Avances en Alimentacin Animal Laboratorio Finca de Mouriscade

Laln (Pontevedra), 2 de octubre de 2006

Avances en aditivos para rumiantes: probiticos, enzimas y cidos orgnicos

Gerardo Caja

Grupo de Investigacin en Rumiantes Universitat Autonoma de Barcelona

Aditivos en Alimentacin Animal: UE (1/4)

DOCE 18/10/03)

Nuevo Reglamento CE 1831/2003 (publicado En vigor a partir de 18/10/2004. Retirada de todos los antibiticos de uso alimentario. Autorizacin temporal (hasta 1/1/2006) de antibiticos con principio activo no usado en humanos (avilamicina, flavofosfolipol, monensina, salinomicina). Informe de alternativas a coccidiostticos antes 1/1/2008 (retirada progresiva a partir 31/12/2012).

Aditivos en Alimentacin Animal: UE (2/4)

CE 1831/2003: Art. 5 Requisitos autorizacin EFSA (Autoridad Europea de Seguridad Alimentaria). Aptdo. #2: Los aditivos no debern... Tener efecto adverso en sanidad animal, salud humana y medio ambiente. Ser presentados de forma que induzca a error al consumidor. Perjudicar al consumidor reduciendo las caractersticas distintivas de los productos animales o inducirle a error.

Aditivos en Alimentacin Animal: UE (3/4)

CE 1831/2003: Art. 5 Requisitos autorizacin Aptdo. #3: Debern cumplir al menos una de las siguientes caractersticas...
- Influir positivamente en:
El pienso Los productos animales Color de los pjaros y peces ornamentales. La produccin, actividad y bienestar de los animales, actuando en la flora intestinal o en la digestibilidad Las necesidades de los animales Efecto coccidiosttico.

- Satisfacer:

- Tener:

Aditivos en Alimentacin Animal: UE (4/4)

CE 1831/2003 Categoras (Art. 6) y Grupos funcionales (Anexo I): Tecnolgicos Organolpticos Nutricionales Zootcnicos: utilizados para influir en la

productividad de animales sanos o en el medio ambiente. Digestivos Estabilizadores de la flora intestinal Sustancias que influyen en medio ambiente Otros aditivos zootcnicos

Coccidiostticos e histomonstatos

Probiticos:

Concepto extendido y bien aceptado, eliminado por el nuevo Reglamento.

lactobacilos vivos mejora la salud intestinal y bienestar del hospedador. Fuller (1989) introduce el concepto general de probitico

Metchnikoff (1907) propone que el consumo de

Havenaar & Huis int Veld (1992)

Cultivos, simples o mezclados, de microorganismos vivos que benefician al hospedador, mejorando su microflora intestinal original

Van Eys & den Hertog (2003)

Dosis suficiente o efectiva

Efectos del pH sobre el ecosistema ruminal

9
Alcalosis grave
Amonaco (9.26)

9 8
Fosfatos

8 7 6 5 4

Limite superior alcalino

Saliva (8.3) Zona de elevacin natural (ayunas)

Bicarbonatos

Valores comunes
Carbnico (6.25)

Sales AGV

Zona de normalidad

7 6 5 4

Limite inferior cido Zona de Propinico (4.87) evolucin Butrico (4.81) irreversible Actico (4.75)

Acidosis grave
D-Lctico (3.86) L-Lctico (3.79) Frmico (3.75)

Efectos del pH sobre el ecosistema ruminal

9
Alcalosis grave
Amonaco (9.26)

8 7 6 5 4

Limite superior alcalino

Valores comunes

Carbnico (6.25)

Sales AGV

normalidad

Bicarbonatos

t Saliva aZona de (8.3) n n elevacin natural i (ayunas) lac y trol gu e on R Zona lc cide f

al ur

9 8
Fosfatos

7 6 5 4

Limite inferior cido Zona de Propinico (4.87) evolucin Butrico (4.81) irreversible Actico (4.75)

Acidosis grave
D-Lctico (3.86) L-Lctico (3.79) Frmico (3.75)

Fe rm en

C6 C6 -C6 -C5 -C5 -C5 -C6-C6 -C6 Alimento CHO

Hi dr lis is

Metabolismo de los Hidratos de Carbono (CHO) en el rumen y formacin de los AGV

tac in

G-6P

F-6P

G-1P

Gliceraldehido-3P

Piruvato (C3)

-C6 -C6 -C6 -

CH3-CO-COOH

El Piruvato es clave en la formacin de AGV en el rumen: 1 Hexosa (C6) = 2 Piruvato + 2 ATP

