EL CITOESQUELETO.

MICROTUBULOS

Microtbulos
Los microtbulos son varillas rgidas y huecas de unos 25nm de dimetro. Son estructuras dinmicas que estn continuamente ensamblandose y desensamblandose. Intervienen en la determinacin de la forma celular y en diversos movimientos celulares, incluyendo formas de locomocin, transporte intracelular de orgnulos y la separacin de los cromosomas durante la mitosis.

Distribucin interfsica de los microtbulos en un fibroblasto en cultivo. Anticuerpo contra tubulina (verde).

Estructura
Los microtbulos se componen de un nico tipo de protena globular llamada tubulina. La tubulina es un dmero constituido por dos polipptidos, -tubulina y -tubulina. Un tercer tipo de tubulina, la -tubulina se localiza especficamente en el centrosoma. Los dmeros de tubulina se polimerizan para formar microtbulos que generalmente consisten en 13 protofilamentos lineares ensamblados alrededor de un centro hueco. Los protofilamentos se disponen cabeza con cola y por tanto son estructuras polares con un extremo (+) de crecimiento rpido y un extremo () de crecimiento lento.

Estructura de un microtbulo y sus subunidades. A) las dos subunidades de tubulina; b) una molcula de tubulina y un protofilamento; C) microtbulo; D y E) microtbulo (MET).

Tanto la -tubulina como la -tubulina se unen a GTP. El GTP unido a la -tubulina se hidroliza a GDP justo despus de la polimerizacin. La hidrlisis disminuye la afinidad de la tubulina por las molculas adyacentes y se favorece la despolimerizacin, lo cual resulta en el comportamiento dinmico de los microtbulos. Los microtbulos sufren tambin intercambio rotatorio. La hidrlisis de GTP conduce a un comportamiento denominado inestabilidad dinmica, en la que los microtbulos individuales alternan entre periodos de crecimiento y de acortamiento.

Formacin de los microtbulos.

El que un microtbulo crezca o se acorte est determinado por la velocidad de adicin de tubulina con respecto a la velocidad de hidrlisis de GTP. Si las molculas de tubulina se aaden ms rpido de lo que se hidroliza el GTP se mantiene una caperuza de GTP en el extremo (+). Si el GTP se hidroliza ms rpidamente de lo que se aaden nuevas subunidades, la presencia de tubulina unida a GDP lleva al desensamblaje.

Inestabilidad dinmica de los microtbulos.

Ensamblaje de microtbulos
En las clulas animales, la mayora de los microtbulos se extienden hacia afuera desde el centrosoma, el cual se localiza junto al ncleo celular cerca del centro de las clulas interfsicas. Durante la mitosis los microtbulos se extienden a partir de centrosomas duplicados para formar el huso mittico. El centrosoma sirve como lugar de inicio del ensamblaje. Este inicio establece la polaridad del microtbulo en la clula, que crecen en sus extremos (+) extiendiendose desde el centrosoma.

Imagen de clulas en cultivo con doble tcnica de inmunofluorescencia. En verde se ven microtbulos y en amarillo aparato de Golgi

Clula en metafase con centrosomas en lados opuestos de la clula.

La protena clave en el centrosoma es la -tubulina, la cual nuclea el ensamblaje de los microtbulos. Se asocia a ms protenas para formar el complejo del anillo de tubulina. Una vez iniciado el ensamblaje los microtbulos pueden ser liberados del centro organizador de microtbulos para organizarse en otro lugar de la clula.

Polimerizacin de tubulina nucleada a partir de complejos en forma de anillo de tubulina

Imagen de fibroblastos en cultivo con anticuerpos antitubulina en que se pueden ver centros organizadores de microtbulos (MTOCs).

Los centrosomas estn formados por un par de centriolos, orientados de forma perpendicular entre s, rodeados por material pericentriolar. Los centriolos son estructuras cilndricas constituidas por nueve tripletes de microtbulos. El material pericentriolar es el que inicia el montaje de los microtbulos (-tubulina).

MTOC (centro organizador de microtbulos).

Esquema en que se representan MTOCs. Tambin se aprecia la composicin de un centriolo.

Los centriolos son estructuras proteicas complejas con una clara polaridad. Un extremo tiene forma de rueda de carro con numerosas extensiones hacia el centrosoma. Los centriolos continen -tubulina que forma parte de los tripletes.

