Universidad Andrs Bello Facultad de ciencias Laboratorio de biologa celular 133 Profesores: Luciana Oliveira Cruz Joselin Sofa

Jerez Ortega

TRABAJO PRCTICO N5:

Mitosis, meiosis Y Fecundacin

BIO133-2

Autores:

Juan Pablo Duarte Martn Quezada Fernanda Arredondo

- 12-05-2011 -

Introduccin

Todas las clulas provienen de otraclulapreexistente. As Virchow complementaba en 1858 la teora celular.Omne vivum en vivo (todo lo vivo proviene de lo vivo). En 1860 Pasteur, amplia la teora con este postulado. Al respecto hoy se sabe que todos los organismos vivos utilizan la divisin, como mecanismos de desarrollo, formacin de rganos, reparacin de tejidos y el crecimiento del individuo. Los organismos unicelulares ocupan la divisin celular para su reproduccin, una clula se divide y formar dos clulas hijas genticamente iguales con el que mantendrn el nmero cromosmico de la especie. En cambio en los organismos pluricelulares la divisin celular se convierte en un proceso cclico destinado a la produccin de mltiples clulas. El ciclo celular es la serie de eventos que transcurren desde que una clula se forma por divisin de una preexistente hasta que se divide y da origen a dos clulas hijas. La duracin del ciclo celular es variable, dependiendo del tipo de clula, los nutrientes y de la temperatura. El ciclo celular de una clula se divide en dos fases: interfase y la fase M o de divisin. La interfase es de gran importancia para el desarrollo del ciclo celular. En ella se presenta una gran actividad metablica, caracterizada por la sntesis de importantes tipos de macromolculas y la duplicacin de organelos celulares. A su vez la interfase se divide en tres periodos G1, S Y G2. G1 corresponde a la fase de crecimiento celular. Fase en la cual no podremos apreciar los cromosomas, ya que el material gentico se encuentra disperso en el interior del nucleo en forma de cromatina. En el citoplasma ocurren los diferentes procesos metablicos y los organelos celulares se multiplican, mientras la clula crece. S es el periodo de sntesis del ADN. Es donde la doble hlice se abre en diversos puntos (horquillas de replicacin) en la cual ocurrir la replicacin del ADN. G2 en este periodo el ADN ya estduplicado, es decir la clula va a tener el doble de material gentico que en un comienzo. Al final de este periodo se iniciara un empaquetamiento que conducir durante la mitosis a la formacin de los cromosomas. Fase M o de divisin es la ltima etapa del ciclo celular y dar termino produciendo dos sucesos, mitosis y citodieresis, en la que los cromosomas y el contenido citoplasmtico se distribuyen equitativamente entre las clulas hijas.

La mitosis corresponde a la reparticin del material gentico equitativamente. Normalmente concluye con la formacin de dos ncleos separados el uno del otro seguido de la particin del citoplasma (citodieresis) para formar dos clulas hijas. Para comprender mejor la mitosis se separa en cuatro fases distintas: profase, metafase, anafase y telofase. Profase: la cromatina se condensa para formar los cromosomas. Metafase Los cromosomas se ubican en el ecuador gracias al huso mittico Anafase: el huso mittico se acorta y los cromosomas migran a los polos Telofase: sobre los cromosomas ubicados en los polos se forma una envoltura nuclear formando dos ncleos. Todos los seres vivos que ocupan la reproduccin sexual, se originan de dos clulas haploides provenientes de los organismos de los progenitores, estas clulas llamadas gametos se forman por medio de un proceso llamado Meiosis, este proceso produce una gran variabilidad gentica que se obtiene de los crossing-over. En el proceso de fecundacin los gametos haploides provenientes de los progenitores se unen para crear un organismo diploide. Este proceso es especifico en cada especie, donde se reconocen el ovulo y los espermatozoides que intentan penetrar el ovulo para fecundarlo. La penetracin del ovulo tambin tiene un proceso de bloqueo para impedir que despus de la penetracin del primer espermatozoideingrese un segundo permitiendo la correcta segregacin de los gametos por el huso mittico y as tener una fecundacin viable.

Objetivos
El propsito de este laboratorio es identificar y describir las etapas de la mitosis y meiosis en clulas, a travs de la observacin microscpica de tejidos fijos, tanto vegetales, como animales, en estos ltimos identificar los gametos correspondiente al sexo. Tambin se llevar a cabo una fecundacin in vitro para determinar si los gametos de un Mytilus chilensis (chorito) macho son capaces de realizar quimiotaxis para encontrar el ovulo de la hembra y llevar a cabo el proceso de fecundacin de este ltimo, adems de reconocer aspectos generales de la fecundacin.

