Universidade Federal do Piau Centro de Cincias da Sade Disciplina Biofsica BIOFSICA: Um conceito Biofsica (Fsica Biolgica) o estudo do carter

r fsico dos fenmenos biolgicos (vitais), estudados em todos os nveis, comeando pelas molculas e as clulas, e terminando pela biosfera em seu conjunto. As investigaes biolgicas comeam com o mapeamento fsico do problema relacionado com a natureza viva. Isto significa que tal questo se formula a partir das leis gerais da Fsica e da estrutura atmica e molecular da matria. Nesta investigao a Biofsica utiliza metodologia, conhecimentos e tecnologias da Fsica, Qumica e Matemtica, guiada por uma filosofia, uma disposio final, com o objetivo de descobrir, aprofundar e dominar os fenmenos biolgicos. Devemos observar que o contedo da Biofsica no est obrigatoriamente ligado utilizao dos equipamentos fsicos, porm os mdicos ou bilogos que utilizam estes aparelhos em geral no se ocupam da Biofsica, embora possam estar envolvidos fenmenos Biofsicos nos eventos estudados com estes aparelhos. Objetivos da Biofsica O enorme campo de atividade da Biofsica, ao lado de sua complexa estrutura, no lhe permite um simples e nico objetivo. Em sntese podem ser enumerados: 1- Estudar os fenmenos biolgicos atravs das leis e princpios da Fsica 2- Adaptar ao estudo da Biologia a tecnologia e mtodos da Fsica. 3- Estudar os efeitos dos agentes fsicos sobre os seres vivos e particularmente, sobre suas ultra-estruturas e seus funcionamentos. 4- Construir modelos fsicos e matemticos dos sistemas vivos. Mtodos de Estudo da Biofsica A Biofsica utiliza para investigao os mesmos mtodos da Fsica, isto , a observao, a experimentao, a induo e a deduo. A seqncia de uma metodologia caracteriza um estudo cientfico. Cada um dos mtodos exige do pesquisador correta atitude que se expressa atravs da honestidade, imparcialidade, precisa tecnologia e extremada ateno ao trabalho. Partes da Biofsica Condicionalmente a Biofsica se divide em cinco partes. Esta diviso em reas de concentrao do conhecimento surgiu naturalmente com o desenvolvimento da Biofsica, pois sua vasta abrangncia fez com que houvesse necessidade de formao de grupos especializados em reas definidas dos diversos campos da Biofsica. Ento, seguindo a natureza viva que se nos apresenta em vrios nveis de complexidade: as molculas, as organelas celulares, clulas, tecidos, organismos, biosfera, temos os diversos nveis de que si ocupa a Biofsica. Que so: Biofsica Molecular Biofsica celular: bioenergtica e bioeletrognese Biofsica dos Sistemas Fisiolgicos Radiobiologia Mtodos e Recursos de Investigao e Anlise utilizados na Biofsica. A Biofsica Molecular estuda a estrutura e as propriedades fsico-qumicas das molculas biologicamente funcionais, sobretudo os biopolmeros, ou seja, as protenas e os cidos nuclicos. A tarefa da Biofsica Molecular consiste em descobrir os mecanismos fsicos, responsveis pela funcionalidade biolgica das molculas, por exemplo, da atividade cataltica das enzimas e distribuio dos gens nos cromossomos. A Biofsica Celular estuda a estrutura e funo dos sistemas celulares e de tecidos. Este domnio da Biofsica considerado o mais velho e tradicional. Suas tarefas fundamentais hoje esto ligadas com o estudo da fsica das membranas biolgicas e dos processos bioenergticos (Bioenergtica). A biofsica da clula inclue o estudo da gnese e transmisso do impulso nervoso (Bioeletrognese), o estudo dos processos mecanoqumicos (em particular a contrao muscular), o estudo dos fenmenos fotobiolgicos (fotossntese e viso). A Biofsica dos Sistemas Fisiolgicos estuda todos os aspectos fsicos e funes dos sistemas fisiolgicos. Que so: Respirao, Circulao, Funo Renal, Audio, Viso e a Biomecnica dos msculos e esqueletos. Radiobiologia estuda os efeitos das radiaes sobre os seres vivos, desenvolvendo sua metodologia. Dentro deste campo destacam-se duas sub-reas a das radiaes ionizantes e a das radiaes excitantes (fotobiologia). Mtodos e Recursos de Investigao e Anlise utilizados na Biofsica. O desenvolvimento de uma srie de mtodos e tcnicas de anlise com aplicao na investigao dos fenmenos Biofsicos deu origem a um campo da Biofsica que se dedica a elaborao de tcnicas que do suporte a investigao Biofsica. 12345-

Segundo a caracterstica fsica ou fenmeno em que se baseiam podemos classificar estes mtodos em: a) Mtodos de investigao baseados nas caractersticas fsicas (massa molecular, dimenses e formas): - Sedimentao - Ultrafiltrao - Disperso da luz - Disperso dos Raios X - Cromatografia - Eletroforese. b) Mtodos de investigao baseados na interao das substncias com a radiao (dos raios X radiofrequncia): - Espectrofotometria de Absoro: infravermelho, visvel, ultravioleta. - Espectrofotometria de Emisso: fluorescncia, absoro atmica - Dicroismo Circular - Disperso tica-rotatria - Difrao de Raios X - Espectroscopia de Ressonncia Gama (efeito Mossbauer) - Ressonncia Paramagntica Nuclear(NPR) - Ressonncia Paramagntica Eletrnica (EPR) - Ressonncia Magntica Nuclear (NMR) - Microscopia tica - Microscopia Eletrnica - Radiografia - Tomografia Computadorizada - Ultrassonografia c) Mtodos de investigao baseados na emisso de radiao por substncias radioativas incorporadas aos sistemas biolgicos (biomolculas, clulas, tecidos, rgos). So tcnicas radioscpicas que utilizam os traadores radioativos em pesquisa biolgica, por exemplo: - Auto-radiografia - Radioimunoensaio - Marcao radioisotpica - Cintilografia.

SOLUES l - INTRODUO Todos os seres vivos, do ponto de vista biofsico, constituem-se de uma poro (ou pores) de soluo cujo volume determinado por meio de membranas biolgicas. Sob este ponto de vista uma ameba ou um animal pluricelular podem ser considerados como uma soluo ou um conjunto de solues, embora altamente complexas e heterogneas. A composio qumica de uma clula depende do tipo de clula, da regio que se est examinando e varia continuamente com o tempo. Diz-se que a vida comeou nos oceanos primitivos, portanto, em uma soluo aquosa. Todos os animais, aquticos ou no, procuram conservar-se com uma composio dentro de determinados limites, caractersticos da sua espcie. Qualquer variao, se no corrigida, pode levar a alteraes fisiolgicas que terminam resultando na morte do animal. Na espcie humana, por exemplo, a concentrao extracelular de K+ deve permancecer nos limites de 4,5 a 5,5 mEq/l. Alteraes para cima ou para baixo desses limites podem levar morte por parada cardaca. Qualquer pesquisa na rea biolgica faz uso de reagentes na forma de soluo. A maior parte dos medicamentos empregados na rea biomdica apresentada sob a forma de soluo: antibiticos, anestsicos, vitaminas, minerais, antitrmicos, analgsicos, vacinas. Na recuperao de pacientes desidratados ou para a manuteno do volume hdrico durante uma cirurgia ou no ps-operatrio, faz-se uso de solues cujo volume, composio e velocidade de administrao devem ser estritamente controlados e so calculados com base no peso do paciente, no grau de desidratao e outros parmetros clnicos. ll - COMPOSIO Qualquer soluo constituda basicamente por, no mnimo, dois componentes: o soluto e o solvente. O plasma sanguneo, por exemplo, uma soluo constituda de grande quantidade de gua, que o solvente, na qual esto dispersos vrios solutos, tais como: protenas, sais minerais, aminocidos, acares, vitamins, hormnios e outros. Tratando-se de lquidos biolgicos, teremos sempre a gua como solvente e a maior parte dos solutos na forma slida. Uma exceo importante consiste na dissoluo dos gases envolvidos na respirao celular nos lquidos biolgicos. Ill - CONCENTRAO Caracteriza-se qualitativamente uma soluo identificando-se quimicamente o seu solvente e o seu soluto, ou seus solutos por exemplo: soluo aquosa de NaCl. Quando no se especifica o solvente, subentende-se que seja a gua. A caracterizao quantitativa de uma soluo feita por dois parmetros: a sua concentrao ( C ) e o seu volume (V). Como existe uma relao matemtica entre esses dois parmetros e, alm disso, possvel ter-se vrios volumes de uma soluo com a mesma concentrao, a caracterizao quantitativa das solues feita comumente apenas pela sua concentrao. Por definio a concentrao C de uma soluo a relao entre a quantidade de soluto (Q) e o volume da soluo (V) : Q C = ----V Q V = ----C

==>

Q=C.V

==>

Dessa definio, deduz-se que a quantidade de soluto (Q) presente em uma soluo sempre igual ao produto da concentrao (C) pelo volume da soluo (V). IV-UNIDADES DE CONCENTRAO Da definio de concentrao conclui-se que as unidades de concentrao dependem das unidades de medidas ou de expresso da quantidade de soluto e do volume da soluo. Por exemplo : se a quantidade de soluto for expressa em grama (g) e o volume da soluo em litro (l) a concentrao ser em g/l. Na rea biomdica as unidades de concentrao mais utilizadas so as seguintes: mg/ml............................................indica a quantidade de miligrama de soluto existente em cada um mililitro de soluo. mg%..............................................indica a quantidade de miligrama de soluto existente em cada cem mililitros de soluo. g/ml(g/cm3)....................................indica a quantidade de grama de soluto existente em cada um mililitro de soluo. g%.................................................indica a quantidade de grama de soluto existente em cada cem mililitros de soluo. M ou mol / l...................................indica o nmero de moles de soluto existente em cada um litro de soluo.

mM ou mmol/l...............................indica o nmero de milimoles de soluto existente em cada litro de soluo. N ou Eq/l................................ indica o nmero de equivalentes-grama de soluto (em relao a uma determinada funo) existente em cada um litro de soluo.

mEq/l.............................................indica o nmero de miliequivalentes-grama de soluto(em relao a uma determinada funo) existente em cada um litro de soluo. Osm ou osmol/l..............................indica o nmero de moles de partculas de soluto, ou seja, o nmero de osmoles existente em cada um litro de soluo. mOsm ou mosmol/l.........................indica o nmero de milimoles de partculas de soluto existente em cada um litro de soluo A converso de uma unidade de medida em outra pode ser feita facilmente atravs de fatores de converso ou de proporcionalidade. Por exemplo: a converso de g/l para mol/l feita utilizando-se a massa molecular como fator de converso. Para transformar concentraes de mol/l para osmol/l, utiliza-se o fator de Van`t Hoff (i). As converses de g para mg ou l para ml no necessitam comentrios. V - REGRAS DE DILUIO A concentrao de uma soluo pode ser modificada por meio de trs processos. 1 - Acrescentando-se ou retirando-se solvente (V) 2 - Acrescentando-se ou retirando-se soluto (Q) 3 -Acrescentando-se ou retirando-se soluto(Q) e solvente (V) na forma de soluo a uma concentrao diferente. Se a concentrao final (Cf) for menor que a inicial (Ci) dizemos que a soluo foi diluda, ao contrrio, que foi concentrada. Em qualquer caso, porm, o Princpio da Diluio estabelece que a quantidade final de soluto (Qf) ser obrigatoriamente igual quantidade inicial (Qi) somada quantidade acarescentada (+Qa) ou retirada (-Qa). Qf = Qi Qa sendo: Qf = Cf . Vf Qi = Ci . Vi Qa = Ca . Va Como, em qualquer soluo, a quantidade de soluto sempre igual ao produto da concentrao pelo volume, podemos substituir na equao anterior e obter uma nova equao com a qual podemos calcular a concentrao da soluo modificada (Cf). Cf . Vf Qf = = Ci . Vi _ Qi Ca . Va Qa e Vf = Vi Va

Quando ocorrer alteraes apenas no volume da soluo (processo 1) quantidade final (Qf) de soluto permancecer igual inicial (Qi). As equaes anteriores sero simplificadas pois o ltimo termo (Qa) nulo: Qf = Qi e Cf . Vf = Ci . Vi sendo Vf = Vi Va

Devemos chamar a ateno para o uso de unidades COERENTES nessas equaes. Multiplicar C em moles/l por V em ml ou querer obter Cf em moles/l expressando Ci em g / l absurdo ! Na rea biomdica, muitas substncias so prescritas e administradas com base no peso corporal do paciente e divididas em mais de uma tomada por dia. As doses dirias ou fracionadas (de 12/12 hs, de 8/8 hs, etc.) podem ser facilmente obtidas por simples regras de proporcionalidade, sabendo-se o peso corporal do paciente. Se, por exemplo, um medicamento apresentado na forma de suspenso a 100mg/ml, deve ser administrado na dose de 40mg/kg . dia (40 mg por kg de peso por dia) dividido em quatro tomadas, como deveria ser a prescrio desse medicamento para um indivduo de 50 kg de peso corporal ? 1 kg..........40 mg 50 kg.......... x mg 2000 mg..........1 dia (24 hs) Y mg..........1/4 dia (6 hs) 100 mg..........1 ml 500 mg..........Z ml x (dose diria) = 2000 mg Y (dose fracionada) = 500 mg Z (volume da suspenso) = 5 ml

Prescrio: Tomar 5ml da suspenso (que contm 500mg do medicamento) de 6 em 6 horas (quatro vezes por dia).

COMPOSIO E PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DOS COMPARTIMENTOS DOS ORGANISMOS SUPERIORES I- INTRODUO Os animais unicelulares ou de pequenssimo porte captam diretamente do ambiente o oxignio e as substncias nutritivas necessrias sua sobrevivncia e lanam, tambm diretamente no meio ambiente, os produtos resultantes do seu metabolismo. So portanto bastante suscetveis a variaes do meio e, se no dispem de meios de locomoo ativa ou passiva, morrem aps um certo tempo porque consomem todos os nutrientes disponveis. Os animais multicelulares, como o homem por exemplo, no podem, evidentemente, depender da captao DIRETA de oxignio e nutrientes, e nem da eliminao DIRETA de catablitos no meio ambiente. Se assim fosse, apenas as clulas superficiais sobreviveriam e, alm disso, o animal teria que viver num meio aquoso (mergulhado em uma salmoura). Para solucionar esse problema, a natureza (?) desenvolveu, nos animais superiores, sistemas especializados em determinadas funes. Cada sistema constitudo por rgos, que por sua vez so constitudos por tecidos e estes por clulas. Assim: - separando o animal do ambiente externo e desempenhando um papel de proteo, temos o sistema tegumentar. Essa proteo inclue a defesa contra agentes biolgicos nocivos ou contra a perda de gua, eletrlitos ou calor pelo organismo. - para a captao do oxignio e eliminao do gs carbnico temos o sistema respiratrio. - para a digesto dos alimentos, absoro dos nutrientes e da gua e eliminao dos resduos temos o sistema digestrio. - para a distribuio do oxignio e dos nutrientes a todas as clulas do organismo e para a coleta do gs carbnico e dos catablitos por elas produzidos temos o sistema circulatrio ou cardiovascular. - para a depurao do sangue, eliminao de substncias txicas no volteis como a uria, controle e manuteno do volume hdrico, do pH e da osmolaridade do organismo temos o sistema urinrio. - para a locomoo em busca de alimento ou para a defesa do animal temos o sistema steo-muscular. - para a determinao das caractersticas sexuais e para a perpetuao da espcie temos o sistema reprodutor. - por fim, para possibilitar o funcionamento harmnico dos sistemas anteriores, controlando o organismo como um todo, temos o sistema neuro-hormonal que, alm disso, permite ao animal especialmente ao homem o relacionamento social e a execuo de atividades intelectuais. Nos animais unicelulares basta a membrana citoplasmtica para separar o meio intracelular do meio ambiente. Alm dessa funo de compartimentalizao a membrana celular tambm controla o intercmbio entre os meios intra e extracelular. Os animais multicelulares, com o grande nmero e a variedade de clulas individuais que possuem, necessitam de sistemas especiais de controle de intercmbio. Como so constitudos por diversos sistemas cuja clulas nem sempre esto em contato direto com o ambiente, tm que desenvolver para si um meio ambiente interno que possibilite o intercmbio entre todas as clulas, atravs do sistema circulatrio, e tambm o intercmbio com o meio ambiente externo atravs do sistema tegumentar, respiratrio e urinrio. O controle qualitativo e quantitativo desse meio ambiente interno de suma importncia para a sobrevivncia do animal. Do ponto de vista fsico-qumico um animal nada mais do que uma soluo aquosa, pois cerca de 65% de seu peso gua. O restante constitudo pelos diversos solutos existentes nos seres vivos como os pequenos compostos orgnicos e inorgnicos e as macromolculas. II-PROPRIEDADES FSICAS DA GUA As propriedades fsicas da gua demonstram porque a natureza a elegeu espontaneamente o maior componente da matria viva. A gua constitui cerca de 60 a 70% do peso corporal dos animais superiores. Alm do seu admirvel poder solvente, que suplanta o dos demais lquidos, outras propriedades comprovam a necessidade vital da gua. II.1-Estrutura da gua A molcula de gua consiste de dois tomos de hidrognio (H) ligados por ligao covalente a um tomo de oxignio (O). Vrias experincias comprovam que a molcula de gua no linear, isto , os seus tomos no esto em linha reta, mas sim formando uma cadeia dobrada segundo um ngulo de 105 graus. A estrutura molecular da gua est representada na figura abaixo: H / (-) O (+) 105 graus \ H Trata-se de uma molcula dissimtrica; os dois tomos de hidrognio esto do mesmo lado em relao ao oxignio. Esta configurao confere molcula de gua as propriedades de um dipolo pois, sendo o oxignio mais eletronegativo, atrai com mais fora os eltrons das ligaes com os dois tomos de hidrognio. Forma-se assim uma regio negativa em torno do tomo de oxignio e uma regio positiva em torno dos tomos de hidrognio. Por isso, a gua , entre todos os solventes, o mais ionizante e tambm

aquele que, para os eletrlitos, tem o maior poder de dissociao. Ainda pela mesma razo, as molculas de gua so unidas por pontes de hidrognio, como mostra a figura: H \ / H / O .....H -- O H H \ O : H \ O As linhas cheias representam ligaes covalentes e as linhas interrompidas, ligaes secundrias chamadas ligaes por pontes de hidrognio ou pontes de hidrognio. No espao, a estrutura tetradrica. A ligao por pontes de hidronio a causa de algumas propriedades especiais da gua. uma ligao que pode ser classificada como ligao qumica, mas que excepcionalmente, de fraca energia (~- 5 Kcal/mol). A ligao por pontes de hidrognio ocorre em virtude da atrao de um prton ou um on hidrognio por dois tomos fortemente eletronegativos pertencentes a duas molculas ou grupamentos atmicos distintos. Seu interesse grande porque: - encontrada na gua, no ponto em que une as molculas (de modo que poderia ser qualificada como ligao fsica) em muitos constituintes do organismo. encontrada tambm em macromolculas como as protenas e os cidos nucleicos, nas quais muito contribui para a manuteno da estrutura espacial dessas molculas. - tem fraca energia, o que permite o seu fcil rompimento. Quanto maior a temperatura de um sistema, menor a quantidade de pontes de hidrognio existente. As pontes de hidrognio implicam numa forte associao das molculas isto , numa forte coeso. Isso explica a forte tenso superficial e o ponto de ebulio elevado para uma molcula to leve como a gua. No estado gasoso, a gua se apresenta sob a forma de mono-hidrol (H-O-H), de peso molecular igual a 18g/mol. No estado lquido, porm, a polaridade da gua permite a associao de molculas entre s, atravs de pontes de hidrognio, com a formao de di-hidrol (H-O-H)2 ou tri-hidrol (H-OH)3 em diferentes propores dependendo da temperatura. O gelo, ou seja, a gua no estado slido, parece que est unicamente na forma de tri-hidrol. II. 2-Calor especfico ( c = Q / m . t ) Calor especfico de uma substncia corresponde quantidade de calor necessria para variar de 1 grau Celsius a temperatura de 1 g dessa substncia. Quanto maior o calor especfico de uma substncia, maior sua capacidade de absorver, armazenar ou ceder grandes quantidades de calor sem sofrer grandes variaes de temperatura. Em condies ordinrias de temperatura e presso a gua, entre todos os lquidos, o que tem maior calor especfico: 1 cal/g.C. Significa que deve-se retirar ou acrescentar 1 cal a cada 1 g de gua para que haja uma variao de temperatura de 1C ou ou 100 cal para cada 100 g para variar a temperatura de 1C. Esta propriedade fsica da gua de grande importncia para os seres vivos pois permite que ela se comporte como um tampo ou amortecedor trmico, impedindo que ocorram grandes variaes da temperatura celular em decorrcia do calor liberado durante as reaes biolgicas. Nos animais superiores, a contnua movimentao da gua atravs do sistema circulatrio facilita a distribuio do calor por todas as partes do organismo e o intercmbio com o meio ambiente. Para ilustrar, admitamos a existncia hipottica de dois animais A e B, sendo o animal A composto de 200 g de gua e o animal B de 200 g de uma substncia cujo calor especfico igual a 0,2 cal/g.oC. Suponhamos que esses animais estejam a uma temperatura de 37oC e efetuem uma mesma reao biolgica com a liberao de 100 cal. Supondo ainda que todo o calor liberado permanea nos animais, quais sero suas temperaturas aps as reaes? Animal A m = 200 g c = 1 cal / g.C Q = 100 cal ti = 37 C t = ? tf = ti + t = ? Animal B m = 200 g c = 0,2 cal / g.C Q = 100 cal ti = 37 C t = ? tf = ti + t = ? H / H H \ / H.......O /

-------------------------------------------------------------------------------------------------c = Q / m . t donde t = Q / m . c --------------------------------------------------------------------------------------------------

10

100 cal t = ---------------------------200 g . 1 cal / g . C

100 cal t = ---------------------------200 g . 0,2 cal / g . C

t = 0,5 C t = 2,5 C tf = 37 C + 0,5 C = 37,5 C tf = 37 C + 2,5 C = 39,5 C -------------------------------------------------------------------------------------------------O animal A, composto de gua, sofreu apenas uma variao de temperatura de meio grau Celsius, enquanto o animal B sofreu uma variao de temperatura cinco vezes maior. Com mais 100 cal, a temperatura do animal A elevar-se-ia para 38 C, ao passo que a do animal B atingiria 42 C. II.3-Calor latente de mudana de estado(L= Q/m) Denomina-se calor latente de uma substncia a quantidade de calor necessria para mudar 1g dessa substncia de um estado fsico para outro. Assim, podemos ter calor latente de fuso, solidificao, evaporao, condensao, sublimao, etc. Nas temperaturas usuais suportadas pelos seres vivos, as mudanas de estado que podem ocorrer com a gua so a passagem de slido para lquido (fuso), ou o inverso (solidificao) e a passagem de lquido para vapor (evaporao), ou o inverso (condensao). O calor latente de fuso/solidificao da gua de 80 cal/g e o de evaporao/condensao de 540 cal/g. Quer dizer, para se congelar um grama de gua necessrio retirar da mesma 80 calorias, enquanto que para evaporar um grama de gua preciso ceder-lhe 540 calorias. Sendo relativamente grande, o calor latente de solidificao da gua dificulta o seu congelamento; o que seria desastroso para os seres vivos. O elevado calor latente de evaporao da gua uma propriedade fsica de grande importncia na regulao da temperatura corporal porque permite que o organismo libere grandes quantidades de calor, por meio da evaporao, sem perder grandes quantidades de gua. A evaporao da gua ao nvel da pele e das vias respiratrias se faz s custas do calor interno do organismo, isto , a gua ao evaporar-se retira calor do corpo. Este um importante mecanismo de regulao da temperatura corporal, mas seria extremamente prejudicial se o calor latente de evaporao da gua fosse pequeno pois, para eliminar uma determinada quantidade de calor o organismo teria que perder uma grande quantidade gua, o que poderia lev-lo rapidamente a uma desidratao e morte. Imaginemos novamente a existncia de dois animais A e B, sendo A composto de 200 g de gua e B de 200 g de uma substncia lquida cujo calor latente de evaporao vale 108 cal/g. Suponhamos que esses animais necessitam perder, por evaporao, 1080 calorias. Quais as quantidades de lquidos que deveriam evaporar? Animal A Q = 1080 cal L = 540 cal/g m = ? m= Q L = 1080cal = 2g 540 cal/g Animal B Q = 1080 cal L = 108 cal/g m = ? m= Q L = 1080cal = 10g 108 cal/g

O animal A perderia apenas 1% da sua massa enquanto o animal B perderia 5% para eliminar a mesma quantidade de calor. II.4 - Tenso superficial A tenso superficial da gua maior do que a de qualquer outro lquido, com exceo do mercrio. Esta propriedade de grande importncia no estudo fsico-qumico dos fenmenos de superfcie, como os que se observam nos colides. ---------------------------------------------------------------------------Tenso superficial (20C ) ---------------------------------------------------------------------------gua 72,7 dina/cm Glicerina 65,2 dina/cm Benzeno 27,9 dina/cm Acetato de etila 23,3 dina/cm ------------------------------------------------------------------------II.5 - Constante dieltrica A gua possui uma constante dieltrica elevada em virtude da polarizao existente nas suas molculas. Esta propriedade lhe permite separar e manter partculas de carga oposta sob a forma dissociada ou mesmo ionizar substncias moleculares: NaCl + H2O ----------------> Na+ aq + Cl-aq

