Virologia.

Os vrus pequenos agentes infecciosos (medem menos de 0,2 m), formados basicamente por uma cpsula protica envolvendo o material gentico, que, dependendo do tipo de vrus, apresentam genoma constitudo de uma ou vrias molculas de cido nuclico (DNA ou RNA), as quais possuem a forma de fita simples ou dupla (pode ter DNA+RNA juntos Citomegalovrus. Os cidos nuclicos dos vrus geralmente apresentam-se revestidos por um envoltrio protico formado por uma ou vrias protenas, o qual pode ainda ser revestido por um complexo envelope formado por uma bicamada lipdica. uma partcula basicamente protica que pode infectar organismos vivos. So parasitas obrigatrios do interior celular e isso significa que eles somente se reproduzem pela invaso e possesso do controle da maquinaria de auto-reproduo celular. O termo vrus geralmente refere-se s partculas que infectam eucariontes (organismos cujas clulas tm carioteca), enquanto o termo bacterifago ou fago utilizado para descrever aqueles que infectam procariontes (domnios bactria e archaea). Muitos vrus codificam para algumas protenas estruturais, as que fazem uma partcula viral madura (ou virion) e talvez uma enzima que participa na replicao do genoma viral. Outros vrus podem codificar muito mais protenas, muitas das quais no fazem parte de um vrus maduro, mas participam de alguma forma na replicao viral. O vrus do herpes um dos mais complicados vrus e tem 90 genes. Como muitos vrus fazem poucas ou no produzem enzimas, eles so dependentes das enzimas das clulas hospedeiras para produzir mais partculas virais. Assim a estrutura viral e replicao so fundamentalmente diferentes daquelas de organismos celulares. A dependncia viral da clula hospedeira em vrios aspectos do ciclo de crescimento tem complicado o desenvolvimento de drogas visto que a maioria das drogas inibem o crescimento celular e tambm a multiplicao viral (porque eles usam as mesmas enzimas). Uma vez que uma das principais razes para se estudar o metabolismo viral encontrar drogas que inibam seletivamente a multiplicao de vrus, precisamos saber quando os vrus usam suas prprias protenas no seu ciclo de replicao - da podemos ento tentar desenvolver drogas que inibam as protenas virais (especialmente enzimas virais) especificamente. O vrus invade uma clula e assume o comando, fazendo com que ela trabalhe quase que exclusivamente para produzir novos vrus. A infeco viral geralmente causa profundas alteraes no metabolismo celular, podendo levar morte das clulas afetadas. Fora da clula hospedeira, os vrus no manifestam nenhuma atividade vital e se houver alguma clula compatvel sua disposio, um nico vrus capaz de originar, em cerca de 20 minutos, centenas de novos vrus. Especificidade viral: um tipo de vrus ataca apenas determinados tipos de clulas, por que o vrus s consegue infectar a clula que tiver em sua membrana substncias s quais ele possa se ligar. Por exemplo: o vrus da poliomielite infecta apenas clulas nervosas, intestinais e da mucosa da garganta. O vrus da Rubola j consegue infectar maior nmero de tecidos humanos. O vrus da gripe bastante verstil e pode infectar diversos tipos de clulas humanas. Vrus infectam todos os grupos principais de organismos: vertebrados, invertebrados, plantas, fungos, bactria, mas alguns vrus tm um espectro de hospedeiros maior que outros; entretanto, nenhum cruza a barreira eucaritica/procaritica. Classificao de Baltimore: um modo de classificao que ordena os vrus em sete grupos, com base na caracterstica do genoma viral e na forma como este transcrito a mRNA. Grupo I: Vrus DNA dupla fita (dsDNA) Grupo II: Vrus DNA fita simples (ssDNA) Grupo III: Vrus RNA dupla fita (dsRNA) Grupo IV: Vrus RNA fita simples senso positivo ((+)ssRNA) Grupo V: Vrus RNA fita simples senso negativo ((-)ssRNA) Grupo VI: Vrus RNA com transcrio reversa (ssRNA-RT) Grupo VII: Vrus DNA com transcrio reversa (dsDNA-RT)

