Kligler Hierro Agar Fundamento En el medio de cultivo, la peptona de carne y la triptena, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo

bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables.

El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificante.

Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa. 2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta lactosa, y glucosa. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares.

4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas a partir de glucosa. 5-El ennegrecimiento del medio indica microorganismo produce cido sulfhdrico. que el

AGAR DE HIERRO Y TRIPLE AZUCAR TSI En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables.

El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.

Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

AGAR DE HIERRRO Y LISINA (LIA) En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, La lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y desaminasa.

El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico.

El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8. Por desaminacion de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La descarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada.

Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.

Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

1- Decarboxilacin de la lisina: Positiva: Pico violeta/fondo violeta. Negativa: Pico violeta/fondo amarillo. 2-Desaminacin de la lisina: Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp. 3-Produccin de cido sulfhdrico: Positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y fondo)

Caractersticas del medio Medio preparado: color violeta

MIO Medio de cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de levadura, peptona y triptena. Adems, la triptena aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio cido es amarillo.

Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina decarboxilasa e indol La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculacin. La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio.

Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo. La presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente.

Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color prpura. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo

1-Movilidad: Positivo: presencia de turbidez o crecimiento ms all de la lnea de siembra. Negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.

2-Ornitina decarboxilasa: Positivo: color prpura. Negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio.

3-Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. Positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. Negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro- amarillento.

Caractersticas del medio Medio preparado: prpura transparente a ligeramente opalescente.

SIM El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehdo del reactivo de para originar un compuesto de color rojo.

Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2

Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende ms all de la lnea de siembra. Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra. Cepas H2S positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el medio. Cepas H2S negativas: el medio permanece sin cambio de color.

Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac s o de Erlich. Cepas indol negativas: sin cambio de color

CALDO UREA Este medio de cultivo, formulado por Rustigian y Stuart, presenta bajo contenido de nutrientes y alta capacidad buffer. El extracto de levadura es la nica fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y cofactores, y aporta los nutrientes esenciales para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfatos constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es el indicador de pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa.

Aquellas bacterias que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrgeno proveniente de la urea, la hidrolizan, liberando amonaco y dixido de carbono. Estos productos metablicos alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo fenol a rojo. Su uso, se recomienda para diferenciar Proteus spp. de otros gneros.

Citrato En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino.

El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico.

El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El indicador vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.

Resultados Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad. Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color

Fenil alanina Determina la capacidad e la bacteria para desaminar el aminocido fenilalanina en cido fenilpirvico por accin de la enzima Fenilalanina desaminasa, esto va a producir una acidificacin del medio, que se va a poner de manifiesto mediante la aplicacin de 0,2 - 0,3 mL de Cloruro frrico al 10 %, si hay en el medio c. fenilpirvico aparece una coloracin verdeazulada.

O.F. Medio Basal de Hugh & Leifson. Medio de cultivo, que al ser suplementado con hidratos de carbono, se usa para determinar el metabolismo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram negativas. Esta prueba es til para diferenciar especies bacterianas. Tambin, permite determinar movilidad y produccin de gas. Fundamento El medio basal O.F., fue desarrollado por Hugh y Leifson, para evidenciar la importancia del significado taxonmico del metabolismo oxidativo-fermentativo de los hidratos de carbono por las bacterias Gram negativas.

Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F. conteniendo el mismo hidrato de carbono, y uno de los 2 tubos es sellado con vaselina o parafina antes de la incubacin, se puede diferenciar bien el metabolismo oxidativo o fermentativo, as como la no utilizacin de un hidrato de carbono por la bacteria en estudio.

En el medio de cultivo, el agregado de una alta concentracin de un determinado hidrato de carbono, hace que los microorganismos utilicen para su desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aerbicas utilicen la triptena presente con la consecuente produccin de reaccin alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez producida por un microoganismo oxidativo.

El fosfato dipotsico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH que vira al color amarillo en medio cido. El contenido de agar, da la propiedad de ser un medio semislido, y permite determinar la movilidad y la distribucin de los productos cidos en el medio de cultivo.

La glucosa es el hidrato de carbono mas frecuente que se agrega al medio basal O.F., pero tambin pueden agregarse otros azcares, como ser, lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o xilosa, entre otros. Por oxidacin o fermentacin de un determinado hidrato de carbono, se acidifica el medio y el indicador de pH vira del color verde al amarillo.