dos componentes, C5b y C5a. Esta escisin la pueden llevar a cabo dos enzimas, una generada en la va alterna, llamada C3bBb3b, y otra en la va clsica y en la va de la lectina, llamada C4b2a3b. Por el efecto de estas enzimas, cientos o miles de fragmentos de C5b se unen a la membrana y cada uno de ellos capta desde la fase fluida circundante los fragmentos C6 y C7, que ya adquieren actividad quimiotxica y de fijacin a membranas. Si al complejo C5b67 se une la fraccin C8, el complejo C5b678 adquiere capacidad citoltica gracias a que C8 modifica su configuracin espacial para ofrecer zonas hidrofbicas que facilitan su insercin en la membrana. Este complejo adquiere capacidad para interactuar con el factor C9 formando el complejoC5b6789 (Figura 10). Las molculas de C9 (en nmero de 1 a 18) sufren cambios y presentan ms zonas hidrofbicas que aceleran la penetracin de este complejo en la membrana. El complejo C5b6789 recibe el nombre decomplejo de ataque a la membrana. La polimerizacin de C9 crea cientos o miles de poros que ponen en contacto directo el medio intra y extracelular (Figura 11). Estos poros permiten el intercambio masivo de sales, iones y agua a una tasa tal que las bombas biolgicas son incapaces de mantener los gradientes de concentracin transmembrana y, por tanto, tambin las diferencias de potencial. Esto significa el derrumbe osmtico y la lisis de la clula. Los linfocitos T citotxicos y las clulas NK producen una protena llamada perforina muy similar a C9 y que al igual que sta se polimeriza sobre la superficie de las clulas diana atacadas por estos linfocitos.

Codificacin las complemento

gentica

de del

fracciones

Las molculas C2, C4 y el factor B (Bf) son codificadas por genes ubicados en el cromosoma 6, entre los loci HLA-B y HLA-DR. Los factores B y C2 son codificados por un solo locus y En el existen dos loci del que para C4, C4a y C4b. brazo los corto genes cromosoma 1 del hombre se localizan codifican las cadenas alfa y beta de C8 y de C1q. Los genes C6 y C7 (originados por duplicacin) se encuentran en el cromosoma 5. En el brazo largo del cromosoma 1 se encuentra la regin RCA, que contiene genes ligados que codifican protenas reguladoras como CR1, CR2, DAF, H, C4BP y MCP. Receptores para factores del complemento Muchas de las funciones del complemento se llevan a cabo tras la unin de fragmentos de algunos factores del complemento a receptores presentes en la superficie de algunas clulas. En la (Tabla 1) se describen muchos de estos receptores.

Funciones del complemento

El complemento posee una extensa variedad de funciones, esencialmente dirigidas a la eliminacin de microorganismos y que actan como parte de la respuesta inmune innata o potenciando la accin de los anticuerpos en la respuesta adaptativa humoral. Entre ellas destacan las acciones: Citoltica, Anafilotxica, Quimiotxica Facilitadora de la fagocitosis ( opsonizacin) A estas acciones se pueden unir otras, tales como su participacin en el aclaramiento de inmunocomplejos y su apoyo en el proceso de activacin de linfocitos B. En suma, todas estas acciones hacen que el complemento sea un factor fundamental potenciando la inflamacin por diferentes mecanismos, fenmeno bsico en la defensa frente a infecciones. A continuacin se analizan cada una de estas funciones. Accin citoltica del complemento La lisis directa de un gran nmero de bacterias, tales como bacteridium, salmonella, shigella, escherichia, vibrio, treponema y otras, se desarrollan por los cambios electrolticos y osmticos que producen cientos o miles de poros formados por el complejo de ataque a la membrana C5b6789 (MAC), que ha sido analizado en apartados anteriores cuando hemos estudiado la va ltica del complemento. Este proceso de destruccin directo mediado por el complejo de ataque a la membrana se denomina citotoxicidaddependiente del complemento. Accin facilitadora de la fagocitosis