Estrutura Viral Dentre os vrios grupos de vrus existentes, no existe um padro nico de estrutura viral. A estrutura mais simples apresentada por um vrus consiste de uma molcula de cido nuclico coberta por muitas molculas de protenas idnticas. Os vrus mais complexos podem conter vrias molculas de cido nuclico assim como diversas protenas associadas, envoltrio protico com formato definido, alm de complexo envelope externo com espculas. A maioria dos vrus apresentam conformao helicoidal ou isomtrica. Dentre os vrus isomtricos, o formato mais comum o de simetria icosadrica. Partcula viral: so formados por um agregado de molculas mantidas unidas por foras secundrias, formando uma estrutura denominada partcula viral.Uma partcula viral completa denominada vrion. Este constitudo por diversos componentes estruturais (ver tabela abaixo para mais detalhes): 1. cido nuclico: molcula de DNA ou RNA que constitui o genoma viral. 2. Capsdeo: envoltrio protico que envolve o material gentico dos vrus. 3. Nucleocapsdeo: estrutura formada pelo capsdeo associado ao cido nuclico que ele engloba (Os capsdeos formados pelos cidos nucleicos so englobados a partir de enzimas) . 4. Capsmeros: subunidades protecas (monmeros) que agregadas constituem o capsdeo. 5. Envelope: membrana rica em lipdios que envolve a partcula viral externamente. Deriva de estruturas celulares, como membrana plasmtica e organelas.

6. Peplmeros (espculas): estruturas proeminentes, geralmente constitudas de glicoprotenas e lipdios, que so encontradas ancoradas ao envelope, expostas na superfcie. Todos os vrus contm um genoma de cidos nuclicos (RNA ou DNA) e uma capa protica protetora (chamada capsdio). O genoma de cido nuclico mais a capa protica protetora chamado de nucleocapsdio que tem uma simetria icosadrica, helicoidal ou complexa. Vrus podem ou no ter um envelope. Vrus envelopados obtm seus envelopes por gemulao atravs da membrana da clula hospedeira. Em alguns casos o vrus gemulam atravs da membrana plasmtica, mas em outros casos o envelope se deriva de outras membranas tais como as do corpsculo de Golgi ou do ncleo. Alguns vrus se associam com partes especializadas da membrana plasmtica da clula hospedeira; por exemplo, o vrus Ebola se associa com pores lipdicas ricas em esfingomielina, colesterol e protenas contendo glicolipdios. Poxvrus so excees pois eles se auto-empacotam com membranas da clula hospedeira usando um mecanismo diferente do processo de gemulao normal utilizado por outros vrus. Virus envelopados nem sempre precisam matar suas clulas hospedeiras para serem liberados, uma vez que eles podem brotar para fora da clula processo esse que no necessariamente letal para a clula portanto alguns virus que brotam podem montar infeces persistentes. Vrus envelopados so prontamente infecciosos somente se o envelope estiver intacto (uma vez que protenas da adsoro viral que reconhecem os receptores nas clulas hospedeiras esto no envelope viral). Isso segnifica que agentes que danificam o envelope, tais como detergentes alcolicos, reduzem a infectividade.