11

H2O H2O

+ +

HCl NH3

-----------------> ----------------->

H2OH+ + HO+

ClNH3+

Por fim, a polaridade da gua induz at reaes, embora fracas, entre duas molculas de gua: H \ O / H H + / H H \ O OH+ / H H \ + O/

-------------------------------------------------------------Constantes dieltricas -------------------------------------------------------------cido ciandrico 95 gua oxigenada 93 Formamida 84 gua 82 cido frmico 62 Etanol 26 -------------------------------------------------------------A gua se apresenta livre ou ligada a certas partculas coloidais, formando a chamada bainha de hidratao. a gua ligada aos emulsides do plasma, isto , as protenas, que vai influir na presso osmtica do plasma, a qual se denomina presso onctica ou coloidosmtica. III-DISTRIBUIO DE GUA E SOLUTOS NOS ORGANISMOS SUPERIORES. Dissemos anteriormente que os seres vivos nada mais so que solues aquosas. No se trata, porm, de uma soluo nica e homognea pois a existncia de diversas membranas possibilita o fracionamento da soluo total em compartimentos que apresentam composio e propriedades, s vezes, bastante diferentes. Essas diferenas de concentrao e de propriedades entre dois ou mais compartimentos decorrem obviamente das propriedades das membranas que os separam como por exemplo permeabilidade e capacidade de transporte ativo. Esquematicamente podemos dividir um animal superior em dois grandes compartimentos ou lquidos: o lquido intracelular (LIC) e o lquido extracelular (LEC). O LIC seria o conjunto de todas as clulas do organismo e corresponde a cerca de 40% de peso corporal. lgico que se trata de uma abstrao pois cada clula indivdual tem seu LIC particular. O LEC seria um meio ambiente interno, ou seja, o lquido atravs do qual se realiza o intercmbio entre as diversas clulas e sistemas do organismo e entre o organismo e o meio ambiente externo. Corresponde a cerca de 20% do peso corporal e subdividi-se em dois compartimentos: o lquido intravascular (LIV) ou plasma e o lquido intersticial (LIT). Este ltimo corresponde a 15% do peso corporal e compreende o lquido existente entre as clulas e o compartimento intravascular. O LIT est separado do compartimento intravascular, ou seja, do sistema circulatrio pela parede dos vasos sanguneos, mais especificamente, pela membrana dos capilares que onde verdadeiramente ocorre o intercmbio entre esses dois compartimentos. O lquido intersticial (LIT) funciona como um tampo protetor para as clulas, amortecendo variaes de concentrao, de osmolaridade, de pH ou at mesmo de temperatura que ocorram bruscamente no compartimento intravascular (sangue). ------------------------------------------------------------------------------------------------Distribuio da gua nos organismos superiores * -------------------------------------------------------------------------------------------------Volume lquido total (VT) 60% Lquido intracelular (LIC) 40% Lquido extracelular (LEC) 20% Lquido intersticial (LIT) 15% Lquido intravascular (LIV) 5% -------------------------------------------------------------------------------------------------* Porcentagem mdia (v / p) em relao ao peso corporal -------------------------------------------------------------------------------------------------A osmolaridade normal dos lquidos corporais, no homem, de 0,3 Osm (0,3 osmol/l). Conhecendose o peso corporal de um animal pode-se determinar o volume (V) e a quantidade de soluto (Q) em cada compartimento. Assim, para um homem de 80kg teramos os seguintes valores: -------------------------------------------------------------------------------------------------VT = 48 l C = 0,3 osmol/l Qt = 14,4 osmol -------------------------------------------------------------------------------------------------LIC | LEC | V = 16 l C = 0,3 osmol/l Q = 4,8 osmol

12

|--------------------------------------------------------------------| LIT | LIV V = 32 l | V = 12 l | V = 4 l C = 0,3 osmol/l | C = 0,3 osmol/l | C = 0,3 osmol/l Q = 9,6 osmol| Q = 3,6 osmol | Q = 1,2 osmol -------------------------------------------------------------------------------------------------Observe-se que a osmolaridade dos trs compartimentos a mesma. Isto ocorre em virtude das membranas celular e capilar serem totalmente permeveis gua . Havendo alterao da osmolaridade em um at que um novo equilbrio seja alcanado. O contedo lquido dos animais varia com a idade e com o sexo. Alm disso, cada tecido possue compartimento, a gua se desloca por osmose do compartimento menos concentrado para o mais concentrado uma concentrao prpria de gua: -------------------------------------------------------------------------------------------------Msculos 75-80% Tecido nervoso 70-85% Tecido conjuntivo 60% Hemcias Tecido sseo 25% Tecido adiposo 20% -------------------------------------------------------------------------------------------------IV-DISTRIBUIO DOS SAIS Nos lquidos corporais, quase todos os cidos, bases e sais se apresentam como partculas carregadas de eletricidade, os ons, em virtude da elevada constante dieltrica da gua. Os compostos que formam ons em soluo so chamados eletrlitos. Existem eletrlitos fortes , que se apresentam totalmente ou quase totalmente sob a forma dissociada ou ionizada, como o cloreto de sdio, o cido clordrico, ou o bicarbonato de sdio; e outros, os eletrlitos fracos, que se encontram parcialmente dissociados ou ionizados, como o cido actico ou o cido carbnico . Os ons carregados positivamente so os ctions, e os carregados negativamente so os nions. Os ons de importncia fisiolgica so: Ctions: H+, Na+, K+, Ca++, Mg++, NH+ nions : OH-, HCO3-, Cl-, H2 PO4-,HPO4=, proteinatos(prot -) = e SO4 . No organismo como um todo, o nmero de ons carregados positivamente deve ser equilibrado por igual nmero de cargas negativas. Deste modo, necessrio que os ctions e nions existentes nos lquidos corporais, embora possuam molaridade diferentes, tenham a mesma equivalncia eletroqumica. A equivalncia eltrica, porm, no necessariamente igual a equivalncia osmtica. Um mol de Ca++ equivale osmoticamente a um mol de Cl-, mas os dois no se equivalem eletricamente. -------------------------------------------------------------------------------------------------COMPOSIO DOS LQUIDOS DOS COMPARTIMENTOS DOS ANIMAIS SUPERIORES * -------------------------------------------------------------------------------------------------Lquido Extracelular (LEC) ( LIC ) L . Intracelular --------------------------------------------------------------Plasma (P) L. Intersticial -------------------------------------------------------------------------------------------------Na+ 142 Na+ 143 K+ 157 K+ 5 K+ 4 Na+ 14 Ca++ 5 Ca++ 5 Mg++ 26 Mg++ 3 Mg++ 3 Ca++ ------------------- ------------------------------------------------- ----155 155 197 HCO3- 27 HCO3- 27 HCO3- 10 Cl103 Cl117 HPO4-- 2 HPO4-- 2 HPO4-- 117 SO4-1 SO4-1 SO4--c. Org. 6 c. Org. 6 c. Org. 6 prot16 prot2 prot70 --------------------------------------------------------------------------155 155 197 -------------------------------------------------------------------------------------------------* As concentraes so expressas em mEq / l V-se, pelo quadro acima, que h marcantes diferenas entre a composio do lquido intracelular (LIC) em relao ao extracelular (LEC) principalmente no que diz respeito ao Na+ e ao K+, sendo o

60%

13

Na+ o ction predominante do LEC e o K+ do LIC. Com relao aos nions, o Cl- do LEC substitudo pelo HPO4= no LIC. Entre o plasma e o lquido intersticial, a principal diferena a presena de uma maior concentrao de macromolculas (protenas) no primeiro. Essas partculas desempenham importante papel na manuteno da tonicidade do compartimento intravascular e no intercmbio de lquidos atravs dos capilares. As diferenas de concentrao dos ctions Na+ e k+ entre o lado interno e externo das clulas no so obtidas por simples difuso, mas po um processo metablico complexo, que constitue o chamado transporte ativoassociado a propriedades passivas da membrana celular como a permeabilidade seletiva.

V- MECANISMOS DE TROCA DE SUBSTNCIAS ENTRE OS COMPARTIMENTOS. As foras que promovem o movimento de gua e de pequenas molculas atravs das membranas dos compartimentos so: difuso, filtrao, osmose e transporte ativo. A DIFUSO consiste no espalhamento de uma substncia devido simplesmente ao movimento aleatrio de suas molculas ou partculas constituintes. Pode ser difuso simples, quando ocorre num meio homogneo, ou difuso atravs de uma membrana. Existindo a substncia nos dois lados da membrana, a difuso se faz nos dois sentidos. No cmputo geral, porm, o transporte efetivo se faz da regio de maior concentrao para a de menor concentrao. Denomina-se FILTRAO o processo de transferncia de substncias atravs de uma membrana por mieo de um gradiente de presso hidrosttica. A natureza da membrana, ou seja, o dimetro dos seus poros, quem determina quais as partculas que podero ou no atravess-las. A filtrao constitue um importante mecanismo de troca de substncias entre os compartimentos intravascular e intesticial atravs das paredes dos capilares. Normalmente, a membrana dos capilares amplamente permevel gua e pequenas molculas e impermevel s macromolculas como as protenas e os polissacardeos. A OSMOSE consiste na transferncia efetiva de solvente de uma soluo menos concentrada para outra mais concentrada atravs de uma membrana quando esta permevel apenas ao solvente. Dependendo do dimentro dos poros, durante o fenmeno da osmose, alm do solvente podem ser transportadas tambm pequenas molculas ou partculas nele dissolvidas. Todos os processos vistos anteriormente so classificados como TRANSPORTE PASSIVO porque a transferncia de substncias se faz s custas da energia dos gradientes j existentes no sistema. A membrana no necessita realizar nenhum travalho para que o processo ocorra: existindo um gradiente (de concentrao, eltrico, de presso hidrosttica ou osmtica) e sendo a membrana permevel, o transporte se efetua PASSIVAMENTE, ESPONTANEAMENTE. Considerando-se TRANSPORTE ATIVO, a transferncia UNIDIRECIONAL de uma substncia atravs de uma membrana INDEPENDETEMENTE ou at mesmo CONTRA um gradiente qualquer. Esse processo necessita de uma fonte externa de energia pois, de outro modo no poderia manter o transporte em uma nica direo nem vencer um gradiente contrrio que mesmo no existindo de incio, apareceria logo que fosse iniciado o processo. Normalmente, as membranas biolgicas obtm na hidrlise do ATP a energia necessria para executar seus transportes ativos. As membranas podem ser estudadas quanto permeabilidade a uma substncia, ou seja, a um soluto, ou a uma soluo. Quanto permeabilidade a uma soluo as membranas podem ser classificadas como PERMEVEIS, POUCO PERMEVEIS, ou IMPERMEVEIS, conforme o grau de facilidade com que se deixam atravessar pela referida substncia. Quanto permeabilidade a uma soluo as membranas podem ser classificadas como PERMEVEIS, quando se deixam atravessar pelo soluto e pelo solvente; SEMI-PERMEVEIS, quando se deixam atravessar apenas pelo solvente e IMPERMEVEIS, quando no se deixam atravessar nem pelo solvente nem pelo soluto. claro que uma mesma membrana pode ser permevel a uma soluo e semipermevel a outra. A ltima classe de membranas (impermeveis) poderia ser associada a estruturas qeratinides nos seres vivos. VI - OSMOSE, OSMOLARIDADE, PRESSO OSMTICA E TONICIDADE Denomina-se OSMOSE, a transferncia efetiva de solvente atravs de uma membrana semipermevel, como decorrncia de um gradiente de concetrao do soluto entre os dois compartimentos separados pela membrana. Na realidade, a osmose uma caso particular de difuso atravs de uma membrana.

A ...... ...... .. . . . . M

B ....... ....... . . . . . ..

....... ...... M ....... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..

14

.......... ............ .......... ............ .......... ............ (Incio)

.......... ............ .......... ............ .......... ............ (Equilbrio)

Consideremos o esquema acima constitudo por dois compartimentos A e B, separados por uma membrana M, permevel apenas gua. Coloquemos no compartimento A 2 litros e no compartimento B 1 litro de gua pura. Sendo a membrana permevel, haver um fluxo contnuo de gua de A para B e de B para A, devido ao movimento aleatrio das molculas que resulta em choque das mesma entre si e com as paredes do recipiente, e portanto, com a superfcie da membrana. Como, porm, as molculas no lado A esto submetidas a uma presso hidrosttica maior que no lado B, o fluxo de A para B ser maior que de B para A. Teremos ento uma transferncia efetiva de gua de A para B at que as duas presses se igualem. Nesse ponto o sistema atingiu um estado de equilbrio dinmico em que os fluxos de A para B e de B para A continuam existindo, porm, com a mesma intensidade. importante frisar que o processo de transporte efetivo da gua de A para B se efetuou em decorrncia de um gradiente de presso hidrosttica: no tem nada a ver com osmose. Estando o sistema em equilbrio hidrosttico, coloquemos no lado A 0,15 mol de glicose (G). Teremos ento uma soluo 0,1 M no lado A e solvente puro no lado B.

A ....... . . . . . . .. M ............ .............

0,1 M (G)

gua

Com relao s presses hidrostticas, o sistema continua em equilbrio. Teremos agora, no entanto, um desequilbrio de concentrao. Como a membrana impermevel glicose, se poder supor que nada mais aconteceria ao sistema pois, apesar de estar submetida a um gradiente de concentrao, a glicose no pode passar para o lado B e atingir assim um equilbrio de concentrao. Infelizmente, a soluo no to simples assim: o sistema est desequilibrado e, como tudo no universo, tende espontaneamente para um estado de equilbrio. O desequilbrio foi estudado com relao glicose mas, ele existe tambm com relao gua. A presena do soluto no lado A diminue a energia cintica mdia das molculas do solvente nesse compartimento. Isto , a energia cintica mdia das molculas de gua no lado B (solvente puro) maior que no lado A (soluo), pois, nesta parte da energia cintica das molculas da gua transferida para as partculas do soluto. Disso resulta que a energia cintica mdia (a presso) com que as molculas de gua se chocam no lado A da membrana menor que no lado B. Alm disso, as partculas do soluto no lado A tambm se movem aleatoriamente e se chocam com a superfcie da membrana. Os choques do soluto, porm, so ineficazes e apenas tomam o lugar de um choque que poderia ser de uma molcula de gua. Esses dois fatores em conjunto, ou seja, a diminuio da energia cintica mdia e a diminuio do nmero de choques do solvente no lado A fazem com que o fluxo de gua de A para B seja menor que de B para A. Haver ento um fluxo efetivo do solvente do lado B (solvente puro) para o lado A (soluo), o que constitue o fenmeno da OSMOSE. A 0,1 M (G) ..... M ......... .......... ......... (incio) B A B

gua .. . . . ..... M .. . . . . . . . . . ........... . . .. . . . . . . . (equilbrio)

A passagem do solvente de B para A gera um gradiente de presso hidrosttica e vai diminuindo a concentrao do soluto no lado A. Esses dois fatores promovem um aumento da energia cintica e do numero de choques do solvente no lado A, o que resulta em aumento do fluxo de A para B. Por outro lado, a diminuio da presso hidrosttica no compartimento B leva a uma diminuio da pressode choque das molculas na membrana, o que resulta numa diminuio do fluxo de B para A. Assim, a passagem do solvente por osmose cria um gradiente de presso hidrosttica que dificulta a

15

continuao do processo e facilita o fluxo em direo inversa. O sistema atingir o equilbrio quando os dois fluxos, de A para B e de B para A, novamente se igualarem. Observe-se que o sistema est em equilbrio como um todo, apesar de no estar em equilbrio hidrosttico. Esse desequilbrio hidrosttico existe justamente para contrabalanar o desequilbrio osmtico. O gradiente hidrosttico tem um sentido inverso ao gradiente osmtico. A presso com que o solvente transferido para a soluo chamada PRESSO OSMTICA e pode ser medida indiretamente pela presso que se deveria exercer sobre a soluo para impedir a passagem do solvente.

. . . . . . . . ... ........... M . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. A presso osmtica total e permanente de uma soluo s evidenciada quando a soluo separada do seu solvente puro por uma membrana estritamente SEMI-PERMEVEL. Estudando o fenmeno da osmose, Pfeffer demostrou experimentalmente que: 1 - Mantendo-se constante a temperatura, a presso osmtica (PO) diretamente proporcional OSMOLARIDADE da soluo, ou seja, concentrao de partculas de soluto. 2 - Mantendo-se constante a osmolaridade, a presso osmtica diretamente proporcional TEMPERATURA ABSOLUTA da soluo. Essas relaes, em conjunto, so representadas pela equao abaixo, onde K uma constante de proporcionalidade que independente do tipo, ou seja, da natureza qumica do soluto. PO = K . Osm . T Vant Hoff, analisando a equao derivada dos estudos de Pfeffer, notou que a osmolaridade corresponde relao entre o nmero de moles de partculas; ou seja, o nmero de osmoles (n) e o volume da soluo (v).. (Osm = n/V). Substituindo e fazendo um rearranjo, obteve a equao ..... PO . V = n . K . T que idntica equao de Clapeyron, para o comportamento dos gases perfeitos : P . V = n . R . T Experimentalmente demonstrou-se que o valor de K na equao de Vant Hoff igual ao valor de R (constante dos gases perfeitos) na equao de Clapeyron, o que leva suposio de que, idealmente, as partculas de um soluto se comportam como as molculas de um gs ocupando o mesmo volume da soluo. Porm, do mesmo modo como os gases reais s obedecem equao de Clapeyron quando esto submetidos a baixas presses, as solues reais s obedecem a equao de Vant Hoff quando esto em baixas concentraes, isto , quando esto muito diludas. No clculo da presso osmtica de uma soluo mais conveniente utilizar a equao de Pfeffer: PO = K . Osm . T onde K = 0,082 atm . l / osmol . T Tratando-se de solues de eletrlitos, a osmolaridade igual molaridade multiplicada pelo fator de Vant Hoff (i) da substncia (Osm = M . i). No caso de solues moleculares, ou seja, que no se ionizam nem se dissociam, o fator de Vant Hoff igual a 1 (um) e a osmolaridade torna-se numericamente igual a molaridade. Quando se estudam os fenmenos de osmose, aconselhvel expressar sempre a concentrao em OSMOLARIDADE (Osm ou Osm/l). A osmolaridade usada ainda para se classificar uma soluo em relao a outra. Se as duas solues tm a mesma osmolaridade, so classificadas como ISOSMOLARES. Se uma tm uma osmolaridade maior que a outra, a primeira classificada como HIPEROSMOLAR em relao segunda e a segunda classificada comoHIPOSMOLAR em relao primeira. Nota-se que, para classificar duas ou mais solues quanto osmolaridade, no necessrio coloc-las em contato atravs de uma membrana. Pode uma soluo estar aqui e a outra em Belo Horizonte. Basta telefonar daqui, as solues so isosmolares ; se a de l for maior que a daqui, a de l hiperosmolar em relao daqui. Solues isosmolares desenvolvem a mesma presso osmtica quando so separadas do solvente por membranas SEMI-PERMEVEIS. Quais seriam, por exemplo, as presses osmticas a 27C de uma soluo de glicose a 36 g/l e de uma soluo de cloreto de sdio a 5,85 g/l, quando as mesmas forem separadas dos seus solventes puros por membranas semi-permeveis? (Considere-se o NaCl 100% dissociado) DADOS: Glicose: NaCl: T = 27 + 273 = 300 K T = 27 + 273 = 300 K i = 1 osmol / mol i = 2 osmol / mol C = 36 g / l C = 5,85 g / l M = 36 g / l 180 g / mol = 0,2 mol / l M = 5,85 g / l = 0,1mol/l 58,5 g / mol

16

Osm = 0,2 mol/l . 1 osmol/mol Osm = 0,1 mol/l . 2 osmol/mol Osm = 0,2 osmol / l Osm = 0,2 osmol / l PO = K . Osm . T PO = 0,082 atm.l/osmol.K . 0,2 osmol/ l . 300 K = 4,92 atm Embora as solues tenham diferentes concentraes em g/l e mol/l apresentam a mesma presso osmtica. Isto ocorre porque as duas solues tm a mesma osmolaridade e esto em contato com membranas semi-permeveis. Esquematicamente, teramos estados de equilbrios exatamente iguais quando colocassmos as duas solues em contato com solventes puros: A x x x x o (equilbrio) (equilbrio) ( x ) NaCl ( o ) Glicose Podemos observar que cada soluo aumenta de volume s custas de solvente que retirado do outro compartimento. Poderamos definir o POTENCIAL OSMTICO de uma soluo como sendo a sua capacidade de ganhar ou absorver solvente, por osmose, quando est separado do mesmo por uma membrana SEMI-PERMEVEL. O potencial osmtico uma decorrcia da presso osmtica e portanto da osmolaridade da soluo: quanto mais concentrada uma soluo maior sua presso osmtica e maior seu potencial osmtico. Disso resulta tambm que solues ISOSMOLARES tm a mesma presso osmtica e o mesmo potencial osmtico. O que aconteceria se colocssemos um litro da soluo de NaCl no lado A e um litro de glicose no lado B, utilizando um nico dispositivo. A B o o o B A B

NaCl 0,2 Osm 4,92

Glicose 0,2 Osm 4,92 atm

Nenhum dos compartimentos aumentaria de volume s custas do outro pois as solues exercem a mesma presso osmtica, ou seja, tm o mesmo potencial osmtico, s que, em sentidos inversos. Donde se conclui que tratando-se de uma membrana semi-permevel, no existindo gradiente de presso osmtica no ocorre transferncia efetiva de solvente por osmose. E se colocssemos dois litros da soluo de NaCl no lado A e apenas um litro da soluo de glicose no lado B ? A B A B

(Incio) (Equilbrio) NaCl (0,20 Osm) Glicose (0,20 Osm) Haver uma transferncia efetiva de solvente de A para B. Nesse porm, o processo no pode ser denominado de osmose porque ocorreu em decorrncia de um gradiente de presso hidroststica e no osmtica. As duas solues tinham, inicialmente, a mesma presso e portanto o mesmo potencial pois continuam sendo isosmolares. interessante observar que no equilbriuo as presses hidrostticas (os nveis lquidos) no so iguais. Isto ocorre porque, medida que o solvente se desloca de A para B devido ao gradiente hidrosttico, a osmolaridade do NaCl vai aumentando, a da glicose vai diminuindo e comea a aparecer um gradiente de sentido inverso ao gradiente hidrosttico. O equilbrio atingido quando o fluxo de A para B devido ao gradiente hidrosttico se iguala ao fluxo de B para A devudi ai gradiente osmtico. Temos o inverso do que ocorreu no esquema mostrado na pgina 16: l um gradiente de concentrao (ou osmtico) gerou um gradiente hidrosttico de sentido inverso.