Fe rm en

C6 C6 -C6 -C5 -C5 -C5 -C6-C6 -C6 Alimento CHO

Hi dr lis is

Metabolismo de los Hidratos de Carbono (CHO) en el rumen y formacin de los AGV

tac in

G-6P

F-6P

G-1P

Gliceraldehido-3P

G CO2

Piruvato (C3)

Acetil-CoA

-C6 -C6 -C6 -

Formiato

Piruvato = Acetato (C2) + CO2 + H2 + ATP CH4 Acetato CO2 + 4 H2 = CH4 + 2 H2O + ATP

Fe rm en

C6 C6 -C6 -C5 -C5 -C5 -C6-C6 -C6 Alimento CHO

Hi dr lis is

Metabolismo de los Hidratos de Carbono (CHO) en el rumen y formacin de los AGV

tac in

G-6P

F-6P

G-1P

Gliceraldehido-3P

G CO2

Piruvato (C3)

Acetil-CoA Malonil-CoA Aceto-acetil-CoA

-C6 -C6 -C6 -

Butirato

2 Piruvato = Butirato (C4) + 2 CO2 + + 2 H2 + ATP

Fe rm en

C6 C6 -C6 -C5 -C5 -C5 -C6-C6 -C6 Alimento CHO

Hi dr lis is

Metabolismo de los Hidratos de Carbono (CHO) en el rumen y formacin de los AGV

tac in

G-6P

F-6P

G-1P

Gliceraldehido-3P

G CO2

Piruvato (C3)

LDH

Lactato

COOH-CO-CH2-COOH COOH-CHOH-CH2-COOH

Oxalacetato (C4) Malato (C4)

Acrilil-CoA

Fumarato (C4) Propionil-CoA

Piruvato = Propionato (C3) + ATP = = Lactato (C3) Succinil-CoA

Succinato (C3)

Propionato

Efectos del pH sobre la orientacin de las fermentaciones ruminales (Kaufman et al., 1980)
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Zona de normalidad
Acetato Propionato Lactato

AGV (% Molar)

Acidosis

7,4 7,2 7 6,8 6,6 6,4 6,2 6 5,8 5,6 5,4 5,2 5 4,8 4,6

pH ruminal

Lac tob a

cilo s

Flora celuloltica activa

Flora amiloltica activa

Efectos del pH sobre la orientacin de las fermentaciones ruminales y la flora dominante

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
Zona de normalidad
Acetato Propionato Lactato

AGV (% Molar)

Metangenas Streptococos Selenomonas Megasfera

Lactobacilos

7,4 7,2 7 6,8 6,6 6,4 6,2 6 5,8 5,6 5,4 5,2 5 4,8 4,6

pH ruminal

Microorganismos usados en alimentacin animal como probiticos: 1/4

Microorganismo Bacterias lcticas (Gram +) No esporuladas Gnero Lactobacillus Especies L. Acidophillus L. casei L. GG L. bulgaricus L. plantarum BifidoB. bifidum bacterium B. brevi B. longum B. termophilus B. animalis Streptococcus S. termophilus S. lactis S. leuconostoc

Lactobacilos: L. acidophilus (Kunkel, 2001)

Lactobacilos: L. plantarum (Kunkel, 2001)

Bifidobacterias: B. bifidum (MAGPIE project)

(http://magpie.ucalgary.ca/)

L. acidophilus

Microorganismos usados en alimentacin animal como probiticos: 2/4

Microorganismo Bacterias lcticas (Gram +) No esporuladas Gnero Enterococcus Lactococcus Pedicoccus Leuconostoc Bacterias lcticas (Gram +) Esporuladas Sporolactobacillus Especies E. faecali E. faecium L. lactis P. acidilactici L. mesenteroides S. inulinus

Enterococos: E. faecium (Kunkel, 2001)

Microorganismos usados en alimentacin animal como probiticos: 3/4

Microorganismo Gnero Especies B. subtilis B. cereus (toyoi) B. coagulans P. freudenreichii Bacterias no lcticas Bacillus (Gram +) Esporuladas Propionibacterium

Bacilos: B. cereus (Kunkel, 2001)

Microorganismos usados en alimentacin animal como probiticos: 4/4

Microorganismo Levaduras Hongos Gnero Saccharomyces Aspergillus Especies S. cerevisiae S. boulardii A. niger A. oryzae

Levaduras: Saccharomyces cerevisiae

(Kunkel, 2001)

Aspergilos: A. niger (Kunkel, 2001)