A partcula viral completa, conhecido como virion, consiste de cido nuclico cercada por uma camada protetora (protena) chamada capsdeo. Estes so formados a partir de subunidades idnticas de protena chamada capsmeros. Vrus pode ter um lipdio "envelope", derivado da membrana da clula hospedeira. O capsdeo feita a partir de protenas codificadas pelo genoma viral e sua forma serve como base para a distino morfolgica. Subunidades da protena viral codificado ir se juntam para formar um capsdeo, requerendo a presena do genoma do vrus. Protenas associadas com cidos nuclicos so conhecidos como nucleoprotenas, e a associao de protenas virais do capsdeo com cido nuclico viral chamada de nucleocapsdeo.. Em geral, existem quatro tipos principais de vrus morfolgicas: - Envelope: Algumas espcies de envelope do vrus se em uma forma modificada de uma das membranas celulares, tanto a membrana externa em torno de uma clula hospedeira infectada, ou membranas internas, tais como membrana nuclear ou retculo endoplasmtico, ganhando assim uma dupla camada lipdica externa conhecido como um viral envelope. Esta membrana repleta de protenas codificadas pelo genoma viral e genoma do hospedeiro, a membrana lipdica prpria e qualquer carboidratos presentes inteiramente originrios do anfitrio. O vrus da gripe e HIV usar essa estratgia. Vrus mais envolvidos so dependentes do envelope para sua infectividade. - Helicoidais: Estes vrus so compostos de um nico tipo de capsmeros empilhados em torno de um eixo central para formar uma estrutura helicoidal, que pode ter uma cavidade central, ou tubo oco. Isto resulta em virions arranjo em forma de bastonete ou filamentosos: estes podem ser curtos e extremamente rgidos, ou longos e muito flexveis. O material gentico, geralmente RNA fita simples, mas DNA fita simples em alguns casos. No geral, o comprimento de uma cpside helicoidal est relacionado com o comprimento do cido nuclico nela contido e o dimetro dependente do tamanho e disposio dos capsmeros. O bem estudado vrus do mosaico do tabaco um exemplo de um vrus helicoidais. Partculas virais helicoidais no-envelopadas so mais comuns entre vrus que infectam plantas, os quais possuem genoma de ssRNA. Esta a morfologia do vrus do mosaico do tabaco (TMV), um dos objetos de estudo mais clssicos da virologia, sendo o primeiro vrus a ser descoberto. A morfologia helicoidal envelopada encontrada principalmente entre vrus (-)ssRNA, entre os quais se encontram muitos agentes etiolgicos de doenas humanas conhecidas, como: sarampo (Paramyxoviridae), gripe (Orthomyxoviridae) , raiva(Rhabdoviridae) , ebola (Filoviridae), hantavirose (Bunyaviridae), febre de Lassa (Arenaviridae). Porm, existem exemplos de vrus com esta conformao que contm material gentico composto por dsDNA e (+)ssRNA. - Icosadrico: A maioria dos vrus animal so icosadricos ou quase esfrica com simetria icosadrica. O nmero mnimo de capsmeros idntico imposto de doze, cada um composto por cinco sub-unidades idnticas. Vrus icosadricos no-envelopados esto entre os mais comuns. Eles possuem genomas constitudos por dsDNA, ssDNA, dsRNA ou (+)ssRNA. So capazes de infectar organismos de todos os grupos de seres vivos. Vrus icosadricos envelopados possuem material gentico formado por dsDNA, dsRNA, ou (+)ssRNA. Vrions icosadricos envelopados so pouco comuns entre os vrus de animais. - Complexo: Esses vrus possuem um capsdeo que no nem puramente helicoidais, nem puramente icosadrico, e que podem possuir estruturas extras, como caudas de protena ou uma parede complexa exterior. Alguns bacterifagos, como fago T4 Enterobactrias tm uma estrutura complexa que consiste de uma cabea icosadrica ligado a uma cauda helicoidal, que pode ter uma placa de base hexagonal com fibras salientes cauda protena. Esta estrutura da cauda age como uma seringa

molecular, anexando ao hospedeiro de bactrias e, em seguida, injetar o genoma viral na clula. Alm dos fagos, existem outras famlias virais que possuem vrions com caractersticas que contrastam com as morfologias mais usuais, tais como as ilustradas anteriormente. Entre esto: Baculoviridae, Reoviridae ePoxviridae.

estas

famlias

Genoma Diversidade genmica entre os vrus Propriedade Parmetros DNA RNA DNA e RNA (em diferentes fases do ciclo de vida)

cido nuclico

Forma

Linear Circular Segmentada

Fitas

Fita simples Fita dupla Dupla fita com as regies de fita simples

Sentido

Sentido positivo (+) Sentido negativo (-) Ambas (+/-)