17

Se tivssemos colocado volumes diferentes das solues de modo que as mesmas no ficassem submetidas a um gradiente de presso hidrosttica, no haveria nenhum transporte efetivo de solvente. Poderamos obter tal situao utilizando o esquema abaixo. A B NaCl 0,2 Osm M Glicose 0,2 Osm

No se deve portanto atribuir OSMOSE qualquer transporte efetivo de solvente. Analisemos agora o que ocorreria se colocssemos no lado A um litro de soluo de glicose 0,4 Osm. A membrana continua sendo SEMI-PERMEVEL a ambas as solues. Quanto ao aspecto hidrosttico, no h nenhum desequilbrio. Logo, se houver algum transporte, este no pode ser atribudo a um gradiente de presso hidrosttica. Antes de conluir como seria alcanado o equilbrio, imaginemos o que aconteceria se colocssemos separadamente as solues nos seus respectivos compartimentos em contato com seus solventes puros. O NaCl exerceria uma presso osmtica de 4,92 atm transportanto solvente no sentido de B para A. A glicose, por sua vez, exerceria uma presso duas vezes maior (9,84 atm) transportando solvente no sentido A para B. Colocando agora as duas solues em contato atravs da membrana, quem ganharia? As solues no so mais ISOSMOLARES e portanto no tm mais o mesmo potencial osmtico. Assim, ganha o compartimento que possuir maior potencial osmtico, ou seja, maior capacidade de retirar solvente do outro compartimento. A B A B o o . . M M o . o o . . . .. o o o o . . . . o o o (Incio) (Equilbrio) NaCl 0,2 Osm Glicose 0,4 Osm 4,92 9,84 Podemos observar que a soluo hiperosmolar ganha e a hiposmolar perde solvente. A explicao simples: sabemos que quanto maior a quantidade de soluto em uma soluo , mais baixa a energia cintica mdia das molculas do solvente e menor o nmero de choques eficazes na membrana. Sendo assim, a energia cintica mdia e o nmero de choques do solvente na soluo hiposmolar maior que na soluo hiperosmolar, o que resulta num fluxo efetivo do solvente da soluo hiposmolar para a soluo hiperosmolar. Isto no quer dizer que o transporte efetivo do solvente por osmose foge s leis da difuso. Na verdade o solvente est se deslocando de uma soluo mais concentrada para outra menos concentrada, se considerarmos a sua concentrao e no a do soluto. importante relembrar e salientar que, na anlise que fizemos at agora, estabelecemos sempre a condio de que a membrana fosse SEMI-PERMEVEL a ambas as solues. As concluses obtidas, s podem ser aplicadas quando essas condies so respeitadas. Se, no esquema que utilizamos anteriormente (incio desta pgina) a membrana fosse semipermevel soluo de NaCl mas permevel soluo de glicose, o equilbrio seria totalmente diferente. Apesar da soluo de glicose ter um potencial osmtico maior que o da soluo de NaCl, o mesmo no pode ser evidenciado porque a membrana no se distribue homgeneamente, ou seja, com a mesma concentrao nos dois compartimentos e no exerce nenhum efeito osmtico permanente (Dependendo da membrana pode-se observar s vezes um efeito osmtico temporrio que aparece antes que o equilbrio final seja alcanado). No final, porm, tudo ocorre como se tivssemos colocado a soluo de NaCl no compartimento A e o solvente puro no compartimento B: o x x x x o o o o o o x o x (Equilbrio) o x x o o

o (Incio) NaCl 0,2 Osm Compare com o esquema da pgina anterior, inclusive quanto ao gradiente de presso hidrosttica que existe no equilbrio. O asterisco junto ao smbolo M significa que se trata de outra membrana. Os seres vivos no possuem nenhuma membrana que seja estritamente SEMI-PERMEVEL a todos os lquidos biolgicos. A membrana capilar por exemplo, semi-permevel a solues de macromolculas mas totalmente permevel a solues de pequenas molculas (NaCl, sacarose, uria,

18

etc.). A membrana celular, em geral, semi-permevel a solues de NaCl, CaCl, sacarose, insulina, manitol, mas permevel a solues de uria. No se pode, portanto, prever o comportamento osmtico de uma soluo nos seres vivos baseando-se apenas no conhecimento da sua osmolaridade, da sua presso osmtica ou do seu potencial osmtico. Vimos que as concluses obtidas, quando a membrana semi-permevel a todas solues envolvidas. Passamos ento a trabalhar com outra propriedade das solues ou dos compartimentos que denominamos TONICIDADE. Podemos conceituar a TONICIDADE de uma soluo (ou compartimento) como sendo a sua capacidade de retirar ou absorver solvente de outra soluo qualquer, da qual est separada por uma membrana qualquer. Se as duas solues tm a mesma capacidade, ou seja, a mesma tonicidade, os fluxos de solvente nos dois sentidos sero iguais e nenhuma das duas aumenta de volume s custas da outra. Dizemos que as solues so ISOTNICAS. Se as solues tm tonicidades diferentes, o fluxo de solvente ser maior no sentido da soluo de menor tonicidade para a soluo de maior tonicidade. Esta ltima, portanto, tende a aumentar de volume e classificada como HIPOTNICA. Comparando os conceitos de POTENCIAL OSMTICO e de TONICIDADE podemos deduzir que o primeiro um caso particular do segundo. Vimos que: - o potencial osmtico a capacidade de ganhar solvente quando a soluo est separada do solvente puro por uma membrana semi-permevel. - a tonicidade a capacidade de ganhar solvente quando a soluo est separada de outra soluo qualquer, ou do solvente, por uma membrana qualquer. Significa que o potencial osmtico de uma soluo corresponde sua tonicidade mxima e que solues totalmente permamentes tem tonicidade nula. Da comparao entre as definies de potencial osmtico e tonicidade deduzimos tambm que solues ISOSMOLARES (tambm chamadas isosmticas) nem sempre so ISOTNICAS. Isto ocorre porque a Osmolaridade depende apenas da concentrao do soluto enquanto que Tonicidade depende tambm da permeabilidade de membrana que separa as solues. Pode inclusive acontecer que uma soluo HIPEROSMOLAR seja HIPOTNICA em relao a outra. Examinemos as seguintes situaes, utilizando o sistema de dois compartimentos A e B, separados por uma membrana M. I - Colocando-se no compartimento A soluo 0,3 Osm de NaCl e no compartimento B soluo 0,3 Osm de glicose, sendo a membrana semi-permevel a ambas as solues. A B A B x x x x x x o M o o x x o o o x x o x x M o o o o o

(Incio) (Equilbrio) NaCl 0,3 Osm Glicose 0,3 Osm Como as duas solues tm a mesma osmolaridade (0,3) so ISOSMOLARES e tm portanto o mesmo potencial osmtico. Sendo a membrana semi-permevel s duas solues, suas tonicidades sero e, no caso, iguais. Os dois compartimentos sero portanto ISOSMOLARES e ISOTNICO. II - Colocando-se NaCl 0,3 Osm em A e glicose 0,4 Osm em B. A membrana a mesma do exemplo anterior.

o x x x x x x NaCl (0,3 Osm) o o o o o o x x o o x x x o o (0,4 Osm) o o o Glicose o o o o

Quanto osmolaridade, o compartimento B HIPEROSMOLAR em relao ao compartimento A (0,4 maior que 0,3). Sendo a membrana semi-permevel s duas solues, suas

19

tonicidades sero mximas porm, a tonicidade em B ganha solvente e HIPERTNICO em relao ao compartimento A. De modo anlogo, o compartimento A HIPOSMOLAR e HIPOTNICO em relao ao compartimento B. Com respeito s situaes I e II podemos concluir que, tratando-se de membranas semipermeveis, h sempre correspondncia entre a OSMOLARIDADE e a TONICIDADE. III - Colocando-se NaCl 0,3 Osm em A e glicose 0,3 Osm em B, sendo a membrana agora, permevel a ambas as solues. A x x x x x (Incio) o M o o o o x x x (Equilbrio) B o o A B o o o o o o

x x

Quanto osmolaridade as solues so ISOSMOLARES. Como a membrana permevel, suas tonicidades so nulas e portanto iguais. Assim, as solues so ISOSMOLARES e ISOTNICAS mas, no equilbrio, teremos os dois solutos homogeneamente distribudos nos dois compartimentos. Comparando com a situao I , seria tentador pensar que solues isosmolares so sempre isotnicas, que a membrana seja permevel ou semi-permevel a ambas as solues. Na verdade, isto verdade. O que no verdade que a osmolaridade sempre corresponde tonicidade, que a membrana seja permevel ou semi-permevel. Vejamos a situao seguinte. IV - Colocando-se NaCl 0,5 Osm em A e glicose 0,2 Osm em B. A membrana a mesma da situao anterior. A B A B

x x x x x o M

o o o o o (Incio) NaCl 0,3 Osm

x x x x x x

M o o

o o o o o

(Equilbrio) Glicose 0,4 Osm

Quanto osmolaridade, A HIPEROSMOLAR em relao a B. Porm, como a membrana permevel s duas solues, suas tonicidades sero nulas e iguais. Logo, A ISOTNICO em relao a B. De modo anlogo, B HIPOSMOLAR mas ISOTNICO em relao a A. Analisando as situaes III e IV, conclumos que solues separadas por membranas permeveis, so sempre ISOTNICAS, no importa quais sejam suas OSMOLARIDADES.

V - Colocando-se em A soluo 0,3 Osm de NaCl e em B soluo 0,3 Osm de uria sendo a membrana impermevel ao NaCl mas permevel a uria. A x x x x x x o M o B o x A o x o o x M o x B

o x o o o x o (Incio) (Equilbrio) NaCl 0,3 Osm Quanto osmolaridade, A ISOSMOLAR em relao a B. Porm, como a membrana permevel soluo de uria, esta no exerce nenhuma tonicidade. Logo, o compartimento A ganha solvente sendo portanto HIPERTNICO em relao a B. O compartimento B, por sua vez, ISOSMOLAR mas HIPOTNICO em relao ao compartimento B.

20

Se tivssemos utilizado NaCl 0,1 Osm em A e uria 10,0 Osm em B, a soluo de uria continuaria sendo HIPOTNICA apesar de ser agora HIPEROSMOLAR (numa proporo de 100 para 1). VI - Colocando-se em A soluo de NaCl 0,3 Osm e em B uma soluo mista de glicose 0,3 Osm e uria 0,5 Osm. A membrana impermevel ao Nacl e glicose mas permevel a uria. A x x x x x x o o o x o o x x o o (Equilbrio) Glicose 0,3 Osm/ Uria 0,5 Osm o B x x o A B o o

(Incio) NaCl 0,3 Osm

Quanto osmolaridade, A HIPOSMOLAR em relao a B. O potencial osmtico no compartimento B maior que no compartimento A mas a tonicidade de B mantida apenas pelo potencial osmtico da glicose, j que a tonicidade da uria nula. Como o potencial osmtico, isto , a tonicidade do NaCl igual a da glicose, as solues so ISOTNICAS. Quer dizer, o compartimento a HIPOSMOLAR mas ISOTNICO em relao a A. Observe-sa que, retirando a uria do compartimento B, teramos um equilbrio idntico ao que ocorreu na situao I. Da anlise das situaes V e VI, podemos tirar uma concluso final que vlida para todas as situaes: A TONICIDADE de um compartimento isolado por uma determinada membrana correspondente ao potencial osmtico das partculas NO DIFUSVEIS atravs dessa membrana. S se pode aumentar a tonicidade (ou o volume) de um compartimento isolado por uma determinada membrana acrescentando, a esse compartimento, soluto no difusvel atravs dessa membrana. VII - EQUILBRIO DE GIBBS-DONNAN Como uma grande parte das protenas dos organismos vivos esto sob a forma de disperso coloidal, em soluo inica e separadas por membranas semi-permeveis, necessrio que se estude um tipo especial de distribuio de ons que profundamente influenciada pela presena de partculas no difusveis carregadas eletricamente.

A Prot-

M Na+ Cl-

B Na+ ClNa+ Prot-

Na+ Prot- Na+ Prot- Na+ Cl-

Na+ Prot- Na+ ClProt- Na+ Cl- Na+ Na+ Prot- Na+ Clprot- Na+Cl- Na+ Na+ Prot- Na+ ClProt- Na+ Cl- Na+ Na+ Prot- Na+ ClProt- Na+ Cl- Na+ Na+ Prot- Na+ Cl-

Na+ ClNa+ ClNa+ ProtNa+ ClProt- Na+ Na+ ClNa+ protNa+ ClProt- Na+ Na+ ClNa+ ProtProt- Na+ Cl- Na+ Na+ Na+ ProtNa+ ClProt- Na+ Na+ ClNa+ ProtNa+ ClProt- Na+ Na+ ClNa+ ProtNa+ Cl-

21

(Incio) Prot - : 12 Na+ : 12

Cl- : 12 Na+ : 12

(Incio) Prot- : 12 Cl- : + Na+ : 14 Na : 10 Cl- : 5

Consideremos o sistema acima constitudo por dois compartimentos separados por uma membrana M. No compartimento A foi colocado um litro de soluo 0,12 M de ons Na+ equilibrados por nions proteinato (Prot-). Ao compartimento B, adicionamos o mesmo volume de soluo 0,12 M de NaCl. A membrana impermevel apenas ao nions proticos. Apesar de estar submetido a um gradiente de concentrao, o on proteinato (Prot-), por ser uma macromolcula, no pode atravessar os poros da membrana. Por isso no difunde de A para B. O on Na+ atravessa livremente a membrana mas seu fluxo efetivo inicial nulo: a quantidade que passa de A para B igual que passa de B para A porque sua concetrao a mesma nos dois lados da membrana. O on cloreto (Cl-) porm, tm todas as condies para apresentar um fluxo efetivo diferente de zero pois : 1 - Est submetido a um gradiente de concentrao e 2 - a membrana lhe permevel. O cloreto se difunde ento de B para A devido a um gradiente de concentrao. Como o on cloreto se difunde inicialmente sem seu ction correspondente (Na+), esta difuso realiza um trabalho eltrico que se manifesta sob a forma de energia potencial eltrica (Voltagem). Se estabelece assim um campo eltrico (negativo em A, positivo em B) qued tende a dificultar a passagem de ons cloreto do lado B para o lado A e, ao mesmo tempo, promove um fluxo efetivo de ons sdio tambm de B para A. importante lembrar que o fluxo efetivo de Na+ se deve a um gradiente eltrico criado pela difuso do cloreto a qual decorreu de um gradiente de concentrao. Ocorre com o sdio o inverso do que ocorreu com o cloreto: a difuso por gradiente eltrico gerou um gradiente de concentrao. O processo continua at que os dois ons atinjam um equilbrio eletroqumico, mesmo que os dois compartimentos no atinjam tambm um equilbrio osmtico. Dizemos que o on cloreto (Cl-), ao se difundir de B para A, realiza um trabalho til porque a energia potencial de concentrao (qumica) est se transformando em energia potencial eltrica. A energia potencial de concentrao pode ser calculada por uma equao derivada da expanso isotrmica dos gases perfeitos, aplicada para cada on: Ec = R . T ln (Cl -) b Energia potencial de concetrao (Cl -) para o on cloreto. Ec = R . T ln (Na+) b Energia potencial de concentrao (Na+) a para o on sdio. O equilbrio de Donnan alcanado quando o campo eltrico estabelecido atravs da membrana pela difuso do on cloreto promove um aumento do on sdio no lado B, de tal modo que a diferena de energia potencial de concentrao para o Na+ anula totalmente a diferena de energia potencial de concentrao para o Cl-. Ento: R . T ln (Cl- )b + R . T ln (Na+ ) b = 0 (zero) (Cl- )a (Na+ ) a Donde se conclue que: (Na+ ) b = (Cl- ) b = r (Relao de Gibbs-Donnan) (Na+ ) a (Cl- ) a ou (Na+ )a . (Cl- ) a = (Na+ ) b . (Cl-) b Uma vez atingido o equilbrio de Donnan, podemos afirmar que: a - A concentrao do ction difusvel (Na+) sempre maior no lado que contm o nion no-difusvel (Prot-). b - A concentrao do on Cl- continua maior no lado B, porm passa a existir cloreto tambm do lado A do sistema. c - Se formos calcular as tonicidades de cada soluo, notaremos que o compartimento que contm o on NO difusvel sempre hipertnico. d - Como consequncia, o equilbrio de Donnan gera um desequilbrio osmtico, isto , o equilbrio de Donnan eletro-qumico e no osmtico. e - Para impedir que o compartimento que contm o on NO difusvel retire solvente do outro compartimento, se poderia aplicar uma presso mecnica ou hidrosttica de sentido inverso. o que acontece, por exemplo, ao nvel dos capilares sanguneos. VIII - ESQUEMA DE STARLING. IMPORTNCIA DA PRESSO ONCTICA. Os capilares constituem os vasos sanguneos de paredes mais delgadas e de calibre mais fino. O sangue chega at eles pelas artrias, as quais em ramificaes sucessivas e sem transio real vo diminuindo seu calibre e simplificando sua estrutura at se converterem em capilares. Estes vasos, por sua vez, se renem novamente sem transio real e do origem s veias. Os capilares, portanto, podem ser divididos esquematicamente em uma poro arterial e uma poro venosa. Nos capilares, os nutrientes trazidos pelo sangue e destinados s clulas atravesam as suas paredes para se misturar com o lquido intersticial e da passar para o interior das clulas. As substncias eliminadas das clulas fariam um percurso inverso. A passagem de lquidos e substncias atravs dos capilares feita por processos de filtrao, difuso e osmose. A filtrao a passagem de lquidos atravs dos poros dos capilares. E depende, fundamentalmente, de duas presses: a presso hidrosttica (PH), devido compresso mecnica que o

22

corao exerce sobre o sangue, e a presso onctica (PO) devido presena de macromolculas, partculas no difusveis, no plasma. A presso hidrosttica (PH) exercida no sentido de expulsar lquido do espao intravascular para o espao intersticial. A presso onctica (PO) tende a trazer lquido do espao intersticial para o intravascular. Na poro arterial do capilar a PH maior que a PO e, ento, o lquido sai dos capilares para o espao intersticial por filtrao. Na poro venosa do capilar a PO maior que a PH e, ento, o lquido volta para o interior do capilar por osmose. Como a diferena de presso na poro arterial do capilar maior do que na poro venosa, a quantidade de lquido que sai dos capilares na poro arterial maior do que a quantidade que entra na poro venosa. Pra retirar o restante do lquido do espao intersticial se faz necessrio a presena de um sistema de drenagem auxiliar do sistema venoso, o sistema linftico. Esquema de Starling capilar Poro Arterial PH PEf 40 15 | | | | PO | | | 25 | Poro Venosa PH PO 25 PEf 10 15 Vasos Linfticos

(Presso em mmHg)

(PEF= Presso Efetiva de Filtrao)

OBS: A concentrao de macromolculas constante ao longo de todo o leito capilar. A diferena consiste na resultante entre TONICIDADE (PO) e PRESSO HIDROSTTICA. O esquema de Starling serve para explicar o equilbrio do volume lquido do leito vascular, e, pode ser associado ao equilbrio de Gibbs-Donnan, visto anteriormente, considerando-se o LIV como meio que contm a partcula no-difusvel e que a membrana endotelial capilar carregada negativamente na superfcie em contato com o LIV, o que explica as diferenas entre as concentraes de Na+ no LIV e no LIT. Uma outra teoria utilizada para explicar o intercmbio de lquidos entre o LIV e o LIT a da vasomotricidade, que envolve tambm o jogo de influncia entre a presso hidrostrtica (filtrao) e a presso osmtica (osmose).

23

DIFUSO, POTENCIAL DE EQUILBRIO E POTENCIAL DE MEMBRANA I- INTRODUO Todas as partculas em soluo aquosa possuem um movimento errtico, aleatrio, que promove colises moleculares num contnuo intercmbio de energia cintica entre as partculas do sistema. Tal como as molculas de um gs, as partculas de um soluto qualquer ao se dissolverem em determinado lquido, adquirem liberdade de movimento e com isso passam a colidir muitas vezes umas com as outras. Estas colises intermoleculares constituem o mecanismo pelo qual a velocidade das partculas do soluto muda continuamente. exatamente essa semelhana com o comportamento dos gases que permite a aplicao da equao dos gases perfeitos no clculos da presso osmtica e na deduo da equao de Nernst, como veremos adiante . Como resultado desses choques intermoleculares contnuos, existe uma distribuio de velocidade entre as partculas dissolvidas , para cada instante. De modo que, a cada instante, a maioria das molculas assume valores de velocidade que esto muito prximos de uma mdia de velocidade que, por sua vez, est diretamente relacionado com a temperatura do sistema. Consequentemente, ao elevar-se a temperatura de um corpo h um aumento na energia cintica translacional mdia de suas molculas ou partculas, e que equivale a acelerar a difuso para o caso de solues lquidas ou gasosas. A difuso um processo de intercmbio contnuo das molculas de um gs ou de uma soluo. portanto, uma consequncia do intercmbio de energia cintica translacional entre as molculas de um sistema. A difuso pode ocorrer em um meio homogneo ou atravs de um obstculo (uma membrana, por exemplo). II- FATORES QUE PROMOVEM A DIFUSO Considere-se um recipiente constitudo por dois compartimentos I e II separados por uma membrana M, nos quais se colocou gua. Adicionando-se dois solutos A(*) e B(+), sendo a membrana permevel apenas ao soluto B, observamos o seguinte: I * + * + * + * + * + * + Incio o equilbrio. - o equilbrio ser atingido quando as concentraes dos lados I eII forem iguais para a substncia difusvel. - mesmo quando as concentraes dos lados I e II forem iguais, continuar havendo difuso de I para II mas, como est havendo difuso igual em sentido contrrio, o fluxo efetivo ser zero. - aumentando-se a temperatura do sistema, o fluxo efetivo continuar sendo nulo (zero) mas, a difuso estar aumentada em ambos os sentidos. - o soluto A, como no pode atravessar os poros da membrana, no se difunde para o lado II. Concluindo: Os fatores que regem a difuso de soluto, no carregados eletricamente, atravs de uma membrana so: temperatura, concentrao e permeabilidade. III- DIFERENA DE POTENCIAL QUMICO (DIFERENA DE POTENCIAL DE CONCENTRAO) Tomando-se uma substncia A, no ionizada, contida em apenas um de dois compartimentos, separados por uma membrana permevel, como o esquema abaixo: I M II P1 . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . Sistema P2 M II * * + * * + I * * + + M II + +

Aps a difuso

- haver uma passagem efetiva de molculas B do lado I para o lado II, at que seja atingido

I II . . . . . . . . . . . . . . . . . .. Analogia com os gases perfeitos

Com relao ao sistema, podemos afirmar o seguinte:

24

- Como existe um gradiente de concentrao entre um lado e outro da membrana, h uma diferena de potencial qumico, acumulada no lado I em relao ao lado II. Essa diferena de concetrao, sendo a membrana permevel, somente se manter se houver, de alguma forma um gasto de energia do ambiente ou da membrana, capaz de neutralizar o fluxo efetivo de partculas do lado I para o lado II. - O fluxo efetivo de molculas de I para II, dissipar toda a energia potencial, inicialmente acumulada sob a forma de gradiente de concentrao e, portanto, pode ser convertida em trabalho. - Como podemos ento calcular essa energia potencial de concentrao do sistema? Para isso precisamos fazer uma analogia do sistema como o comportamento dos gases perfeitos. Associemos ento os compartimentos I e II com cilindros vedados por mbolos que deslizam sem atrito, conforme a fora exercida sobre eles. Consideremos ainda que ambos os cilindros permaneam a temperatura constante e que exista uma quantidade de gs perfeito apenas no cilindro I. Qual a semelhjana existente entre os cilindros com gs perfeito e os compartimentos com a soluo? - O compartimento I, como mais concentrado, assemelha-se ao cilindro I que est sob maior presso. - A mesma analogia pode ser feita ao relacionar-se o compartimento II como o cilindro II, que inicialmente esto ambos vazios. Se fssemos, por um mecanismo qualquer, diminuindo gradativamente a presso P1 do cilindro I, at que a mesma ficasse igual a P2, notaramos que seria realizado um trabalho de difuso isotrmica pelo gs, que poderia ser comparado ao trabalho de difuso isotrmica do soluto do compartimento I para o compartimento II, de modo que a sua concetrao diminuiria gradativamante e se torne igual a C2. P1 P2 C1 (-) C2 C2 . . ........ ........ I V1 . . . . M V2 M

II I II Tal como o gs que se expandiu isotermicamente de P1 para P2, ao diminuirmos o peso (fora) sobre o mbolo, e realizou um trabalho, as partculas de uma soluo, ao se difundirem de uma concentrao C1 para C2, podero realizar um trabalho til se convenientemente acopladas a determinados sistemas fsico-qumicos. Por exemplo, se cada partcula que difundisse carregasse uma carga eltrica, seria realizado um trabalho eltrico. O trabalho de expanso isotrmica de um gs pode ser calculado pela equao: W = R . T. ln P1 P2 ou W = R . T . ln V2 V1 se W = & ^ Ep V1 V2 Volume P1 ............. (P1,V2) (P2, V2) P2 ............................. (Presso)

Essa equao nos permite calcular o trabalho (W) realizado por um gs em expanso isotrmica e corresponde, portanto, diferena de energia a potencial (^- E), entre duas presses (P1 e P2), que pode ser convertida em trabalho. Como, ento, poderemos adaptar essa equao para o clculo da diferena de potencial qumico existente entre duas concentraes (C1 e C2) de um determinado soluto em soluo aquosa? A frmula geral para o clculo da concentrao (C) de uma soluo : C = Qs V donde Qs = C . V

Quando um gs se expande, ou um determinado soluto se difunde, a quantidade total de partculas do sistema, ou seja, Qs, continua a mesma, apenas o volume (V) ocupado que aumenta. Portanto, durante a expanso do soluto: Qs1 (Inicial) = Qs2 (final) ou C1 . V1 = C2 . V2 donde

25

C1 = V2 C2 V1 Substituindo-se os valores de V pelos valores de C na equao para gases, obteremos a equao que nos permite calcular a diferena de potencial qumico ou de concentrao (^- Eq) que existe entre diferentes concentraes de uma determinada substncia em soluo ( em dois compartimentos separados por uma membrana, por exemplo), ou tambm, a quantidade de energia que dever ser gasta para estabelecermos uma diferena de concentrao no sistema por um processo ativo: ^ Ec = R . T . ln C1 C2 IV - ENERGIA POTENCIAL ELTRICA (GRADIENTE ELTRICO) A frmula citada anteriormente adequada quando a substncia molecular, porm quando se trata de subtncia ionizada, devemos levar em considerao no somente a diferena de potencial qumico existente entre os dois lados da membrana, como tambm o trabalho eltrico realizado por determinada substncia inica ao se difundir atravs da membrana. Qual o trabalho eltrico realizado quando um mol de determinado on covalente se difunde contra um determinado campo eltrico? Em outras palavras qual o trabalho realizado para o transporte de cargas positivas (1 mol) de uma distncia grande ( considere-se infinita) at o plo positivo? W = q .^ v O trabalho eltrico (We) o produto da diferena de potencial (^-V) pelo nmero de cargas eltricas elementares transportadoras (q). Por uma questo de coerncia de unidades, se a diferena de potencial eltrico expressa em volt, a quantidade de cargas (q) carregadas por 1 mol de on qualquer de valncia z, passa ser calculada pela equao: q = z . F O trabalho eltrico ficar ento expresso em joule e corresponde energia potencial eltrica (^- Ee) adquirido pelo sistema. We = z . f . ^ v = ^ Ee Mas, qual a utilidade em sabermos que o trabalho eltrico ou a energia potencial eltrica acumulada por transporte de um determinado on pode ser calculada pela expresso matemtica abaixo? ^ Ee = z . F . ^ v IV . 1 - Trabalho Eltrico nos Sistemas Biolgicos Ocorre que nos sistemas biolgicos as clulas e respectivos compartimentos intersticiais efetuam um intercmbio de lquidos e eletrlitos que afetado no somente pelo gradiente de concentrao e pela permeabilidade da membrana como tambm, pela diferena de potencial eltrico transmembrana. Imaginemos, como exemplo, um sistema constitudo por dois compartimentos separados por uma membrana impermevel apenas a macromolculas. Coloquemos no compartimento I uma determinada substncia que, em soluo, se dissocia em um on protico (proteinato, Prot-) com carga negativa e no on potssio ( K+) para equilibr-lo eletricamente. (Veja esquema abaixo). I Prot- K+ K+ ProtProt- K+ K+ ProtProt- K+ (Inicio) M II I Prot- K+ ProtK+ ProtProtProt- K+ (Equilbrio) M - + - + - + - + - + - + - + II

K+ K+

Sendo a membrana permevel apenas ao on potssio, este se difundir do lado I para o lado II. Porm, como se trata de uma carga eltrica, evidente que toda difuso implica em um trabalho eltrico, que acumulada sob a forma de energia potencial eltrica (voltagem ou diferena de potencial eltrico) entre as duas faces da membrana, uma vez que o on se difunde separando-se do nion que lhe dava neutralidade eltrica. Portanto, em virtude do on potssio (K+) atravessar a membrana sozinho h o aparecimento de uma diferena de potencial eltrico (^ v) entre as superfcies I e II da membrana. Ou seja, a membrana fica polarizada.