Imagen de MET de los dos centriolos del MTOC. Flechas= material pericentriolar.

MTOC. Se aprecian los centriolos y los microtbulos que irradian de ellos.

Organizacin en la clula
Protenas asociadas a los microtbulos (MAP). Algunas de estas protenas estabilizan microtbulos aadiendo caperuzas en sus extremos que evitan el desensamblaje. Otras protenas asociadas a microtbulos, las catastrofinas (es un tipo de quinesina) los desestabilizan al promover su despolimerizacin repentina.
Microtbulos dispuestos paralelamente debido a la protena MAP-2

Efectos de las protenas que se unen a los extremos de los microtbulos.

Motores microtubulares
Los microtbulos son responsables de diversos movimientos celulares (transporte intracelular y posicionamiento de las vesculas de membrana y de los orgnulos, separacin de los cromosomas en la mitosis y el movimiento de cilios y flagelos. El movimiento de los microtbulos es llevado a cabo por dos familias de protenas, las quinesinas y las dinenas.

Estructura de la quinesina.

Estructura de la dinena.

La quinesina y la dinena son protenas motoras que se mueven a lo largo de los microtbulos en direcciones opuestas. La quinesina I se desplaza hacia el extremo (+) y la dinena hacia el extremo (-).

Existen 45 quinesinas conocidas en el ser humano. La mayora de mueven por el microtbulo hacia el extremo (+), pero algunas lo hacen hacia el extremo () y otras no se mueven en absoluto (anclaje de otras estructuras a tubulina). Las secuencias de las colas ligeras varan entre quinesinas, lo cual les permite mover distintas mercancias. Las dinenas siempre se dirigen a los extremos negativos pero tambin pueden llevar distintas cargas.

Distintos tipos de protenas motoras (quinesina y dinena) asociadas a un microtbulo transportando a lo largo de l distintas molculas.

Transporte de mercancas
Los microtbulos estn generalmente orientados con sus extremos () en el centrosoma y sus extremos (+) extendindose hacia la periferia. La quinesina I y miembros de su familia transportan su carga hacia la periferia de la clula (en clulas nerviosas llevan vesculas secretoras con neurotransmisores desde el Golgi hasta las ramas terminales del axn). La dinena y los miembros de la quinesina que transportan al extremo () llevan materiales hacia el centro de la clula (en las mismas clulas nerviosas, vesculas endociticas desde el axn hasta el cuerpo celular)

A) movimiento de las vesculas en el interior de una clula. B) Movimiento de las vesculas a lo largo del axn.

Los microtbulos y protenas motoras asociadas tambin son responsables de posicionar los orgnulos encerrados en membranas (RE, Golgi, mitocondrias y lisosomas)

Localizacin en la clulas de los orgnulos debido a los microtbulos. En A) microtbulos (verde), RE (azul) y amarillo (aparato de Golgi). En B) arriba RE y abajo microtbulos. En C) igual marcaje que en B en una clula en que se han despolimerizado los microtbulos.

Efecto de la despolimerizacin de microtbulos sobre el complejo de Golgi. A la izquierda los microtbulos estan marcados en rojo y el aparato de Golgi en verde. A la derecha se ha provocado la despolimerizacin de los microtbulos y el complejo de Golgi se fragmenta y se dispersa por todo el citoplasma.

Cilios y flagelos
Prolongaciones de la membrana plasmtica constituidas por microtbulos y responsables del movimiento de varios tipos de clulas eucariotas. Cilios (10 m de longitud) Baten en un movimiento coordinado de manera que la clula se desplaza en un medio lquido o bien el lquido se desplaza sobre la superficie celular. Desplazan lquidos y mucus sobre la superficie de las clulas epiteliales. Tracto respiratorio. Flagelos (200 m de longitud) Su batido es ondulatorio. Las clulas tienen generalmente slo uno o dos flagelos. Son responsables de la locomocin de varios protozoos y de los espermatozoides.

Epitelio respiratorio. Obsrvese en la zona apical la presencia de cilios.

Epitelio ciliado de trompa uterina. Cilios en la zona apical.

Imagen de MEB. Clulas epiteliales de bronquio, unas con cilios (Ci) y otras con microvellosidades (Mv).