Genomas virais so circulares, como polyomaviruses, ou linear, como o adenovrus. O tipo de cido nuclico irrelevante para a forma do genoma. Entre os vrus RNA, o genoma frequentemente dividido em partes separadas dentro do virion e chamado de segmentados. Cada segmento so cdigos para uma protena e so geralmente encontradas juntas em um capsdeo. O genoma dos vrus de RNA tem ainda a caracterstica de possuir senso positivo (atua como mRNA funcional no interior das clulas infectadas) ou senso negativo (serve de molde para uma RNApolimerase transcrev-lo dando origem a um mRNA funcional). A quantidade de material gentico viral menor que a da maioria das clulas. No genoma dos vrus esto contidas todas as informaes genticas necessrias para programar as clulas hospedeiras, induzindo-as a sintetizar todas as macromolculasessenciais replicao do vrus. Vrus sofrem alterao gentica por diversos mecanismos. Estes incluem um processo chamado deriva gentica em que bases individuais no DNA ou RNA mutar para outras bases. A maioria destas mutaes pontuais so "silenciosos", eles no alteram a protena que o gene codifica, mas outros podem conferir vantagens evolutivas tais como a resistncia aos medicamentos antivirais. Mudana antignica ocorre quando h uma mudana importante no genoma do vrus. Isso pode ser resultado de uma recombinao ou rearranjo. Quando isso acontece com os vrus influenza, as pandemias podem resultar. Genomas segmentados conferem vantagens evolutivas; diferentes cepas de um vrus com um genoma segmentado pode embaralhar e combinar genes e produzir descendncia ou vrus (filhos) que tm caractersticas nicas. Recombinao gentica o processo pelo qual uma fita de DNA interrompida e, em seguida, juntou-se ao fim de uma molcula de DNA diferente. Isso pode ocorrer quando os vrus infectam as clulas ao mesmo tempo e estudos de evoluo viral tm mostrado que a recombinao tem sido galopante nas espcies estudadas. Recombinao comum a ambos os vrus RNA e DNA. Ciclo de replicao A reproduo envolve dois aspectos: a duplicao do material gentico viral e a sntese das protenas do capsdio. O vrus entra na clula hospedeira, inibe o funcionamento do material gentico da clula infectada e passa a comandar as snteses de protena. Populaes virais no crescem atravs da diviso celular, porque eles so acelulares, em vez disso, eles usam a maquinaria e o metabolismo de uma clula hospedeira para produzir mltiplas cpias de si mesmos. Pode ser dividida em 7 etapas:

1. Adsoro; 2. Entrada; 3. Decapsidao; 4. Transcrio e traduo; 5. Replicao do genoma; 6. Montagem; e 7. Liberao.

1. Adsoro: Uma etapa essencial reproduo viral a adsoro (ligao) do vrion a uma clula suscetvel. A adsoro viral se d por meio da interao entre protenas virais, presentes no envelope ou no capsdeo, e receptores celulares que se encontram ancorados a membrana plasmtica. A especificidade destas interaes alta, como em um modelo chavefechadura, e determina o tropismo viral para infectar determinadas clulas e tecidos especficos. Ligaes qumicas no covalentes, tais como pontes de hidrognio, atraes inicas e foras de van der Waals, so responsveis pela adeso entre as protenas virais e os receptores celulares. Nos momentos iniciais da adsoro, a partcula viral interage com um ou poucos receptores, caracterizando uma ligao reversvel. Porm, medida que mais receptores se associam ao vrion, esta ligao passa a ser irreversvel, possibilitando a posterior entrada do vrus na clula. 2. Entrada no citosol: Este processo envolve a entrada (penetrao) do vrion no citosol e posterior desmontagem do capsdeo para liberao do genoma viral no interios da clula. Para alcanar o ambiente intracelular, cada vrus utiliza um mecanismo particular. Entre os principais mecanismos, esto: - Endocitose: pela formao de endossomos (vesculas). Quando um vrus entra por endocitose, o seu vrion encontra-se envolto pela membrana vesicular. Vrus envelopados liberam os nucleocapsdeos de dentro dos endossomo promovendo a fuso entre o envelope viral e a membrana da vescula.J os vrus no envelopados, por no possurem envelope, utilizam outras estratgias para sair dos endossomos: alguns, como os adenovrus, provocam a lise do endossomo, enquanto outros, como os poliovrus, geram poros na membrana vesicular e injetam o genoma viral diretamente no citosol. - Fuso: Neste mecanismo, executado apenas por vrus envelopados, o nucleocapsdeo liberado no interior da clula mediante a fuso entre o envelope viral e a membrana celular. - Translocao: por meio da ao de uma protena receptora, o vrion pode atravessar a membrana por meio de translocao, do ambiente extracelular para o citosol. Este mecanismo raro e pouco entendido.

