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ENZIMAS E MTODOS DE ESTUDOS DA CLULA

UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHO - UFMA CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS - CCBS CURSO DE OCEANOGRAFIA PROF DR PAULA CILENE ALVES DA SILVEIRA

ENZIMAS E MTODOS DE ESTUDOS DA CLULA

NATHALIA DE ARAJO CADUDA DA SILVA MOTTA OC11101-04

So Luis 2010

SUMRIO

1. ENZIMAS 2. MTODOS DE ESTUDOS DA CLULA 3. REFERNCIAS

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1. ENZIMAS As enzimas so protenas catalisadoras formadas dentro de clulas vivas, podendo tambm agir fora delas. Apresentam a capacidade de acelerar as reaes qumicas, j que estas seriam muito lentas devido quantidade de reaes e a temperatura na qual ocorrem. So slidas e solveis em gua e lcool diludo. A maior parte de protenas sintetizadas na clula so enzimas, chamadas enzimas intracelulares. Entretanto, existem enzimas extracelulares, produzidas pelos ribossomos e excretadas pela clula. Indstrias alimentcias utilizam enzimas pela sua capacidade de deteriorao, sendo produzidas para serem aplicadas na produo, conservao e modificao de produtos animais e vegetais, produo de medicamentos e de derivados das matrias primas animais e vegetais. 1.1. FUNES E PROPRIEDADES As enzimas so catalisadores potentes quimicamente definidos como protenas. Protenas so molculas compostas por aminocidos unidos por ligaes peptdicas. Sua frmula consiste em um grupo carboxlico, um grupo amina e um radical R Catalisadores so substncias que aceleram a reao qumica, diminuindo a sua energia de ativao Apresentam uma propriedade extremamente especfica conhecida como encaixe chave-fechadura com o substrato. Cada enzima age sobre um nmero limitado de compostos devido a uma frao da enzima que responsvel pela sua ligao ao substrato se diferenciarem uma das outras devido estrutura das protenas que formam a enzima, determinando a especificidade enzimtica. Permanecem inalteradas aps as reaes, pois apenas catalisam o substrato, sendo, portanto, utilizadas vrias vezes por no serem consumidas na reao. 1.2. FATORES QUE INFLUENCIAM NA ATIVIDADE Temperatura: a temperatura influencia na atividade enzimtica. No chamado ponto timo a atividade mxima, a temperaturas muito baixas elas se tornam rgidas. Com temperaturas elevadas (acima de 50 graus Celsius) a enzima se desnatura e a atividade cai bruscamente. Em

geral o aumento de temperatura acelera as reaes qumicas, quando no ultrapassam uma certa temperatura. PH: o ph timo varia de acordo com cada enzima, e maximiza o efeito das enzimas. Ligeiras modificaes do ph, tanto para mais quanto para menos, provocam uma minimizao da atividade enzimtica. Com uma mudana brusca a enzima se desnatura e perde a sua funcionalidade. Presena de inibidores: certas molculas podem inibir a ao cataltica de uma enzima podem ser competitivos ou no. Os inibidores competitivos disputam o centro ativo da enzima com os substratos, por apresentarem semelhana molecular com o substrato. A sua capacidade de inibio vai depender ento da concentrao do substrato. Os inibidores no-competitivos combinam-se com as enzimas em locais diferentes do centro ativo, podem ter papel regulador na atividade enzimtica e seu potencial de inibio vai depender da concentrao do inibidor. 1.3. TIPOS DE ENZIMAS: Exemplo de algumas enzimas com suas fontes, aplicaes e efeitos:

2. MTODOS DE ESTUDOS DA CLULA

2.1. MICROSCOPIA O microscpio um instrumento que produz imagens ampliadas de objetos de tal que no podem ser observados a ser vistos a olho nu. Existem vrios tipos de microscpios, mas as anlises dos mtodos de estudos da clula nesse trabalho sero feitas baseadas no microscpio de luz. 2.1.1.Microscpio de Luz: o espcime atravessado por feixes de luz

Modalidades na observao na microscopia de luz:

a) Campo claro: A luz atravessa o material analisado b) Campo Escuro: Um sistema especial de condensador faz com que a luz fique de tal forma inclinada que no atravessa o material. Apenas os feixes desviados pelo objeto so observados c) Contraste de fase: Anis na lente condensadora e objetivas promovem retardo ptico no caminho do feixe luminoso d) Contraste Interdiferencial: Prismas pticos no caminho da luz modificam a fase de onda luminosa e) Polarizao: Dois filtros (polarizador e analisador) que selecionam apenas um plano de direo de vibrao da luz: plano de luz polarizada

f) Fluorescncia: As substncias absorvem a luz em um comprimento de onda e emitem luz com comprimentosmaiore (fonteluminosa: luz de mercrio, filtros:De excitao / barragem. g) Microscpio invertido: tem o sistema de iluminao acima do estgio e o sistema de lentes embaixo. Permitem a visualizao atravs de espcimes espessos, como placas de cultivo de clulas,pela proximidade da lente ao fundo da placa h) Microscpio estereoscpico: Observao de objetos opacos por onde a luz no passa, tais como: cristais, fsseis e moedas.