Contraste entre el movimiento de los cilios (izquierda) y los flagelos (derecha).

El axonema
El axonema es la estructura fundamental que constituye tanto a cilios como a flagelos. Est constituido por microtbulos y sus protenas asociadas. Los microtbulos se disponen en un patrn caracterstico de 9+2, donde un par central de microtbulos se encuentra rodeado por nueve dobletes de microtbulos exteriores.

Imagen de MET. Zona apical de clula ciliada.

Imagen de ME del axonema.

Los microtbulos fusionados en los dobletes exteriores no son iguales. Uno de ellos est completo, formado por 13 protofilamentos (tbulo A) mientras que el otro est incompleto con slo 10 u 11 protofilamentos (tbulo B) unidos al tbulo A.

Imagen de MET del axonema y esquema de sus partes.

Los dobletes exteriores se conectan al par central mediante espinas radiales y entre s mediante puentes formados por nexina.

Los extremos () de los microtbulos de cilios y flagelos estn unidos a un cuerpo basal que tiene una estructura similar a la del centriolo. Nueve tripletes de microtbulos. Los cuerpos basales tienen un papel definido en la organizacin de los microtbulos del axonema. Cada uno de los dos microtbulos externos del axonema est formado por la extensin de dos de los microtbulos presentes en los tripletes del cuerpo basal. Adems de para iniciar el crecimiento de los microtbulos del axonema, los cuerpos basales tambin tienen la funcin de anclar los cilios y flagelos a la superficie de la clula.

Secciones transversales de cuerpo basales de cilios.

Continuacin de los microtbulos desde el corpsculo basal hasta los cilios.

Corpsculos basales y dos cilios vistos al MET.

Movimientos de los microtbulos en cilios y flagelos.

Las actividades de las molculas de dinena en distintas regiones del axonema deben estar cuidadosamente reguladas para producir el batido coordinado de los cilios y las oscilaciones ondulatorias de los flagelos.

Dos dobletes de un cilio con sus protenas asociadas. Reconstruccin tridimensional del axonema.

Esquema e imgenes de MET con las distintas partes de un espermatozoide.

Reorganizacin de microtbulos en la mitosis.

En la mitosis, el conjunto de microtbulos presente en clulas interfsicas se desensambla y las unidades libres de tubulina se reensamblan para formar el huso mittico, responsable de la segregacin de los cromosomas. La reestructuracin del citoesqueleto de microtbulos es dirigida por la duplicacin del centrosoma para formar dos centros organizadores de microtbulos en lados opuestos del huso.

Ciclo del centriolo.

Los centrosomas se duplican durante la interfase pero permanecen juntos hasta que comienza la mitosis.

Electronmicrografa mostrando un par de centriolos recin duplicados.

Una vez que comienza la mitosis, los centrosomas se separan y migran a polos opuestos del ncleo impulsados por protenas motoras que se desplazan a lo largo de los microtbulos.
Inmunofluorescencia anti-alfa tubulina. Tincin de los cromosomas Hoechst 33342.

La entrada de la clula en la fase de mitosis cambia drsticamente la dinmica de ensamblaje y desensamblaje de los microtbulos. La dinmica de desensamblaje de los microtbulos aumenta unas diez veces, originando una despolimerizacin general y acortamiento de microtbulos. A la vez, el nmero de microtbulos que emana del centrosoma aumenta entre 5 y 10 veces. Estos cambios producen el desensamblaje de los microtbulos interfsicos y el crecimiento de gran nmero de microtbulos cortos a partir del centrosoma.

Evolucin del huso mittico a lo largo del ciclo celular.

La formacin del huso mittico implica la estabilizacin selectiva de algunos microtbulos que irradian desde el centrosoma. Estos microtbulos son tipos: Microtbulos cinetocricos. Se unen a los cromosomas condensados en sus centrmeros que estn asociados con protenas especficas para formar el cinetocoro. La fijacin al cinetocoro estabiliza los microtbulos. Microtbulos cromosmicos. Conectan con los extremos de los cromosomas. Microtbulos polares. Se estabilizan solapndose unos sobre otros en el centro de la clula. Microtbulos astrales. Se extienden desde el centrosoma hacia la periferia de la clula.

Las tres clases de microtbulos que forman el huso mittico.