3. Decapsidao do cido nuclico: assim que os nucleocapsdeos alcanam o citosol, estes so transportados pelo citoesqueleto (dentro de vesculas ou na forma de nucleocapsdeos livres) em direo ao local especfico de processamento do genoma viral, que pode ser no prprio citosol ou no ncleo celular. Para que o genoma possa ser transcrito, traduzido, e replicado, o material gentico do vrus deve ser previamente liberado e exposto no ambiente intracelular. Procedimento no qual o capsdeo desmontado completamente ou parcialmente. 4. Transcrio e traduo da informao gentica: -Sntese de mRNA: H diferentes mecanismos de transcrio que os vrus adotam para sintetizar mRNA a partir dos seus variados tipos de material gentico. Os vrus podem ter genoma constitudo por dsDNA, ssDNA, dsRNA, ssRNA, alm de alguns serem capazes de realizar a transcrio reversa (ssRNA-RT e dsDNA-RT). Outra propriedade notvel dos cidos nuclicos virais a polaridade (sentido, ou senso) das fitas de DNA e RNA. Fitas senso positivo (+) apresentam seqncia idntica do mRNA, enquanto as senso negativo (-) apresentam seqncia nucleotdica complementar. Diante desta complexidade de caractersticas, as estratgias de transcrio do genoma viral so to variadas quanto os mecanismos de entrada, e podem envolver mais de uma etapa, as quais levam converso da informao gentica viral em mRNA.

- Sntese de protenas: As protenas virais so sintetizadas pela maquinaria celular (ribossomos, tRNAs). O processo de traduo ocorre no citosol, em ribossomos livres ou associados ao retculo endoplasmtico. Algumas das protenas sintetizadas em ribossomos livres so transportadas para o ncleo. Protenas produzidas em ribossomos associados ao retculo so transportadas desta organela para o complexo de Golgi,. Os diferentes vrus de DNA e RNA possuem mecanismos prprios deregulao da expresso gnica, os quais controlam a produo de protenas em momentos e quantidades apropriadas s necessidades virais. 5. Replicao do genoma viral: Na maioria dos casos, o genoma replicado no mesmo local onde ocorre a transcrio do material gentico do vrus, isto , no citoplasma ou no ncleo. [4] Assim como ocorre na transcrio, o processo de replicao de genomas virais envolve a participao de polimerases. Vrus de fita simples precisam produzir uma fita complementar ao genoma, que posteriormente servir de molde para a sntese do material gentico. Vrus de fita dupla utilizam cada uma das duas fitas para gerar suas respectivas cpias complementares. 6. Montagem do vrion: A montagem corresponde ao processo de formao das partculas virais infectivas (vrions). Neste estgio do ciclo de infeco, as protenas estruturais sintetizadas em etapas anteriores se associam para constituir o capsdeo. Capsdeos com formato helicoidal so formados em torno da superfcie da molcula de cido nuclico. J os capsdeos de simetria icosadrica so montados previamente e depois preenchidos com o genoma viral, atravs de um poro na estrutura pr-formada denominada pr-capsdeo. O procedimento de montagem de vrus no-envelopados se resume a formao dos nucleocapsdeos, enquanto que para vrus envelopados a montagem s se finaliza depois da aquisio do envelope viral. 7. Liberao de novas partculas virais: A liberao dos vrions do citosol pode se dar por lise celular ou brotamento. A liberao por lise celular mais comum aos vrus no-envelopados, e ocorre quando a membrana plasmtica da clula infectada se rompe, levando-a morte celular. Porm, nem todo processo de liberao viral causa danos a clula hospedeira. O brotamento um mecanismo de liberao que pode provocar pouco ou nenhum prejuzo clula. Aps a liberao, quando os vrions se encontram no meio extracelular, a maioria deles permanece inerte at que outra clula hospedeira seja infectada, reiniciando o ciclo de replicao viral. [5] O material gentico dentro de vrus, e o mtodo pelo qual o material replicado, variam entre diferentes tipos de vrus. Vrus DNA: A replicao do genoma dos vrus mais DNA ocorre no ncleo da clula. Se a clula tem o receptor apropriado em sua superfcie, esses vrus entrar na clula por fuso com a membrana da clula ou por endocitose. A maioria dos vrus de DNA so totalmente dependente de DNA da clula hospedeira e maquinaria de sntese de RNA e RNA mquinas de processamento. O genoma viral deve atravessar a membrana nuclear da clula para aceder a esta mquina. Vrus RNA: Estes vrus so nicos porque a sua informao gentica est codificada no RNA. Replicao geralmente ocorre no citoplasma. Vrus RNA pode ser colocado em cerca de quatro grupos diferentes, dependendo de seus modos de replicao. A polaridade (ou no podem ser usados diretamente para produzir protenas) do RNA determina em grande parte o mecanismo de replicao, e se o material gentico de fita simples ou dupla-fita. Vrus RNA replicase usar suas prprias enzimas RNA para criar cpias de seus genomas. Vrus trancriptase revesa: Estes replicar usando a transcrio reversa, que a formao de DNA a partir de um modelo de RNA. Reversa transcrever vrus contendo genoma de RNA usar um DNA intermedirio para replicar, enquanto os genomas de DNA contendo usar um intermedirio RNA durante a replicao do genoma. Ambos os tipos usam a enzima transcriptase reversa para realizar a converso de cido nuclico. Retrovrus geralmente integram o DNA produzidos por transcrio reversa no genoma do hospedeiro. Elas so suscetveis a drogas antivirais que inibem a enzima transcriptase reversa, por exemplo, zidovudina e lamivudina. Um exemplo do primeiro tipo o HIV, que um retrovrus. Exemplos do segundo tipo so os''''Hepadnaviridae, que inclui vrus da hepatite B. Efeitos sobre a clula hospedeira: A gama de efeitos estruturais e bioqumicas que os vrus tm sobre a clula hospedeira extensa. Estes so chamados de efeitos citopatolgicos. A maioria das infeces de vrus, eventualmente, resultar na morte da clula hospedeira. As causas de morte incluem a lise celular, as alteraes membrana da clula de superfcie e apoptose. Muitas vezes, a morte celular causada por cessao de suas atividades normais por causa da represso por vrus protenas especficas, nem todos que so componentes da partcula do vrus. Alguns vrus no causam mudanas aparentes para a clula infectada. Clulas em que o vrus latente e inativo mostram poucos sinais de infeco e, muitas vezes funcionar normalmente. Isso faz com que infeces persistentes e muitas vezes o vrus inativo por muitos meses ou anos. Este frequentemente o caso com os vrus herpes. Alguns vrus, como Epstein-Barr, pode levar as clulas a proliferar sem causar a transformao maligna, enquanto outros, como o papilomavrus, so estabelecidas as causas do cncer.