Levaduras:
Efectos consistentes en vacas lecheras y terneros en transicin. Regulacin de pH ruminal y mejora de la inmunidad Efectos positivos sobre la digestin de la fibra: Aumento acetato y grasa leche Reduccin del propionato y protena leche? Gran variacin de respuesta segn la dosis efectiva, especie y cepa de Saccharomyces

Efectos relativos de la suplementacin con levaduras en 10 experimentos en vacas lecheras

(van Vuuren, 2003)
Control (min.-mx.) Ingestin, kg MS/d Produccin leche, kg/d Composicin leche: Protena, % kg/d Grasa, % kg/d
1:

Levaduras (% control) 103 (94-113)1 103 (96-118) 99 (94-105) 102 (92-123) 102 (94-115) 105 (91-116)

15.7 24.1 22.5 40.5 2.87 3.57 0.70 1.27 1.14 4.05 0.74 1.46

Media (min-mx)

Efectos de la suplementacin con levaduras en en ovejas lecheras de dos razas (Caja et al., 2003)
Manchega
Control Ingestin, kgMS/d Produccin leche, l/d Real Corregida energa Composicin, % Grasa Protena total Protena verdadera Casena Eficacia, l leche/kgMS 2.84 1.47 1.51 7.71 6.05 5.36 4.58 0.53 Levadura 2.95 1.54 1.52 7.19 6.06 5.44 4.59 0.51

Lacaune
Control 3.59 2.63 2.55 7.10 5.70 4.92 4.32 0.71 Levadura 3.30 2.59 2.49 6.92 5.78 4.91 4.39 0.75

Efecto (P <) 0.344 0.944 0.887 0.009 0.527 0.774 0.465 -

Efectos de la suplementacin con levaduras en el concentrado (SC) y en la leche (SB) en terneros lactantes (Galvao et al., 2005)

Efectos de la suplementacin con levaduras en el concentrado en corderos Awassi en cebo (Haddad y Goussous, 2005)

+25%

+7%

Enzimas:

Fundamentalmente Celulasas y Xilanasas. Procedentes de microorganismos probiticos Resultados poco consistentes. Efectos esperados sobre la digestin de la fibra:
Aumento de la ingestin Aumento acetato y grasa leche Reduccin del propionato y protena leche?

Gran variacin de respuesta segn enzima, dosis, especie, condiciones de aplicacin y racin.

Efectos de la suplementacin con enzimas en en vacuno de engorde a base de forraje

(Beauchemin et al., 1995)
Dosis de enzima Control 1 2 4 Heno de alfalfa:
ADP, kg/d MSI, kg/d IC, kg MS/kg 1.03a 10.2a 9.9 1.21a 8.8bc 7.3b 1.12 7.5ab 7.1 1.27bc 1.28bc 10.8a 10.5a 9.0 8.7 1.32a 8.3ab 6.5ab 1.15 8.1b 7.0 1.13a 7.5a 7.5b 0.99 6.8a 7.2 1.34c 11.7b 8.5 1.24a 9.2bc 6.3ab 1.02 7.8b 7.6

16

1.19abc 1.12ab 10.9a 10.3a 9.6 9.5 1.27a 8.6bc 6.8ab 1.12 7.3ab 6.9 1.64b 9.3c 5.9a 1.11 7.3ab 7.0

Heno de fleo:
ADP, kg/d MSI, kg/d IC, kg MS/kg

Ensilado de cebada:
ADP, kg/d MSI, kg/d IC, kg MS/kg

Efectos de la suplementacin con enzimas en en vacuno de leche (Beauchemin et al., 1995)

Dosis enzima Control Ingestin, kgMS/d Produccin de leche, kg/d Leche corregida 4%, kg/d Grasa, % Protena, % Eficacia (kg leche/kgMSI) 20.4 23.7b 22.7b 3.79 3.4 1.20 Baja 20.7 24.6ab 23.3ab 3.70 3.4 1.22 Media 20.7 25.6a 24.6a 3.78 3.4 1.29

cidos orgnicos:
Fundamentalmente Mlico y Fumrico. Estimuladores de microorganismos (prebiticos?) Resultados muy prometedores en condiciones intensivas. Producto natural contenido en algunos forrajes (leguminosas) Variacin de respuesta segn condiciones de aplicacin y racin.