26

Devemos levar em considerao que inicialmente o K+ tende a estabelecer um fluxo efetivo de cada ction do lado I para o lado II, em virtude da existncia de um gradiente de concentrao (potencial qumico ou energia de concentrao). A voltagem ou campo eltrico que se estabelece na membrana , no entanto tende a provocar um fluxo de K+ em sentido contrrio (de II para I) que vai terminar contrabalanando o fluxo inico por potencial qumico. Quando a diferena de energia potencial de concentrao (^ Ec) for igual e contrria diferena de energia potencial eltrica (^ Ee), digamos ento que a voltagem transmembrana igual ao potencial de equilbrio (P . Eq), para o on em questo (no caso, o K +). Nestas condies, a diferena de energia potencial total entre os lados I e II igual a zero e, apesar da difuso continuar em ambos os sentidos, o fluxo efetivo de ons atravs da membrana nulo. Isto , uma vez que a voltagem atinja o potencial de equilbrio para uma determinada diferena de concentrao, a ENERGIA LIVRE ( diferena de potencial eletroqumico, ^ u) igual a zero. A diferena de potencial eletroqumico (^ u) pode ser calculada pela soma algbrica da energia potencial eltrica com a energia potencial de concentrao para determinado on: ^ u = ^ Ee + ^ Ec ou seja ^ u = z . f . ^ v + R .T . ln C1 C2 Dissemos que, quando o sistema atinge o equilbrio, a diferena de potencial eletroqumico (^ u ) nula (igual a zero) . Logo: C1 z . F . ^ v + R . T . ln ----------- = 0 C2 Donde: C1 z . F . ^ v = -R . T . ln -------C2 C2 z . F . ^ v = R . T . ln -------C1 R.T C2 ^ v = -------- ln ------z.F C1 ^ v o gradiente eltrico, ou seja, a diferena de potencial eltrico que deve existir, entre as duas faces da membrana, para contrabalanar ou equilibrar um gradiente de concentrao. Por esse motivo, ^ v passa a ser chamado Potencial de Equilbrio (PEq). Assim: R.T C2 P . Eq = ---------- ln --------- (Equao de Nerst) z.F C1 IV.2-Potencial de Equilbrio Voltemos a analisar o esquema mostrado na pgina 06 . Designaremos como EFLUXO (Ef) a passagem de ons K+ de I para II, como INFLUXO (If) passagem de ons K+ de II para I e como FLUXO EFETIVO (Fe) a diferena entre o EFLUXO e INFLUXO. No incio (tempo zero) , a membrana est despolarizada, o efluxo mximo (100), o influxo nulo (0) e o fluxo efetivo (Fe) igual ao efluxo. No momento subsequente o tempo zero, no entanto, a membrana j est ligeiramente polarizada, ou seja, comea a aparecer uma diferena de potencial eltrico (d.d.p) devido difuso das cargas positivas de I para II. Ao mesmo tempo, comea a existir um fluxo de II para I, ou seja, um influxo. O Fluxo efetivo, porm, ainda grande e continua a passar cargas positivas de I para II, tornando a membrana cada vez mais polarizada. Registrando-se com um voltmetro de boa sensibilidade, a d.d.p (voltagem) entre os dois lados dsa membrana em funo do tempo, teramos um resultado como na figura 01 (abaixo): Fig.01 d.d.p (mV) Pot. Equilbrio Px 0 0 tx t Tempo

Fig.02

27

100 FLUXO Ef Fe If 0 0 0 Px P.Eq t d.d.p (mV) tempo

Relacionando-se a polarizao da membrana ((d.d.p) com os fluxos (Efluxo, Influxo, e Fluxo Efetivo), obteramos um resultado como mostrado na figura 02. Partindo-se do princpio elementar de eletrosttica de que cargas iguais se repelem, torna-se fcil compreender que quando a diferena de potencial cai aumentando ( o lado II cada vez mais positivo), o EFLUXO vai diminuindo e o INFLUXO vai aumentando. Depois de um tempo t, o efluxo se torna igual ao influxo e o FLUXO EFETIVO de ons torna-se nulo. Neste momento, a d.d.p torna-se constante (Fig. 01) porque a quantidade de cargas (K+) que migram de I para II por gradiente de concentrao (potencial qumico) igual ao nmero de cargas positivas que retornam de II para I por gradiente eltrico (potencial eltrico). A d.d.p transmembrana cresce a partir do zero at atingir o Potencial de Equilbrio, que a diferena de potencial eltrico ou o campo eltrico que se deve estabelecer atravs de uma membrana, na existncia de um gradiente de concentrao, para que o fluxo efetivo de determinado on seja igual a zero. No potencial Px mostrado nas figuaras 01 e 02, por exemplo, a polarizao (d.d.p) da membrana ainda insuficiente para fazer com que o Influxo (If) seja igual ao Efluxo (Ef). Logo, nesse potencial, o Fluxo Efetivo (Fe) de cargas positivas (K+) ainda diferente de zero e a membrana continua a ser polarizada at atingir o Potencial de Equilbrio. Devemos lembrar ainda que, ao concluirmos que o fluxo efetivo de determinado on atravs da membrana, e sim, que a difuso deste on igual nos dois sentidos (difuso por gradiente de concentrao = difuso por gradiente eltrico). Iniciando-se a experincia j com uma determinada concentrao de on potssio no lado II, a membrana tambm ficaria polarizada; bastaria que a concentrao em II fosse menor que em I. A figura 02, entretanto, tomaria outro aspecto, porque, mesmo com uma d.d.p igual a zero (no incio) o Influxo seria diferente de zero. Alm disso, o Potencial de Equilbrio seria menor, porque sendo o gradiente de concentrao menor, bastaria uma menor polarizao para tornar o Fluxo Efetivo igual a zero. Compare as figuras 03 e 04 com as figuaras 01 e 02. Fig. 03 d.d.p (mV) fig. 01 Pot. Equilbrio

0 t tt Tempo Aumentando-se gradativamente a concentrao do K+ no lado II com relao a uma determinada concentrao fixa no lado I, notaremos que o Influxo inicial (quando o Potencial transmembrana igual a zero) torna-se cada vez maior e o Fluxo Efetivo cada vez menor. Isto equivale a dizer que, quanto menor for o gradiente de concentrao qumica (potencial qumico), menor ser a diferena de Potencial transmemrana( potencial eltrico) necessria para que o fluxo efetivo seja nulo. Na figura 04 vemos que quanto maior a concentrao inicial no lado II, isto , quanto menor o gradiente de concentrao menor o potencial eltrico necessrio para atingir o equilbrio (P. Eq). FLUXO 100 C3* C2* If1 C1* 0 P.Eq3 ). Quando as concentraes iniciais (nos lados I e II ) forem iguais, o gradiente de concentrao ser nulo e o Fluxo Efetivo tambem o ser. Desse modo, nenhuma carga eltrica passar de I P.Eq2 P.Eq1 d.d.p(mV) C* = Concentrao no lado II em relao a uma concentrao fixa no lado I (C3 > C2 > C1 Fig.04 Ef If3 If2 0

28

para II e nenhum gradiente eltrico ser necessrio para fazer com que a difuso do on de I para II seja igual difuso de II para I . Em resumo - O Potencial de Equilbrio Transmembrana a diferena de potencial eltrico que se deve estabelecer atravs de uma membrana, para que o fluxo efetivo de um determinado on seja igual a zero, apesar da existncia de um gradiente de concentrao. O Potencial de Equilbrio para um determinado on, em soluo aquosa contido em dois compartimentos separados por uma membrana de permeabilidade seletiva, pode ser calculada aplicando-se a Equao de Nerst, que uma expresso matemtica deduzido de princpios fisico-qumicos da conservao da energia (10 Lei da Termodinmica e trabalho de expanso isotrmica de um gs). Equao de Nerst: RT C2 P . Eq = ---------- ln ----------zF C1

( C1 > C2 )

Tratando-se de on negativo (monovalentes) multiplica-se o resultado por -1 ou inverte-se a razo entre as concentraes. O Potencial de Equilbrio obtido indica sempre a d.d.p existente no lado interno com relao ao lado externo. Obtendo-se um resultado de -75mV entre as faces interna e externa da membrana, sendo a face interna negativa. importante lembrar ainda que o equilbrio eletroqumico um fenmeno puramente PASSIVO. Se, para um determinado on , o gradiente de concentrao no est equilibrado matematicamente (pela equao de Nerst) com a polarizao existente na membrana, sinal de que esse on deve estar submetido a um processo ATIVO e/ou deve ser muito pouco permeante. Nas clulas musculares dos mamferos, por exemplo, o potencial eltrico existente atravs da membrana celular (potencial de repouso) corresponde ao Potencial de Equilbrio do on Cl- mas um pouco menor que o Potencial de Equilbrio do K+ e muito diferente do Potencial de Equilbrio para o on Na+ e realiza um transporte ativo de Na+ e K+ (bomba de NA+ e K+ ). O on Cl- se equilbra passivamente. V-POTENCIAL DE REPOUSO OU POTENCIAL DE MEMBRANA CELULAR As clulas animais contm protenas, ons fosfatos e bicarbonatos equilibrados eletricamente pelos ons potssio, e, em menor escala pelo sdio. Ao passo que o meio extracelular contm, principalmente, NaCl e em menor concentrao o potssio e o bicarbonato. Na representao abaixo, vemos os meios intra e extracelular com seus respectivos ons. As dimenses dos smbolos correspondem s suas concentraes relativas. Os sinais (+) e (-) representam a polarizao eltrica existente entre as faces da membrana. + + + - + - Prot+ + - HPO4+ - + + + + + Na+ K+ cL+ +

+ + + - + + +

A tabela abaixo mostra a composio mdia dos meios intra e extracelulares de uma fibra muscular de mamfero. A tabela apresenta tambm os potenciais de equilbrio eletroqumico para os ons Na+, K+ e Cl-, calculados conforme a Equao de Nerst, e o Potencial de Membrana ou Potencial de Repouso (PR) existente na clula.
_____________________________________________________________________

on Na+ 9K+ ClPotencial

*Ce 145 154 120 0

*Ci 12 155 3,8 -90

P.Eq(mV) +65 -95 -90 ///

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

_____________________________________________________________________

* (mEq/l) Eq. de Nerst : P. Eq (mV) = 60 . log Ce Ci Pode-se observar que o Potencial de Repouso (PR) que realmente existe na membrana da clula bastante diferente do Potencial de Equilbrio requerido para o on sdio, um pouco menor que Potencial de Equilbrio para o on potssio e exatamente igual ao Potencial de Equilbrio para o on cloro. Significa que apenas que o Cl- est em equilbrio eletroqumico, ou seja, o seu gradiente de concentrao est exatamente contrabalanceado pela polarizao da membrana. Isto leva suposio de que o equilbrio

29

eletroqumico do cloro quem determina o potencial de repouso. Tal suposio pode ser verificada variando-se a concentrao extracelular do Cl- e medindo-se o potencial de membrana. Experimentalmente verificou-se que alteraes moderadas da concentrao do Cl- no modificam significativamente o potencial de repouso(PR). Descartado o papel do cloreto, o on mais provvel de desempenhar algum papel na gnese do potencial de membrana seria o K+, pois seu potencial de equilbrio est muito prximo do PR. Essa hiptese tambm pode ser verificada baseando-se na equao de Nerst: se o potencial de repouso determinado pelo equilbrio eletroqumico do potssio, variaes na sua concentrao extracelular deveriam provocar alteraes no potencial de repouso. De fato, experimentalmente, foi comprovado que um aumento na concentrao extracelular do K+ diminue o potencial de repouso. Para compreender como a distribuio eletroqumica do K+ poderia gerar um potencial de membrana, imaginemos uma membrana celular despolarizada, sendo subitamente colocada em contato com os meios intra e extracelulares. conveniente relembrar que o K+ intracelular est equilibrado eletricamente com nions NO DIFUSVEIS (Prot- e HPO4=). Devido existncia de ons potssio tanto no LIC como no LEC, evidente que haver difuso de K+ tanto do meio intra para o extracelular (EFLUXO), como do meio extra para o meio intracelular (INFLUXO). Entratanto, como a concentrao de K+ no LIC maior que no LEC, teremos um EFLUXO maior que o INFLUXO, isto , um FLUXO EFETIVO de K+ do meio intra para o extracelular. Como o potssio se difunde sem seu nion correspondente, evidente que a membrana comea a se tornar polarizada, pois cada K+ que se desloca do meio intra para o extracelular carrega uma carga positiva e deixa uma carga negativa.

(i) ProtK+

M +

(e) Protk+ If K+ -

(i) + + +

(e) Prot+ + +

(i)

(e)

k+

K+ -

k+

(Incio)

(Equilbrio)

A medida em que a membrana vai se carregando eletricamente, o EFLUXO diminue, ao mesmo tempo em que se eleva o INFLUXO. A um certo ponto os dois se igualam e o FLUXO EFETIVO se torna igual a zero. Desse ponto em diante, a diferena de potencial eltrico entre as duas faces da membrana se torna constante. Esse potencial corresponde ao potencial de equilbrio do potssio para as concentraes intra e extracelular existente e pode ser calculado pela Equao de Nerst (no caso, vale 95mV). importante compreender e frisar que a quantidade de K+ necessria para criar esta diferena de potencial eltrico pequena (1/100000) em relao s quantidades totais de K+ nos meios intra e extracelulares, de modo que a equao de Nerst pode ser aplicada usando-se as concentraes iniciais e no as finais , aps o equilbrio. Relacionando-se, em um grfico, os fluxos de K+ com a polarizao gradativa de membrana (d.d.p), teramos o seguinte resultado: Fig.06 Fluxo Ef If P.Repouso P.Eq

-90

-95

d.d.p(mV)

Se o Potencial de Repouso da membrana celular fosse determinado apenas pelo Equilbrio Eletroqumico do K+, deveramos esperar que seu valor correspondesse ao Potencial de Equilbrio para o K+, determinado pela Equao de Nerst. Na verdade, o que se v que o Potencial de Repouso (-90mV) um pouco menor que o Potencial de Equilbrio do K+ (-95mV). Ness asituao, temos que admitir que o EFLUXO passivo est sendo maior que o INFLUXO (veja o grfico), de modo que a clula est continuamente perdendo potssio, isto , cargas positivas. Como o Potencial de Repouso se mantm constante deve existir um mecanismo ATIVO de entrada de K+ que equilibre continuamente o escape passivo. Tal mecanismo j foi identificado e denominado bombade K+. O on Na+ seria o menos provvel de gerar o Potencial de Repouso pois, para as concentraes existentes nos meios intra e extracelulares seu Potencial de Equilbrio (+65mV) calculado pela Eq. de Nerst bastante diferente do Potencial de Repouso realmente existente na membrana (-90mV). Na verdade a distribuio do Na+ tende a anular o Potencial de Repouso pois, tanto o seu gradiente de

30

concentrao quanto o gradiente eltrico da membrana (positivo fora, negativo dentro) favorecem sua entrada passiva na clula. Ora, cada on sdio que entrasse carregaria uma carga positiva que iria neutralizar as cargas negativas no interior da clula e diminuindo gradativamente o Potencial de Repouso. De modo que podemos visualizar a clula como uma cidade constantemente assediada pelo sdio. A nica maneira definitiva da clula impedir essa invaso pelo sdio seria tornar a membrana absolutamente impermevel aos ons Na+. Tal soluo, porm, seria desvantajosa para a clula, pois restringiria bastante suas possibilidades de intercmbio com o meio ambiente. O que ocorre na prtica, que a membrana celular, apesar de no ser completamente impermevel, apresenta, em condies de repouso, uma baixssima permeabilidade ao sdio. Medidas efetuadas em vrias clulas demonstraram que a permeabilidade da membrana ao Na+ cerca de 100 vezes menor que ao K+. Entretanto, a simples diminuio da permeabilidade no impede a penetrao contnua, embora pequena, do Na+ na clula pois essa baixa permeabilidade compensada pela presena de dois gradientes que foram a entrada do Na+: o gradiente de concentrao e o eltrico. Assim, obrigatoriamente, a clula est passivamente e continuamente ganhando Na+, ou seja, cargas positivas. Como o Potencial de Repouso no varia, apesar dessa enrtrada contnua de cargas positivas, temos que admitir novamente a existncia de um mecanismo ATIVO que promova a extruso do Na+ para contrabalanar sua contnua penetrao PASSIVA na clula, e manter constante o Potencial de Repouso. Esse mecanismo tambm j foi indentificado e denominado bombade Na+. Na realidade, a bombade Na+ funcionava acoplada bombade K+, constituindo a chamada bombade Na+ e K+. Essa bomba consiste num complexo enzimtico existente na membrana celular que, utilizando energia fornecida pelo ATP, transporta on Na+ do meio intra para o extracelular e o on K+ do meio extra para o intracelular. Uma viso global da membrana celular, em condies de repouso , mostraria os seguintes fluxos: (i) - M + Na+ 1 2 3 4-Transporte ativo K+ 4 5 6 ClProtHPO4= - M + Obs: - O tamanho das setas indica a intensidade dos fluxos - A espessura das setas indica a permeabilidade relativa das membranas, exceto para os transportes ativos . A Bombade Na+ e K+ de suma importncia para a manuteno das concentraes intra e extracelulares do Na+ e do K+ e, indiretamente, para a manuteno do Potencial de Repouso. Tal importncia pode ser verificada experimentalmente, bloqueando-se a Bomba de Na+ e K+, por meio de inibidores enzimticos como a ouabaina. A inibio da Bomba de Na+ e K+ resulta, inicialmente, num aumento da polariza0, ou seja, numa hiperpolarizao da membrana. Isto ocorre porque, como vimos, existe um FLUXO EFETIVO passivo de K+ que, normalmente, contrabalanada pelo Transporte Ativo: bloqueando o Transporte Ativo, o fluxo de K+, ou seja, de cargas positivas, vai aumentando a polarizao da membrana at atingir o Potencial de Equilbrio para o K+ (veja fig). Poder-se-ia argumentar que, quando a Bomba de Na+ e K+ est inibida o fluxo de Na+ deixa de ser contrabalanado pelo Transporte Ativo de modo que passa a existir um Fluxo Efetivo de Na+ que tenderia a causar uma hipopolarizao e no uma hiperpolarizao da membrana. Na verdade, isto ocorre mas, como a membrana muito mais permevel a K+ do que ao Na+, o efeito que predomina, inicialmente, a hiperpolarizao devida ao fluxo de K+. O Fluxo Efetivo do Na+ tem um efeito retardado, ou melhor, a longo prazo, por causa da baixa permeabilidade de membrana a esse on. Se a Bombade Na+ e K+ permanece inibida por um longo perodo, o Na+ (cargas positivas) vai penetrando lentamente na clula e diminuindo gradativamente o Potencial de Repouso. Essa hipopolarizao progressiva da membrana, por sua vez, provoca um escape 7 8 Cl7-Influxo passivo 8-Efluxo passivo K+ 5-Influxo passivo 6-Efluxo passivo (e) Na+ 1-Influxo passivo 2-Efluxo passivo 3-Transporte ativo

31

contnuo de K+ em virtude do Potencial de Repouso se tornar novamente menor que o Potencial de Equilbrio do K+. Num cmputo geral, o efeito a longo prazo da inibio da Bombade Na+ e K+ seria a anulao dos gradientes de concentrao do Na+ e K+ e o desaparecimento quase completo da polarizao da membrana. Restaria apenas a polarizao decorrente do Efeito de Gibbs-Donnan em virtude da presena dos nions no difusveis no interior da membrana. Analisando a situao de cada on isoladamente, veramos o seguinte: on Cl- : - O fluxo exatamente igual ao influxo. Isto ocorre porque o gradiente eltrico existente na membrana exatamente igual ao que seria necessrio para equilibrar o gradiente de concnetrao. O influxo ocorre a favor do gradiente de concnetrao mas contra o gradiente eltrico enquantro o efluxo ocorre contra o gradiente de concentrao mas a favor do gradiente eltrico. on K+ : - O influxo ocorre contra o gradiente de concentrao mas a favor do gradiente eltrico. - O efluxo ocorre a favor do gradiente de concentrao mas contra o gradiente eltrico. Porm, no caso do K+, o gradiente eltrico existente (-90 mV) menor do que seria necessrio (-95 mV) para equilibrar o gradiente de concentrao. Desse modo, o efluxo maior que o influxo e a clula est continuamente perdendo K+. Essa perda PASSIVA de K+ contrabalanada pelo transporte ATIVO efetuado pela Bombade Na+ e K+, de tal modo que o fluxo efetivo nulo e as concentraes interna e externa de K+ se mantm constantes. on Na+ : - O efluxo muito pequeno porque, primeiro, a membrana muito pouco permevel ao sdio, e, segundo esse efluxo ocorre contra um gradiente de concentrao e contra um gradiente eltrico. - O influxo tende a ser bastante intenso porque ocorre a favor tanto do gradiente de concentrao como do gradiente eltrico mas no o , por causa da baixa permeabilidade da membrana. De qualquer modo, o influxo maior que o efluxo e o Na+ est continuamente penetrando na clula. Essa invaso PASSIVA de Na+, que terminaria por anular o Potencial de Repouso, contrabalanado pelo transporte Ativo efetuado pela Bombade Na+ e K+. Desse modo, o fluxo efetivo do on sdio tambm nulo e suas concentraes intra e extracelular se mantm constantes.