CULTIVO DE VRUS A partir de tcnicas sorolgicas, possvel detectar os vrus em sua forma inteira (que possui capacidade de se replicar), seu antgeno viral ou seus cidos nucleicos. Cultivo de vrus animais: O cultivo de um determinado vrus animal limitado pela necessidade de um tecido vivo em que as clulas possuam receptores apropriados, e que sejam suscetveis replicao dos vrus aps a penetrao no citoplasma. Inicialmente dispunha-se apenas de animais de experimentao em que se conseguia obter a multiplicao dos vrus, utilizando a tcnica em casos onde o vrus no se multiplica in vitro, como o vrus da Raiva em coelhos. Tambm so bastante utilizados roedores e cachorros, porm a tcnica esbarra em questes ticas. Uma alternativa a inoculao desses fluidos nas cavidades (ex.: alantide) de ovos embrionados, cujo epitlio ou eventualmente o prprio tecido embrionrio seja sucetvel infeco por determinados vrus (por exemplo, os vrus do Sarampo, Influenza, Polio e Herpes crescem bem nessas condies). A diviso celular dos ovos ativa o metabolismo celular, o que favorece a multiplicao de vrus, como o HIV, que cresce em ovo de galinha, mas a limitao da tcnica que poucos vrus se replicam nesse meio. O estudo dos vrus animais teve um grande avano a partir dos anos 40, quando se comeou a utilizar as culturas celulares, desenvolvidas inicialmente por Enders e colaboradores, para a multiplicao in vitro do vrus da poliomielite. Esse mtodo prtico e barato, o que resulta em sua grande utilizao. As clulas podem ser obtidas a partir de culturas de explante. Essa tcnica consiste na utilizao de fragmentos de tecidos ou rgos, que so cultivados em meio adequado de crescimento celular. Os fragmentos aderidos superfcie de um frasco apropriado vo liberar espontaneamente as clulas, de maneira a formar uma camada monocelular. Isso feito em meio nutritivo, tamponado com CO2, sendo que aps algumas horas de incubao as clulas aderem-se superfcie do novo frasco, e multiplicam se formando outra camada celular. A esse procedimento dado o nome de sub-cultivo. As culturas primrias so derivadas diretamente dos tecidos. Esse tipo de cultura celular constitudo por clulas diploides (contm o mesmo nmero de cromossomos da espcie que deu origem cultura). A cultura primria geralmente mais sensvel que as demais para o cultivo de vrus, e pode ser utilizada para a produo de vacinas. Entretanto, apresenta algumas desvantagens, entre elas, a maior dificuldade de obteno, o alto custo e a possibilidade de contaminao por vrus latentes. muito importante para a multiplicao adequada dos vrus, que a cultura de clulas esteja limpa, sem presena de bactrias e fungos. EFEITO CITOPATOGNICO: Caracteriza o dano que o vrus causa na clula. O efeito mais comum a morte celular. Outros efeitos so: -Lise -Arredondamento: a desorganizao causada pelo vrus causa a deformao das clulas; -Vacuolizao; -Formao de sinccios: fuso das membranas plasmticas de duas clulas; -Incluses: formao de aglomerados de vrus em determinado lugar das clulas; -Picnose: as clulas se tornam menores que o normal; -Apoptose OBS: O cultivo celular s usado experimentalmente, pois para diagnstico seria caro manter a cultura e poderia haver demora na multiplicao dos vrus. TERAPIA ANTI-VIRAL Enquanto as drogas antibacterianas atuam sobre alvos especficos das bactrias (como por exemplo, na parede celular, que no existe no hospedeiro), nos vrus no h essa especificidade, o que dificulta a terapia anti-viral. H a ao da enzima transcriptase reversa, que no existe na clula humana, mas drogas inibidoras dessa enzima s funcionam em retrovrus, que so os que possuem essa enzima. A alternativa ento estimular a resposta imune do hospedeiro ou estimular componentes do prprio sistema imune que atuem sobre as protenas virais (como exemplo, o estudo de protenas que vrus precisam para se replicar e tentar inibi-las). Como exemplo, pode ser citado o interferon, que bloqueia ao dos vrus, mas possui muitos efeitos colaterais. No caso dos vrus, no h uma rota metablica especificamente viral para ser inibida, e por conta desses fatores, muitos antivirais que so aparentemente eficazes in vitro so ineficazes in vivo. Caractersticas do antiviral: 1) Interferir com a funo especfica do vrus (uma funo unicamente viral ou uma funo celular que seja menos suscetvel a droga do que o vrus); 2) Interferir na funo celular de maneira a inibir a replicao do vrus, agindo apenas nas clulas infectadas. Deve haver cuidado extra para que no afete as clulas no infectadas.