Como hemos vistos a lo largo de las vas del complemento algunos factores tras su activacin se asientan de forma estable sobre la superficie de los grmenes. Los grmenes quedan as opsonizados, un trmino que etimolgicamente significa marcado para ser comido. Los factores del complemento que llevan a cabo este marcaje se llaman opsoninas y entre ellas se encuentran factores del complemento propiamente dichos como C1q, C3b, C5b67, C5b6789, o productos de degradacin del complemento que quedan igualmente unidos a la superficie celular y sirven tambin de marcadores, como iC3b, C3d y C3dg. El reconocimiento, fagocitosis y destruccin intracelular de los grmenes portadores de opsoninas en su superficie lo llevan a cabo distintos tipos de clulas que poseen receptores para dichas opsoninas (Figura 13.12). Los receptores involucrados en el reconocimiento de opsoninas son CR1, CR3, CR4 y C1qR (CR, complemento receptor). CR2 no est involucrado en este proceso porque se expresa en clulas que no son fagocitarias profesionales. Tampoco estn involucrados C3aR ni C5aR porque sus ligando no quedan en ningn momento fijado sobre la superficie celular. No obstante C3a y C5a juegan un papel importante en la inflamacin porque las clulas en las que se expresan sus receptores estn muy relacionadas con este proceso. Accin anafilotxica del complemento En algunos de los pasos de las vas del complemento C4b y por se C5b, su liberan como con accin pequeos son C3b, importantes de fragmentos, funciones

inductoras

inflamacin

estimulante de clulas cebadas, con lo que stas liberan mediadores responsables de reacciones anafilcticas. De esta manera se provoca la contraccin del msculo liso de la parte venosa de los vasos sanguneos de la zona infectada, con lo se produce una vasodilatacin y por consiguiente un aumento de la permeabilidad del vaso. Esto facilita la llegada de ms fagocitos y ms factores del complemento desde la sangre (Tabla 13.2). En su conjunto, la accin de las anafilotoxinas, junto con la de las citocinas de inflamacin (IL-1 y TNF), pueden explicar de forma lgica los signos locales de la inflamacin tales como enrojecimiento, aumento de tamao, aumento de temperatura y dolor. Accin quimiotctica del complemento

Tambin ciertos factores liberados en las reacciones del complemento poseen acciones quimiotcticas, atrayendo clulas al foco inflamatorio donde se estn produciendo. Entre ellos destaca el fragmento C5a frente al cual las clulas fagocitarias poseen receptores de forma que cuando en un foco de infeccin se liberan y se difunden, se movilizan los fagocitos hacia ese lugar. Aclaramiento de inmunocomplejos Los eritrocitos, mediante su receptor CR1 y a travs del factor C3b unido a inmunocomplejos circulantes, hacen que stos sean eliminados desapareciendo su peligrosidad para el organismo. Este proceso ocurre en el hgado son o bazo, por donde los sus los losinmunocomplejos macrfagos receptores de CR1, liberados

eritrocitos. As a su paso por el hgado o el bazo, los estos CR3 rganos, o mediante unen CR4,

inmunocomplejos a travs de C3b (o mediante receptores para Fc a travs de IgG) y los fagocitan quedando libres los eritrocitos para captar nuevos inmunocomplejos. Siendo el hemate la partcula celular ms abundante de la sangre es fcil entender la eficiencia de este mecanismo (Figura 13.13). Estimulacin de la respuesta inmune humoral Los linfocitos B poseen un receptor (CR2) para varios subproductos del complemento, entre ellos C3d. Cuando una bacteria opsonizada por C3d es reconocida por los anticuerpos de superficie de un linfocitoB, esta clula recibe las dos seales que necesita para activarse: una seal por sus anticuerpos de membrana y otra por el receptor para C3d. Esto hace que el linfocito experimente una expansin clonal que ir seguida de transformacin en clulas plasmticas secretoras de anticuerpos dirigidos contra el germen que inici la reaccin.

Mecanismos de regulacin del complemento

Dado el gran potencial lesivo del sistema del complemento, ste debe de encontrarse estrechamente regulado por diversos mecanismos y molculas (Tabla 13.2), al objeto de evitar la lisis de las clulas autlogas del individuo donde asienta. El mecanismo ms simple de regulacin es la baja concentracin y labilidad de muchos de sus factores, sin embargo existen factores que actan regulando la cascada del complemento en distintos puntos estratgicos. Los principales puntos de accin de estos factores se encuentran inhibiendo el C1, el C4, el C3 o inhibiendo el MAC. Inhibicin de C1. En este fenmeno interviene el inhibidor de la C1 esterasa (C1inh) que bloquea la formacin de C3b convertasa de la va clsica por su capacidad de unin y neutralizacin de los fragmentos C1r y C1s. En los casos de deficiencia en C1inh aparece el edema angioneurtico hereditario, porque el C1 activado degrada elevadas cantidades de C2 produciendo un acmulo de C2b. Este factor es degradado anormalmente por plasmina, lo que da lugar a C2-Kinina que es un potente vasodilatador y aumenta la permeabilidad vascular produciendo los edemas caractersticos del cuadro clnico mencionado. Inhibicin de C4. El C4 puede ser inhibido por:

Eel factor C4BP (C4-binding protein), que tiene la capacidad de captar C4b facilitando su disociacin del complejo C4b2a e inhibiendo, por tanto, la actividad de convertasa de C3. El factor I (FI) es una esterasa de tipo serina que circula en forma activada. El C4b disociado es susceptible de ser atacado por el factor I y ser degradado en C4c y C4d. Los receptores de membrana DAF (factor acelerador de la degradacin) y la MPC (cofactor protenico de membrana) se encuentran ampliamente distribuidos en clulas inmunes y no inmunes. Tienen la capacidad de inhibir la unin, facilitar la disociacin de C4b y C2a (DAF) o favorecer que el factor C4b pueda ser degradado por el FI (MCP). Estos receptores son de gran importancia en los mecanismos de prevencin de lisis de las clulas autlogas (de la propia persona). Inhibicin de C3. La regulacin de C3, al ser ste el factor central en la activacin del complemento, es probablemente el mecanismo de regulacin ms importante. En este sentido

interviene: El factor H (FH) es una protena plasmtica homloga que tiene la capacidad de unir C3b en la fase fluida. Otro regulador importante es el Factor I que ataca entonces C3b liberando una pequea fraccin C3f y convirtindolo en iC3b.

Un defecto en este tipo de regulacin acontece en un tipo de glomerulonefritis (membranosa tipo II), en la que aparecen autoanticuerpos (factores nefrticos) que se une al complejo C3bBb, estabilizndolo y hacindolo resistente a la accin de FH. Los receptores de membrana CR1, DAF y MCP actan sobre el C3b de forma semejante a su actuacin sobre C4b: inhiben la unin o facilitan la disociacin C3bBb (CR1, DAF) o actan como cofactores del factor I en la degradacin de C3b unido a la membrana (CR1, MCP). En este caso C3b tambin se degrada a iC3b, sobre el que el factor I puede seguir ejerciendo su actividad cataltica originando las fracciones C3c y C3d. Todos estos mecanismos inhiben la capacidad de C3b de formar convertasa de C5, as como de que C3b medie la adherencia celular. Sin embargo, C3b s mantiene la capacidad de adherencia a clulas fagocticas por los receptores de estas clulas para iC3b (CR1, CR3 y CR4). Inhibicin del MAC. En este sentido actan: La protena S (vitronectina) es una glucoprotena plasmtica con capacidad para unirse al complejo C5b67 impidiendo que ste se una a la membrana celular. El CD59 que es una protena ampliamente distribuida en las membranas celulares que inhibe la insercin de C9 en el complejo C5b-8. El factor de restriccin homloga (Homologous Restriction Factor, HRF) tambin est ampliamente distribuido en la membrana de las distintas clulas y presenta una funcin equivalente al CD59.

Proteccin de lo propio, lisis de lo extrao Se piensa que los factores reguladores DAF, HRF y CD59 actan exclusivamente en la inhibicin de la lisis de las clulas del propio organismo donde asientan. Estas protenas de membrana se detectan fundamentalmente en eritrocitos y clulas endoteliales que son las clulas que se encuentran en mayor peligro de autolisis por el complemento. En la enfermedad hemoglobinuria paroxstica nocturna hay un defecto congnito de DAF, HRF y CD59 producindose una anemia debido a la lisis de los hemates, lo cual ocurre frecuentemente durante la noche. Lgicamente los grmenes no presentan en sus membranas molculas reguladoras de la autolisis por lo que no pueden protegerse de los efectos lticos del

complemento. Esto determina, por tanto, un mecanismo rudimentario de discriminacin entre lo propio y lo no propio. En algunos grmenes la simple presencia de una cpsula puede ser un mecanismo de resistencia al complemento. Otros grmenes presentan protenas de membrana que impiden el desarrollo del MAC o enzimas que degradan los factores del complemento o liberan factores proteicos que inactivan las convertasas de C3, etc.