32

FUNO DA HEMOGLOBINA NO TRANSPORTE DE GASES E NO TAMPONAMENTO SANGUNEO O sangue venoso chega aos alvolos pulmonares na seguinte situao: a) baixo contedo de O2 (foi consumido pelos tecidos) no plasma e nas hemcias. b) elevado contedo de CO2 (liberado pelos tecidos) na forma de CO2 dissolvido, H2CO3 e HCO3-, no plasma e nas hemcias. c) Hemoglobina desoxigenada e protonada. Os prtons (H+) so provenientes da dissociao do H2CO3 que se formou devido ao elevado contedo de CO2 (CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3 ). A hemoglobina desoxigenada funcionou como a base conjugada de um tampo impedindo que os H+ liberados permanecessem na forma livre e baixasse o pH do meio, e facilitou lo transporte de CO2 na forma de HCO3-. Caso no houvesse o tamponamento pelo Hb o pH do meio baixaria rapidamente (pois o sistema tampo HCO3- / H2CO3 no tampona seus prprios componentes - o H2CO3 no caso) e a eliminao de CO2 celular seria dficultada pois o gradiente de concentrao CO2 clulas / CO2 plasma desapareceria rapidamente devido saturao do plasma. d) Protenas plasmticas na forma carbamnica, tambm devido ao elevado contedo de CO2 do plasma (CO2 + Prot -NH2 Prot-NHCOOH). Todos os componentes citados (O2, HBO2, Hb, +HHb, H+, HCO3-, Prot-NH2, Prot-NHCOOH, CO2) esto em equilbrio REVERSVEL entre si pois todos participam de uma cadeia de reaes que se inicia, de um lado, captao ou liberao de O2 e, do outro, na captao ou liberao de CO2. So as variaes de concentrao desses dois gases que, de acordo com a lei da ao das massas, disparam as reaes, ora num sentido, ora no sentido inverso, procurando novo equilbrio. Repetindo, no sangue venoso todos os componentes do sistema transportador de O 2 e CO2 esto em equilbrio dinmico. Atingindo os capilares pulmonares, o sistema transportador (sagnue) se depara com uma alta concentrao de O2 e uma baixa concentrao de CO2; exatamente o inverso das condies do sangue. Haver ento um fluxo de O2 do alvolo para o sangue e um fluxo de CO2 do sangue para o alvolo, alterando suas respectivas concentraes. Dissemos anteriormente que so as variaes de concentraes desses gases (O2 e CO2) que, de acordo com a lei de ao das massas, disparam as reaes, num sentido ou no outro. Normalmente eles atuam de modo cooperativo, isto , deslocam o equilbrio num mesmo sentido. Isto acontece porque eles se encontram nos extremos da cadeia de reaes; o aumento na concentrao de um concomitante com a diminuio na concentrao do outro desloca todas as reaes num mesmo sentido, seja no sentido da oxigenao e perda de CO2 ( sentido 1) ou no da desoxigenao e ganho de CO2 (sentido 2) pelo sangue. As condies ao nvel dos pulmes (alta de O2 e baixa de CO2 alveolar) so favorveis ao sentido 1 e teremos ento os seguintes processos: a) A alta concentrao de O2 (proveniente do alvolo) facilita a oxigenao da hemoglobina (reao 1) que se encontra na forma protonada (+HHb). A captao de O2 pela hemoglobina protonada diminue sua afinidade pelos prtons (H+) que sero ento liberados no meio(reao 2). A hemoglobina passar para a forma oxigenada e desprotonada. b) O aumento da concentrao de H+ no meio (devido desprotonao da +HHbO2) associado alta concentrao de HCO3- deslocar a reao H+ + HCO3 H2CO3 (reao 3) no sentido da formao do H2CO3. Um aumento na concentrao deste, por sua vez, deslocar a reao H2CO3 H2O + CO2 (reao 4) no sentido da formao de CO2 o que facilitar sua difuso para o alvolo que j est facilitada pela baixa concentrao de CO2 no mesmo. Se tivssemos iniciado o raciocnio com a alterao na concentrao do CO2, o resultado final seria o mesmo: ganho de O2 pelo sangue. Seno vejamos: a diminuio da concentrao plasmtica de CO2 (devido sua difuso para o alvolo) desloca a reao 4 no sentido da reposio do CO2 que se difundiu, o que leva a um consumo de H2CO3. Um consumo deste, por sua vez, desloca a reao 3 no sentido de repor o H2CO3 consumido, o que provoca uma diminuio na concentrao de H+. Esta, por sua vez, facilita o deslocamento das reaes 2 e 1 no sentido da desprotonao e oxigenao da hemoglobina. c) Por fim, a diminuio do CO2 no sangue (devido sua difuso para o alvolo) desloca a reao Prot-NHCOOH Prot-NH2 + CO2 (reao 5) no sentido da liberao de CO2 que continuar se difudindo para o alvolo. Desse modo, o CO2 recebido pelo sangue, ao nvel dos tecidos, e que vinha transportado nas forma de CO2 dissolvido HCO3-, H2CO3 e Prot - NHCOOH foi excretado nos alvolos pulmonares, ao mesmo tempo em que o sangue era oxigenado. O sangue que saiu os pulmes e ir para os tecidos (sangue arterial) apresenta-se nas seguintes condies, com todos os seus componentes novamente em equilbrio dinmico: a elevado contedo de O2 (recebido ao nvel dos alvolos) no plasma e nas hemcias. b baixo contedo de CO2 (perdido ao nvel dos alvolos), tanto na forma de CO2, dissolvido como na forma de HCO3- e H2CO3, no plasma e nas hemcias. c Hemoglobina oxigenada e desprotonada. Os prtons (H+) foram liberados devido oxigenao da hemoglobina protonada. Neste caso a hemoglobiana funcionou como o cido conjugado de um tampo (compare com o item c no sangue venoso) impedindo que o consumo de H+ devido ao deslocamento das reaes 3 e 4 aumentassem o pH do meio e facilitou a eliminao de CO2,promovendo o deslocamento das reaes 3 e 4 nesse sentido. d Protenas na forma amnica (Prot-NH2) devido ao baixo contedo plasmtico de CO2. Pode-se observar que o sangue arterial apresenta-se em um estado oposto quele do sangue venoso. Ao atingir os tecidos o sistema transportador de O2 e CO2 (sangue), agora, depara-se com uma situao inversa daquela encontrada nos pulmes, ou seja, uma baixa concentrao de O2 e uma alta concentrao de CO2 nas clulas, situao esta decorrente do metabolismo celular. Esta situao propiciar um fluxo de O2 do sangue para as clulas e um fluxo de CO2 das clulas para o sangue, alterando suas

33

respectivas concentraes, o que deslocar todas as reaes no sentido contrrio aquele que ocorreu ao nvel dos alvolos pulmonares: 1 O fluxo de CO2 das clulas para o plasma aumenta sua concentrao no mesmo, o que desloca a reao 4 no sentido da formao de H2CO3 que, por sua vez, se dissociar em HCO3- e H+. Caso a hemoglobina no funcionasse como um tampo, prtons (H+) liberados iriam se acumulando e diminuindo o pH do meio, o que dificultaria a formao de H2CO3 e o armazenamento do CO2 na forma de HCO3-.` 2- O fluxo de O2 do plasma para as clulas desloca a reao 1 no sentido da desoxigenao da hemoglobina o que facilita o seu funcionamento como tampo (item anterior) pois a hemoglobina na forma desoxigenada tem maior afinidade pelos prtons (H+) do que na forma oxigenada. 3- Por fim, o aumento da concentrao plasmtica de CO2 deslocar a reao 5 no sentido da associao do CO2 aos grupos -NH2 das protenas deixando-os na forma carbamnica (prot-NHCOOH). Cedendo O2 para as clulas e recebendo o CO2 por elas produzido, o sangue volta s condies citadas no incio (itens a, b, c, d - sangue venoso). Fecha-se assim o incio de transporte de O 2 dos pulmes para os tecidos e de CO2 dos tecidos at os pulmes onde ser eliminado pela respirao. Observaes: I - Os grupos amina (-NH2) da hemoglobina participam tambm no transporte de CO2 na forma carbamnica (-NHCOOH). Seu comportamento semelhante ao das protenas plasmticas. No foram includas no esquema por motivos de simplificao. II - Quando se diz que no sangue venoso a hemoglobina est na forma desoxigenada e desprotonada, trata-se de uma simplificao. Na verdade, tanto no sangue venoso como no arterial, existe sempre um equilbrio entre as quatro formas da hemoglobina: oxigenada protonada (+HHbO2), oxigenada desprotonada (HbO2), desoxigenada protonada (+Hhb) e desoxigenada desprotonada (Hb). Dependendo das condies haver a PREDOMINNCIA no de uma forma sobre as outras, mas sim, de uma situao sobre a outra. No sangue arterial, a alta concentrao de O2 e a diminuio da concentrao de +H, facilitar a predominncia da forma oxigenada desprotonada sobre a forma desoxigenada protonada (HbO2: 96%, +HHb: 4%). J no sangue venoso, a baixa concentrao de O2 (perdido ao nvel dos tecidos ) e acidez do meio (proveniente da dissociao do H2CO3, formado pela hidratao do CO2 liberado pelos tecidos), resultaro na diminuio da percentagem de hemoglobina oxigenada desprotonada (HbO2 - 65%) e aumento da percentagem da forma desoxigenada protonada (+HHb - 35%). O2 A H+ +HHbO 2 +HHb - 4% HbO2 - 96% No esquema acima o crculo superior mostra a situao da hemoglobina no sangue venoso e o crculo inferior, no sangue arterial. O lado B mostra as reaes que ocorrem ao nvel dos pulmes: captao de O2 e liberao de H+. O lado A mostra o deslocamento do equilbrio do sistema quando o mesmo atinge os tecidos: lliberao de O2 e a captao de H+. A existncia da hemoglobina na forma oxigenada- protonada efmera pois existe uma influncia antagnica do O2 e do H+ sobre a hemoglobina: a oxigeneo da hemoglobina diminue sua afinidade pelos prtons (H+) que so ento liberados e o contrrio, ao contrrio. Esse fenmeno denominado Efeito Bohr. Essa influncia antagnica do O2 e dos prtons sobre a hemoglobina uma decorrncia da sua prpria estrutura. O on Fe++ do grupo heme, de acordo com seu estado oxigenado ou desoxigenado influencia a distribuio eletrnica do radical lateral do aminocido histidina que quem funciona como doador ou aceptor dos prtons. Quando o Fe++ est oxigenado o radical lateral histidina torna-se menos negativo e portanto com menor afinidade pelos prtons. A desoxigenao do Fe++ desloca a negatividade do complexo para o radical da histidina que passa a captar os prtons do meio. +HHb - 35% HbO2 - 65% +HHbO 2 B H+ O2

GRUPO HEME - Fe++

O2

Prot - CH2

C = CH HN CH (Histidina) N H+

34

Capilar Pulmonar

Plasma Alvolo Pulmonar O2 HCO3O2 +HHb

Hemcia 1 HbO2 +HHbO 2 H+ HCO3H2CO3 3 2

4 CO2 CO2 5 Prot-NH2 Prot-NHCOOH H2O

SANGUE VENOSO O2 O2 CO2 CO2 +HHb H2CO3 H+ HCO3H2CO3 HCO3 H+ H Prot-N COOH

Capilar Pulmonar Clulas Plasma Hemcia +HHb 1 HbO2 2 H+

+HHbO 2 O2 O2

HCO3-

HCO3-

3 H2CO3

4 CO2 CO2 5 H2O

Prot-NH2

Prot-NHCOOH

35

BIOELETROGNESE I Potencial de Ao Potencial de Equilbrio Membranas Excitveis ATPases Transportadoras BIOELETROGNESE II Msculo Liso Msculo Esqueltico Contrao Muscular Lisa e Esqueltica As membranas celulares com sua composio inica intra e extracelular apresenta uma diferena de potencial eletroqumico transmembrana, varivel de clula para clula dependendo do tecido e que em repouso possui valor constante. Este potencial apresenta uma polaridade negativa no intracelular e positiva no extracelular devido s macromolculas no difusveis existente no interior das clulas. No estado de repouso a clula apresenta-se com uma grande permeabilidade aos ons K+ de Potencial de Equilbrio (P. Eq.) em torno de -95 mV e mostra-se praticamente impermevel aos ons Na+ que possui P.Eq. em torno de +65mV. Na presena de um estmulo a membrana que antes era praticamente impermevel ao Na+, torna-se altamente permevel, elevando-se assim a concentrao de Na+ intracelular em decorrncia do aumento do influxo deste on. Isso provoca uma despolarizao na membrana celular. Com propsito de compensar essa despolarizao a clula eleva o efluxo de K+ sendo assim repolarizada. Chega a um determinado ponto que o eletrofluxo muito grande , hiperpolarizando a clula . Neste ponto a clula atravs das ATPases Na-K coloca Na para fora e K para o interior da clula, deixando a membrana em equilbrio eltrico mas ainda com um pequeno desequilbrio qumico. Todas estas alteraes eltricas que ocorrem na membrana celular aps a presena de um estmulo denomina-se Potencial de Ao (P.A.). A membrana celular possui protenas especficas para grupos de substncias chamadas de receptores. As substncias podem ligar-se a estas protenas de todos os tipos de interaes qumicas: inica, pontes de hidrognio, foras de Van Der Waals e covalente. No caso de ligaes covalentes a ao bastante prolongada. Publicaes mais antigas mostraram que existia na membrana celular vrios tipos de protenas (receptores). Existia receptores prprios para hormnios esterides que poderiam induzir a sntese proteca especfica (R1) e em caso dos neurotransmissores seriam eles proprios canais de ons associados aos canais nas membranas plasmticas da clula alvo (R2). Outros receptores (R3 e R3i) atuariam estimulando ou inbindo respectivamente a adenilato ciclase que por conseguinte alteraria a concentrao intracelular da adenosina monofosfato (AMPc). Isto ocorreria atravs de distintas ligaes com Guanosina (GTP) com protenas reguladoras (Gs e Gi) respectivamente. Se Gs for ativada de forma tal que possa estimular a adenilato (A.C.), esta se ligar ao GTP formando o complexo agonista-receptor apropriado o que elevar os nveis de AMPc intracelularmente. Se no entanto for ativada a Gi, esta indiretamente inibir a A.C. que por sua vez diminuir os nveis de AMPc celular. Os nveis de AMPc podem determinar ou no os estmulos de protenas cinases dependentes. O influxo de Ca++ regulado atravs de receptores distintos (R4 e R5). ESQUEMA1. O Ca++ citoplasmtico regula algumas funes diretamente e outras apenas quando encontra-se ligado protenas reguladoras intracelulares dependentes de clcio, a calmodulina (CaM). O complexo CaM-Ca++ controla as funes de algumas protenas diretamente e de outras pela ativao de um grupo, distinto de protenas cinases dos quais a miosina de cadeia leve (MLCK) um exemplo. A teoria mais recente no se refere a estes receptores citados anteriormente, mas a mecanismos reguladores da atividade celular estritamente ao fenmeno da cascata. Existe na membrana celular a fosfolipase C (PLC) que atravs da ativao da protena Guanina Nucleotdeo (G) por ocupao do receptor especfico pelo agonista ativa-a levando hidrlise dos inositois bifosfato da membrana. Esta hidrlise ocasiona a fosforilao do inositol 1,4,5 trifosfato (INaP 3) e do Diacilglicerol (DG) resultando em inositol Tetrafosfato (InsP 4) que por sua vez libera Ca++ dos estoques intracelulares que estimula a C-quinase, atravs da estimulao da calmodulina. ESQUEMA 2. ATPases transportadores A membrana plasmtica constitui-se de uma membrana lipoproteica que delimita a clula. O modelo de mosaico fluido sugerido por Singer e Nicolson, 1972, sugerem que as protenas integrais formam um conjunto heterogneo de molculas dispostas de modo que seus grupos apolares mergulham no interior hidrofbico da membrana, enquanto seus grupos polares se projetam para a fase aquosa. Estas protenas funcionariam como carriar que translocariam on de um lado para outro da membrana as custas de mudanas conformacionais. Este transporte indo contra um gradiente qualquer requer de energia. Sendo assim as protenas transportadoras funcionam como enzimas capazes de hidrolizar a ligao entre os fosfatos B e Y do ATP, liberando ADP e Pi e de aproveitar a energia resultante para o transporte de ons. O transporte ativo de Na+ e K+ catalizado por uma enzima Na-K-ATPase descoberta por Skou (1957). Trabalhos feitos com medida em fragmentos de membrana e fluxos ativos de Na+/K+ medida em eritrcitos ntegros, mostraram as seguintes caractersticas: 1). Ambos esto localizados na membrana e utilizam ATP 2). Ambos so ativados sinergicamente por Na+ e K+ 3). Em ambos o on amonaco pode substituir o K

36

4). As concentraes de Na+ e K+ necessrias para produzir metade da ativao mxima em ambos os processos so muito prximas. 5). A ovabana inbe os processos, sendo 10-7 M a dose necessria para a inibio. 6). Em ambos, concentrao muito altas de Na+ inbem competitivamente a ativao pelo K e vice-versa. A enzima apresenta um stio de alta afinidade pelo Na e baixa pelo K voltando para o lado interno da membrana, e outro stio de alta afinidade pelo K e de baixa afinidade pelo Na+ voltado para o lado externo da membrana. A ATPase Na/K foi evidenciada em todos os tecidos onde h transporte ativo de Na e K, incluindo: crebro, nervo perifrico, hemceas, rim msculos, bao, fgado, pulmo, estmago, retina, cristalino, vrios tecidos epiteliais, diversas glndulas. Em outros animais, como: msculos, pele, bexiga de anfbios, axnios de lulas gigantes, nervo perifrico de caranguejo, rim de lagosta. Recentemente foi demonstrado a presena de ATPases em clulas (algas marinhas) com caractersticas bastante semelhantes s Na/K ATPases. Mecanismos de Reao da Na/K ATPases A fosfoenzima (E1 - P) capaz de reagir reversvelmente com o ADP resintetizando ATP estaria voltada para o lado interno da membrana e apresentaria Na ligado a ela. Durante o ciclo de reao esta fosfoenzima sofreria uma mudana conformacional dependendo de alto Mg, convertendo-se em um segundo tipo fosfoenzima (E2 - P) voltada para o lado externo da membrana que, apresentando baixa afinidade ao Na, prontamente liberaria este on para o meio extracelular. A ligao de K a esta fosfoenzima (E- P) promoveria sua desfosforilao seguinte de seu retorno posio intracelular acompanhada da liberao de K no meio intracelular. ESQUEMA 2 e 3. CITOPLASMA Esquema 03 Pi 2K+ E1 + 3Na+ 3Na+ + ATP 3Na ATP ADP Lado ADP

E1-P +

Interno

Pi + E2 E2-P 2K + E2-P Lado 2K H2O 2 K Externo _____________________________________________________________ 2K+ 3Na+ MEIO EXTRACELULAR Miosina nos canais Cinase e Contrao do Msculo Liso Evidncias sugerem que existe no msculo liso receptor para o Ca++ na protena leiotonina anlogo a troponina C. O msculo liso contm maiores concentraes de Ca++ nos receptores das protenas calmodulina (Ca M) e enzima especfica Ca M - dependente e elevadas taxas de miosina (MICK), a actina - dependente da ativao da miosina ATPase. No modelo de contrao muscular lisa, e Ca++ dependente da ativao da MLC.P. interage com a actina formando um ciclo actina-miosina, regulando os processos filamentosos. Recentemente foi descoberta a protena caldesmon, que est associada com o domnio ATM-M. tambm um componente do sistema contrtil na motilidade das clulas. Na ausncia de Ca++ e CaM, caldesmon pode ligar-se A-TM, inibindo a formao da ligao entre A-MLC.P. Neste modelo a MLCK na resposta contrtil poder ocorrer: 1) A contrao ocorre com elevadas concentraes intracelulares de Ca++ livre, com caldesmon controlando o sistema. 2) No msculo contrado contm altas concentraes de MIC.P. Estudos mostraram que a elevada concentrao de Ca++ ocorre somente durante 2-5 s tem valores levemente altos durante o plat sustentado. No msculo esqueltico, na maioria das vezes, h uma correspondendncia entre durao da contrao e magnitude e durao como aumento ihntracelular de Ca++. Isto no ocorre no msculo liso. A troponina C ausente no msculo liso. A quantidade de actina e miosina maior no msculo liso do que no msculo esqueltico. durante a contrao sustentada no msculo esqueltico (ttano), o cosumo de oxignio alto mas durante a contrao do msculo a taxa de O2 eleva-se no incio da contrao mas cai os valores somente durante a fase de plat. Ainda que as protenas intermediarias estejam em ambos os msculos, elas so consideralmente maior no msculo liso comparando-se com o msculo esqueltico. O rearranjo tambm diferente. O msculo liso constitudo de dois domnios distintos: domnio fibrilar: a caldesmon - troponina actina -miosina (CD + TM - A - M) e o domnio contendo actina ligada a protenas filamina e protena intermediria desmina, formando domnio filamina actina-desmina (F - A - D). No msculo esqueltico somente um estmulo leva a contrao muscular. No msculo liso tem sido provada a participao direta do Ca++ na contrao lisa. Contrao Muscular Lisa Os msculos lisos possuem filamentos porticos responsveis pelo mecanismo da contrao muscular formado pelas protenas: caldesman- tropomiosina- actina-miosina (CD-TM-A-M) e actina-desmina C A-D. Durante o repouso, o msculo liso formado por uma ponte de actina-miosina-

37

caldesmon que impede a ligao com a tropomiosina e uma outra protena , filamina, que est associada ao domnio actina-desmina. Uma ativao celular por qualquer um dos mecanismos: 1) ativao fosfollipase C; 2) ativao de adenosina monofosfato (AM PC); 3) estimulao direta da G protena por agnosta, como patra substncia P, eleva os nveis de Ca++ promovendo a fosforilao da meromiosina de cadeia leve (MILK) em MIC-P. Os nveis eleados de Ca++ tambm promovem a dissociao de caldesmon atravs de Ca++ cdependente de calmodulina e ativao do domnio filamina-actina-desmina (F-A-D). Tudo isso reduz concentrao muscular. durante a contrao da protena C-quinase promove a fosforilao de outras protenas, como desmina, sinemina, caldesmon e de vrias protenas citolticas. O mecanismo de fachadura dos filamentos durante a concentrao muscular causada pela reorganizao e estabillizao supramolecular dos componentes do domnio F-A-D. A iniciao da contrao resultou na formao de ciclo A-M. as propriedades desta ponte ocorre com a MLC. P formando uma destas pontes foi desfoforilado (A-MLC.P. -------- A-MLC + Ci). Na contrao sustentada e Ca++ depende elevado somente na fase inicial, durante a ativao da MLCK retornando aos valores basais. Estudos da Ultraestrutura Atravs de novos mtodos de imunoflluorescncia microscpica e imunocitoqumica e microscopia e;etrnica na anlise das clulas musculares lisas observou-se a presena de dois domnios distintos. CD - TM - A - M - F - A - livre de miosina e caldesmon. Mostrou tambm a presena de outras protenas intermedirias: sinemina, vinculina, plactina e filamina na superfcie densa de plaquetas e intracelularmente alta quantidade de actina. Gelsolina poderia temporariamente elevar o mecanismo dependente de Ca++. No incio o consumo de oxignio elevado oudiminue com a aividade da miosina ATPase. Kinase C, sua funo no Msculo Liso A atividade da fosfolipase C fosforaliza INSP 3 em INSP 4 mobilizando o Ca++ localizado na vescula mitocondrial. O aumento do Ca++ no retculo sarcoplasmtico ativa a calmodulina dependente do Ca++ (Ca M) . A C -Kinase foi descoberta por Niskizuka no crebro. Sempre que uma clula ativa por um agonista dois eventos ocorrem: a hidrlise de PIP 2 e ativao da C - Kinase. Os ferbais ester, como DG, TPA (13-O-tetra decanoyl pherbor - 13 - acetato) e PDB (forbol dibutirato) ativam a C-Kinase. C - Kinase Dependente de Fosforilao no Msculo Liso Durante a fase inicial celular o Ca++ no citosol regula a ativao de CaM - dependente. Caldesmon o substrato para 2 protenas cinases: Ca++ CaM e C-Kinase. A fosforilao de caldesmon altera o efeito de interao do domnio A-TM-M. Caldesmon fosforilada inivbe a interao A-D. Estudos mo9stram que a fosforilao de caldesmon eleva a ponto de ligao A-M necessria manter a tenso muscular. Aps a mudana conformacional da tropomiosina ocorrida aps a ligao Ca++ - Troponina C. Liberando o centro ativo da actina este se ligar a meromiosina de cadeia leve levando ao mecanismo de deslizamento dos filamentos formados pelas protenas musculares, ou seja, Contrao Muscular. Para ocorrer o retorno muscular necessrio a retirada do Ca++ do sarcoplasma por meio da ATP-ase Ca++, eliminando ligao Ca++ Troponina C. O sarcmero um complexo resultante de zonas claras e escuras que aparecem no msculo esqueltico em decorrncia de pouco ou muito de determinada protena. Possui uma banda A escura formada basicamente de miosina, mostando-se escura. No interior desta banda I predominantemente tropomiosina, e no interior desta uma linha Z. Durante a contrao muscular pela teoria dos filamentos deslizantes, o sarcmero diminui de tamanho, desaparece a banda H eI. A banda A permanece. Voltando ao repouso tudo volta ao normal. BIBLIOGRAFIA GOODMAN & GILMAN. As Bases Farmacolgicas da Teraputica. 7 edio. Guanabara Koogan. 1987. LACAZ. VIEIRA. BIOFSICA. MARINHO, Lis C. Estudo Qumico e Farmacolgico do Extrato e Alcalides Quinolizidnicos isolados de Bowdichia virgilioides, Kunth. Tese de Mestrado.