SOLVEL EM GUA
DROGA IDEAL

ESTVEL NA CORRENTE SANGUNEA FACILMENTE ABSORVIDA PELA CLULA

Deve interromper a replicao do vrus sem afetar significativamente o metabolismo de clulas do hospedeiro

TXICA
DROGA IDEAL NO PODE SER

CARCINOGNICA MUTAGNICA ALERGNICA TERATOGNICA

Possveis fases do ciclo de replicao viral para atuao de frmacos: 1) ADSORO: por competio com o receptor especfico viral. Exemplo: Influenza x amantadin; drogas que impedem a ligao da gp120 do HIV com o CD4 (problema: estabilidade das protenas); maraviroc bloqueia interao CCR5 e HIVgp120. 2) CAPTAO EM VESCULAS INTRACELULARES (endossomas) 3) LIBERAO DE CIDO NUCLEICO: perda da protena de revestimento, fuso da membrana lipdica com endossoma/lisossoma a inibio da acidificao do compartimento do endossoma pode ser um bom alvo. 4) INTEGRAO DO DNA VIRAL NO DNA DA CLULA 5) TRANSCRIO DO GENOMA DE NOVO RNA OU DNA: o alvo, nesse caso, a enzima DNA ou RNA polimerase 6) TRANSCRIO OU PROCESSAMENTO DO mRNA (Exemplo na transcrio, traduo e replicao do genoma viral: vrus respiratrios com ribavirina; todas as drogas contra herpesvrus; quase todas as drogas contra HIV) 7) SNTESE PROTICA 8) MODIFICAO PS TRADUCIONAL (Exemplo na montagem e liberao do vrus: Rifamicina x poxvrus)

