Dr.

Juan Antonio Lugo Ros

TINCIONES

Introduccin
El diagnstico de alguna enfermedad requiere de mejores herramientas de trabajo que solo los sntomas y signos. Hay ocasiones que se debe emplear alguna tcnica auxiliar de laboratorio.

Introduccin
La tincin ayuda a mejorar el contraste de muestras al observarles con un microscopio. Esto implica agregar un colorante que destaque una estructura o algn componente en particular de las clulas en la muestra.

Introduccin
Las tinciones se usan para definir y examinar tejidos en bruto (resaltando, por ejemplo, fibras musculares o tejido conectivo) poblaciones celulares (clasificando diferentes clulas) u organitos en de clulas individuales.

Introduccin
Tinciones biolgicas tambin se usan para marcar clulas en citometra de flujo y marcar protenas cidos nucleicos en electroforesis en gel. Las tinciones no estn limitadas a materiales biolgicos, tambin pueden ser usadas para estudiar la morfologa de otros materiales (por ejemplo, polmeros semicristalinos).

Clasificacin
Las tinciones biolgicas se clasifican por varios criterios. Por ejemplo por el sujeto de estudio es: In vivo: Se realiza a organismos o clulas vivas, incluso organitos celulares. Se usan colorantes llamados vitales, que no causan dao al

organismo durante un tiempo corto.

Clasificacin
In vitro: Estudia al organismo vivo colocado en condiciones artificiales. Se

realiza en clulas aisladas y fciles de separar. Estas clulas se colocan sobre un sustrato adecuado llamado medio de cultivo en el cual se mantienen con vida mientras dura el estudio.

Clasificacin
Si es por el colorante es: Directa: Si el colorante interacta

directamente con el sustrato, sin otro tratamiento posterior. Indirecta: Cuando se usa otra sustancia adems del colorante, llamada mordiente como el cido tnico

Clasificacin
Si es por la tcnica se clasifican en: Simples: Cuando se usa un solo

colorante y se divide en dos clases: Colorantes bsicos: con carga positiva se usan frecuente mente. Colorantes cidos: Se usan con menos frecuencia.

Clasificacin
Diferencial: Cuando se emplean dos o mas colorante, por ejemplo tincin

de gram, tincin alcohol-cido resistente.

Tincin de gram
Metodologa 1. Recoger muestras. 2. Hacer el extendido en espiral. 3. Dejar secar a temperatura ambiente. 4. Fijar la muestra con metanol por un minuto o al calor (flamear 3 veces aprox.)

Tincin de gram
Metodologa 5. Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las clulas gram positivas y gram negativas se tien de color azul-purpura. 6. Enjuagar con agua.

Tincin de gram
Metodologa 7. Agregar lugol y esperar entre 1 minuto. 8. Enjuagar con agua. 9. Agregar acetona y/o alcohol, esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion)

Tincin de gram
Metodologa 10. Enjuagar con agua. 11. Tincin de contraste agregando safranina o fucsina bsica y esperar 1-2 min Este tinte dejar de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

Tincin de gram
Metodologa 12. Enjuagar con agua. 13. Para observar al microscopio ptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersin.

Tincin de gram

Tincin de gram

Tincin de gram

Tincin Zielh Neelsen

Metodologa Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Los reactivos necesarios son : cido peridico 58% carbol fucsina de Ziehl (fucsina fenicada).

Tincin Zielh Neelsen

Preparar mezclando en el orden dado: 0,5 g fucsina bsica 50 cc agua destilada 5 cc etanol absoluto 28,5 g cristales de fenol derretidos

Tincin Zielh Neelsen

hematoxilina alcohol cido 1%:
alcohol de 35

cido clorhdrico

Tincin Zielh Neelsen

Lavar con agua destilada y colorear con fucsina fenicada por 15 min, decolorar en alcohol cido al 50% y lavar con agua destilada.

Tincin Zielh Neelsen

Agregar hematoxilina, 10 min con azulidificar con carbonato de litio, por ejemplo,. Deshidratar, aclarar y montar preparaciones

Tincin Zielh Neelsen

Tincin Zielh Neelsen

Variantes para preparaciones citolgicas. Hacer un frotis de la muestra. La fijacin al calor asegurar de que el frotis se adhiera al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede dar resultados falso negativos, un frotis muy grueso puede desprenderse del portabjetos.

Tincin Zielh Neelsen

Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tincin con los extendidos hacia arriba. Dejar el frotis sobre el puente de tincin. Aplicar fucsina-fenicada. Deje que el colorante permanezca por 5 minutos. Mantenga el calor durante este perodo.

Tincin Zielh Neelsen

Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos). Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el colorante.

Tincin Zielh Neelsen

Lave el colorante suavemente del portaobjetos con agua corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua.

Tincin Zielh Neelsen

Decolorar con alcohol-cido. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, alcohol cido y mantnga sobre el portaobjetos por 7 minutos. Si no se decolora lo suficiente, el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teido.

Tincin Zielh Neelsen

Enjuague con agua una vez ms los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si el portaobjetos an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la solucin decolorante de 1 a 3 minutos. Aplicar la solucin de contraste azul de metileno (1 minuto) y enjuagar con un leve chorro de agua.

Tincin Zielh Neelsen

Incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua y finalmente, coloque deje el portaobjetos a que sequen al aire. Ahora coloquele una pequea gota de aceite de inmersin y haga la observacin al microscopio con 100 x.

Tincin Zielh Neelsen

Tincin Schaeffer-Fulton
Metodologa Se coloca la muestra bacteriana en un portaobjetos con una tcnica asptica y se fija con calor. Despus la preparacin se suspende sobre un bao de agua con un papel poroso sobre ella, para darle un bao de vapor.

Tincin Schaeffer-Fulton
Metodologa El colorante verde de malaquita se le agrega para que penetre a travs de las gruesas paredes de las endosporas , que adquieren un color verde. Tras cinco minutos se retira la preparacin del vapor, y la cubierta de papel se quita.

Tincin Schaeffer-Fulton
Metodologa Se deja enfriar y se lava con agua por 30 segundos. La preparacin se tie entonces con una solucin diluida de safrania por 2 minutos . Esta solucin colorea de rosa o rojo otros microbios. La preparacin se lava de nuevo con agua y secada con un papel secante.

Tincin Schaeffer-Fulton

Fin