38

CONTRAO MUSCULAR 1 - ESTRUTURA DO MSCULO ESQUELTICO Os msculos esquelticos so constitudos por clulas finas, alongadas e multinucleadas, denominadas fibras musculares. As fibras musculares possuem de 10 a 100 Im, e comprimento varivel conforme o tipo de movimento pelo msculo executado. Ao microscpio tico, especialmente com iluminao de contraste de fase, as fibras apresentam faixas finas transversais, alternadamente claras e escuras, ao longo de todo seu comprimento. Por isso os msculos esquelticos so classificados como msculos estriados. O contedo intracelular das fibras na maior parte, ocupado pelos elementos contrteis de dimetro de 1 a 2 Im, dispostos paralelamente por todo comprimento da fibra, as miofibrilas. O padro de estriaes exibido pelas fibras atribudo s miofibrilas. Nas miofibrilas observa-se alternao sucessivas de bandas densas, chamadas bandas A (de anisotrpicas) e bandas menos densas, chamadas bandas I (de isotrpicas). Cada banda I apresenta uma fina linha escura dividindo-a ao meio, perpendicularmente, a linha Z. No msculo em repouso, a regio central da banda A apresenta uma densidade um pouco menor que o restante da banda, chamada de banda H. E, por fim, perpendicularmente e na regio central da banda H, existe uma linha mais densa, a linha M. SARCMERO A H I

Define-se como sarcmero o segmento delimitado por duas linhas Z sucessivas, tendo no seu interior uma banda A separando duas semibandas I. O sarcmero a unidade contrtil, e tem em mdia 2 a 3 Im de comprimento. Outras estruturas celulares, tambm so encontradas. A membrana plasmtica da fibra muscular chamada sarcoplasma, o citoplasma sarcoplasma, o retculo endoplasmtico de retculo sarcoplasmtico. Possuem tambm, muitas mitocndrias localizadas preferencialmente na periferia da fibra, mas tambm entre as miofibrilas. O msculo como um todo envolvido por uma membrana chamada epimsio. Percorrendo feixes de fibras musculares, existe uma membrana proveniente de invaginao do epimsio que o perimsio. Por ltimo envolvendo uma nica fibra muscular encontramos o endomsio. 2 - ESTRUTURA AO MICROSCPIO ELETRNICO Ao microscpio eletrnico, observa-se que as miofibrilas so constitudas por dois tipos de miofilamentos chamados grossos e finos. Os filamentos finos so constitudos por trs tipos de protenas: Actina, Troponina e Tropomiosina, estas inserem-se na linha Z, projetando-se de cada lado em direo ao centro do sarcmero. Os filamentos grossos so constitudos pela agregao de molculas de uma outra protena, a miosina. Localizam-se na regio central do sarcmero. No msculo em repouso, os filamentos finos opostos no se encontram no centro do sarcmero, explicando a regio mais clara no centro da banda A, a banda H. No centro desta observa-se uma linha mais densa, denominada linha M. Em cortes transversais feitos em diferentes nveis do sarcmero, observa-se que cortes na altura da banda I s contm filamentos finos, e aqueles na altura da banda H somente filamentos grossos. J nos cortes feitos na regio da banda A esto presentes os dois tipos de filamentos, dispostos em um arranjo espacialmuito regular. Cada filamento grosso rodeado por seis filamentos finos, dispostos como se estivesse constitundo os vrtices de um hexgono. Por outro lado, cada filamento fino acha-se rodeado por trs grossos. Portanto, h uma relao de 2:1 entre o nmero de filamentos grossos e finos. 3 - PROTENAS CONTRTEIS As miofibrilas so constitudas de quatro protenas principais. A miosina, que forma os filamentos grossos, e a actina, principal componente dos filamentos finos, esto diretamente envolvidas no processo de contrao muscular. Duas outras - tropomiosina e troponina, que se localizam nos filamentos finos - tem um papel regulador, funcionando como nterruptor, pois atuam para ligar ou desligar o processo. 3.1 - A Miosina Esta protena constitue cerca de 55% do total de protenas do msculo estando, portanto, provavelmente envolvida no fenmeno contrtil. tambm uma enzima que cataliza a hidrolise do ATP.

39

A molcula de miosina alongada, constituda de uma poro filamentosa, vulgarmente chamada de cauda, terminada em uma das extremidades por uma poro globular, a cabea. Na realidade a cabea formada por duas pores globulares, ligadas por um curto segmento aparentemente muito flexvel. Com tempos muito curtos de tratamento pela tripsina, a molcula rompida em dois fragmentos, denominados meromiosina leve (MML) e pesada (MMP). A MML segmento da cauda, enquanto a MMP o restante da cauda com as pores globulares a ele ligadas. Com tratamento mais prolongados pela tripsina, a MMP quebrada nos chamados subfragmentos 1 e 2. Os primeiros (S-1) corresponde s partes globulares isoladas, destitudas de qualquer resto da parte filamentosa presente na MMP, que constitue o subfragmento 2 (S-2). O tratamento com uma outra enzima proteoltica, a papana, ataca preferencialmente a juno das partes globulares, separando s-1 do restante da molcula. Isolando-se os diversos fragmentos, pode-se constatar o stio de hidrlise do ATP, que est localizado no s-1 (regio globular) que tambm, a nica parte capaz de se fixar aos filamentos finos. A molcula de miosina , assim, extremamente interessante, por apresentar duas regies morfologicamente distintas. A cauda desempenha um papel estrutural formando o arcabouo do filamento grosso. A cabea capaz de se ligar a filamentos finos e a sede de tranduo de energia qumica em mecnica, base do processo contrtil. O peso molecular da miosina de cerca de 470.000. constituda de duas cadeias polipeptdicas principais e quatro cadeias leves. Na cauda, estas cadeias se encontram enroladas, uma em torno da outra, numa estrutura chamada hlice dupla ou coiled coil. Em uma das extremidades, aps um curto trecho em que no esto mais unidas entre s, as cadeias se enovelam constituindo as regies globulares.

S2

S1

20A MML MMP

Na estrutura quaternria da miosina, ela apresenta ainda quatro cadeias leves (CL) presas aos S-1, duas em cada uma dessas pores globulares. O papel dessas CL na atividade funcional da miosina ainda no est esclarecido. H sugestes de que elas desempenham um papel estabilizador da conformao tridimensional das regies globulares. 3.2 - Actina Constitue-se 20-25% de massa de protenas das miofibrilas. Quando solvel, em gua ou soluo de fora inica muito baixa, chamada de actina-G. Em solues de fora inica elevada, como o interior das clulas musculares, ela se polimeriza, passando forma F-actina (fibrosa). A polimerizao pode ser facilmente revertida, voltando forma monomrica. Cada unidade de actina presente na F-actina tem uma molcula de ADP (adenosina difosfato) firmemente ligada. Quando ocorre a despolarizao, e estando ATP presente no meio, a G-actina troca seu ADP por ATP. Durante a repolarizao o ATP hidrolizado em ADP (que permanece ligado) e fosfato inorgnico (que liberado para o meio). Deve-se resaltar que a actina no uma ATPase como a miosina. Isto porque no ocorre nenhuma hidrlise desta nucleotdeo antes ou depois da polimerizao. A hidrlise que se observa um simples processo estequiomtrico, uma molcula de ATP sendo hidrolisada para cada unidade de G-actina que se incorpora F-actina. (G-actina - ADP ) n ------------------- nG - actina - ADP G - actina - ADP + ATP -------------- G - actina - ATP + ADP nG - actina - ATP - ATP ---------------(G - actina - ADP) n + nPi 4 - PROTENAS REGULADORAS 4.1 - Tropomiosina Esta protena apresenta uma estrutura muito semelhante cauda da molcula de miosina, e sue nome decorre do fato de que seu descobridor acreditava ser uma molcula precursora da sntese da miosina. Ela , entretanto, consideralvemte menor do que a cauda da miosina, apresentando um peso molecuoar de 70.000. formada por duas cadeias polipeptidicas. Cada uma delas apresenta, como a cauda da miosina, na protena nativa, uma hlice enrolada uma sobre a outra, sob a forma de dupla hlice. 4.2 - Troponina

40

 uma protena com peso molecular de 76.000 formada por trs subunidades que possuem funes especificadas bem distintas. Estas subunidades foram denominadas TnC (a que se liga ao Ca++), TnI (a que inibe a atividade ATPsica do complexo actinomiosina) e TnT (a que se liga tropomiosina). A TnC tem peso molecular de 18.000. Pura, apresenta quatro stios de ligao de Ca++ que podem ser divididos em duas classes: dois deles so stios de alfa afinidade, os outros dois so stios de afinidade menor. Entretanto, na troponina completa, ou mesmo quando se adiciona TnI TnC, os quatro stios passam a apresentar a mesma afinidade pelo Ca++. Alm de se ligar a TnI capaz de se ligar TnT porm no capaz de se ligar a tropomiosina ou F-actina. A ligao de Ca++, tanto TnC pura quanto troponina completa, acarreta mudanas conformacionais na molcula protica. TnI - esta subunidade tem peso molecular de 20.000. capaz de se ligar TnC e Factina, porm no tropomiosina. Apresenta a propriedade de inibir a atividade ATPsica magnsiodependente da actomiosina sinttica, esteja o Ca++ presente ou no. TnT - a maior subunidade com peso molelcular de 37.000. capaz de se ligar TnC e tropomiosina, mas no capaz de se ligar TnI ou F-actina. Sua funo ligar o restante da molcula de troponina ao filamento fino, ou mais especificamente, tropomiosina. MECANISMO DA CONTRAO MUSCULAR Antes de falar a respeito da contrao, necessrio falar a respeito de potencial de ao. Quando um estmulo aplicado o impulso nervoso propagado atravs do potencial de ao. a propagao do P.A. prossegue-se despolarizando e repolarizando a membrana da clula nervosa. Na poro final do nervo (telodendro) existe vesculas que contm no seu interior o mediador qumico - acetilcolina para o msculo esqueltico. Estas vesculas esto carregadas negativamente fora e positivamente no seu interior. Por esta razo elas esto continuamente em repulso com a face interna da membrana celular nervosa. Quando o potencial de ao chega terminao nervosa e ocorre a inverso de cargas decorrente da despolarizao pelo P.A., a vescula se aproxima, se acopla membrana e abre-se lanando na fenda sinptica o mediador qumico. O mediador, assim ocupar seu receptor na membrana muscular gerando P. A. que ser propagado atravs dos tubos T (invaginao da membrana muscular). Os tbulos T formam com duas vesculas do retculo sarcoplasmtico um sistema denominado Trade. No interior das vesculas do retculo sarcoplasmtico existe vesculas contendo no seu interior Ca++ que ser lanado no sarcoplasma, durante a propagao do P.A. atravs dos tbulos T, para que ocorra a transduo do impulso nervoso. O mecanismo pelo qual o estmulo eltrico determina a liberao do Ca++ a nvel de Trade ainda no est explicado. Com o lanamento do Ca++ para o sarcoplasma, este se ligar na TnC iniciando o processo de Contrao Muscular. Na ausncia do Ca++, o stio de ligao da cabea da miosina na actina est bloquado, ou seja, no formado o complexo actinomiosina, no havendo pois, contrao muscular. Com a liberao do Ca++ do Rs para o sarcoplasma e este se ligando TnC leva a uma mudana de conformao de toda troponina, ocasionando o deslocamento da troponina para uma posio mais prxima ranhura entre as actina, o que permite o acesso da cabea da miosina (M) ao seu stio de ligao-actina. O deslocamento da troponina ocorre ao longo de toda sua molcula. Observa-se com isso que o comprimento da banda A permanece constante, enquanto o comprimento da banda I e o da banda H varia proporcionalmente com o grau de encurtamento ou estiramento. O encurtamento ocasionado pelo deslizamento dos filamentos finos por entre os grossos. Ocorre, tambm diminuio do sarcmero, com a aproximao progressiva das linhas z. A banda H vai desaparecendo pela aproximao das extremidades dos filamentos finos opostos e a banda I diminuindo proporcionalmente. Como o sarcmero existe em grande nmero e ao longo de toda fibra muscular, o encurtamento deste leva ao encurtamento da fibra, e portanto do msculo. O Ca++ liberado ser logo rearmazenado para o RS, a sua ATPase transportadora, ocorrendo ento o relaxamento muscular. Com o relaxamento, o sarcmero volta ao tamanho normal, assim como a fibra e o msculo. A banda H reaparece, a banda I retorna ao tamanho normal. ESTMULOS LIMIAR: estimlo de qualquer tipo que possa desencadear uma resposta. SUBLIMIAR: estmulo que no capaz de desencadear uma resposta. SUPRALIMIAR: Estmulo de fora superior ao limiar, sendo portanto capaz de desencadear resposta. Os estmulos sublimiares quando so aplicados de maneira contnua eles podem se somarem e desencadear resposta. Em um estmulo supralimiar desencadeia uma coantrao mais vigorosa do que um estmulo limiar, isto porque o nmero de fibras atingidas com o estmulo supralimiar superior ao atingido pelo estmulo limiar. O mesmo no ocorre quando ambos so aplicados em uma nica fibra muscular. Neste caso a resposta a mesma para ambos os estmulos. BIBLIOGRAFIA 1 - VIEIRA-LACAZ, Francisco. biofsica. guanabara koogan. Rio de

janeiro. 1981.

OBS.: A maioria das informaes citadas nesta apostila foram copiadas do livro acima citado.

41

INTRODUO A RADIOBIOLOGIA I - INTRODUO O uso das radiaes nos diversos campos da tecnologia humana traz consigo, ao mesmo tempo, benefcios e riscos. Para que sejam minorados os riscos e maximizados os benefcios deve-se compreender bem os efeitos biolgicos das radiaes, ou seja, a Radiobiologia. Desde o sculo passado que se notou a existncia destes efeitos e, pela falta de conhecimetos bsicos de Biologia houve dissociao entre os avanos cientficos que pesquisaram as radiaes sofreram no prprio organismo doenas resultantes destes efeitos. Aps as exploses atmicas de Hiroshima e Nagasaki, foi que os efeitos biolgicos das radiaes comearam a ser amsi conhecidos com o estudo dos sobreviventes. A Radiobiologia se classifica em: - Radiobiologia das radiaes ionizantes (Rx, raios gama, feixe de partculas aceleradas, etc) e Radiobiologia das radiaes no ionizantes ou Fotobiologia (radiaes ultravioleta). II - ORIGEM E EVOLUO DA RADIOLESO Em um organismo exposto a um feixe de radiaes ionizantes h o aparecimento de alteraes (leso) em diversos nveis de organizao. De tal modo que, podemos estudar essas alteraes em fragmentos moleculares, molculas, organelas celulares, clulas, tecidos, rgos e organismos. Os processos que originam as radioleses podem ser classificadas em trs fases: Fase Fsica - em que h transferncia da energia da radiao para o organismo vivo, produzindo excitaes moleculares e ionizaes. Tem uma durao aproximada de 10 -13 s; Fase Fsico-qumica - reaes dos produtos resultados da fase anterior, com o aparecimento de produtos secundrios. Esta fase dura mais ou menos 10-16 s; Fase Biolgica - alteraes nos processos bioqumicos do organismo como resultado das reaes ocorridas na fase fsica fsico-qumica. Esta fase depende muiito das condies metablicas do organismo e ainda, nesta fase em que pode haver reparaes das radioleses. Pode durar de segundos a anos. As radioleses podem lesar as clulas por dois mecanismos: mecanismo direto (em que a energia da radiao transferida ao ADN) e mecanismo indireto (a energia da radiao transferida molculas vizinhas ao ADN, como a gua por exemplo). III - EFEITOS DAS RADIAES SOBRE O ADN E AS PROTENAS a) Efeitos das Radiaes sobre o ADN - degradao das bases pricas e pirimdicas - rompimento das cadeias helicoidais, que pode ocorrer hlice (simples) ou nas duas (duplas) - rotura das pontes de hidrognio - aparecimento de ligaes inter e intramoleculares

em apenas uma

b) Efeitos das radiaes sobre as protenas - rotura da cadeia polipeptdica - rompimento das pontes de hidrognio - alteraes nos aminocidos Estes efeitos levam a perda da atividade funcional das protenas que pode ser medida atravs de atividade enzimtica. IV - RADIOSSENSIBILIDADE A avaliao dos efeitos fisiolgicos das radiaes pode ser feita de diversas maneiras. Podese escolher, por exemplo, a incapacidade de diviso celular, o bloqueio da sntese de macromolculas ou a parada na respirao. Mas, nem sempre apenas um desses critrios se presta para esta avaliao. Desse modo, o conceito de radiossensibilidade dos organismos vivos muito varivel, pois varia de acordo com o critrio escolhido para se medir o efeito. Fatores que modificam a radiossensibilidade: Qumicos - agem provavelkmente por intermdio de trs mecanismos: por modificao da leso inicial, por alterao dos processos de reparao ou por pertubaes metablicas celulares. Efeito oxignio - em um sistema biolgico, irradiado com radiaes ionizantes, na presena de oxignio sua radiossensibilidade aumenta. Sensibilidade por anlogos de bases nitrogenadas - bactrias que se reproduzem na presena de alguns anlogos de bases pirimdicas, como por exemplo o 5-bromouracil incorporam esses anlogos em suas molculas de ADN e apresentam maior radiossensibilidade. Proteo qumica - existem algumas substncias que reduzem os efeitos das radiaes nos organismos vivos, quando presentes no meio durante a irradiao. Dentre estas, cita-se vrios compostos sulforados (cistena, cisteamina, etc.), inibidores da atividade enzimtica (NaCl), alguns hormnios e vitaminas. Fsicos - existem alguns fatores fsicos que podem alterar a radiossensibilidade de um organismo, tais como a temperatura com que as clulas destes organismos so incubadas e os fatores relacionados com a radiaso (dose, tempo de exposio, tipo de radiao, etc). Biolgicos - o mais importante destes fatores a presena e funcionalidade dos mecanismos de restaurao. Outros fatores so o grau de diferenciao da clula e sua velocidade de mitose (so mais radiossensveis as clulas em multiplicao intensa, assim como a radiossensibilidade inversamente proporcional ao grau de diferenciao celular).

42

V - MECANISMOS DE RESTAURAO DAS CLULAS So os meios atravs dos quais as clulas tentam corrigir o que foi lesado de seus componentes que interagiram com radiaes. So classificados em trs grupos: - restaurao da biomolcula lesada por desapareci mento do radioproduto; - restaurao por retirada do fragmento lesado e sua substituio por novo pedao ntegro (Exciso); - a clula faz cpias dos fragmentos no alterados da biomolcula e, forma uma molcula normal (recombinao) VI - EFEITOS SOMTICOS DAS RADIAES Os efeitos somticos das radiaes se classificam em: imediatos e retardados. Os imediatos so os que aparecem at 60 dias aps a irradiao, e os que se manifestam depois deste tempo so os retardados. Os efeitos imediatos podem ser sub-classificados em gerais (quando todo o organismo exposto s radiaes) e localizados (quando apenas alguns tecidos, rgos ou aparelhos so expostos s radiaes). VI-A) Efeitos Imediatos Gerais; Sndrome aguda de radiao Dose Letal Mdia (LD50(30)) - a melhor forma de expressar a mortalidade provocada em uma populao de animais irradiados. E a dose letal para 50% dos animais irradiados aps 30 dias. Para o ser humano essa dose se encontra numa faixa de 250 a 450 rad. (ver pgina 04). Sndrome aguda de irradiao - os sintomas e sinais observados em indivduos expostos a elevadas doses de radiao so dependentes da dose de radiao aplicada. Doses acima de 100.000 rad. acarretam morte imediata do organismo irradiado. Com doses entre 10.000 e 100.000 rad, em 1 a 2 dias haver xito letal, com o aparecimento de sintomas predominantes de uma sndrome do sistema nervoso central (excitabilidade, incordenao motora, alteraes respiratrias e circulatrias, etc.). VI-B) Efeitos Imediatos Localizados - alteraes no sistema hematopotico - pancitopenia devido diminuio funcional da medula ssea. - no aparelho digestivo h modificaes funcionais tais como anorexia, o alimento permanece mais tempo no estmago, diminuio da absoro dos alimentos, etc. eritema e depilao. VI - EFEITOS TARDIOS DAS RADIAES - carcinognese - diminuio da vida mdia dos animais irradiados - efeitos no crescimento e desenvolvimento (malformaes congni - efeitos localizados (cataratas, esterilizaes, etc.) Efeitos somticos das radiaes Dificuldades do estudo em seres humanos. No se pode fazer estudos em cobaias humanas naturais: - sobreviventes de Hiroshima e Nagasaki - sobreviventes em acidentes de reatores e usinas nucleares (Chernobil) - profissionais da rea - pacientes de radioterapia (superdosagem de I131 e outros) - pessoas envolvidas em acidentes de contaminao radioativa (Goinia-GO) - populao de reas de alto nvel de radioatividade natural: Guarapari-ES, Arax-MG, Morro velho-MG. Casos de leucemia (frequncia relativa)

tas)

(Hiroshima)

(Japo) 1945 1960 Ano

Animal Homem Co

DL50 (30d) (rad) 250-450 350

43

Camundongo Macaco Galinha Sapo Rato Coelho Pardal Tartaruga Peixe Dourado

550 600 600 700 750 800 800 1.500 2.500 Sndrome Aguda de Irradiao

S O B R E V I D A

100d 10d 1d 1h

Efeitos tardios Sndrome do S.H. Sndrome do S.G.I. Sndrome do S.N.C. Morte molecular 500 1000 10000 100000 Dose (rad)

100 F r r e e l q a u t i nv ca i (%) a Pre-implantao Organogenese Feto

(poca de irradiao) 1 - Anomalias (SNCl, olhos, esqueleto) 2 - Morte pr-natal 3 - Morte neo-natal ou efeitos tardios (catarata, esterilidade) Exerccio - Introduo radiobiologia 01 - Justifique a necessidade do estudo da Radiobiologia? 02 - O que radioleso? Quais suas faces? 03 - Quais as alteraes que as radiaes provocam no ADN e nas protenas? 04 - De que modo a radiossensibilidade de um organismo pode ser medida? 05 - Cite trs fatores que modificam a radiossensibilidade de um organismo. 06 - Qual a necessidade de uso de complexo vitamnico por um paciente que est fazendo radioterapia? 07 - como as clulas procuram reparar as radioleses? 08 - O que Dose Letal Mdia (LDP (30))? E seu valor para o ser humano? 09 - De que depende uma sndrome de irradiao? Exemplifique. 10 - Cite quatro efeitos tardios das radiaes. QUESTIONRIO PROTEO RADIOLGICA 01 - Qual o objetivo da proteo Radiobiolgica? 02 - Que vem a ser Radiao de Fundo? Qual sua origem? 03 - A que se deve a exposio interna? 04 - Quais as medidas prticas que se deve tomar para evitar exposies interna? 05 - A que se deve a exposio interna? 06 - Quais os fatores bsicos de proteo contra as radiaes externas? 07 - Qual o smbolo usado para denotar presena de radiao? 08 - D os limites anuais de dose Equivalente Efetivo de Dose para: a) trabalhadores b) indivduos do pblico

44

09 - D os limites de Equivalente de Dose para: a) trabalhadores b) indivduos do pblico Sequncia dos acontecimentos no Desenvolvimento de Leso por radioleso Estgio 1 processo fsico de absoro da radiao ionizante; Tempo: 10-16 a 10-12s ionizao e excitao dos tomos. Estgio 2 Tempo: Milissegundos - reaes qumicas iniciais. Estgio 3 alteraes de molculas biologicamente importantes. Tempo: segundos a horas. Estgio 4 fenmenos biolgicos: mutaes efeitos no letais; Tempo: horas a anos. Efeitos letais. Radilise da gua Pierre Curie verificou a produo de Hidrognio e Oxignio em soluo de sais de rdio como consequncia da interao das partculas alfa com as molculas de gua. Mais tarde, foi detectada a formao de perxido em solues aquosas irradiadas e caracterizada a formao de radicais livres. Radical livre - um tomo, ou molcula que possui um ou mais eltrons no emparelhados, que os assegura alta reatividade qumica. OH OHOH ionte hidroxila radical livre -Radilise da gua ausncia de Oxignio. H2O . H2O H2O+ + H2O H2O+ + H2OH+ + H2O + OH OH hidraxil

H2O- + H2O OH- + H2O + H ---------------------------------------------------------------------------------H2O + hf H + OH-

-Radilise da gua em presena de oxignio. + O2 O2H OH + H2O + O2 + H2O2 O2OHHO2 H2O+ + HO2 + HO2

OBS: Os radicais formados em presena de Oxignio so 3 vexes mais reativas. ORIGEM DAS LESES INDUZIDAS PELAS RADIAES As leses so induzidas por: - Efeitos diretos: A energia da radiao transferida para o ADN, modificando-lhe a estrutura; - Efeitos indiretos: a energia transferida para uma molcula intermediria (gua, por exemplo) cuja radilise acarreta formao de produtso altamente reativos, capazes de lesar o DNA.

Direto Indireto

45

Os efeitos diretos e indiretos variam em funo de diversos fatores: - temperatura; - teor de gua; - teor de oxignio; - presena de outras osmolaridades que possam capturaros produtos de radilise da gua; - etc. RADIOSSENSIBILIDADE RELATIVA DE CLULAS DE MAMFEROS Radiossensiblilidade Tipo celular Caractersticas relativa elevada Clulas primordiais vida curta indiferencihematopoticas, ada, divide-se regular espermatognias, -mente. clulas das cristas intestinais. pouco elevada clulas precursoras da divide-se limitada de srie hematopotica. vezes; diferenciada at certo grau. mdia clulas endoteliais, divide-se irregularmenfibroblastos. te, perodo de vida mui -to varivel. pouco baixa clulas epiteliais vida longa; no se divi do fgado, rim, glndu-de frequentemente; la salivar, etc. grau varivel de diferenciao. baixa neurnios, eritrcitos, no se divide; altamen clulas musculares, -te diferenciada. etc. RADIAES IONIZANTES DE IMPORTNCIA BIOLGICA Raios-Gama - ondas eletromagnticas de alta energia (sem carga). - produzidas por desintegrao radioativa. Partculas Beta - emisses particuladas; carregadas; leves. - produzidas por desintegrao radioativa ou por aceleradores. Partculas Alfa - emisses particuladas; carregadas; pesadas. Raios X - ondas eletromagnticas de alfa energia (sem cargas). - produzidas em tubos de raios X. Prtons, Duterons Ncleos Pesados - emisses particuladas, carregadas, pesadas. - produzidas por aceleradores. Nutrons - emisses particuladas, sem carga, pesadas. - produzidas por aceleradores. Msons PI (ons Negativos) - emisses particuladas, carregadas, mais pesadas que betas e mais leves que prtons. - produzidas por aceleradores. Nvel de organizao Clulas EFEITOS BIOLGICOS DA RADIAO Tipo de leso Efeitos importantes aberraes cromos- morte celular, inibismicas, mutaes. o da diviso celular; transformao p/ estado maligno. hipoplasia; transrotura na funo formao de clutissular; morte: inlas p/ estado maduo de cncer. ligno. leso do sistema hematopotico,gas- bito.