-Inibidores da fuso: bloqueiam fuso do HIV com membrana atravs da interao com gp41 Anlogos de nucleosdeos Muitas drogas antivirais so nucleosdeos sintticos que interferem de alguma maneira com a sntese de DNA ou RNA. Exemplos: Ribavirin - Ganciclovir Aciclovir - Trifluridina Cidofovir - Didanosina,ddl Famciclovir - Lamivudina, 3TC Idoxuridina - Zidovudina, AZT Os melhores medicamentos antivirais so os inibidores da sntese de cidos nucleicos. So seletivos porque podem usar sua prpria enzima para ativar a droga e/ou sua polimerase pode ser mais sensvel a droga. Exemplo: ACICLOVIR (considerado uma das melhores drogas antivirais por ser anlogo da purina e inibir a replicao de DNA). *Coquetis de HIV: possuem trs medicamentos, com mecanismo de ao diferente, para evitar que o vrus escape da ao antiviral. Combinao usual: 1 inibidor de protease + 2 inibidores de transcriptase reversa. A liberao de cido nucleico resultado de uma fuso dependente de um pH timo, inibido por um dos medicamentos, o que inibe esse processo, por exemplo.

Inibidores enzimticos So aqueles que interferem com os processos de replicao viral, mas no so anlogos de nucleosdeos. Podem inativar as enzimas virais por ligarem-se diretamente a elas ou por serem inibidores da protease. Exemplos: Fosfato de oseltamivir - Efavirenz Foscarnet - Indinavir Nevirapina - Ritonavir Delavirdine - Saquinavir

OBSERVAES: Bacterifago Esse vrus (Bacterifago T4), se reproduz em certas linhagens de bactria Escheirchia coli. Ao entrar em contato com a bactria, adere parede celular por meio de certas protenas presentes nas fibras de sua cauda. Na cauda desse vrus, esto presentes tambm enzimas que so capazes de digerir e perfurar a parede da clula bacteriana. O DNA do bacterifago injetado no citoplasma celular. Os genes do vrus so transcritos em molculas de RNA e traduzidos em protenas virais. Isso ocorre por que a clula no diferencia os genes do invasor de seus prprios genes. Em poucos minutos, a bactria est totalmente controlada pelo bacterifago. O passo seguinte ser a produo de protenas que constituiro as cabeas e caudas dos novos vrus. Depois, as cabeas e caudas se agregam ao DNA formando vrions completos. Cerca de 30 minutos aps a entrada de um nico vrus, a clula j est repleta de partculas virais. Nesse momento, so produzidas enzimas que iniciam a destruio ou lise (do grego lysys, destruio) da parede bacteriana, que arrebenta e libera centenas de vrions maduros que podem reiniciar o ciclo. Vrus da Gripe Existem centenas de variedades desse vrus, e todos portadores de RNA. A infeco comea quando o vrion adere substncias presentes na superfcie das clulas (geralmente as que revestem as vias respiratrias). O vrus penetra por inteiro, diferindo-se do vrus bacterifago que s injeta o material gentico. No interior da clula j infectada, o capsdio digerido por enzimas, liberando o RNA viral no citoplasma celular. O RNA capaz de se duplicar, dando origem inmeras cpias dentro da clula hospedeira. A unio de cidos nuclicos e capsdios originam novos vrions que se libertam das clulas infectadas. No h a morte da clula hospedeira, embora isso possa ocorrer. Retrovrus Seu material hereditrio o RNA e sua principal caracterstica a presena da enzima transcriptase reversa, capaz de produzir molculas de DNA a partir do RNA. A membrana desse vrus se funde com a membrana da clula e o capsdio viral penetra no citoplasma celular. O RNA, ento, produz uma molcula de DNA que ir penetrar no ncleo da clula, introduzir-se em um dos cromossomos do hospedeiro e recombinar-se com o DNA celular. Esse DNA viral integrado ao cromossomo celular chamado de provrus, que ir produzir molculas de RNA, originando centenas de vrions completos. Uma vez com os genes do provrus integrados aos da clula, esta ir produzir partculas virais durante toda a sua vida. No leva a morte da clula hospedeira, mas esta poder transmitir o provrus para suas clulas filhas. Cncer e AIDS Muitos retrovrus possuem genes denominados oncogenes, que induzem as clulas hospedeiras diviso descontrolada com a formao de tumores cancerosos. H certos retrovrus como o HIV que ataca os linfcitos T do sangue e o agente causador da AIDS.