2.2. TCNICAS DE PREPARAO DE ESTUDO

2.2.1.Coleta do material - a obteno da pea, por bipsia ou necropsia. 2.2.2.Fixao tem o objetivo de evitar a destruio das clulas por suas prprias enzimas (autlise), ou bactrias.

Este tratamento feito imediatamente aps a retirada do material (bipsia), ou at antes (fixao por perfuso do animal). A fixao endurece os tecidos, tornando-os mais resistentes e favorveis s prximas etapas A fixao pode ser feita por processos fsicos ou qumicos. Exemplos de fixadores: formol e lquido de Bouin (uma mistura de formol, cido pcrico e cido actico). 2.2.3.Desidratao tem a funo de retirar a gua dos tecidos para a impregnao da pea com parafina. Para isto, a pea submetida a banhos sucessivos em lcoois com teor cada vez mais acentuado. 2.2.4.Diafanizao - submete a pea com um solvente de parafina. O mais usado o xilol. 2.2.5.Impregnao pela parafina fundida - permite a obteno de cortes suficientemente finos para serem observados ao microscpio. Para isso os tecidos devem ser submetidos a banhos de parafina a 60C, no interior da estufa. Em estado lquido, a parafina penetra nos tecidos, conferindo-lhes dureza. 2.2.6.Incluso - a passagem da pea que estava na estufa para um recipiente retangular (forma) contendo parafina fundida que, depois de solidificada temperatura ambiente, d origem ao chamado bloco de

parafina. A incluso pode tambm ser feita com celoidina, gelatina ou resorcina epxi, sendo estas ltimas usadas para microscopia eletrnica. 2.2.7.Microtomia - a etapa em que se obtm delgadas fatias de peas includas na parafina, atravs de um aparelho chamado micrtomo, que possui navalha de ao. A espessura dos cortes geralmente varia de 5 a 10 um (micrmetros). (1 um = 0,001 mm) 2.2.8.Extenso - os cortes da microtomia so enrugados. Para desfazer estas rugas, so esticados num banho de gua e gelatina a 58C, e pescados com uma lmina. Leva-se ento, estufa a 37C, por 2 horas, para que se d a colagem do corte lmina, pela coagulao da gelatina contida na gua quente. 2.2.9.Colorao confere um contraste aos componentes dos tecidos, tornando-os visveis e destacados uns dos outros. Para realiz-la, so observados 3 itens:

a) Eliminao da parafina - por meio de banhos sucessivos em xilol, benzol ou toluol.

b) Hidratao - executada quando o corante utilizado solvel em gua. Deve ser gradativa, com lcoois de teor decrescente, para evitar o rompimento dos tecidos.

c) Colorao - os corantes so compostos qumicos com determinados radicais cidos ou bsicos que possuem cor, e apresentam afinidade de combinao com estruturas bsicas ou cidas dos tecidos.

Rotineiramente, usa-se hematoxilina, corante bsico, que se liga aos radicais cidos dos tecidos, e eosina, corante cido que tem afinidade por radicais bsicos dos tecidos. Os componentes que se combinam com corantes cidos so chamados acidfilos e os componentes que se combinam com corantes bsicos so chamados basfilos. Por exemplo, os ncleos das clulas, onde predominam substncias cidas (DNA), so basfilos, ou seja, coram-se pela hematoxilina (corante bsico de cor roxa); por sua vez, o citoplasma, onde predominam substncias bsicas

(protenas estruturais), acidfilo, corando-se pela eosina (corante cido de cor rosa). 2.2.10. Montagem - a etapa final da tcnica histolgica, e consiste na

colagem da lamnula sobre o corte, com blsamo do Canad, que solvel em xilol e insolvel em gua. A lamnula impede que haja hidratao do corte pela umidade do ar ambiente, permitindo ento que estas lminas se mantenham estveis por tempo indefinido. Aps a montagem, levam-se as lminas estufa, para secagem do blsamo do Canad.

3. REFERNCIAS

http://www.ufmt.br/bionet/conteudos/01.09.04/luz.htm JUNQUEIRA & CARNEIRO, Histologia Bsica, 10 ed., Ed.Guanabara Koogan http://pt.scribd.com/doc/3804973/Biologia-Tipos-de-Microscopios www.fea.br/FISMA/biotecnologia/.../apostila_histologia_basica_demo.pdf