Tecido

Corpo inteiro

46

trintestinal, nervoso central. transformao do tecido para estado maligno.

- cncer

47

CLASSIFICAO DOS EFEITOS BIOLGICOS CAUSADOS POR RADIAES - Efeitos Estocsticos: so aqueles cuja ocorrcia depende da dose recebida, sem limiar (ex.: mutaes genticas e cncer). - Efeitos no estocsticos: so aqueles cuja severidade do dano aumenta com a dose. possvel se estabelecer uma dose llimiar. - Efeitos Hereditrios ou Genticos: danos nas clulas dos rgos reprodutores, e surgem somente no descendente da pessoa irradiada. Tm caracter acumulativo (Estocstico). - Efeitos Somticos: danos das clulas do corpo da prpria pessoa irradiada. Depende: da dose total absorvida; da taxa de absoro da regio e rea do corpo; e do valor da dose limite. Os efeitos somticos pode ser: a) Imediatos: so aqueles de aparecimento rpido (de hora a semanas), aps exposio aguda. b) Retardados: so aqueles que surgem depois de anos ou mesmo dcadas. SNDROME DE IRRADIAO AGUDA APS EXPOSIO DE CORPO INTEIRO Sistema Nervoso Central - Sndrome SNC Principal rgo determinante: crebro. Lilmiar da sndrome: 2.000 R. Latncia da sndrome: h a 3 h. Limiar do bito: 5.000 R. Tempo de bito: 2 dias. Sinais e sintomas: letargia, tremores, convulses, ataxia. Sistema Gastrintestinal Principal rgo determinante: Intestino Delgado. Limiar da Sndrome: 500 R. Latncia da sndrome: 3 a 5 dias. Limiar de bito: 1.000 R. Sinais e sintomas: mal-estar, anorexia, nlseas, vmitos, diarria, disfuno G1, mfebre, desidratao, perda de eletrlitos, colapso circulatrio. Sndrome Hematopotica Principal rgo determinante: medula ssea. Limiar da sdrome: 100 R. Latncia da sndrome: 2 a 3 semanas. Limiar de bito: 3 a 8 semanas. Sinais e sintomas: mal-estar, febre, dispnia, fadiga, leucopenia, trombopenia, prpura. RADIOSSENSIBILIDADE TISSULAR RELATIVA Sensibilidade relativa. Tecidos ---------------------------------------------------------------------------------------------Elevada Epitlio linfide, hematopotico,espermatognico, epitlio intestinal. Pouco elevada no epitlio estratificado orofarngeo, epitlio epidrmico. Mdia Pouco baixa Tecido conjuntivo intersticial, vascular delgado, cartilagem ou osso em crescimeto. Cartilagem ou osso maduro, epitlio hepti -co, epitlio renal, pancretico, tirideo e supra-renal.

Baixa Tecido muscular neuromuscular. ----------------------------------------------------------------------------------------------

48

CROMATOGRAFIA I - INTRODUO A cromatografia um mtodo fsico-qumico muito utilizado na anlise qualitativa de misturas homogneas como, por exemplo, extratos de tecidos animais ou vegetais. O mtodo se baseia no carreamento da mistura por uma fase mvel, que pode ser um fluido lquido ou gasoso, atravs de outra fase essencialmente fixa ou estacionria, que pode ser um slido ou um lquido preso em um suporte. As substncias de misturas se distribuem entre as duas fases de acordo com os seus coeficientes de partico ou de adsoro. A tcnica consiste em depositar a mistura na fase fixa e fazer passar atravs desta a fase mvel. As substncias que possuem maior afinidade com a mesma a uma velocidade tanto maior quanto for a afinidade com essa fase. As substncias que tiverem maior afinidade com a fase fixa permanecero prximo do ponto onde aplicadas, ou seja, se deslocaro com uma velocidade tanto menor quanto maior for a interao ou afinidade com a fase fixa. como se a fase fixa segurasse as substncias que lhe so afins e a fase mvel carreasse as outras, promovendo, desse modo, a separao das mesmas. II - CROMATOGRAFIA DE ADSORO Quando a fase fixa constituda por slido poroso ou finamente granulado (slica, carbonato de clcio, xido de alumnio, carvo, amido, etc) a cromatografia dita de ADSORO porque se baseia na maior ou menor capacidade de adsoro dos componentes da mistura sobre a superfcie do sdio que chamado adsorvente. Quando a fase mvel flui atravs do slido, vai carreando as substncias menos adorvidas, promovendo assim a resoluo da mistura. Algumas condies devem ser observadas nesse tipo de cromatografia, especialmente com relao s caractersticas da substncia usada como adsorvente que: 1 - deve ser insolvel na fase mvel 2 - no deve sofrer nenhuma alterao de natureza qumica durante o processo 3 - no deve reagir quimicamente nem com a fase mvel e nem com as substncias componentes da mistura. No se poderia, por exemplo, fazer uma cromatografia de partio utilizando a gua como fase mvel e a sacarose como adsorvente porque quando se iniciasse o processo a fase mvel iria dissolvendo a fase fixa. A cromatografia de adsoro pode ser efetuada utilizando-se basicamente duas tcnicas: a) Cromatografia em camada fina na qual a fase fixa (o adsorvente) distribudo homogeneamente em finas camadas sobre uma placa de vidro (lmina de microcpio, por exemplo). A mistura a ser resolvida colocada prxima a uma das extremidades da placa que, em seguida, mergulhada ou colocada em contato com a fase mvel. Por capilaridade a fase mvel vai ascendendo na fase fixa e, ao atingir a mistura, inicia o processo de separao. A) suporte fase fixa (adsorvente) mistura mistura fase mvel suporte B) fase mvel fase fixa componentes da

b) Cromatografia em coluna. Nesse caso o adsorvente colocado em colunas de vidro. A mistura de substncia adsorvida no topo da coluna e, em seguida, passa-se a fase mvel atravs do adsorvente. Esse aranjo permite que as fraes (componentes da mistura) possam ser coletadas separadamente quando saem na outra extremidade da coluna. A cromatografia em coluna permite ainda a utilizao de gases como fase mvel. III - CROMATOGRAFIA DE PARTIO Coeficiente de partio Uma substncia colocada em contato com um sistema bifsico constitudo por dois lquidos imisveis se distribuir entre eles de acordo com a maior ou menor afinidade ou solubilidade que possua em relao ao par de lquidos empregados. Esse fenmeno denominado PARTIO porque indica o modo como se distribue ( ou como se parte) um mesmo soluto em relao a dois solventes imisveis. Para cada substncia pode-se definir um coeficiente de partio (alfa) que corresponde razo entre as concentraes (no entre as quantidades !!) do soluto na fase superior (Cs) e na fase inferior (Ci).

Cs

Solvente 1

49

Cs a = ----------Ci Ci Solvente 2

Em relao a um determinado par de solvente imisvel, o coeficiente de partio caracterstica de cada substncia e depende apenas da temperatura. Normalmente, o par de solvente utilizado constitudo por um lquido de natureza polar e outro de natureza apolar. Isto necessrio porque se os dois solventes tiverem a mesma natureza, provavelmente sero miscveis, o que impediria o fenmeno da partio. A distribuio de uma mistura em relao ao par de solvente tambm determinado pela natureza dos componentes da mistura: as substncias de natureza apolar se dissolvero mais (no somente !!) no solvente apolar e as de natureza polar, no solvente polar. Cromatografia de Partio A Cromatografia de Partio se baseia no fenmeno da partio, mais especificamente, nas diferenas entre os coesuporte ficientes de partio dos componentes de (papel) uma mistura em relao a um par de solventes imisveis. fase fixa A tcnica consiste em tomar imvel (gua) um dos solventes, no qual colocada a mistura, e fazer passar atravs deste o oumistura tro solvente, que ser a fase mvel. A imobilizao de um dos solventes consefase mvel guido por meio da fixao do mesmo em (butanol) um suporte slido, que pode ser uma tira de papel de filtro, uma fina camada de slica ou uma coluna de material poroso.

IV - CROMATOGRAFIA DE TROCA INICA Nesse tipo de cromatografia a fase fixa constituda por uma resina porosa que contm grupamentos ionizveis que podem adquirir cargas positivas ou negativas: /---------------------\ | v | R ---- SO3 - Na+ NH4+ Cl^ | | \----------------------/ R ---- SO3 - Na+ NH4+ Clfase fixa fase mvel

V - CROMATOGRAFIA POR FILTRAO EM GEL No exatamente um processo de cromatografia. Trata-se na verdade de uma ultrafiltrao ao inverso utilizando-se pequenas esferas porosas com filtros ou peneiras moleculares. A tcnica consiste em embeber os gros de gel (fase fixa) e coloc-los em uma coluna de vidro. A mistura de substncia a serem separadas colocada no topo da coluna e em seguida passa-se a fase mvel que pode ser gua ou uma soluo apropriada. A separao se processa de acordo com a forma e o dimetro das substncias da mistura. As molculas maiores saem na frente ao contrrio do que ocorreria numa filtrao convencional. Isto ocorre porque as molculas pequenas, pelo fato de poderem penetrar nos poros dos gros de gel tm um percurso maior que as molculas maiores que passam por forados gros de gel.

CROMATOGRAFIA POR FILTRAO EM GEL Fase mvel Mistura Fase fixa (gros de gel) Suporte Gros de gel (ampliado)

50

51

ELETROFORESE I - INTRODUO A eletroforese consiste na migrao de substncias carregadas eletricamente, quando submetidas ao de um campo eltrico externo. Foi desenvolvida inicialmente por Tiselius, em 1937, e tem grande utilidade na anlise qualitativa de misturas homogneas. Na rea biomdica, sua aplicao bastante ampla, indo desde pesquisas mais simples sobre a composio de sistemas ou lquidos biolagicos at como mtodo auxiliar no diagnstico e prognstico de diversas patologias humanas. Na clnica mdica, por exemplo, a eletroforese um dos exames fundamentais no estudo de alteraes das protenas plasmticas do organismo. II PRINCPIO DO MTODO

uma lei geral de Eletricidade, o fato de que cargas eltricas de sinais opostos se atraem e cargas eltricas de mesmo sinal se repelem. Assim, partculas com carga eltrica livre, quando submetidas a um campo eltrico, sero atradas pelos polos opostos s suas cargas, ou seja, as partculas carregadas positivamente (ctions) sero atradas pelo polo negativo (CTODO) e as partculas carregadas negativamente(nions) sero atradas pelo polo positivo (NODO). Se no existir algum fator que impea o livre deslocamenmto das partculas, a ao do campo eltrico far com que elas migrem em direo aos respectivos polos de atrao. Isto pode ser conseguido, por exemplo, colocando-se as partculas em soluo ou suspenso, como mostra o esquema abaixo: . . . (+) . . . (-) (+)

(-)

A+ B-

A+ BB- BA+ A+

A+ A+

BA+

BA+ BB-

Aps algum tempo de aplicao do campo eltrico, as partculas positivas estaro mais concentradas em torno do CTODO e as partculas negativas em torno do NODO. Obtm-se assim, uma separao entre partculas de cargas opostas. A velocidade de migrao das partclas em direo aos plos de atrao diretamente proporcional fora eltrica exercida pelo campo eltrico sobre cada partcula e inversamente proporcional viscosidade e fora inica do meio. A lei de Columb estabelece que a fora eltrica exercida sobre cada partcula depende da intensidade do campo eltrico e da quantidade de carga eltrica livre da partcula. So, portanto, trs os fatores que determinam a velocidade de migrao de uma partcula num experimetno eletrofortico: - a viscosidade e fora inica do meio - a intensidade do campo eltrico (voltagem) - a quantidade de carga eltrica efetiva da partcula Na prtica, as partculas analisadas por eletroferese, so submetidas a um campo eltrico constante e se deslocam num meio de fora inica e viscosidade tambm constantes. Nessas condies, a velocidade de migrao vai depender fudamentalmente da quantidade de carga eltrica efetiva das partculas. Consequentemente, a eletroforese pode ser usada, no somente para separar partculas de cargas eltricas opostas, mas tambm, para separar partculas de carga eltrica de mesmo sinal, desde que as mesmas estejam em quantidades diferentes. ... ... (-) (+) (-) (+)

C= C= A+ A+ A+ B- C= B- BB- A+ C=

A+ A+ A+ A+

B- C= B- C= B- C= B- C=

Note no esquema acima, as partculas C= se deslocaro com uma velocidade maior que as partculas B- e, num determinado instante, podero estar totalmente separadas. O volume, a forma e a massa molecular das partculas so outros fatores menos importantes, que tambm podem influir na velocidade de migrao. III - TIPOS DE ELETROFORESE III.1 - Eletroforese Livre

52

Nesta tcnica eletrofortica, as partculas se deslocam livremente no meio condutor; da porque chamada eletroforese livre. A eletroforese livre tem aplicao no estudo analtico de macromolculas mas apresenta algumas desvantagens: permite a ampla difuso das partculas e dificulta a obteno isolada das fraes separadas. Alm disso, a passagem da corrente eltrica, aquecendo o lquido condutor, promove movimentos de conveco que interferem na migrao das partculas. III.2 - Eletroforese em Suporte Neste caso, a migrao das partculas se faz sobre um suporte slido ou semi-slido, embebido no lquido condutor e mergulhado pelas extremidades em cubas que comtm os eletrodos. O esquema abaixo mostra um modelo de eletroforese em suporte: ... amostra suporte (-) (+)

A mistura de substncias (amostras) coletada na parte central do suporte. De acordo com as cargas efetivas das partculas, estas migraro para os plos positivo ou negativo e, aps algum tempo, estaro localizadas em pontes diferentes do suporte, constituindo as chamadas fraesou zonas. amostra (-) (+) ponto de aplicao

A eletroforese em suporte tambm denominada eletroforese de zona ou anticonvectante. Como suporte, foram empregadas inicialmente, tiras de papel de filtro. Em seguida vieram o acetato de celulose e os gis de gar, amido e acrilamida. O papel permite a separao de cinco (5) fraes de protenas do soro humano, aps cerca de dezesseis (16) horas de aplicao de um campo eltrico apropriado. Com os gis de amido e acrilamida, chega-se a obter at vinte (20) fraes em uma ou duas horas. Uma grande vantagem da eletroforese em suporte que, aps a migrao, as fraes permanecem isoladas e podem ser retiradas separadamente ou fixadas ao suporte. Substncias incolores podem ser reveladas, no prprio suporte, por meio de reaes caractersticas com corantes adequados. Alm disso, a colorao das fraes permite uma avaliao quantitativa da amostra por meio da densitometria. IV - ELETROFORESE DE PROTENAS Atualmente, todos os tipos de substncias podem ser separadas por eletroforese. Mesmo as que no possuem carga natural, podem adquir-la por meio de reaes com grupamentos ou radicais ionizados. Os glicdios por exemplo, formam complexos com o on borato e podem ento ser analisados por eletroforese. , no entanto, no estudo das protenas que a eletroforese se constitue num mtodo fsicoqumico valioso para separar e analisar misturas dessas macromolculas, determinar suas mobilidades e caracteriz-las. Alm disso, a composio protica quantitativa de um sistema biolgico, como o soro sanguneo por exemplo, revela importantes dados sobre o estado geral do animal. As protenas so heteropolmeros (macromolculas) constitudas por centenas a milhares de monmeros chamados aminocidos, que obedecem frmula geral: H H \ / N O | // R -- C -- C | \ H OH Os aminocidos apresentam, portanto, um radical amina ( -NH2 ) e um radical carboxila ( -COOH ) ligados a um mesmo tomo de carbono. Na formao das protenas, a carboxila de um aminocido reage com o grupamento amina do aminocido seguinte, formando as chamadas ligaes peptdicas: ... H \ / N O | // R1 -- C -- C a | \ H N O | // R2 -- C -- C b

53

| H

\ ..................... : OH H : H ................. \ / N O | // R3 -- C -- C | \ H OH

H \ /

N | ...... No esquema anterior, a letra b mostra a formao de uma ligao peptdica, e a letra a mostra uma ligao j formada. Os diversos aminocidos existentes na natureza diferem entre s pelo radical lateral R. De acordo com o carter cido-bsico desse grupamento, os aminocidos podem ser classificados em trs categorias: I - Monocido-monobsico, quando R neutro II - Dicido-monobsico, quando R tem carter cido III - Monocido-dibsico, quando R tem carter bsico Uma nomeclatura mais simples, embora no muito correta, poderia classific-la em aminocidos neutros, cidos e bsicos, respectivamente. O esquema a seguir, apresenta exemplos de aminocidos de cada uma das categorias: H \ / GLICINA ( I ) H

N O | // H -- C -- C | \ H OH H \ / H

O N O \\ | // C -- CH2 -- C -- C / | \ HO H OH H \ H \

CIDO ASPRTICO ( II )

H /

N O | // N -- ( CH2 )4 -- C -- C LISINA ( III ) / | \ H H OH Devido presena na sua estrutura de, pelo menos, um grupamento bsico ( -NH2 ) que pode captar prtons ( H+ ), e um grupamento cido ( -COOH ) que pode doar prtons ( H+ ), os aminocidos se comportam como substncias anfteras, isto , podem doar ou captar prtons na dependncia do meio em que se encontram. Tudo depende da oferta : uma soluo que oferece uma alta concentrao de H+, isto , um baixo pH, dificulta a liberao de prtons (H+) pelo grupo carboxila que permanece na forma de -COOH, e facilita a captao dos mesmos pelo grupo amina (-NH2) que passa para a forma de -NH3+. Elevando-se gradativamente o pH, isto , diminuindo-se a concentrao de H+, o grupo carboxila (-COOH) comea a liberar prtons, passando para a forma -COO-, mas o grupo amina continua protonado (-NH3+). Por fim, em concentraes hidrogeninicas ainda baixas, o grupamento - NH3+ comea a perder prtons para a soluo, passando para a forma desprotonada (-NH2). Ao liberar prtons (H+), o grupo carboxila (-COOH) adquire carga negativa (-COO-) enquanto o grupo amina (-NH2), ao captar prtons, aquire carga positiva (-NH3+). Desse modo, os aminocidos podem apresentar carga eltrica efetiva nula, negativa ou positiva, dependendo da oferta de H+ pela soluo onde so colocados. Um aminocidos neutro, como a glicina, poderia adquirir trs configuraes dependendo do pH, ou seja, da concentrao de H+ da soluo onde colocado: NH3+ | C __ | H NH3+ | COO| H NH2 | H __ C__ COO| H H+

__

COOH H

__

__

H+

54

(A) (B) (C) <-------------------------------------------------------------------------------------------> aumento de pH ou diminuio da concentrao de H+ Quando a glicina colocada em soluo de pH muito baixo (A), ou seja, em uma alfa concentrao de H+, tanto o radical amina como o radical carboxila esto protonados. Nessas condies, o aminocido adquire carga eltrica positiva pois o grupo carboxila apresenta carga nula mas o grupo amina est carregado positivamente. Em pH muito alto (C), devido carboxilao de H+, tanto o grupo amina quanto o grupo carboxila liberam prtons (H+) para a soluo. O aminocido adquire ento carga eltrica negativa pois, agora, o grupo amina apresenta carga nula mas o grupo carboxila est carregado negativamente. Num pH intermedirio (B), a concentrao hidrogeninica ser o suficiente para permitir a liberao de prtons pelo grupo carboxila mas mantm o grupo amina protonado. Nessa situao, o aminocido apresenta-se sob a forma dipolar (ZWITTERIONICA) com carga eltrica efetiva nula pois o grupo carboxila est carregado negativamente e o grupo amina positivamente. A formao do zwitteron possvel porque o grupamento -NH3+ um cido mais fraco que o -COOH, de modo que a ionizao completa de cada um se efetua em diferentes valores de pH. O pH no qual o aminocido adquire a forma dipolar, isto , apresenta cargas eltricas negativas e positivas equivalentes, denominado PONTO ISOELTRICO(pI) desse aminocido. Cada aminocido tem um pI especfico. Quando colocado em uma soluo de pH igual ao seu pI e submetido a um campo eltrico, o aminocido no sofre migrao para nenhum dos plos pois, nessas condies, apresenta carga eltrica efetiva nula. O ponto isoeltrico (pI) funciona como um pH neutro para o aminocido, isto , equivale concentrao de H+ na qual as foras cidas e bsicas do aminocido so equivalentes. Se o aminocido colocado num pH maior que seu pI, ou seja, num pH bsico, ele funciona como cido, libera (perde) prtons (H+) e adquire carga eltrica negativa. Quando colocado em um pH menor que seu pI, ou seja, num pH mais cido, o aminocido funciona como base, capta (ganha) prtons(H+) e adquire carga eltrica positiva. Os aminocidos neutros (monocido-monobsico) apresentam pI prximo de 7, geralmente menor. o caso da glicina que tem pI = 6,1. Os aminocidos cidos (dicido-monobsico) devem apresentar pI baixo (menor que 7) porque a concentrao hidrogeninica deve ser alta o suficiente para manter um dos dois grupos carboxilas na forma protonada (-COOH). O cido asprtico, por exemplo, tem pI = 2,0. Com os aminocidos bsicos (monocido-dibsico) ocorre o inverso: o pI deve ser maior que 7, isto , a concentrao hidrogeninica da soluo deve ser baixa o suficiente para permitir que um dos grupos amina esteja na forma desprotonada. O pI da lisina, por exemplo, vale 10. O esquema a seguir mostra as configuraes que podem ser adquiridas pelos aminocidos glicina (GLI), o cido asprtico (ASP) e lisina (LIS), relacionadas com uma escala de pH de 0 a 14: 0 7 14 \-----------------------------------------------------------------------------------/ GLI ^ | H H H | | | H - C - NH3+ <==> H - C - NH3+ <==> H - C - NH2 | | | COOH COOCOO-

0 7 14 \-----------------------------------------------------------------------------------/ ASP ^ | COOH COOH COOCOO| | | | CH2 CH2 CH2 CH2 | | | | H - C -NH3+ <=> H - C - NH+3 <=> H - C - NH+3 <=> H - C - NH2 | | | | COOH COOCOOCOO-

0 7 14 \-----------------------------------------------------------------------------------/ LIS ^

55

| NH+3 NH+3 NH+3 NH2 | | | | (CH2)4 (CH2)4 (CH2)4 (CH2)4 | | | | H - C - NH3+ <==> H - C - NH3+ <==> H - C-NH2 <=> H-C-NH2 | | | | COOH COOCOOCOOAs setas indicam o pH no qual, cada aminocido adquire a forma zwitterinica. Se colocssemos uma mistura de glicina, cido asprtico e lisina no centro de um suporte embebido em um tampo de pH igual a 6,1 e aplicssemos um campo eltrico s extremidades do suporte, teramos as seguintes ocorrncias: - a glicina permaneceria no ponto de aplicao pois est exposta a um pH igual ao seu pI (carga nula) - o cido asprtico migraria para o polo positivo pois est exposto a um pH maior que o seu pI, no qual funciona como cido (perde H+, adquirindo carga negativa) - a lisina migraria para o polo negativo pois est exposta a um pH menor que o seu pI, no qual funciona como base (ganha H+, adquirindo carga positiva)

O esquema abaixo mostra a localizao que teriam os aminocidos, aps a aplicao do campo eltrico por um tempo apropriado: ponto de aplicao (-) pH=6,1 (+)

LIS+

GLI0

ASP-

Utilizando-se um tampo de pH = 10, em vez de 6,1, a lisina teria carga nula e no migraria para nenhum dos plos. A glicina e o cido asprtico migrariam ambos para o plo positivo pois esto colocados em um pH maior que seus pontos isoeltricos. No entanto, a separao entre eles ainda seria possvel pois a glicina teria uma carga negativa enquanto o cido asprtico teria duas, de modo que suas velocidades de migrao seriam diferentes. O esquema abaixo mostra o resultado que seria obtido: ponto de aplicao (-) pH=10 LIS0 GLIASP= (+)

De um modo geral, a velocidade de migrao (v) diretamente proporcional diferena entre o pI do aminocido e o pH do tampo, e inversamente proporcional massa molecular (MM) do amincido: ( pI - pH ) v = k . --------------MM O comportamento eletrofortico das protenas semelhante ao dos aminocidos. Apesar de que, na formao das ligaes peptdicas, isto , na formao da cadeia protica, os grupamentos amnicos de um aminocido so neutralizados definitivamente pelos grupamentos carboxlicos do aminocido seguinte, sobram dois grupamentos terminais: um grupo amina numa extremidade e um grupo carboxila na outra. Alm disso, os radicais laterais dos aminocidos cidos ou bsicos ficam livres para doar ou receber prtons (H+) da soluo e fornecer diferentes qualidades e quantidades de cargas eltricas protena. Como os aminocidos, as protenas aparesentam tambm pontos isoetricos. A diferena apenas quantitativa: enquanto os aminocidos apresentam apenas uma carga negativa e uma positiva, no ponto isoeltrico (pI), uma protenas pode apresentar, por exemplo, quarenta (40) cargas positivas e quarenta (40) negativas. No ponto isoeltrico, a oferta(concentrao) de H+ pela soluo faz com que a quantidade de grupamentos bsicos protonados (carga positiva) seja igual quantidade de grupamentos cidos desprotonados (carga negativa), de modo que a carga eltrica efetiva da protena seja nula. Nessa situao, a protena no migra para nenhum dos polos.