Materiales y mtodos

El primer experimento trata sobre la observacin de gametos (de chorito) y a la vez la fecundacin producida entre ellos, donde el material principal fue el microscopio ptico utilizado a un aumento 4X, 10X, 40X y 100X para dichas observaciones. En la extraccin de gametos se ocupo una pipa pasteur y fueron diluidos con agua de mar, dejndolos por separados en distintas placas de petri. Luego estas muestras se dejaban en un porta objeto para ser observadas. La fecundacin se vio a un aumento de 100X debido a esto se tuvo que visualizar vertiendo una gota de aceite de inmersin en la muestra. En la segunda experiencia se observ el TEJ 12, una muestra fija de la punta de la raz de una cebolla, teida con hematoxilina-eosina, en estado de mitosis, con un microscopio ptico Olympus Cx21 con objetivo de inmersin 100X aplicando a la muestra entre los objetivos 40X y 100X el aceite de inmersin. Para realizar la experiencia n3 fueron puesta bajo observacin microscpica ptica, con objetivo de inmersin 100X, aplicando a las muestras entre los objetivos 40X y 100X el aceite de inmersin, dos muestras permanentes: TEJ 23 corte de ovario de rata y el TEJ 24 corte de testculo de rata

Actividad 1: Identificar gametos y fecundacin

Fig. 1: vulos vistos a un aumento 10X, donde su estructura no se denota perfectamente, solo se aprecian grandes circunferencias oscuras.

Fig. 2: Ovulo sin fecundar rodeado de espermatozoides visto a un aumento de 100X, claramente el ovulo presenta una estructura ms distinguible, donde lo ms evidente es la zona gelatinosa que lo rodea.

Fig. 3: Ovulo fecundado visto a un aumento 100X, donde se puede apreciar una condensacin mayor y la zona gelatinosa ya no se encuentra rodeando el ovulo.

Fig. 4: vulos y espermatozoides vistos a 4X, en un campo oscuro, debido a esto los espermatozoides podan tomar una forma ms distinguible.

Experiencia n 2

Fig. 5: Observacin de la punta de la raz de una cebolla, cada una de sus clulas estn en diferentes etapas de la mitosis.

Interfase Telofase Anafase

Actividad 3

Fig. 6 Testculo de rata En la fotografa se pueden apreciar clulas intersticiales, se observan espermtidas en costados en los mrgenes del tejido intersticial. A medida que se va acercando al lumen (hacia el centro de la estructura) cambia la estructura.

Fig. 7 Ovario de rata En esta fotografa se puede apreciar quistes foliculares en crecimiento, en aumento 100x objetivo de inmersin

Fig. 8 ovulo de rata

Conclusin
Uno de los propsitos de este laboratorio era la observacin de gametos en proceso de fecundacin, donde determinaramos si los espermios de chorito son capaces de realizar quimiotaxis para el reconocimiento de vulos, al poner los espermatozoides bajo observacin microscpica es posible observar que estos hacen quimiotaxis con los vulos, ya que, al hacer el puente estos se dirigen inmediatamente a los vulos, y ocurre la fecundacin. Al observar los vulos, es posible distinguir entre vulos fecundados y no fecundados, por la desintegracin de su zona pelcida. La observacin de la muestra vegetal, de punta de raz de cebolla, est en diferentes etapas de mitosis, mas no se pueden distinguir todas las etapas de la mitosis (profase, metafase, anafase, telofase) o simplemente en la muestra no se presentaban. En la observacin microscpica de los TEJ 23 corte de un ovario de rata y TEJ 24 corte de un testculo de rata, en el primero es posible identificar un ovulo de rata [Fig.8] lo cual era nuestro propsito, mas no es apreciado correctamente por excesos de luz al tomar la fotografa. En los cortes de estas muestras hay una probabilidad altsima de encontrar clulas germinales.