Produccin de AGV en el rumen: Resumen

CHO G Glucosa 6P
Gliceraldehido 3P

Piruvato Malato
COOH-CH2-CH2OH-COOH

CH2-CO-COOH

Formiato
LDH

CH4

Acetil-CoA Acetato
CH3-COOH

Propionato
CH3-CH2-COOH

Lactato
COOH-CO-COOH

Butirato

CH3-CH2-CH2-COOH

Produccin de Propionato a partir de Piruvato

pH > 6 pH < 6

Piruvato

Selenomonas ruminantium

Oxalacetato Meg Lactato Malato asph Acrilil-CoA Propionil-CoA Propionato

era e lsde ni i

Fumarato Succinato Succinil-CoA Propionato

Efecto de la dosis de Malato sobre el pH in vitro

(Carro y Ranilla, 2002)
6,40

pH
0mM 4mM 7mM 10mM

6,30

*** *** ***

***

6,20

6,10

6,00

Maz

Cebada

Trigo

Sorgo

Efecto lineal de la dosis de malato *** P < 0.001)

Efecto de la dosis de Malato sobre el lactato in vitro (Carro y Ranilla, 2002)

mg/l
200 0mM 4mM 7mM 10mM

**
150

* *

100

50

Maz

Cebada

Trigo

Sorgo

Efecto lineal de la dosis de malato (*P < 0.05, **P < 0.01)

Efecto de la dosis de Malato sobre el propionato in vitro (Carro y Ranilla, 2002)

2,00

***
1,50

***

***

***

0mM 4mM 7mM 10mM

1,00

0,50

0,00

Maz

Cebada

Trigo

Sorgo

Efecto lineal de la dosis de malato (*** P < 0.001)

Efectos Malato (m) en corderos (Flores et al., 2003)

Cebada (C) C C+m No. corderos 16 16 PV final, kg 25.2 25.9 ADP, g/d 259b 330a Pienso, gDM/d 948a 923a IC 3.80a 2.87b Dias a 25 kgPV 34d 28e pH rumen (matad.) 6.87b 7.05ab Papilas rumen1 29c 34b Color Gris Plido
1 a,b d,e

Maiz (M) M M+m 16 16 25.2 26.1 299ab 307ab 913a 844b 3.25b 2.90b 31de 29e 6.93ab 7.13a 38a 26c Gris Plido

Efecto (P<) 0.167 0.013 0.007 0.002 0.120 0.017 0.001

Cebada

Cebada + Malato

Maz

Maiz + Malato

Cebada

Cebada + Malato

Cebada

Cebada+Malato

Maz + Malato

Maz

1 cm

Malato y digestibilidad corderos (Flores et al., 2003)

a,b :

P < 0.01

Cebada (C) C+m 1.07 82.1a 84.5a 82.2a 49.7a 55.9a 83.4a
Dura

Maz (M) M 1.03 79.3b 82.2b 76.1b 42.1b 54.9a 81.4b

C Ingestin, kgMS/d 1.09 Digestibilidad, %: 78.1b MS 81.0b MO 78.3b PB 39.8b FND 47.4b FAD 80.6b EB Blanda Heces 5.88b pH rumen (vivo)

M+m 0.97 0.131 83.1a 85.6a 81.2a 48.6a 59.2a 84.5a

Efecto (P<)

6.44a

0.001 0.001 0.001 0.002 0.017 0.003 Blanda Dura 5.90b 6.02a 0.001

Efectos de la suplementacin con enzimas fibrolticas (A y B) y malato en vacuno lechero Exp. 1 en USA (n = 233 vacas)
(Vicini et al., 2003)

Enzimas fibrolticos de Trichoderma longibrachiatum: A (Finnfeeds, Helsinki, Finland; 1.25 L/t de MS forraje) y B (Biovance Technologies, Omaha, USA; 2 L/t de MS forraje) SSMA = Aditivo de azcares solubles y c. mlico (Milk Specialties, Dundee, USA).

1) Ningn efecto significativo (P > 0.10)

Efectos de la suplementacin con enzimas fibrolticas (A y B) y malato en vacuno lechero (Vicini et al., 2003) Exp. 2 en UK (n = 116 vacas)

Enzimas fibrolticos de Trichoderma longibrachiatum: A (Finnfeeds, Helsinki, Finland; 1.25 L/t de MS forraje) y B (Biovance Technologies, Omaha, USA; 2 L/t de MS forraje) SSMA = Aditivo de azcares solubles y c. mlico (Milk Specialties, Dundee, USA).

2) Ningn efecto significativo (P > 0.10)

Conclusiones:
Problemtica de la acidez irreversible El Piruvato como clave de la sntesis AGV Sntesis del Lactato: va acrlica y succnica (si!) Inters y especificidad de los utilizadores del lactato: Megasfera (pH < 6) Selenomona (pH > 6) Estimulacin de la va succnica por el Malato Posibilidad de favorecer a Propinico y digestin de la Fibra simultneamente Necesidad de profundizar la investigacin de probiticos y de estas nuevas vas.

... Gracias por su atencin.