56

Colocando-se em um pH maior que seu pI, ou seja, com uma oferta menor de H+, a protena perde H+ para a soluo. Perder H+ significa perder cargas positivas e, assim, a protena fica com carga residual negativa. Quanto mais distante estiver o pI do pH da soluo, mais fraca ser a oferta de H+ e mais prtons (H+) a protena perder para a soluo. Consequentemente, maior ser sua carga negativa e maior sua velocidade de migrao em direo ao nodo. Em valores de pH menores que o pI, a oferta de H+ pela soluo ser cada vez maior. A protena, ento, captar cada vez mais prtons, adquirindo carga positiva cada vez maior. A velocidade de migrao, por sua vez, ser tambm cada vez maior. A diferena entre o pI da protena e o pH da soluo (pI - pH) pode ser usada como regra simples para se avaliar a qualidade (se negativa ou positiva) e a quantidade relativa de cargas eltricas adquiridas pela protena. Suponhamos quatro protenas X, Y, V e Z, de pontos isoeltricos respectivamente iguais a 4, 6, 7 e 9, colocadas em um tampo de pH = 7. As diferenas pI - pH valero: X : pI Y : pI V : pI Z : pI pH pH pH pH = = = = 4 6 7 9 7 7 7 7 = = = = -3 -1 0 +2

As protenas X e Y apresentariam cargas negativas porm, a quantidade de cargas presentes na protena X seria maior que na protena Y. A protena V teria carga nula e a protena Z teria carga positiva. A velocidade de migrao das protenas tambm influenciada pela massa molecular mas, depende fundamentalmente da quantidade de carga eltrica efetiva da partcula. Assim, a diferena pI - pH tambm serve para se avaliar a velocidade de migrao das partculas e sua localizao no suporte. Nas condies citadas anteriormente, as protenas X, Y, V e Z, submetidas a uma eletroforese, apresentariam a seguinte disposio: Ponto de aplicao (-) pH=7

Colocadas em pH = 10, todas as protenas migrariam para o polo positivo (nodo), mas com diferentes velocidades, proporcionais s diferenas pI - pH de cada um.

APLICAES BIOMDICAS

Apesar da multiplicidade de protenas existentes no plasma humano, a eletroforese permite classific-las em fraes principais que apresentam propriedades fsico-qumicas semelhantes. Comumente, a classificao efetuada com base na eletroforese em papel ou acetato de celulose, que separa as protenas plasmticas em seis fraes principais.

A tabela apresentada na pgina seguinte relaciona as seis principais fraes proticas do plasma, juntamente com seus pontos isoeltricos:
____________________________________________________________________

FRAO Albumina a1 - globulina a2 - globulina B - globulina Fibrinognio Y - globulina

pI 4,7 4,8 4,9 5,2 5,3 6,3

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

Utilizando-se o soro sanguneo, em lugar do plasma, obtm-se apenas cinco fraes pois o fibrinognio est. Dependendo das condies da eletroforese, o acetato de celulose permite a subdiviso da frao B em B1 - globulina e B2 - globulina.

57

Para fins de anlise clnica, a eletroforese de protenas do soro efetuada utilizando-se o acetato como suporte, equilibrado com um tampo de pH = 8,6. Nessas condies, todas as fraes protecas apresentaro carga negativa e migraro para o NODO (plo positivo). A velocidade de migrao, como vimos, ser proporcional diferena pI - pH, para cada frao, e estar em ordem decrescente da albumina para a gama-globulina. Aps colorao apropriada, um eletroforetograma de soro humano normal, apresenta o seguinte aspecto: Ponto de aplicao Eletroforetograma (soro, pH = 8,6) (-) (+)

A d p
a2 a1

perfil eletrofortico Por meio de aparelhos denominados DENSITMETROS, pode-se analisar e registrar a intensidade relativa de cor de cada frao. Com isto, obtm-se o perfil eletrofortico do soro ( pg. anterior), que possibilita o clculo da proporo percentual de cada frao em relao ao total. Sabendo-se a concentrao total de protenas, que pode ser obtida facilmente por fotoabsorciometria, pode-se fazer uma avaliao qualitativa e quantitativa bastante segura do estado geral do paciente.

Em condies normais, a concentrao total de protenas no soro humano de 6 a 8 g%. As concentraes reais (em g%) de cada frao so apresentadas na tabela a seguir: ---------------------------------------------------------------------------------------------| CONCENTRAO FRAO ----------------------------------------------| g% % ---------------------------------------------------------------------------------------------2 Albumina | 4.5 - 5.5 | 52.0 - 68.0 ---------------------------------------------------------------------------------------------| a1 | 0.2 - 0.4 | 2.4 - 4.4 ---------------------------------------------------------| a2 | 0.5 - 0.8 | 6.1 - 10.1 Globulinas --------------------------------------------------------| B | 0.7 - 1.2 | 8.5 - 14.5 ---------------------------------------------------------| Y | 0.7 - 1.3 | 10.0 - 21.0 ---------------------------------------------------------------------------------------------Protenas totais | 6.0 - 8.0 | 100.00 ---------------------------------------------------------------------------------------------As protenas plasmticas so responsveis por funes: manuteno da presso onctica do compartimento sanguneo, trasporte de substncias, coagulao, defesa imunitria e outras. A concentrao dessas protenas no plasma determinada principalmente pelo estado nutritivo do animal e pelas funes heptica e renal. Assim, indivduos acometidos por processos patolgicos que alterem estes parmetros, apresentam modificaes nos seus perfis eletroforticos. Essas modificaes podem ser de natureza qualitativa e/ou quantitativa. Desnutrio, glomerulonefrites, insuficincia heptica e doenas neoplsicas, so processos patolgicos que provocam diminuio da frao albumina. As globulinas encontran-se elevadas nos processos infecciosos agudos e diminudas em decorrncia de desnutrio e leucemia. As alteraes nas globulinas podem ser de natureza geral ou seletiva.

58

Bioeletrognese Dados anteriores mostraram a determinao do potencial de equilbrio de um on, definindoo como sendo a diferena de potencial qumico necessria para equilibrar a diferena de potencial eltrico. Ou seja, um on atravessando uma membrana por diferena inicial qumica, gera uma diferena de potencial eltrico que quando estes dois vetores se igualarem, ou seja, a velocidade com que o on entra na clula por potencial qumico se igualar quantidade de on que sai por potencial eltrico atingido o potencial de equilbrio para este determinado on. A clula composta de inmeros ons fora e dentro, cada um eletroquimicamente em equilbrio. Todos estes ons, geram uma diferena de potencial eltrica (ddp) entre o meio intracelular e o extracelular. Cada clula apresenta um valor desta diferena de potencial chamada potencial de membrana, de repouso ou transmembrana. Membranas celulares: a princpio, pensou-se que as membranas celulares eram constitudas por delicada camada de material semelhante a lipdeos entremeadas por diminutos canais preenchidos por gua. Estudos posteriores sugeriram que a membrana plasmtica consistia de uma camada dupla de lipdeos anfipticos com suas cadeias de hidrocarbonetos orientados para dentro, formando uma fase hidrofbica contnua, e suas extremidades hidroflicas orientadas para fora. Isto foi ampliado, por um modelo dinmico, do mosaico fluido, no qual as molculas proticas globulares penetram de um lado ou de outro da dupla camada fluida de fosfolipdeos ou o atravessam por completo (Simger e Nicholson, 1972). Cada molcula de lipdeo na camada dupla consegue mover-se lateralmente, conferindo membrana na fluidez, flexibilidade, elevada resistncia eltrica e impermeabilididade relativa s molculas extremamente polares. As protenas intrsecas da membrana e lipdeos conseguem formar canais hidrofbicos e hidroflicos que permitem o transporte de molculas com caractersticas diferentes. FATORES FSICO - QUMICOS QUE INFLUENCIAM NO TRANSPORTE TRANSMEMBRANA Os frmacos atravessam as membranas tantoo atravs de processos passivos como por mecanismos que envolvem a participao ativa dos componentes da membrana. No primeiro caso, a molcula costuma atravessar por difuso passiva atravs de um gradiente de concentrao, graas sua solubilidade na camada lipdica dupla. Esta concentrao diretamente proporcional magnitude dos gradientes de concentrao atravs da membrana e ao coeficiente maior a concentrao do frmaco na membrana e mais rpida sua difuso. Isto para substncias no inicas. Caso o frmaco seja inico, as concentraes no estado de equilbrio dinmico dependero de diferenas de pH atravs da membrana que influenciam a ionizao da molcula e o gradiente eletroqumico do on. A maioria das membranas biolgicas relativamente permevel gua, e este fluxo pode levar consigo pequenas substncias hidrossolveis. De modo geral, as substncias de peso molecular superior a 100 - 200 no atravessam a membrana celular. Embora a maioria dos ons inorgnicos seja pequeno o suficiente para penetrar na clula, seu raio inico hidratado relativamente grande. Muitos possuem seus fluxos atravs da membrana por transporte ativo. A maioria dos frmacos constituda por cidos ou bases fracos que existem em soluo sob a forma ionizada e no-ionizada. As molculas no-ionizadas costumam ser lipossolveis e conseguem difundir-se artavs da membrana celular. Em contrapartida as molculas ionizadas geralmente no conseguem penetrar na membrana lipdica por causa de sua baixa lipossolubilidade. No suco gstrico, onde o pH = 1,4 a forma predominante de no-ionizada, portanto o frmaco atravessa bem a membrana, mas no plasma onde o pH = 7,4 a forma predominante a ionizada, sendo impossvel o transporte transmembrana. O fluxo macio atravs dos porso intercelulares o principal mecanismo de passagem de frmacos atravs da maioria das membranas endoteliais capilares, com exceo do sistema nervoso central (SNC). Estes poros intercelulares so suficientemente grandes para que a difuso nos capilares seja limitada pelo fluxo sanguneo, e no pela hidrossolubilidade ou por gradientes de pH. Isto um fator importante na filtrao renal. um processo limitado. A periocitose dos frmacos, entretanto, questionvel. O transporte ativo de alguns frmacos ocorre atravs de membranas neuronais, do plexo coride de clulas tubulares renais e hepatcitos. O termo difuso facilitada descreve um processo de transporte mediado por transportadores, no qual no exite demamda de energia e o movimento da substncia em questo no pode ocorrer contra um gradiente eletroqumico. extremamente seletivo, e ocorre quando a difuso simples seria muito lenta. MECANISMO DE AO DAS DROGAS: O efeito da maioria das drogas resulata da sua interao com os componentes macromoleculares do organismo. Os termos substncia receptora e, mais simplesmente, receptor, foram criados para derrotar o componente do organismo com o qual o agente qumico pressupostamente deveria interagir. Embora qualquer componente macromolecular funcional do organismo pode servir operacionalmente como receptor, um grupo particularmente importante do receptor de drogas constitudo pelas protenas. RECEPTORES : Pelo menos do ponto de vista numrico as protenas constituem a classe mais importante de receptores celulares. As drogas ligam-se a elas por interaes conhecidas como: inica, hidrognica, hidrofbica, de Van Der Waals e covalentes. Se a ligao for covalente a durao da droga frequentemente, mais no necessariamente, prolongada.

59

A funo desses receptores fisiolgicos, muitos dos quais so componentes da membrana plasmtica, consiste em acoplar-se ao ligante apropriado e propagar o seu sinal regulador na clula alvo, seja pelo poder de um efeito intracelular direto, seja promovendo a sntese ou a liberao de uma outra molcula reguladora intracelular, conhecida como: segundo mensageiro. MODELOS ESTRUTURAIS DE RECEPTORES FISIOLGICOS Canal inico cont. por agoEnzimas reguladoras nista por agonista Z Fig-01 L L L L

PRO

CIN

GUA

CIC

Z PRO ons Pro-PO 4

G GTP GMP Cclico

1 - So receptores compostos de vrias subunidades em volta de um canal central. Os canais inicos deflagrados por alterao de voltagem so molculas correlacionadas. Fig - 02

2 - Receptores catalticos que funcionam como protenas-cinases (Pro Cin), ou guanililciclases (Gua Cic), possuem campos catalticos globlulares na face citoplasmtica da membrana plasmtica, separados dos seus domnios de ligao do ligante (LL) por uma sequncia polipeptdica. 3 - Os receptores acoplados protena G, acredita-se, dobram-se como sete hlices transmembrana com um trmino amino glicosilado (CHO) fora da clula. Receptores para vrios neurotransmissores formam canais on-seletivos na membrana plasmtica e transportam os seus sinais alterando a composio inica ou o potencial de membrana. Ex.: nicotinicocolinrgico. Grande nmero de receptores na membrana regulam protenas efetuadoras distintas atravs da mediao de um grupo de protenas que se ligam ao GTP, conhecidas como protenas G. Ex.: hormnios peptdios. Os receptores nesses grupos agem facilitando a ligao de GTP a protenas G especficas. A ligao com o GTP ativa a protena G de tal modo que ela, por sua vez possa regular a atividade e fatores especficos como: adenililciclase, fosfolipases C e A2. Uma clula individual pode expressar de cinco ou mais protenas G. As protenas G so ligadas face interna da membrana plasmtica. So molculas heterotrimricas (as subunidades so designadas alfa, beta e gama). e sua classificao baseia-se na identidade da sua subunidade alfa distinta. As protenas G servem como interruptores moleculares nos sistemas transmembranas de sinalizao. Elas podem transmitir sinais estimulatrios ou inibitrios para vrias protenas egetoras. SEGUNDOS MENSAGEIROS CITOPLASMTICOS: Os sinais fisiolgicos tambm so integrados no interior da clula como resultado das interaes entre as vias dos segundos mensageiros. Fig -03 CAMP + AC + Gs Gi.o PCC + PLC CH Ca+2 G?
GI.O + G1

bOMBA CAMP
+

DE
+

PCA + GS

CCPC CAM Ca+2

60

Ca+2 Fig -1 - Interaes entre os segundos mensageiros AMP cclico e Ca++. Os segundos mensageiros so poucos. Desse modo, sua sntese ou liberao frequentemente resulta da ativao de muitas vias. Eles atuam tanto de maneira direta, alterando o metabolismo do outro, quanto indiretamente, partilhando alvos intracelulares. O AMP cclico, o segundo mensageiro a ser identificado em primeiro lugar, sintetizado pela adenililciclase em resposta ativao de vrios receptores; a estimulao mediada pela GS e a inibio por uma ou mais protenas G intimamente relacionadas denominados Gi. Em algumas clulas, basicamente nos neurnios, a adenililciclase tambm estimulada pelo Ca++ que ativa via calmodulina, protena reguladora Ca++ - ligante. A hidrlise de AMPc catalisada por vrios fosfodiesterases, que podem ser ativadas pelo Ca++ e calmoldulina ou pelo prprio AMPc, sendo que a expulso do AMPc da clula realizada por, pelo menos, um sistema de transporte ativo. A AMPc funciona ativando as protenas cinases AMPc-cdependentes, os quais regulam inmeras protenas cinases intracelulares, catalizando a sua fosforilao. A concentrao citoplasmtica de Ca++ outro ubquo segundo mensageiro, controlada pela regulao de vrios canais Ca++- especficos diferentes da membrana plasmtica ou pela sua liberao dos depositos das organelas intracelulares. Os canais de Ca++ podem ser abertos por despolarizao eltrica, interao com Gs, fosforilao por uma protena - cinase AMP cclico - dependete, ou pelo K+ ou ainda pelo prprio Ca++. A abertura pode ser inibida por outras protenas G (Gi e Go). Um canal pode responder a vrias dessas entradas. A liberao de Ca++ dos depsitos intracelulares mediada ainda por um outro segundo mensageiro, o inositol 1, 4, 5 - trifosfato (lP3). O IP3 o produto de hidrlise do lipdio de membrana fosfatidil-inositol 4, 5 - bifosfato; esta reao catalizada por uma fosfolipase C. Esta enzima , ela mesma, regulada por pelo menos duas protenas g, nenhuma delas identificada. O Ca++ regula a atividade celular interagindo com vrias protenas mediadoras, mas os exemplos mais notveis so a protena - cinase C e a calmodulina. A protena cinase C, assim como a protena - cinase AMP cclico-dependente, tem muitos substratos, incluindo uma srie de protenas envolvidas em outros sistemas de sinalizao. A ativao da protena - cinase C pelo Ca++ potenciada pelo diacelgglicerol, o outro produto da reao da fosfolipase C que libera IP3. O alcance da atividade regulatria da calmodulina tambm amplo. Assim, com referncia apenas aos exemplos do AMPcclico e do Ca++, j se pode avaliar a complexidade da interao dos sistemas celulares de sinalizao.

61

CROMATOGRAFIA

A cromatografia um mtodo de separao de substncias baseado em vrios princpios fsicos e fsico-qumicos dependentes do mtodo empregado. A cromatografia pode ser: Partio, filtrao gel, troca inica e adsoro, sendo que este pode ser subdividida em cromatografia analtica e preparativa. O princpio de separao da cromatografia de partio basea-se na solubilidade da substncia em determinada substncia. Quem for mais solvel segue o solvente que caminha na placa por capilaridade. A filtrao em gel faz a separao cromatogrfica pela diferena do pelo molecular. uma filtrao ao inverso, pois saem primeiro as molculas grandes. Isso ocorre porque as molculas menores penetram nos poros do gel constituintes da coluna fazendo com isso um percurso maior, deixando a coluna por ltimo, saindo primeiro as de peso molecular maior. O princpio de separao da cromatografia de troca inica baseado na ligao eletrosttica da substncia com a resina constituinte da coluna que adquire carga de acordo com o pH da soluo em que ela se encontra portanto a resina poder ser de carga nula quando o pH = 7 pois a oferta de H+ igual a liberao ficando com o nmero de cargas positivas igual ao nmero de cargas negativas o que lhe d um carater eletrosttico nulo. Se o material da coluna for colocado em pH < 7 a oferta de prtons pelo meio ser grande a resina captar prtons os que lhe dar cartercatinico (+). O inverso ocorrer com pH > 7, oferta de prtons baixa h liberao de prtons para fase mvel o que dar carater aninico (-). O nmero de cargas da amostra tambm influencia na separao, pois sair primeiro os de menor nmero de cargas. A cromatografia de adsoro baseada no prinpio fsico-qumico de separao onde a fase mvel reage com a fixa e em seguida os constituintes da amostra tambm as ligaro quimicamente com a fase fixa. Cada ligao e desligao feita em saltos. Portanto, um maior nmero de saltos implicar em menor adsoro, e maior solubilidade na fase mvel. Amostra

Solvente

Este tipo de cromatografia se subdivide em cromatografia analtica e preparativa. A cromatografia analtica usada na identificao do nmero de subst6ancias isoladas. J a preparativa usada para se isolar propriamente a substncia.

AMOSTRA A1 + A2 + A3 + A4

- Concentra no rotavapor

62

Placa Analtica 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

- I SUBST Placa Revaladora - I SUBST

Como aps a revelao da placa observa-se 2 posies das manchas, subentende-se que existiam 2 substncias na amostra.

Substncia

Mistura as duas e aplica na placa preparativa 2 substncias misturadas

subst. 1 subst. 2 Mistura

substncias

Revela e em seguida isola cortando cada faixa. Coloca solvente. Filtra e seca. Tem-se assim as isoladas.

- Ainda existe dois tipos de cromatografia a lquido e a gasoso.

63

CIDOS E BASES:

EXAME SALIVAR

A saliva afeta os dentes e a microflora de vrias maneiras. Vrios componentes e propriedades da saliva esto associados com o desenvolvimento da crie dentria. Durante os ltimos anos, a influncia dos fatores salivares, na colonizao dos microrganismos cariogncios sobre os dentes, tem sido foco de interesse, mas nenhum deles teve seu valor diagnstico provado. Muitas correlaes significativas tm sido encontradas apenas entre a velocidade do fluxo salivar e a capacidade tambpo por um lado, e atividade de cries por outro. Estas importantes propriedades da saliva podem ser confirmadas atravs de mtodos simples. A baixa velocidade do fluxo salivar e baixa capacidade tampo levam eliminao reduzida dos microrganismos e restos alimentares, o que prejudica a neutralizao de cidos e reduz a tendncia reminerao das leses iniciais do esmalte. Uma baixa velocidade do fluxo salivar , geralmente, acompanhado por um nmero aumentado de S. mutans e Lactobacillus. Assim, uma alta atividade de crie, vista em pessoas com uma velocidade reduzida do fluxo salivar, pode ser devido no apenas reduo da resistncia do hospedeiro, mas tambm a um predomnio das exigncias microbianas. Determinao da Velocidade do Fluxo Salivar Material: cilindro calibrador, funil, pedao de cera parafinada (cerca de 1,5 g) e um cronmetro. Mtodo: o paciente deve reter na boca o pedao de parafina at que ele fique amolecido, a saliva produzida durante este espao de tempo deglutida. Acionar o cronmetro quando o paciente comear a mastigar a parafina. A saliva produzida colhida em intervalos frequentes, no funil sobre o cilindro. Aps cerca de 5 minutos dever parar de mastigar e expelir a ltima poro da saliva estimulada. Quando a velocidade do fluxo alta, este tempo pode ser diminuido. Entretanto, se a velocidade baixa, deve haver um aumento do tempo. No geral, o paciente deve mastigar pelo menos durante 2 minutos, ou 2 ml de saliva deve ser colhida. O volume da saliva produzida medido e a velocidade da secreo demonstrada em mililitros por minuto (por exemplo: 3,5 ml em 5 minutos igual a 0,7 ml / minuto). Resultados: Velocidade normal do fluxo em adultos: 1,2 ml / min. Velocidade do fluxo acentuadamente diminuda: 0,7 ml / min. Xerostomia: 0,7 ml /min. Uma certa variao entre duas amostras tomadas em diferentes ocasies, geralmente, observada. Para reduzir esta variao, as amostras devero, sempre que possvel, ser tomadas sob condies idnticas. O paciente deve estar um pouco inquieto quando a primeira amostra tirada, isto reduz a velocidade do fluxo. O mesmo efeito percebido quando o paciente est lendo ou distrado com qualquer coisa. Por isto, quando a amostra da saliva tirada, o paciente deve estar sozinho, sem revistas, livros ou outras distraes. A amostra de saliva colhida para determinao da velocidade do fluxo pode ser usado tambm para determinao da capacidade do tampo e para exames microbiolgicos. Capacidade Tampo Material: a saliva estimulada pela parafina obtida da mesma maneira descrita anteriormente. Como a capacidade tampo da saliva geralmente aumenta aps comer, as amostras para a determinao devero ser tomadas cerca de 2 horas depois de cada refeio. Mtodo: adicionar 1 ml de saliva a 3 ml de Hcl a 0,005 M. Para eliminar o dixido de carbono, agitar a amostra e remover a tampa. deixar a amostra repousar por 10 minutos e, ento, medir o pH final. Isto pode ser feito com o papel indicador de pH se um medidor de pH no estiver disponvel. Existem, no comrcio, estojos especiais (dentco-buff) que contm um pequeno frasco com um cido fraco e um indicador de cores. O estojo tambm carrega uma seringa com a qual 1 ml da amostra de saliva pode ser injetada no frasco teste. Depois de misturar, a cor resultante comparada com uma escala de cores acessria. Resultados: Capacidade tampo normal: pH final entre 5 e 7. Capacidade tampo baixa: pH final 4. saliva + HCl CO2 + Os valores de pH entre 4 e 5 devero ser considerados como valores limites. Discusso Os mtodos simplificados, usando inicadores de pH, podem dar resultados que so difceis de interpretar em certos intervalos do pH. Entretanto, eles so sensveis e bastante seguros para a identificao de pacientes com baixa capacidade tampo. Os mtodos, no entanto, no devem ser usados para a diferenciao entre pacientes com capacidade tampo normal ou boa. Como foi dito acima, a baixa velocidade do fluxo salivar e baixa capacidade tampo podem implicar o aumento do risco de crie. Como a velocidade diminuda do fluxo salivr est sempre acompanhada por um nmero aumentado de S. mutans e Lactobacillus, um exame microbiolgico dever ser realizado em tais casos. Se o exame da saliva mostra que valores negativos (baixos) esto presentes, deve-se constatar se eles so ocasionais ou constantes. Se eles so constantes, a razo disto deve ser determinada. Para referncia sobre as medidas no tratamento de valores salivares baixos.

64

65

SUMRIO

Solues...............................................................................................

04

Composio e Propriedades Fsico-Qumicas dos Compartimentos dos organismos Superiores......................................................................... 11 Difuso, Potencial de Equilbrio e Potencial de Membrana ................... 33

Funo da Hemoglobina no Transporte de Gases e no Tamponamento Sanguneo............................................................................................... 47 Bioeletrogense I .................................................................................... Bioeletrognese II ................................................................................. Contrao Muscular ................................................................................ Introduo Radiobiologia ...................................................................... Cromatografia .......................................................................................... Eletroforese ............................................................................................. 52 52 58 64 74 78

66

BIOFSICA

67

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU CENTRO DE CINCIAS DA SADE DEPARTAMENTO DE BIOFSICA E FISIOLOGIA BIOFSICA PROFESSORES: Paulo Humberto Moreira Nunes Lis Cardoso Marinho Medeiros Rita de Cssia Meneses de Sousa Marcelo Campos Rodrigues

68