Discusin
El primer experimento trata sobre la observacin de gametos y a la vez la fecundacin producida entre ellos. Se extrajeron los gametos de un Mytilus chilensis donde los espermatozoides se encontraban en una zona naranja quedando una sustancia blanca y los vulos en una zona negra quedando una sustancia negra. Estos gametos analizados mediante microscopio presentaban estructuras no tan complejas ya que en el espermio solo se observo a un aumento de 40X una cabeza (contenedora del acrosoma y ncleo) y una cola llamada flagelo responsable de su desplazamiento. En la experiencia de fecundacin esta fue observada por distintos aumentos donde el 40X y 100X mostraba el proceso y lo sucedido al momento de que el ovulo era fecundado por los espermios. Por un proceso llamado Quimiotaxia en cual un espermio se dirige hacia los vulos debido a molculas especiales que producen el reconocimiento entre ambos gametos. Antes de que se produzca la fecundacin, el ovulo se encuentra rodeado por un segmento (zona gelatinosa) en la que los espermatozoides eran capaces de atravesar ya que al momento de hacer contacto con el ovulo el acrosoma del espermio contenedor de vesculas y otras sustancias liberan enzimas hidrolticas de este modo poda llegar a la membrana plasmtica y as produciendo una fusin entre membranas para liberar el ncleo contenido en el espermio hacia el interior del ovulo. Al momento en que ocurra este proceso la zona gelatinosa del ovulo se contraa y a la vez el ncleo tomaba una forma ms condensada, todo esto haca referencia a que la fecundacin estaba completa y el cigoto podra formarse con normalidad. La divisin celular corresponde a un mecanismo de reproduccin, en el cual, las clulas duplican su contenido y se dividen en dos. En est es posible reconocer dos grandes etapas: La interfase prepara las condiciones para la fase M (mitosis y citocinesis) y se divide en tres etapas: G1, S y G2. En la observacin de la raz de la cebolla [Fig. 5] es posible identificar una clula en interfase debido a su gran tamao, ya que en esta etapa el DNA es replicado y la clula aumenta de tamao. Seguido de esta en algunas clulas entran a mitosis, donde el DNA es condensado y repartido equitativamente entre las dos clulas. La mitosis, a su vez, es dividida en cuatro etapas principales. La primera es la profase, en la cual los cromosomas comienzan a condensarse y su envoltura nuclear se descompone en vesculas. Es seguida por la metafase, donde los cromosomas estn en su mxima condensacin y forman el huso mittico, adems de estar alineadas sus cromatidas hermanas en el plano ecuatorial unidas por el cinetocoro a los microtubulos cinetocoricos. En la observacin microscpica [fig. 5] no se observa profase ni metafase en las clulas. En la tercera parte de la mitosis, se separan las cromatidas en los cinetocoros movindose a los polos de la clula, lo que corresponde a

anafase, esta es fcilmente reconocible al microscopio [fig.5]. Y por ltimo la telofase donde se vuelve a construir la membrana nuclear, el huso mittico desaparece y los cromosomas se descondensan, por lo general la citocinesis ocurre durante la telofase, por eso se puede observar una leve lnea delimitando entre un ncleo y otro. La espermatognesis es el mecanismo encargado de la produccin de espermatozoides. Es la gametognesis en el hombre. Este proceso se desarrolla en las gnadas, aunque la maduracin final de los espermatozoides se produce en el epiddimo.En el testculo de rata se observ la presencia de espermatidas muy cerca del lumen, clula haploide que pasara por espermatognesis dando como resultado espermatozoides. Por otro lado la ovognesis es el proceso de formacin y diferenciacin de los gametos femeninos u vulos pasando de ovogonia a ovocito primario, ovocito secundario y por ultimo ovulo de apreciacin virtual en el momento de fecundacin. En el ovario de rata observamos los folculos donde el ovulo se estar desarrollando.Si el folculo no logra abrirse y liberar un vulo, el lquido permanece dentro del folculo y forma un quiste, el cual se denomina quiste folicular. Otro tipo de quiste, llamado quiste del cuerpo lteo, se presenta despus de que un vulo ha sido liberado de un folculo.Los quistes ovricos son relativamente comunes y se presentan con ms frecuencia durante los aos frtiles de una mujer.

Bibliografa
http://www.accessexcellence.org/RC/VL/GG/mitosis.php http://www.biologyreference.com/Ma-Mo/Mitosis.html http://www.life.illinois.edu/ib/102/lectures/08reproduction.html http://www.youtube.com/watch?v=lH_PuokSV48

Introduccin a la biologa celular Alberts, Bray, Hopkin, Johnson, Lewis, Raff, Robberts, Walter